2629true 2628true 2627true 2626true 2625true 2624true 2623true 2622true 2621true 2620true 2619true 2618true 2617true 2616true 2615true 2614true 2613true 2612true 2611true 2610true 2609true 2608true 2607true 2606true 2605true 2604true 2603true 2602true 2601true 2600true 2599true 2598true 2597true 2596true 2595true 2594true 2593true 2592true 2591true 2590true 2589true 2588true 2587true 2586true 2585true 2584true 2583true 2582true 2581true 2580true 2579true 2578true 2577true 2576true 2575true 2574true 2573true 2572true 2571true 2570true 2569true 2568true 2567true 2566true 2565true 2564true 2563true 2562true 2561true 2560true 2559true 2558true 2557true 2556true 2555true 2554true 2553true 2552true 2551true 2550true 2549true 2548true 2547true 2546true 2545true 2544true 2543true 2542true 2541true 2540true 2539true 2538true 2537true 2536true 2535true 2534true 2533true 2532true 2531true 2530true 2529true 2528true 2527true 2526true 2525true 2524true 2523true 2522true 2521true 2520true 2519true 2518true 2517true 2516true 2515true 2514true 2513true 2512true 2511true 2510true 2509true 2508true 2507true 2506true 2505true 2504true 2503true 2502true 2501true 2500true 2499true 2498true 2497true 2496true 2495true 2494true 2493true 2492true 2491true 2490true 2489true 2488true 2487true 2486true 2485true 2484true 2483true 2482true 2481true 2480true 2479true 2478true 2477true 2476true 2475true 2474true 2473true 2472true 2471true 2470true 2469true 2468true 2467true 2466true 2465true 2464true 2463true 2462true 2461true 2460true 2459true 2458true 2457true 2456true 2455true 2454true 2453true 2452true 2451true 2450true 2449true 2448true 2447true 2446true 2445true 2444true 2443true 2442true 2441true 2440true 2439true 2438true 2437true 2436true 2435true 2434true 2433true 2432true 2431true 2430true 2429true 2428true 2427true 2426true 2425true 2424true 2423true 2422true 2421true 2420true 2419true 2418true 2417true 2416true 2415true 2414true 2413true 2412true 2411true 2410true 2409true 2408true 2407true 2406true 2405true 2404true 2403true 2402true 2401true 2400true 2399true 2398true 2397true 2396true 2395true 2394true 2393true 2392true 2391true 2390true 2389true 2388true 2387true 2386true 2385true 2384true 2383true 2382true 2381true 2380true 2379true 2378true 2377true 2376true 2375true 2374true 2373true 2372true 2371true 2370true 2369true 2368true 2367true 2366true 2365true 2364true 2363true 2362true 2361true 2360true 2359true 2358true 2357true 2356true 2355true 2354true 2353true 2352true 2351true 2350true 2349true 2348true 2347true 2346true 2345true 2344true 2343true 2342true 2341true 2340true 2339true 2338true 2337true 2336true 2335true 2334true 2333true 2332true 2331true 2330true 2329true 2328true 2327true 2326true 2325true 2324true 2323true 2322true 2321true 2320true 2319true 2318true 2317true 2316true 2315true 2314true 2313true 2312true 2311true 2310true 2309true 2308true 2307true 2306true 2305true 2304true 2303true 2302true 2301true 2300true 2299true 2298true 2297true 2296true 2295true 2294true 2293true 2292true 2291true 2290true 2289true 2288true 2287true 2286true 2285true 2284true 2283true 2282true 2281true 2280true 2279true 2278true 2277true 2276true 2275true 2274true 2273true 2272true 2271true 2270true 2269true 2268true 2267true 2266true 2265true 2264true 2263true 2262true 2261true 2260true 2259true 2258true 2257true 2256true 2255true 2254true 2253true 2252true 2251true 2250true 2249true 2248true 2247true 2246true 2245true 2244true 2243true 2242true 2241true 2240true 2239true 2238true 2237true 2236true 2235true 2234true 2233true 2232true 2231true 2230true 2229true 2228true 2227true 2226true 2225true 2224true 2223true 2222true 2221true 2220true 2219true 2218true 2217true 2216true 2215true 2214true 2213true 2212true 2211true 2210true 2209true 2208true 2207true 2206true 2205true 2204true 2203true 2202true 2201true 2200true 2199true 2198true 2197true 2196true 2195true 2194true 2193true 2192true 2191true 2190true 2189true 2188true 2187true 2186true 2185true 2184true 2183true 2182true 2181true 2180true 2179true 2178true 2177true 2176true 3变种的作用，观察到硒砷的毒性可相互抑制，其相互作用由于浓度因素的影响既可表现出协同效应也可表现为拮抗作用。硒砷两微量元素共存也存在类似Bertrand关于单个元素的最适营养浓度。此外，还进一步分析了硒砷相互作用可能存在的途径。]]> 2175true 2174true 2173true 615(原发性)和H22(OAAT诱发)肝癌组织中不依赖于cAMP的蛋白激酶进行了研究，发现当以内源性蛋白为底物时，H615和H22组织中的酶活力分别是正常肝脏的3.10和2.44倍。以脱磷卵黄高磷蛋白和鱼精蛋白为底物时，肿瘤组织的酶活力是正常肝脏的1.5—4.45倍。研究结果表明，不依赖于cAMP的蛋白激酶活力升高与癌变和癌恶性状态的维持有密切联系。]]> 2172true 2171true 2170true 2169true 2168true 2167true -1，t1／2等于4.53min，推测DMAP的透过方式为易化扩散。]]> 2166true 2165true 2164true 2163true 2162true +梯度时底物仍可使内膜流动性增加，提示流动性的增加与底物氧化启动的电子沿呼吸链的传递过程密切相关。]]> 2161true M可致红细胞溶血，10～40μM可促进K+外逸。1—2%牛血清白蛋白可以对抗这些效应．5—10μM棉酚明显抑制红细胞膜(Na++K+)-ATP酶活性，Ki值6.0μM。]]> 2160true 2159true 2胆固醇含量和肾上腺维生素C含量的作用。而150mT磁处理水上述三种升高作用更为显著，同时还有降低血清总胆固醇和HDL3胆固醇含量的作用。两种磁处理水都具有防止主动脉内皮细胞损伤的效应，其中150mT磁处理水的这种预防作用更为显著。]]> 2158true 2157true 3H]DNA的方法。用该方法制备λ[ 3H]DNA，每升培养物可得10mg以上的产物。比放射性为6.75×104cpm／μGλDNA，酸不溶的放射性产物达99%以上。用单链和天然的λ[ 3H]DNA作底物，能方便地检测出酶制剂中极微量的核酸外切酶Ⅰ与Ⅱ和Ⅲ的污染活性。]]> 2156true CV值增大。(4)EB为10—20μg/ml、PI为50μg/ml是最佳荧光染色浓度。]]> 2155true 2154true +离子传感器,当膜两侧溶液存在着质子梯度时,念珠菌素起着一个钠离子载体的作用。]]> 2153true 2152true 2151true 2150true Dictyostelium discoideum)基因组克隆的核苷酸顺序。这段顺序编码259个氨基酸,并含有一基因5’端非编码区结构。非编码区结构特点及氨基酸顺序表明这是一个新的肌动蛋白基因。基因组中约有15个内切酶消化所得的片段含有与此克隆同源的顺序。]]> 2149true 2148true 2147true 2146true 35S-α-dATP为标记化合物,经缺口转移体外标记探针DNA,用旋转柱层析法分离出标记探针,由膜上DNA-DNA杂交,将ArNPV的多角体蛋白基因定位,确定是在其EcoRⅠ-Ⅱ片段上。]]> 2145true 2144true 2143true 2142true 2141true 2140true 2-·)处理分离的红细胞膜,研究外源自由基对红细胞膜的过氧化作用。结果表明,邻苯三酚对红细胞膜结构和功能有明显的损伤作用,导致膜流动性下降,膜荧光物质增加,膜蛋白发生交联作用以及膜重新封闭能力下降。]]> 2139true 2138true 2137true 2136true 10后的代谢变化。结果表明,线粒体中CoQ同系物总量约占心肌全匀浆的19.49％;外源性的CoQ10能够为线粒体所摄取。]]> 2135true KSM)和链霉素抗血清对二链霉胺的亲和力(KB)之比(KSM/KB)为指标,表征链霉素抗血清抗原结合部位的特异性;建立了快速分析该指标的ELISA(酶联免疫吸附法)法;并对链霉素抗体抗原结合部位的特异性进行了分类。]]> 2134true P＜0.05);同种作物不同品种的种子在蔗糖溶液中萌发时发光强度表现出差异;用蒸馏水和蔗糖分别处理不同抗旱性的品种,则呈现与抗性有关的发光现象。]]> 2133true 60的生长及DNA合成均有剂量依赖的抑制作用。NBT反应证明DFMO能诱导HL60细胞分化。核酸分子杂交实验表明,DFMO引起c-myc基因表达的减少,而c-fos基因表达水平随DFMO浓度增加明显增加。c-myc与c-fos表达的相互变化可能与DFMO对HL60细胞生长、分化影响有一定关系。]]> 2132true 2131true 2130true 2129true 2128true 2127true 2126true 2125true 2124true 2123true 2122true 2121true 2120true 2-·自由基(碱性条件下,邻苯三酚自氧化产生)处理后有明显损伤作用。在此基础上,本文研究猪红细胞SOD对人红细胞膜氧化损伤的保护作用。结果表明,外源SOD对人红细胞膜有明显保护作用,表现为膜流动性和膜重封闭能力保持正常水平,膜蛋白交联作用有显著减小。]]> 2119true 180、P388、H22)也具有杀伤作用。在胰RNA提取物中,对瘤细胞具有杀伤作用的活性物质不是外源性凝集素样多糖类或能透过半透膜的低分子化合物,而是具有一定二级结构的低分子RNA。]]> 2118true 125Ⅰ-胰RNA能参入体外培养的瘤细咆中抑制DNA合成因而导致瘤细胞死亡。在以上实验基础上,我们又在动物体内注射胰RNA,观察对三种(S180、EC、P388)带瘤小鼠的影响,其结果:(1)抑瘤率为68.3％。(2)连续观察90天,给药组与对照组比较,两组的平均存活日数差异非常显著(P＜0.01),生命延长率为372％。(3)T.B淋巴细胞百分率及病理组织学变化,给药组与对照组比较都有明显差异。]]> 2117true 2电极的硅橡胶气透膜上制成的赖氨酸脱羧酶酶电极,性能如下:(1)酶电极对赖氨酸的线性响应浓度范围为0.0025—0.1％;极差为50—55mV;CV值小于5％;(2)连续使用寿命超过30天;(3)高度专一;(4)用于测定发酵过程赖氨酸浓度变化,结果与瓦氏呼吸仪的数据平行,相关性良好。]]> 2116true 2115true 60Co照射后,用HPLC结合AAS和ELISA方法检测第1,5,15,27天小鼠肝脏中金属硫蛋白两种亚型——MT-Ⅰ和MT-Ⅱ的变化发现,照后第1,5天MT-Ⅰ增加10—20倍,MT-Ⅱ增加40—60倍;而且600Rad照射较400Rad照射增加更明显,第15天后趋于正常。]]> 2114true 60Coγ线照射正常人新鲜全血,观察电离辐射对多形核白细胞(PMN)释放超氧化物阴离子自由基(O2-·)的影响,以及人血甲2巨球蛋白(α2M)制剂对辐射引起的PMN释放O2-·的作用。结果表明:正常人新鲜全血照射(5-20Gy)后1h,PMN释放O2-·的量较不照射组增高(P<0.01),红细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活力较不照射组降低(P<0.01)。照前1h加入人血α2M制剂(每ml全血中加入138.5单位)能有效地降低PMN的O2-·释放量,提高红细胞中SOD的活力。离体实验结果提示α2M治疗辐射损伤作用可能与其抑制过多的O2-·产生有关。]]> 2113true 1O2、H2O2和O2-·。钙通道阻断剂——Verapamil对人Ly-CL也有抑制效应,表明人Ly-CL依赖于人淋巴细胞内钙离子浓度的增加。]]> 2112true 2111true 200波和P300波波幅增高,可能与其加速脑能量代谢率并降低脑内生物活性物质代谢率有关。]]> 2110true 125Ⅰ标记。以标记的 125Ⅰ-凝集素为探针再标记来自不同组织的细胞。标记的细胞经过放射自显影,用扫描电镜对细胞表面凝集素受体的位点进行直接观察。实验结果表明鸡胚肝凝集素对细胞的凝集作用具有相对的专一性。]]> 2109true s某些相似特性的固体支撑的双层类脂膜(S-BLM)能够通过两步自组装到新劈开的金属丝上面。如:(1)包有聚四氟乙烯的铂丝头部浸在类脂溶液里,用解剖刀把顶部切开;(2)包有类脂溶液的新铂丝末端转移到0.1mol/L KCl溶液里,电测定证实,数分钟后,在金属丝末端自动地形成了稳定的类脂双层。本文报道了这种固体支撑的BLM(S-BLM)在检测Pb2+离子中的应用。S-BLM为液晶结构,它可用于基础研究、生物传感器和分子电子器件等技术上的应用。]]> 2108true 2107true 2106true 2105true 2104true 7AM/ml。4.测试体系中存在DETAPAC或EDTA,可使捕捉到的自由基信号明显增强。]]> 2103true 6和芦丁与白蛋白的作用。给出了这些药物分子与白蛋白的缔合离解常数,Vit B6和芦丁在人血清白蛋白中的结合位置与第214位色氨酸残基的距离分别为23.4Å和24.02Å。]]> 2102true 2101true 3的含量。结果表明狗红细胞中的GM3的含量较另三种的高,狗肝和兔肝次之,猪肝含量甚微。从狗红细胞中提取和纯化了GM3,其得量为每毫升压积红细胞351.0μg,纯度为92.2％。]]> 2100true 31P核磁共振技术(31P-NMR)研究了L7811鼠腹水肿瘤细胞和615系鼠胸腺细胞(正常对照细胞)。结果发现在肿瘤晚期阶段,L7811腹水肿瘤细胞的含磷化合物未进入完全不活跃状态。此外,腹水肿瘤细胞的磷脂组成与含量亦有明显改变。因此, 31P-NMR谱可做为观察肿瘤细胞内能量生成和某些磷脂合成宏观动态过程的一项参考指标。]]> 2099true 2+则可使BD消失,Cd2+可使[65Zn2+]i量减少。以上结果说明,Zn2+诱发BD的产生机理很可能是Zn2+代替Ca2+通过钙通道进入胞内引起的。]]> 2098true 2097true 2096true Ostrinia furnacalis(Guenèe))抗杀灭菊酯和抗呋喃丹品系的酯酶同功酶进行分析,并与感性品系比较,差异十分明显,为鉴别害虫抗药性的遗传变异提供了有价值的依据,并从方法学的几个侧面进行探讨,为广泛研究害虫抗药性机理做一些基础工作。]]> 2095true 2094true 2093true 32P-dCTP标记的v-abl癌基因探针与7例慢粒白血病细胞DNA的PvuⅡ、Hind Ⅲ和Bg 1 Ⅱ酶切片段杂交。结果发现其中3例慢粒病例的Pvu Ⅱ和Hind Ⅲ酶切杂交图谱与正常对照相比有明显变化,且Pvu Ⅱ酶切位点有多处改变。表明在慢粒白血病中,Ph染色体重排亦可累及 c-abl癌基因内部,并可能有多次多点重排发生。]]> 2092true 2091true +mRNA。将各条件下的大白鼠肝脏Poly(A)+mRNA在麦胚无细胞体外转译系统中表达。结果证明急性热暴露大白鼠肝脏同样能生成分子量分别为71kD、90kD、98kD和 110kD的一组热休克蛋白。]]> 2090true 2089true 2088true 50达到2.7×10-12mol/L.以二硫键连接的ITs比硫醚键连接的ITs细胞毒性高5—10倍(P<0.05),而硫醚键连接的ITs在动物体内代谢慢1倍,且其原型药物维持时间更长,稳定性更好。两类ITs在体内的代谢产物也不相同。]]> 2087true 2086true 2085true 3H-秋水仙碱与微管蛋白间的特异结合及DEAE纤维素对微管蛋白的离子交换作用,连续测定小鼠、鸡胚脑发育过程中的脑微管蛋白的合成变化。结果表明脑微管蛋白的合成速度均在其脑发育的临界期时达到最高峰。此时恰是甲状腺功能逐渐完善的时期。当小鼠进入育龄期时,雌雄鼠脑微管蛋白含量差异显著。可能说明性激素对微管蛋白的合成有重要影响。]]> 2084true 60Co 6.0Gy一次照射,观察硒对血及肝脏亚细胞组分线粒体GSHPx活性,LPO含量改变和 3H-TdR掺入的影响,以及在不同时间血和肝的GSHPx活性变化。并对不同剂量硒对LPO形成的影响进行了研究。结果表明,给硒及 60Co照射后小鼠体内的GsHPx活性显著增高;硒表现一定的抗辐射损伤作用和对损伤机体的恢复作用。另一方面,当给硒量在0.5mg/kg以上时,随着硒浓度的增加,LPO也增加,存在剂量效应关系。]]> 2083true 2现象的发生机制,我们对“红细胞HbA2”的化学组成进行了分析。“红细胞HbA2”的双向电泳结果表明,它含有两种血红蛋白成分:一种相当于HbA,另一种很可能是溶血液HbA2。其单向二次电泳结果也证明,它是由溶血液HbA2和HbA所组成。结果初步说明,盘红细胞中HbA2可能与HbA结合存在。两者可能有相互作用,也许这是产生血红蛋白A2现象的原因。]]> 2082true 2+和CaM时,提纯的牛脑Ca2+/CaM-PK Ⅱ能催化牛脑63kD PDE同工酶磷酸化。最大磷酸参入量是1mol/mo1亚基;(2)在Ni2+和CaM存在时,提纯的牛脑钙调神经磷酸酶能催化磷酸化型63kDPDE同工酶脱磷酸化;(3)CaH2+对磷酸化型63kD PDE同工酶的半激活浓度(AC50)高于非磷酸化型。]]> 2081true 2080true 2TPP)在苯中光解后产生的活泼自由基进行研究。当PBN存在时,光解中可给出6重ESR峰,表明自旋加合物为[HTPP-PBN]·。而氧和碘化物的猝灭作用可知H2TPP的光解是经由三重激发态途径进行的。而PBN的光敏分解则是由尚未转入三重态的H2TPP所引起的。]]> 2079true 2078true 2SeO3,NaHSeO3,Na2SeO4和SeO2等硒化合物对红细胞膜的作用。结果表明,Na2SeO3有抗氧化作用。表现为膜蛋白交联作用显著减小,脂质过氧化物(膜荧光物质)含量下降。本文还就硒抗氧化作用的机理作了讨论。]]> 2077true t0.5)分别为75 min(16α-BAP)和480 min(5α-DTB)。当在反应混合液中有底物孕酮或5α-二氮睾酮存在时,可降低抑制剂对酶活性的抑制速度。把标记的酶用盐酸水解,用氨基酸分析仪进行分析,最后确定,位于酶的活性中心的被标记氨基酸为组氨酸,它可能在氧化还原反应过程中发挥着重要作用。]]> 2076true 2+/CaM的PDE活性。氨茶碱有抑制CaM活化PDE的作用。本文对TFP作用机理及在调控癌细胞增殖及分化中的意义进行讨论。]]> 2075true 2074true 2键合态进行ab initio研究。结果表明Fe(Ⅱ)、Oc和Or的Mulliken布居值分别为24.18、8.19和7.64。这说明氧合血红蛋白的Fe-O2键合态不发生电子转移。研究模型所得到的频率与实验频率基本一致。研究结果不支持Weiss提出的Fe3+O2-模型,为解释血红蛋白传输氧的作用机理提供了新的理论依据。]]> 2073true 125碘标记不含apoE的人HDL3为配体,采用简便的聚乙二醇沉淀分离法,建立了纯化的大鼠肝细胞膜HDL受体分析法,并对膜HDL受体的性质进行了研究。]]> 2072true 2071true 2+可促增PMN发光,提示PMN氧代谢的调控与Fc受体和Ca2+动员有关;活性氧系PMN实施细胞毒效应的重要物质.]]> 2070true 2069true 2).以PEGm2修饰牛血Cu,Zn-SOD,得到了氨基修饰率为30％,残余活力为80％的纯PEGm2-SOD.修饰酶的荧光光谱及圆二色谱均有改变;盐酸胍变性及胃蛋白酶水解实验结果表明,修饰酶的稳定性高于天然酶;免疫学实验表明,与天然酶比较,修饰酶的免疫原性及抗原抗体反应性大为降低.]]> 2068true 2067true 2066true B.subtilis中编码β-1,3-1,4葡聚糖酶的基因bglS,它的产物在E.coli中的合成受宿主、载体和基因片段插入方向的影响。从E.coli细胞中BglS蛋白质定域分析和SDS-PAGE中活性酶分子检测发现存在着32kD和27kD两种活性酶分子,酶分子在周质空间很少停留。这种不同的活性酶分子的出现和分泌特点,可能与大肠杆菌细胞蛋白质加工和转位的方式有关。]]> 2065true 2064true E.coli DH5α,并筛选出阳性重组子。还进行了限制酶酶切分析和蛋白质SDS-PAGE分析。表达的新蛋白质带的分子量与预期的分子量相符。我们认为表达的新蛋白质是TrpE和E7蛋白的融合蛋白。]]> 2063true 2062true A280与A260的比值是1.76。它是由一个亚单位组成的酶分子。最小分子量是49000。pI值是5.2。氨基酸组分与其它来源的葡萄糖异构酶的氨基酸组分相比较有一些差异,其中Glu,Gly,ALa和Leu的含量都此其它异构酶的高,而Met,Trp,Asp,Thr则比其它葡萄糖异构酶的低。]]> 2061true 50约为300μmol/L;改变其底物浓度,测定酶活性并应用Lineweaver-Burk双倒数作图法作图,结果表明,IATPD对该酶活性的抑制作用与ATP呈竞争性,与PGAT呈非竞争性。]]> 2060true 2059true 2058true 2057true 2+,Mn2+,Ni2+,Co2+,Cr3+等与人血清白蛋白的结合;基于Förster无辐射能量转移机理,得出了人血清白蛋白第一类Cu2+结合部位与214位色氨酸残基间的距离。]]> 2056true 2055true Pseudomona cocovenenans)中所分离提取的毒黄素(toxoflavin)对黄嘌呤氧化酶(EC.1、2 3、2)作用的动力学试验表明,毒黄素是此酶的非必需激活剂,而且对以次黄嘌呤为底物的反应的激活作用明显高于以黄嘌呤为底物的反应。此激活作用属于部分混合型。这一结果为探寻毒黄素对人体的致毒机理提供了一条重要线索。]]> 2054true 2053true 2052true 2051true +-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性均降低,并且血浆总胆固醇和低密度脂蛋白-胆固醇浓度与这两种酶活性呈高度负相关,而血浆高密度脂蛋白-胆固醇浓度与Na+-K+-ATP酶活性呈正相关。这些变化的研究,对于进一步探讨动脉粥样硬化的发生机制及其防治可能具有重要意义。]]> 2050true 2049true Ⅱ相,最后促使六角形 HⅡ相解束变成液态.在解束相变中出现了红移现象.丙酮也有使 PE 液晶态先从片层相解束变成立方相,在解束相变中也出现红移现象,但再诱导立方相变成六角形 HⅡ相之后,不是促使其变成液相,而是将其稳定在六角形 HⅡ相.]]> 2048true 2-cytochrome c re-ductase QCR)]均催化同一底物反应,从酶学角度看应存在一类抑制剂能对三个催化泛醌反应的酶兼有抑制作用.经合成和筛选发现3-硝基-N-十二烷基水杨酰胺和2-羟基-3-N-十二烷基酰胺吡啶具备这类性质,它们对催化泛醌反应的三个酶都有抑制作用,而对与泛醌无关的末端氧化酶(cytochrome c oxidase)无任何作用.3-硝 基-N-十二烷基水杨酰胺对检测的心肌制剂各段酶活性的抑制能力均强于2-羟基-3-N-十二烷基酰胺吡啶.]]> 2047true 2046true +-ATP 酶的比活力下降.表明此浓度 T-2 毒素引起了软骨细胞结构与功能的明显改变.文章报道的方法可为检验大骨节病致病因子是否直接作用于大骨节病易侵蚀的软骨细胞提供了一种有效的实验手段.]]> 2045true ED50分别为15.8ng/ml 和 0.32ng/ml.进一步对 aFGF 的等电点及氨基酸组成做了分析.]]> 2044true Carassius aurattus),应用层析介质 Sephacryl S 体系从鱼肝脏中提取金属硫蛋白(MT),并对其性质进行研究.实验表明鲫鱼 MT 的性质与哺乳动物 MT 的性质十分相似.分子量约10 000,含丰富的半胱氨酸,较多的赖氨酸,不含芳香族氨基酸.紫外250nm 处强吸收,280nm 处几乎没有吸收。鱼 MT 含7个金属每分子,并含有20个巯基.测得鲫鱼 MT 等电点 pI 在5.6左右.]]> 2043true 2042true 8乙素分子.b.摄取速度很快,37℃下3min 即可达到饱和.c.被细胞摄取的乙素较难重新释放到溶液,而且未发生明显代谢变化.d.血清可携带乙素在细胞间传递.e.乙素趋向于进入细胞膜双分子层的深处.还结合实验结果对所采用的 SDS 胶束增溶法进行了评述.]]> 2041true 2040true 125I 标记载脂蛋白 CⅢ (apoCⅢ)为配体,采用聚乙二醇沉淀分离法,建立了小鼠肝细胞膜 apoCⅢ 受体(结合位点)放射分析法,并对人及小鼠肝细胞膜 apoCⅢ结合位点的特性进行了研究.]]> 2039true 2038true 2037true Phormidium luridum)别藻蓝蛋白在不同 pH值条件下的吸收光谱和共振拉曼光谱.发现低聚化的结果导致了三聚体别藻蓝蛋白 650nm 特征吸收峰的消失和一些共振拉曼带强度和位置的移动.结果表明在低 pH 值作用下的低聚化的别藻蓝蛋白中藻蓝胆素发色团分子的构象和自由胆素分子类似,比三聚体的别藻蓝蛋白的发色团分子更趋于卷曲,折叠的构象态.而三聚体的别藻蓝蛋白,主要的拉曼带 1645cm-1是其发色团分子构象处于更线性延展的标志,其光谱行为和吸收光谱 Avis/Auv所表征的发色团分子构象的结果相一致.]]> 2036true +双向通过.离子通道打开的持续时间一般在20—120ms之间,多为20—40ms 和 100—120ms;闭合持续时间一般在20—40ms 间,多为20ms.表明通道的开和闭非常频繁.]]> 2035true Km=9.8×10-5mol/L;SDS-PAGE 电泳和聚丙烯酰胺梯度电泳表明,鸭血清胆碱酯酶以相同亚基组成的不同聚合体形式存在,亚基分子量 78000,具有完整的酶活性.不同聚合体带电状态相同.]]> 2034true 2+诱导的低密度脂蛋白(LDL)氧化修饰的抑制作用,通过测定硫代巴比妥酸反应物质(TBARS),荧光物质(lipofusion)扫描及琼脂糖电泳,显示一定浓度的维生素 C 在24h 内对 LDL 的氧化修饰具有抑制作用,并呈现量效效应.提示维生素 C 作为体内存在的一种抗氧化物,可抑制 LDL的氧化修饰,从而在防治动脉粥样硬化的发生具有一定意义.]]> 2033true 20对钙调素依赖的磷酸二酯酶的抑制作用进行了研究,IC50=5μmol/L,表明其拮抗作用大于三氟啦嗪,是强的拮抗剂.荧光分析表明,钙调素与化合物 D20的结合常数为2.64(μmol/L)-1,一个化合物 D20分子与两个钙调素分子结合,并显示了结合方向性及空间位阻影响.]]> 2032true I 值为4.2.但经 SDS-PAGE 则显示二条蛋白带,其分子量分别为64kD 和27kD.酶免疫抑制试验表明该抗血清对 GGTP Ⅱ,Ⅱ’具有抑制作用,双扩散免疫试验产生单一沉淀线,并互相融合在一起.说明二种组织来源的 GGTP 的免疫学特性相一致.]]> 2031true 2030true 2029true 2028true 2027true 3＋作为荧光探针研究了皖南尖吻蝮蛇蛇毒中纤溶组分中钙离子的结合环境.实验表明每个纤溶组分中含有一个高亲和点.钙离子位于发色团色氨酸(Trp)附近,并可能和苯丙氨酸(Phe)结合,在不同波长的激发下能产生Trp→Tb3＋,Trn→Tb3＋→phe,Tb3＋→phe和Tb3＋→Trp之间的能量转移.Tb3＋位于Trp附近并可能与Phe结合.计算表明Tb3＋与Trp之间的距离约为5.66Å.]]> 2026true 2025true ＋转运时合理选用吖啶橙浓度及溶酶体用量的重要性、机理和原则，探讨了其与溶酶体的温育时间和K＋／H＋交换对测定H＋转运的明显影响.]]> 2024true 1 DNA片段重组质粒的人膀胱癌BIU-87细胞系可抑制VEGFmRNA表达.]]> 2023true 2022true 8U/mg, IL2比活为2.2×106U/mg.经阴离子交换、凝胶过滤层析，获得一定纯度的CH925，配合反相HPLC.洗脱收集蛋白峰，CH925纯度为98%.]]> 2021true 2020true 2诱导家兔,对血浆和红细胞溶血液中的MT组分进行色谱分离,发现血液中的MT主要存在于血细胞中.进而对血液MT的来源、分布及其重要的生物学意义进行了讨论.]]> 2019true ＋-ATPase 58kD亚基的基因,利用聚合酶链式反应(PCR)得到了58kD亚基的编码片段.直接将PCR产物连接到PET载体上表达.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白质印迹分析表明58kD亚基的基因得到高效表达.表达产物可达细菌细胞质蛋白的50%.]]> 2018true 2017true 2016true 2+, Mg2+-ATPase)活性降低，这些异常变化与氧自由基引发的脂质过氧化增强或脂质交换有关.]]> 2015true 2014true 3数量级.]]> 2013true 2012true 2011true Bacillus)O74菌株产生的纤维素酶经过Sephadex G-100,DEAE-Sephadex A-25和疏水相互作用Agarose 4B三种层析方法,分离纯化到一个仅具有内切β-葡聚糖酶(CMC酶)活性的纯组分.提纯后酶的比活力提高了27.9倍,总回收率为40%.分子量和等电位点分别为52 500和4.1.酶在pH4-12范围内均具有较高活性.其最适反应温度为50℃,最适反应pH为7.0,属于反应pH范围较广泛的耐碱性纤维素酶.除Hg+,Ag+,Zn2+和Cu2+等少数离子及少数表面活性剂、助剂对酶活性有一定影响外,酶活性相当稳定,符合洗涤剂用酶的条件.]]> 2010true 2009true 2008true 2007true 2006true 2005true 2004true 2003true 1F0-复合体呈现抑制而对F1-ATPase无抑制,这表明ADM可能是通过膜脂起作用的,适当浓度Mg2+能降低ADM对复合体的抑制.经 31P-NMR和标记荧光探针NBD-PE,DPH,MC-540以及内源荧光等的测定,结果表明ADM可能首先通过诱导F1F0膜脂形成非双层脂结构,继而影响了膜脂的堆积程度和流动性,进而引起F1F0-复合体酶蛋白构象的改变,最终导致酶活力的降低.Mg2＋则可能由于与ADM竞争与心磷脂的结合,而对ADM引起F1F0的变化产生保护作用.]]> 2002true 2-3对巨噬细胞内游离Ca2+和Mg2+的影响.实验结果表明:SeO2-3高于10-4mol/L时,有显著的细胞毒性.SeO2-3对细胞的毒性作用使细胞内游离Ca2+和Mg2+的浓度升高但Ca2+浓度的升高速率比Mg2+快.还有,高于10-4mol/L的SeO2-3对红细胞膜上的Ca2+-ATP酶活性有明显抑制作用.]]> 2001true 2000true 4多核苷酸激酶催化的[γ- 32P]ATP的转移反应.其转移效率为未修饰寡聚核苷酸的50%和2%.这种修饰的寡聚核苷酸对T4 RNA连接酶催化的反应没有影响.]]> 1999true 1998true 1997true RPL启动子下游,转化大肠杆菌DH5α,通过温度诱导表达,成功地在大肠杆菌中稳定、高效地表达了中国人IFN-γcDNA,其表达水平占全菌可溶性总蛋白的44.4%,初步复性后生物学活性测定结果表明γ-IFN表达量为0.45×107～2.34×107单位/L.]]> 1996true P<0.01),其中GM1与GD1b相对组分百分比值下降尤为突出(GM1:P<0.05,GD1b:P<0.01); b.单胺类神经递质中NE和DOPA水平下降,DA和HIAA水平升高(P<0.01)．结果提示脑组织经重复缺氧后，中枢神经组织细胞膜受到一定程度的损伤，其结果可能影响到单胺类神经递质的合成、释放、重摄取和贮存的全过程；据此推测脑组织缺氧时神经节苷脂与单胺类神经递质水平改变时存在着相互联系．]]> 1995true 1994true 1993true 1992true 1991true 1990true 1989true -5mol/L)能明显抑制过氧化反应，具有一定的抗氧化作用．并对实验的分子机理进行了简要的讨论．]]> 1988true kcat增加,Km不变.酶对温度和pH的稳定性都显著升高，但最佳反应温度不变．]]> 1987true 2+-ATP酶的方法．用非离子型去污剂C12E8 溶解肌质网，再通过反应红－120琼脂糖亲和层析柱使肌质网Ca2+-ATP酶纯度从粗品中的65％提高到99％，并具有较高ATP水解活性．经SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，为电泳纯．]]> 1986true Viscum coloratum lectin,VCL),是一种高毒性的植物毒蛋白,对小鼠静脉给药的LD50为4.4μg/kg,其粗提物也具有很强的毒性,对小鼠腹腔给药的LD50为0.2g/kg,分子量52 000,等电点10.5.]]> 1985true 1984true 3H]-TdR掺入,活细胞检测等方法测定CAIF对内皮细胞、Hela细胞、QGY7703细胞与小鼠骨髓细胞、人皮肤成纤维细胞等的DNA合成的影响,以及细胞毒作用.采用鸡胚绒毛尿囊膜实验测定CAIF对血管生成的抑制效应.结果显示:CAIF对内皮细胞产生强的抑制作用,对Hela细胞抑制很弱,对QGY7703细胞、小鼠骨髓细胞、人皮肤成纤维细胞均无抑制作用;对鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成产生明显的抑制作用.提示CAIF能较特异地抑制血管生成,CAIF达到电泳纯,是专一性较强的血管生成抑制因子.]]> 1983true 1982true 1981true 32P和[ 3H]肌醇标记磷脂,观察了促分化剂神经节苷脂GM3对人单核样白血病J6-2细胞肌醇磷脂代谢的影响.GM3抑制[ 32P]Pi和[ 3H]肌醇掺入J6-2细胞磷脂酰肌醇(PI),促进[ 32P]Pi和[ 3H]肌醇掺入磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP2),抑制[ 32P]Pi掺入磷脂酸(PA),抑制[ 3H]肌醇掺入三磷酸肌醇(IP3).GM3的上述作用均为浓度依赖性的,随GM3浓度的提高而增强.上述结果表明,GM3抑制J6-2细胞的肌醇磷脂代谢循环.]]> 1980true 1979true 1978true 1977true 10和丙吡啶对TMB4重活化这几种毒剂磷酰化AChE的影响中证实塔崩磷酰化AChE活性中心构象与沙林、梭曼和VX3种毒剂磷酰化的AChE明显不同.]]> 1976true 21表达进行了定量研究,并探讨了ras P21表达与DNA倍体与增殖指数的关系.结果表明,胃癌P21表达量明显高于非癌病变组织的表达量.胃粘膜非癌病变组织中,胃癌前病变组织P21表达量明显高于慢性萎缩性胃炎组织的表达量,并发现P21蛋白的表达量与胃癌和癌前病变组织学分级、DNA倍体、增殖指数密切相关.]]> 1975true 1974true 1973true E.coli系统中得到高效表达,表达产物经SephadexG-50柱层析分离以及胰蛋白酶和羧肽酶B的酶促转化等步骤,可得到纯的人胰岛素突变体(A4Glu→Leu),其氨基酸组成与预期值相符,其受体结合活性及生物活性与标准猪胰岛素的基本相同.]]> 1972true 1,N2,N3,N3-四乙酸铕钠为螫合剂.用Sephadex G-50凝胶柱层析分离标记C17和过量试剂.分部收集的层析物的光密度图和荧光强度图完全一致.蛋白峰处两管标记C17的比活性分别为5.2和8.9Eu3+离子每C17分子,而且C17的标记回收率为64%.标记C17至少在6个月内是稳定的.用铕标记物得到的时间分辨免疫荧光分析的标准曲线具有良好线性和斜率,表明标记物免疫活性良好,而且已用于血清CEA分析.]]> 1971true 1970true Vm和米氏常数Km比其在水溶液中分别提高了近6倍和3倍.]]> 1969true 1968true 3对国人单核样白血病细胞系J6-2细胞蛋白质磷酸化的影响,在[γ- 32P]ATP,GM3,ATP,Mg2+与J6-2细胞液及颗粒两部分共同反应,10min(30℃)体系中,观察到GM3对两部分蛋白质磷酸化的调节作用.GM3(100μmol/L)促进颗粒部分分子量为180 000,87 000,78 000,67 000,43 000及31 000的蛋白质磷酸化,促进胞液部分分子量为87 000及56 000的蛋白质磷酸化,而且能抑制70 000及43 000蛋白质磷酸化.由于GM3已被前人证实能对J6-2细胞起分化作用,其作用时间长达4-6d,很可能GM3对蛋白质磷酸化作用的调节是GM3促分化作用的早期信号.]]> 1967true 1966true 1通用引物MY 11/9介导聚合酶链反应(PCR),从人生殖道疣、癌组织中扩增人乳头状瘤病毒(HPV)同源序列得394-552bp DNA片段,再以内引物GP5/6介导第二次扩增得139-154bp片段,然后根据Rsa Ⅰ酶切扩增片段的电泳图谱来分出HPV型别,无需特异型别的探针进行分子杂交,35例宫颈癌和30例生殖器疣HPV同源序列检出率分别为85.75%和96%;12例卵巢腺癌检出HPV同源序列者7例.本法简便、灵敏、可靠,并适合于临床应用.]]> 1965true -4-1.3×10-2mol/L,响应时间小于60s.]]> 1964true 1963true Km分别为83μmol/L和61μmol/L. 对氯汞苯甲酸能显著抑制酶活性, 二硫苏糖醇可使被抑制的活性得到部分恢复.]]> 1962true 3, 106.]]> 1961true 1960true 3H-TdR掺入实验观察了人低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)及高密度脂蛋白(HDL)和相应的氧化修饰型脂蛋白对培养人SMC DMA合成的影响.结果发现，HDL对 3H-TdR掺入SMC DNA无影响(P>0.05); LDL和VLDL 3H-TdR掺入量明显增加(P<0.05);OX-LDL, OX-VLDL及OX-HDL均使 3H-TdR掺入DNA显著增加(P<0.01).结果表明，LDL和OX-LDL, OX-VLDL及OX-HDL均能刺激SMC DNA合成,促进SMC增殖.]]> 1959true 1958true 1957true 1956true 2+的动态变化与立体分布影像. 结果显示, 在37℃, Fluo-3/AM终浓度为6μmol/L的条件下, C57BL/6J小鼠巨噬细胞负载1h左右即可获得良好的标记效果. 相反, 若探剂浓度太高或负载时间太长, 胞内荧光强度太强, 影响在共聚焦显微镜镜下分辨细胞内结构. 因此用LSCM研究细胞内游离Ca2+变化时, 荧光探剂的负载应以获得最适荧光信号而不是以最大荧光强度为标准. 上述方法在其他如平滑肌细胞、卵母细胞中的测定亦获得满意的结果, 这对进一步研究各种生理和病理条件下细胞内Ca2+信号的动态变化、与跨膜Ca2+梯差的关系及对活细胞功能活动的调节提供了一种可行的、直观的研究手段.]]> 1955true 2+通道单通道电活动的影响. 结果表明, T-2毒素浓度为10mg/L时, 心肌细胞B、L和T三型Ca2+通道均受到明显的阻滞, 其阻滞作用表现为使Ca2+通道的开放概率减小, 开放时间缩短, 关闭时间延长, 而对流过Ca2+通道的Ba2+流幅值无影响.]]> 1954true 1953true 1952true 1）呈现还原状态．将缺脂泛醌细胞色素。还原酶与磷脂重组，可恢复其活性，同时那些呈还原状态的细胞色素也恢复到氧化态.此结果表明如此制备的缺脂泛醌细胞色素c还原酶仍保持着活力所必需的构象状态，细胞色素氧化还原状态随脂缺失的变化反映了脂与蛋白的相互作用.]]> 1951true Comamonas testosteroni菌株中获得了SDS-PAGE单一条带, 相对分子质量为62×103的间羟苯甲酸4-羟化酶比活提高21倍, 产率为30%.此酶为FAD加单氧酶, 催化间羟苯甲酸转变为3,4二羟苯甲酸.]]> 1950true 1949true 2O2所致V79细胞DNA链断裂的防护作用. 结果表明TFA对这两种损伤因子所致的DNA损伤均有不同程度的防护作用, 当TFA浓度达到0.4g/L和0.6g/L时, 分别对H2O2和γ射线所致的损伤有保护作用(P<0.05), 而浓度增至0.8g/L和1.2g/L时, 分别对两种因素所致的DNA链断裂损伤有非常显著的防护效果(P<0.01), 对H2O2的防护效果优于对γ射线.]]> 1948true 1947true 7与镉7金属硫蛋白．在不同pH条件下，比较后二者清除羟自由基能力；在pH6条件下，比较锌7－金属硫蛋白与有关蛋白和无机锌盐清除羟自由基效果．结论是在近生理pH条件下锌7－金属硫蛋白清除羟自由基能力远强于镉7－金属硫蛋白．金属硫蛋白清除羟自由基的能力主要来源于蛋白中处于还原态的流基．]]> 1946true E．Coli J5株对合人Ig基因的噬菌体抗体库进行淘筛富集，免疫印迹筛选，以及ELISA检测，结果获得4株能与E．Coli J5株结合的阳性克隆，且阳性克隆结合抗原的活性可分别被E．Coli J5株、E．Coli Rc-LPS和抗E．Coli J5株核心糖脂域MAb抑制．PCR检测表明，4株阳性克隆均分别带有约660bp大小的重链和轻链基因片段．SDS－PAGE与蛋白质印迹的结果显示，经IPTG诱导的阳性克隆能表达分子量约为50000大小的蛋白，提示该4株阳性克隆能够表达具有一定抗原结合活性的人源Fab片段．]]> 1945true 1944true 1943true 2和有限的碱水解一起，可用于直接的酶法RNA序列分析．]]> 1942true 2O2－Fe2+体系产生的羟自由基的清除作用．结果表明，这3种成分均有清除氧自由基的作用；对超氧阴离子自由基的清除效能大于对羟自由基的清除作用；其作用强度依次为TFA＞TSA＞TPA．结果提示清除氧自由基可能是黄芪抗衰老的主要机理之一，TFA和TSA是黄芪抗氧化作用的主要药理活性成分．]]> 1941true 2（McAbGB2）识别的抗原（McAbGB2抗原）性质及含量进行了研究．结果表明，McAbGB2抗原是由糖及蛋白质组成的复合蛋白质，不耐热；McAbGB2抗原决定簇不存在于铁蛋白及癌胚抗原；蛋白质印边检测表明McAbGB2抗原有两条区带，分子量分别为116及45ku，分布于血液及癌组织；用McAbGB2进行血清学分析（ELISA试验），结果表明：乳腺癌阳性符合率达98％（50／51），正常人及乳腺良性肿瘤病人的假阳性率分别为6％（3／50）及6．7％（1／15）．McAbGB2抗原可能是新的乳腺癌相关抗原．]]> 1940true 1939true 1938true 1937true IC50）为10-6～10-8mol·L-1，催化超氧离子自由基（O-·2）歧化的反应速率常数kq为106～108mol-1·L·s-1.同时观察到几种模拟化合物有抗肿瘤活性或增强水稻抗寒性.]]> 1936true 125I－C1q的结合呈持异、剂量依赖、可饱和及可逆性，每个细胞C1q结合位点数为1.1×106，对C1q的Ka值为1.5×107mol-1，Hill系数为0.9643．Jurkat C1q受体识别C1q的胶原样区．该受体是分子量约70000的膜蛋白分子]]> 1935true 1934true 1933true 3(1,25(OH)2VD3)诱导2d、佛波酯（PMA）诱导6h的人大肠癌细胞CCL229的蛋白激酶C（PKC）及其抑制剂活性．结果显示：诱导后PKC总活性升高(P<0.05); RA, 1, 25(OH)2VD诱导引起细胞质PKC活性增加，PMA诱导后细胞膜PKC比率（细胞膜活性／总活性）显著升高(P<0.01)；诱导后PKC抑制剂活性均降低，其中1, 25 (OH)2VD3组与对照组有显著差异(P<0.05)；提示PMA引起PKC从细胞质向细胞膜转移，不同药物诱导后PKC及其抑制剂活性出现不同的相对均衡关系．]]> 1932true lividans TK54中表达外源基因hGM-CSF的可行性进行了探索，分析了影响外源基因表达的某些因素如：SD与ATG之间的距离，时间对表达的诱导等．为获得外源基因的高效表达探索了最适条件，然后利用MEL信号肽与目的基因片段融合，在链霉菌中获得了分泌型hGM-CSF表达产物，其中有1／3直接分泌到培养基中，其纯化产物经TF－1细胞培养及集落形成实验均证实其生物学活性达到5MU／L．]]> 1931true 2O2－Fe3+体系产生的OH·对人淋巴细胞DNA的双链断裂损伤．H2O2－Fe3+浓度与DNA双链断裂呈明显量效关系；随OH·作用时间延长，细胞DNA双链断裂加重；过氧化氢酶对OH·损伤有明显抑制作用．脉冲电场凝胶电泳法可检测到的H2O2和FeCl3引起细胞DNA双链断裂的最低浓度为0.3 mmol/L和6 μmol/L．]]> 1930true 1929true 1928true 1-Agkistrodotoxin,β1-AgTx)经制备电泳被进一步纯化.经SDS-PAGE鉴定, 观察到天然β1-AgTx以及经电泳纯化获得的碱溶β1-AgTx-OH-成分在电泳图谱上出现的聚合谱带, 然而这些聚合谱带的含量似乎并不随时程的延长而明显地增强.另经双向电泳分析发现, 无论是天然的β1-AgTx或经电泳纯化获得的碱溶β1-AgTx-OH-成分均含有三个具有不同等电点(pI 7.0, 5.8和5.4)及不同含量比例的异构体谱带.天然β1-AgTx中三个异构体的含量比并不随时程延长而明显改变, 碱溶β1-AgTx-OH-成分中的三个异构体的含量比则随着时程的延长而发生显著的变化.]]> 1927true RPL调控下在大肠杆菌中的可溶性高效表达.SDS-PAGE分析表明，鸡肌腺苷酸激酶的含量可占大肠杆菌细胞总蛋白含量的38％.利用Johnson等的干冰/乙醇-冰水浴反复冻融法，可将此重组蛋白进行富集，纯度可达85％以上.鸡肌腺苷酸激酶可与抗兔肌腺苷酸激酶单克隆抗体产生强的交叉反应.]]> 1926true 3H标记σ型阿片受体配基DPDPE与膜受体结合.融合蛋白的肿瘤细胞生长抑制和体内抗肿瘤作用也高于母体分子, 说明脑啡肽和αⅠ干扰素的融合蛋白实现并增强了脑啡肽-αⅠ干扰素融合蛋白的双重功能.]]> 1925true 1924true -·2)对［3H］DL-谷氨酸与大鼠大脑皮层突触膜谷氨酸受体结合的影响，结果表明O -·2明显增强谷氨酸与其受体的结合力，此作用能被2-苯基-1，2-苯并异硒唑-3(2H)酮(EBSELEN)(1 μmol/L)所抑制.]]> 1923true C3基因.其表型分别是：TfC1, TfC2, TfC1C2, TfC1C3, TfC1Dchi, TfC2Dchi.TfC1=0.7420, TfC2=0.2420, TfC3=0.0027, TfDchi=0.0133, 符合Hardy-Weinberg定律, 并与其他已见报道的汉族 Tf基因频率大致相符.]]> 1922true Candida utilis细胞壁的酶解,发现一种分子质量为33 ku的酵母细胞壁主要结构蛋白. 研究显示,在细胞壁上这种蛋白质与细胞壁绝大多数蛋白质成分不同, 它不被胰蛋白酶水解,但对枯草杆菌蛋白酶的作用敏感.33 ku蛋白存在于酵母菌整个对数生长期的细胞壁中,特别是在对数早期细胞壁中，它是唯一的对胰蛋白酶作用不敏感的蛋白质成分.实验证明，该蛋白质对维系酵母细胞壁骨架成分葡聚糖的相互连接和细胞壁的完整结构,具有重要作用，是一种重要的酵母细胞壁嵌合蛋白.]]> 1921true 1920true 1919true 1918true 1917true ω-nitro-L-arginine,L-NNA)抑制巨噬细胞内诱生性一氧化氮合成.发现L-NNA能抑制一氧化氮的合成,而且在一定的范围内,其抑制作用随L-NNA作用剂量的增大而增强;在培养体系中加入L-精氨酸能够逆转这种抑制作用.说明L-NNA可能通过竞争性地与诱生型一氧化氮合成酶(iNOS)活性位点结合,抑制巨噬细胞内的一氧化氮合成.]]> 1916true 1915true 4的晶体结构十分相似.应用计算机同源模拟技术，以hGH-R和CD4的三维结构为模板，模建了hIL-6R功能域（106～322位）的三维结构，初步描述了其结构保守区的构象特征.文章研究模建的hIL-6R三维结构模式为探讨可溶性IL-6R点突变的结果，以及进行三维定量分析IL-6R胞外区功能域的构效关系提供了空间结构基础.]]> 1914true -)是一种强细胞毒性物质. 使含酚基物质如酪氨酸等硝化，是过亚硝酸根损伤生物系统的重要途径之一. 研究了柠檬酸铁和草酸铁对过亚硝酸根硝化酪氨酸反应的影响.在生理pH条件下柠檬酸铁和草酸铁对硝化反应无影响. 在弱酸性条件下柠檬酸铁和草酸铁可催化硝化反应. 对pH影响铁配合物在硝化反应中的催化活性的原因进行了讨论.]]> 1913true 1912true 1911true 1910true 1909true 1908true 1907true 2+-ATP酶共同重建在脂质体上, 酶活力明显增加. 经负染、冷冻断裂复型后电镜等形态学方法证实形成的脂酶体囊泡封闭性好,脂酶体上Ca2+-ATP酶蛋白颗粒均匀、直径增大.]]> 1906true 2+的影响.这些结果表明RF15可能是PSA启动子中的一个新的附属调节元件.与之结合的调节蛋白可能是通过与雄激素受体的相互作用促进雄激素对PSA基因的诱导作用.]]> 1905true 1904true 60-磷脂酰胆碱与体外培养的HeLa细胞融合后，以4 000 lx光强度激发C60(C60浓度20 mg／L)对HeLa细胞具有显著的光致杀伤作用.生化测定证实光激发C60导致膜蛋白巯基含量减少、膜脂过氧化、丙二醛含量增高，SDS-PAGE证明膜蛋白交联，荧光偏振显示膜流动性降低，电镜超微膜结构破坏，经MTT法检测，大部分细胞死亡.C60的强烈光致作用证实了Arbogast等认为光激发C60可产生单线态氧的观态.]]> 1903true 1902true -6 mol/L和4×10-5 mol/L, 诱导细胞24 h.结果发现处理组细胞均有典型的DNA亚二倍体峰, DNA电泳有梯状图谱; 细胞周期百分比SS组较对照组S期增加及G1期减少明显(P＜0.05); ST组G2期增加、G1和S期显著减少(P＜0.01). 对照组细胞染色质分布均匀; 胞质微丝呈细颗粒状, 均匀分布. 诱导细胞染色质碎裂呈不规则缺损; 胞质微丝散乱, 颗粒粗大, 排列不均. 结果表明, SS、ST可诱导CNE-2Z细胞凋亡, 细胞周期和骨架在细胞凋亡时, 均发生了明显改变.]]> 1901true 1900true 1899true 1898true 1897true Km(NO)和Km(NADH)分别为0.128 mmol/L和0.208 mmol/L. Vmax(N2O)为11 363 min-1. 光谱吸收特性研究表明：rF·P-450nor具有典型的血红素蛋白的特性，在413 nm有最大吸收峰. 加入还原剂Na2S2O4时，最大吸收峰前移至405 nm. 与CO结合后，再加入还原剂Na2S2O4时，在450 nm处表现最大吸收.与NO结合后，最大吸收峰移至430 nm附近. 这些光谱特征的变化与天然的F·P-450nor完全一致.]]> 1896true 1895true 1894true 1893true 3和J6-2表达Mφ介导的肿瘤细胞毒(MTC)，CGS与DGS的激活效应高于Ge-132，CGS为最强.它们激活的Mφ磷脂PC代谢转换较常驻Mφ(R-Mφ)明显增高，表现在［3H］胆碱掺入PC增加，CGS的增加效应最强.Ge-132激活的Mφ(Ge-12-Mφ)与R-Mφ比较，增加［32P］Pi掺入PC，降低［32P］Pi或［3H］肌醇掺入PI，但［32P］Pi或［3H］肌醇掺入PIP、PIP2未有显著差异.PC代谢转换的增加很可能是有机锗激活Mφ表达MTC的信息传递所需要的.]]> 1892true 1891true 1890true 1889true －5 mol/L时，αA基因的转录又呈反跳性回升；提示αA晶体蛋白在晶体细胞内，至少应答于高浓度的硒，可能作为一种应激蛋白表达.而随着硒浓度的增加，β23基因的转录则呈现出先升后降的双相变化；提示一定浓度的硒可能借某种机制影响或改变晶体上皮细胞的分化状态.]]> 1888true ex/λem=290/438 nm，最小检测量为1 ng，酪氨酸(Tyr)其次(284/390 nm)为Trp的1/10，苯丙氨酸(Phe)在276/386 nm，脯氨酸(Pro)在308/454 nm，组氨酸(His)在320/466 nm，其磷光只有Trp的1%.Phe与Trp磷光寿命最长，在7 s左右；His最短，只有0.49 s；Tyr 2.8 s，Pro 1.34 s.另外研究氨基酸在甲醇，乙醇，丙醇，丁醇中及pH对氨基酸磷光性质的影响.还计算了Stokes位移能量及激化态pK*a值.]]> 1887true 1886true nHSA)和半乳糖基多聚-L-谷氨酸(GalnPLGA), 并以 125I标记的去唾液酸胎球蛋白(ASF)为标准配体，测定了合成配体抑制 125I-ASF与大鼠肝细胞膜ASGPR结合的IC50值. 结果表明，Gal12HSA、Gal15HSA、Gal26HSA、Gal30HSA和Gal34PLGA均能够有效地抑制 125I-ASF与ASGPR的结合，且前者与ASGPR的亲和力随半乳糖基化程度的增加而增加. 这些合成配体来源丰富、制备简单，适合于作为药物或基因肝靶向运送的导向配体.]]> 1885true E.coli中表达，SDS-PAGE表明，BDNF得到表达，以包涵体形式存在.]]> 1884true 2SO4·10H2O/Na2SO4对系统水分的变化具有有效的缓冲作用；非极性硅藻土吸附固定酶，使之对水分的敏感性得到缓解；另外，加入分子筛去除副产物——“水”可促进酯化过程的进行.]]> 1883true 1882true 2+］i)的变化关系.同时还研究了异搏定对实验性硅肺大鼠模型的作用.结果表明：由α-石英引起的肺泡巨噬细胞内钙升高是由于大量细胞外钙内流,造成细胞内钙超载,引起细胞死亡,并进一步导致硅肺形成.异搏定可以抑制细胞内钙增加,降低细胞的死亡.动物模型实验结果还表明异搏定对硅肺的发生有明显的抑制作用.提示异搏定可能成为硅肺的防治药物.]]> 1881true TK基因表达的复制缺陷型腺病毒载体(AdCEATK).纯化的重组腺病毒滴度达1×1012pfu/ml.CEA阴性的HeLa细胞感染AdCMVTK后对丙氧鸟苷(GCV)很敏感，而感染了AdCEATK后不被GCV杀伤.与此相反CEA阳性的LoVo细胞中AdCMVTK和AdCEATK都有很好的表达活性，说明CEA启动子有良好的细胞专一性.AdCEATK/GCV系统还有明显的旁杀伤效应.此载体将有助于实现对CEA阳性肿瘤的专一性自杀基因治疗.]]> 1880true 1, ribozyme C2).首先应用体外切割实验筛选出作用于HCV-RNA起始密码子上游GTA↓位点的核酶RzA有较好的活性.为初步验证核酶RzA在细胞内的切割活性，经脂质体介导，将RzA-RNA与另一携带该核酶靶基因的质粒表达载体pCl-neo-luciferase(载体中荧光素酶基因受核酶靶基因的调控)共转染HepG2细胞.通过测定荧光素酶基因的表达证实了核酶在细胞内有较好的切割活性.在此实验基础上，把RzA基因克隆至pCl-neo质粒表达载体中，再次经脂质体介导，将重组的表达载体pCl-neo-RzA与携带该核酶靶基因的质粒表达载体pCl-neo-luciferase共转染HepG2细胞，获得了更好的切割效果.]]> 1879true 1878true 1877true 32P-Na2HPO4标记猪血小板，在阿斯匹林阻断花生四烯酸代谢，Apyrase去除分泌的ADP情况下，以A23187和PMA为血小板激动剂，staurosporine为PKC抑制剂，研究Ca2+和蛋白激酶C在血小板聚集中的作用.结果表明，a.A23187在1～20 μmol/L引起血小板聚集，相应地，明显地引起40 ku、20 ku蛋白质磷酸化，且存在剂量和时间效应关系.b.A23187和PMA在血小板聚集和蛋白质磷酸化上都存在着协同效应.c.1 μmol/L staurosporine可大部分抑制20 μmol/L A23187诱导的血小板聚集和20 ku、40 ku蛋白质磷酸化.结果提示，Ca2+激活血小板是建立在激活PKC的基础上，Ca2+通过激活PKC诱导血小板聚集，这是Ca2+激活血小板的主要途径.]]> 1876true 1875true 1874true 1873true 1872true 1871true pichia pastoris是一种理想的真核蛋白高水平表达系统.将鲈鱼(Lateolabrax japonicus)生长激素基因克隆到酵母整合型质粒载体pHIL-D2，经转化his4缺陷型酵母GS115，用PCR方法筛选阳性转化子，并用斑点印迹法筛选多拷贝转化子，经甲醇诱导表达，SDS-PAGE和蛋白质印迹杂交结果证实了表达产物为重组的鲈鱼生长激素.]]> 1870true 1869true 1868true 1867true 4氧化法活化，固定糖化酶，测定了固定化糖化酶的催化反应特性，并与游离酶作了比较.固定化酶在55℃下水解10批淀粉溶液，总反应时间超过24 h，活力无显著变化.]]> 1866true 1Fo复合体Fo部分a亚基的色氨酸荧光可被竹红菌乙素(hypocrellin B, HB)猝灭.不同温度下测定Stern-Volmer图的结果显示，猝灭常数(Ksv)随温度的增加而加大，时间衰变荧光的结果显示，荧光寿命随HB浓度的增加而减小，加入不同浓度的HB, F1Fo复合体的吸收峰没有位移.这些实验结果支持动态猝灭机理.HB还具有有效猝灭浓度低，不影响酶的活力;在脂相和水相的分布比率可高达16 560∶1;实验操作简便等优点.因此HB可作为理想的疏水相荧光猝灭剂，研究与膜结合的F1Fo复合体中镶嵌于膜脂内Fo的构象变化.]]> 1865true 1864true 1863true k基因α和β链cDNA，插入逆转录病毒载体pLSXN，构建Ⅰ-Ak α和Ⅰ-Ak β表达载体，采用脂质体介导的重组质粒转移方法将Ⅰ-Ak α和Ⅰ-Ak β基因导入EL4小鼠淋巴瘤细胞和P815小鼠肥大细胞瘤细胞，经流式细胞仪检测在细胞表面有Ⅰ-Ak表达.将以上两种细胞注射到同源小鼠C57BL/6(H-2d)皮下，观察到肿瘤产生后又消退，证明在肿瘤细胞中单独导入同种异型MHCⅡ类分子基因也能激活肿瘤的细胞免疫，为进一步开展肿瘤的基因治疗奠定了基础.]]> 1862true 1861true 1860true 1859true P＞0.05).]]> 1858true γ(PKCγ)亚类的重组质粒并经基因转染技术和DNA印迹、蛋白质印迹与PKC活性分析，获得了过表达PKCγ的C3H10T1/2细胞——NCP4.NCP4细胞生长速率提高，流式细胞光度术检测表明，NCP4细胞G1期百分率下降，S期和G2+M期百分率升高，与对照组细胞相比，血清依赖性明显下降,贴壁依赖性降低，在软琼脂中形成小集落，出现部分转化表型.进一步检测，首次观察到NCP4细胞中癌基因c-sis表达明显增强，这可能是NCP4细胞血清依赖性下降的分子机理之一.实验表明，在正常C3H10T1/2细胞中PKCγ的过表达可直接导致细胞增殖加速并可诱导出现部分转化特征.]]> 1857true 3亲和柱分离及C18反相高压液相层析纯化后，再用高压电泳，手工Edman降解及自动氨基酸序列分析等技术，对其磷酸化位点进行鉴定.结果发现：GSK-3可使PKA预处理的τ至少在丝氨酸(Ser)-195，Ser-198，Ser-199，Ser-202，Ser-235，Ser-262，Ser-356，Ser-404，苏氨酸(Thr)-205和Thr-231等10个位点发生磷酸化.其中Ser-198，Ser-199，Ser-202，Ser-235，Ser-262，Ser-404，Thr205和Thr-231为Alzheimer病（AD）τ蛋白的异常磷酸化位点.上述磷酸化作用高度抑制τ的生物学活性，提示：AD τ的生物学功能的抑制与Ser-198，Ser-199，Ser-202，Ser-235，Ser-262，Thr-205和Thr-231的磷酸化密切相关，PKA和GSK-3的相互作用可能在AD神经原纤维变性中起重要作用.]]> 1856true Kd值虽无明显变化但Bmax值显著减小（P＜0.01，与正常对照组比较)；注射HDL制剂后，As家兔肝细胞膜LDL受体Kd值仍无明显改变，但Bmax值却显著回升（P＜0.01，与高脂组比较).表明人血浆HDL具有增加As家兔肝细胞膜LDL受体活性的作用.]]> 1855true 1854true P.pastoris中成功表达，将编码HRP-C成熟肽的cDNA构建到pPIC9上，再转化到P.pastoris中，筛选到了分泌表达非糖基化HRP和高糖基化HRP(分子质量超过100 ku)两种主要产物的重组细胞株.优化表达条件，目标产物在摇瓶发酵液中高效表达，可达4～6 g/L.并且直接从发酵液中可获得具有活性的高糖基化HRP，每毫升发酵液中酶活力约有2 U，经初步的纯化HRP具有最大吸收峰403 nm.]]> 1853true 1852true 32P逆转录标记组织总RNA,将cDNA探针与有5 184个基因或表达序列标签EST(expression sequence tag)的高密度cDNA微阵列GF200杂交,软件分析表达谱差异.结果发现三者均呈低表达为主的表达谱,密度值在200以上的基因及EST在鼻咽癌有110个,肺癌134个而鼻咽组织有158个；5个EST在鼻咽高表达但鼻咽癌低表达,3个EST在鼻咽癌高表达但正常鼻咽低表达.结果表明鼻咽癌与正常鼻咽及肺癌组织存在差异表达基因,可能还有新基因在鼻咽癌发生中起作用；采用高密度cDNA微阵列是一种筛选差异表达基因的快速有效方法.]]> 1851true 1850true 1849true A615／A280)高达14，突破了国内外报告的最高值.]]> 1848true Kd值为7.17±1.18 mg/L，Bmax值为(622.5±146.1)mg/g(n=7).]]> 1847true 1846true 1845true Km值为7.9×10-7 mol/L,PI的表观Km值为6.6×10-7 mol/L. 腺嘌呤核苷是该酶的有效抑制剂，3.5×10-7 mol/L腺嘌呤核苷可使该酶活力降低约50％，而TritonX-100对该酶活力具有刺激作用，0.5% TritonX-100可使该酶表现为最高活力.]]> 1844true 53基因导入血管平滑肌细胞后对c-fos和c-jun基因表达的调控作用，将Rb基因或P53基因重组腺病毒载体转染人脐动脉血管平滑肌细胞，应用RT-PCR和免疫组化法检测c-fos、c-jun的mRNA及蛋白质表达水平，以DNA琼脂糖凝胶电泳和β-半乳糖苷酶染色分别观察细胞凋亡和细胞衰老.结果显示，野生型P53基因导入可诱导平滑肌细胞凋亡，c-fos和c-jun mRNA及蛋白质表达水平显著增高.外源性Rb基因导入能促进细胞衰老，下调c-fos基因表达，但对c-jun基因表达没有明显影响.]]> 1843true 2型，该cDNA含一编码369个氨基酸的阅读框架，其中的STP区含14个氨基酸，由STPC编码，胞浆尾区含23个氨基酸，为CYT2,未发现有东西方人种之间的核苷酸的差异.]]> 1842true I-V极相关(r=0.96),整流作用不明显;极化电流绝对值＞1.0 nA时,在两个方向上发生整流,I-V(电流-电压)曲线表现为“S”型, 其中伤害感受神经元整流作用较非伤害感受神经元明显.伤害感受神经元Rm、τ、Cm明显大于非伤害感受神经元(P＜0.01或P＜0.05).结果提示SI区伤害感受神经元与非伤害感受神经元可能在细胞膜结构、细胞大小等方面存在有意义的差别,从而反映其不同的生理功能.此电学参数特点也可为痛觉的特异性学说提供实验资料.]]> 1841true 1840true 2+］i的明显升高，AMP则无此作用.多型核白细胞对ATP和ADP具有不同的浓度依赖性.当细胞外的钙离子被螯合后，ATP和ADP仍能引起细胞内游离钙浓度的升高.结果表明多形核白细胞存在着对ATP和ADP敏感的P2型嘌呤受体，并且属于P2型受体中的P2Y亚类.]]> 1839true 1838true 1837true 1836true 1835true 125I-EGF与人多形成胶质细胞瘤BT325细胞系膜上EGF受体的饱和结合实验, 竞争抑制实验研究GM3，BBG(bovine brain gangliosides)对EGF受体最大结合量, 亲和常数及受体数目的影响; 放射受体法观察EGF-EGFR复合物内吞过程, 测定胞质和培养基中EGF含量.结果表明: BT325细胞质膜上存在高亲和力EGF结合位点,GM3对EGF与其受体的亲和力无明显抑制作用(P＞0.05),但能明显减少其受体的数目(P＜0.05); GM3能明显延长EGF-EGFR复合物内吞过程; GM3处理的胞质中EGF浓度比对照组显著升高(P＜0.05), 培养液中无明显差异,这可能是由于GM3抑制EGF分泌所致.]]> 1834true 2O2损伤后的红细胞（RBC）与IgG的结合能力，并直接检测细胞自发荧光的变化，以研究H2O2对RBC抗原性和脂质过氧化（LPO）荧光产物生成的影响.结果表明RBC抗原性和自发荧光变化与H2O2浓度和作用时间有关，抗原性变化对H2O2更敏感，比引起自发荧光明显增强所需H2O2浓度低两个数量级；还发现了RBC抗原性和自发荧光的变化与细胞的散射光有相关性.]]> 1833true 1832true 1831true 1 368～373, α2 381～388.其中三段已知的蛋白质二级结构与此mRNA二级结构单元间有准确的对应关系.与四种以多重序列联配为基础的蛋白质二级结构预测方法（准确率均为73.20%左右）相对照，预测结果基本一致.结合单体聚合区31个氨基酸晶体结构，在SGI INDIGO2工作站上构建了p53 C端108个残基的三维结构.进一步揭示了p53 C端诸多生物功能区之间的空间构象关系.]]> 1830true E.coli)中获得高效、可溶性表达，而且，确证了表达产物具有预期的生物学活性.]]> 1829true －6～1.91×10－3 mol/L,响应斜率为32.7 mV/pC, 响应时间为5～10 min, 使用寿命可达25 d.用研制的传感器测定了人和兔血清中的甘油三酯含量,结果满意.]]> 1828true 1827true 53基因的LCLs在DNA损伤剂——顺铂处理前未检出p53蛋白，经顺铂处理后，LCLs随作用时间延长细胞存活率明显下降、p53蛋白水平升高、DNA电泳显出梯状带；含mt P53基因的淋巴瘤细胞在顺铂处理前可检出高浓度的p53蛋白，经顺铂处理后，细胞存活率与p53蛋白并无明显改变.这些结果表明：顺铂引起细胞DNA损伤、激活wt p53蛋白的表达、继而wt p53蛋白又促进了DNA损伤细胞凋亡.]]> 1826true 1825true +多巴胺能神经瘤细胞(MN9D)的毒性作用表明MPP+导致细胞电压依赖性钙电流(ICa)显著下降；MPP+作用1 h以内高去极化电压较低去极化电压诱发的钙电流先受MPP+影响而下降; MPP+对未分化细胞的钙电流无显著作用(n=3).]]> 1824true 1823true 4后,转化至E.coli BL21(DE3)中, 构建的重组转化子用酶切和测序鉴定.诱导含有重组转化子的E.coli获得高效表达,经SDS-PAGE和蛋白质印迹鉴定后,采用反复冻融法及葡聚糖凝胶层析柱分离,初步纯化出调宁蛋白突变体T184A.]]> 1822true 1821true ΔAmax）显著低于对照组(P＜0.05)、最大荧光淬灭时间（TΔAmax）、半数荧光淬灭时间（T1/2ΔAmax）非常显著延长(P＜0.01)，肝线粒体质子跨膜转运能力下降；膜脂分子烃链和膜脂深层次流动性下降；线粒体膜PLA2活性增加；血浆脂质过氧化产物MDA和线粒体MDA含量均显著增加.可能膜脂质过氧化和磷脂酶A2的水解是引起内毒素休克肝线粒体质子转运功能改变的重要因素.]]> 1820true 1819true 1818true 1817true 1816true 549和抗顺铂药物的肺腺癌细胞A549/DDP两种细胞胞内游离Ca2+，用碘化丙锭(PI)标记细胞DNA，检测其胞内Ca2+的变化及两种细胞增殖能力和细胞周期.实验结果表明，抗药性细胞株A549/DDP胞浆内游离Ca2+的浓度仅为药物敏感细胞株A549的1/3左右，同时前者的细胞增殖能力较后者明显增强，而且细胞周期也明显缩短.当用BAPTA-AM和EGTA或A23187和Thapsigargin处理细胞以降低或升高其胞内自由Ca2+浓度时可改变细胞的生长周期，二者也呈现明显差别.这些结果表明，对顺铂产生耐药性的人肺腺癌A549/DDP细胞胞内Ca2+浓度的降低，可能影响细胞的增殖，缩短细胞的生长周期，特别是影响起决定作用的G1期，从而有利于肿瘤细胞多药耐药特性的维持.]]> 1815true 3H-TdR掺入实验观察细胞DNA的合成.结果表明，藻红蛋白介导的光动力反应能够有效地抑制肿瘤细胞DNA合成并杀伤癌细胞.随着藻红蛋白浓度增加，DNA合成下降，瘤细胞存活率降低.将藻红蛋白加入到pUC18质粒溶液中，随之进行激光辐照，琼脂糖电泳结果可见pUC18构象由超螺旋（supercoiled）向带切口的环形构象(relax)转换.结果提示：通过改变或影响DNA构象，抑制细胞DNA合成可能是藻红蛋白介导肿瘤光动力治疗的途径之一.]]> 1814true +-ATPase是ATPases中的一种，它在植物细胞的生长发育中有重要的作用.利用竹红菌乙素(HB）和KI这两种分别猝灭蛋白质疏水区域内源荧光和亲水区域内源荧光的荧光猝灭剂，在不同pH值、温度条件下对纯化的大豆液泡膜V型ATPase进行荧光猝灭实验，初步探讨了V型H+-ATPase的水解活性同其蛋白质折叠状态间的关系.研究表明，通过比较不同pH值、温度条件下蛋白质疏水区域和亲水区域内源荧光的荧光猝灭常数（KSV），发现当环境pH值、温度偏离酶的最适pH值和温度时，蛋白质的内源荧光强度降低且疏水区域和亲水区域内源荧光的荧光猝灭常数（KSV）降低，说明伴随着酶的水解活性降低，蛋白质的折叠状态发生了变化.我们认为蛋白质在膜内的折叠状态变化是酶失活机制的一个重要方面，为植物的抗冻和抗盐研究提供了一定的参考.]]> 1813true 2O2)是有机体氧化代谢产物，同时是一种活性氧.应用不同浓度的H2O2，分别于不同作用时间，动态观察其对心肌细胞的损伤作用.从实验结果看到，低浓度的H2O2（＜0.1 mmol/L）作用2 h，使心肌细胞产生早期的生物化学的改变，如MDA产生堆积和细胞周期时相改变（G1期细胞增加，G2期细胞减少），此时心肌酶基本无泄漏，心肌细胞的死亡率很低，HE形态学观察基本无改变；随着H2O2浓度的增加（1～5 mmol/L）和作用时间的延长，进一步诱导细胞损伤加剧，LDH释放和MDA积累明显升高，细胞死亡率也明显增加，已具有统计学意义.同时可观察到其病理形态学的坏死性改变；当10 mmol/L H2O2作用时，细胞大量死亡，形态学可见细胞极度收缩、脱落，形成大面积的细胞脱失区.因此，H2O2作为一种活性氧自由基，依其浓度和作用时间不同可造成不同程度的心肌细胞的损伤.辣根过氧化物酶作为一种自由基清除剂，可明显减少H2O2活性氧自由基对心肌细胞的损伤作用.]]> 1812true 1811true ＋-ATPase的活力提高8倍，且酶定向程度较高，这为进一步研究胡杨细胞质膜特性及获得高纯度H＋-ATPase提供了良好基础.]]> 1810true Candida rugosa脂肪酶（CRL）中分离到三个同工酶（CRL-1、CRL-2和CRL-3），它们在水-有机溶剂双液相体系中催化(R,S)-萘普生甲酯的不对称水解反应，具有不同的立体选择性.分析表明：CRL-1和CRL-2上不同程度地非共价结合有小分子的酸性化合物，阻碍了其活性位点处疏水腔的完全开放；CRL-3上不含有该小分子酸性化合物，活性位点处疏水腔可处于完全开放构象.据此分别将CRL同工酶选择性地固定在不同的载体(GDX101和YWG-NH2)上.通过简单易行的选择吸附步骤，可同时达到同工酶的分离及固定化目的，提出了一种对结构上相差不大同工酶分离的便利方法.]]> 1809true 1808true 1807true 1806true 5 CFU/ml)感染小鼠T淋巴细胞，G418筛选，获得稳定表达CD基因的T/ pCD2细胞.经PCR和RT-PCR方法检测证明CD基因已成功地导入T淋巴细胞中并有效表达.分别用不同浓度的5-FCyt作用于T/ pCD2及T淋巴细胞，光镜下观察不同时间细胞数目变化及MTT法检测细胞活性.结果表明，5-FCyt浓度大于1 μmol/L时，即对T/ pCD2细胞有显著的杀伤作用，而对正常T淋巴细胞基本无毒性，且T/ pCD2细胞在加入药物后生存时间（3～5 d）明显短于未转染的T淋巴细胞（大于14 d）.]]> 1805true Lmax)；并用流式细胞分析(FCA)、原位DNA末端标记(TUNEL)和琼脂糖电泳检测或标记DNA降解片段.结果发现: a.TdT法最低检测限5 ng DNA，线性范围为5～5 000 ng，较检测DNA降解片段的琼脂糖电泳敏感200倍以上；b.地塞米松(DEX)诱导淋巴瘤(Raji)细胞凋亡产生的Lmax呈DEX剂量与诱导时间依赖性增加；c.自发性高血压大鼠(SHR)心肌的Lmax呈年龄依赖性增加并与正常对照鼠(WKY)相比差异非常显著(P＜0.01)；d.TdT法定量Lmax与FCA、TUNEL或电泳分析的相关性良好(r＞0.98).TdT法定量Lmax敏感、特异、准确，可应用于分子生物学、细胞生物学，尤其是细胞凋亡动力学DNA降解评价的定量研究.]]> 1804true 8和CCKA受体拮抗剂L-364，718、CCKB受体拮抗剂L-365，260对大鼠大脑皮质钙调素（CaM）活性的影响.结果表明：a.CCK8对CaM活性的影响具有时间依赖性，15 min达到最高点后逐渐下降；b.CCK8在10－12～10－7 mol/L范围内可刺激CaM活性的增加，超过10－7 mol/L后，逐渐趋于饱和.c.CCKA受体拮抗剂L-364,718、CCKB受体拮抗剂L-365，260均可抑制10－7 mol/L CCK8引起的CaM活性的增加，但两者IC50相差40倍，L-365,260在较低浓度时即能明显拮抗CCK8引起的CaM活性变化.研究结果提示CCK8可能通过CCKB受体引起CaM活性变化，而CaM可能是CCKB受体的重要信号传递机制之一.]]> 1803true 1802true 1801true 1800true 1799true H）和轻链可变区（VL），以Linker连接VH及VL构建抗CEA单链抗体.同时以Spacer连接单链抗体和链亲和素，构建成功单链抗体和链亲和素融合基因，克隆该融合基因至原核表达载体，pET21a(+)，经IPTG诱导表达出该双特异性融合蛋白.活性鉴定表明该融合蛋白具有结合CEA及生物素的双特异性.该融合蛋白在生物领域中有较广阔的应用前景.]]> 1798true 1797true Ki)为3.86 mmol/L.其抑制也受溶液pH影响，pH＜7.5时，对酶无抑制；pH为7.5～10.5时，随pH的增加，抑制作用逐渐增强.提示五氯酚能够进入酶分子内部使其荧光淬灭，并抑制了酶活力；表明酶活力抑制与五氯酚的解离状态有关.]]> 1796true 1795true 1794true s)的转化子经摇瓶发酵，每升发酵液可表达约20 mg的重组Ap-QD2产物，通过纯化可得到7 mg纯的有天然生物学活性的Ap-QD2基因工程产物.]]> 1793true 2+-Vit C引起的大鼠肝线粒体脂质过氧化、膜流动性的降低和线粒体的肿胀，清除邻苯三酚自氧化产生的超氧自由基O-·2并呈一定的剂量-效应关系.]]> 1792true 1791true 1790true 2（A.aBPLA2）基因克隆至温敏表达载体pBLMVL2，在大肠杆菌RR1中成功诱导表达.表达产物A.aBPLA2约占细菌蛋白质总量的20％,并以包涵体的形式存在.纯化包涵体后，将产物变性、复性，然后用FPLC SuperoseTM12纯化，产物经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测只有单一条带.对纯化后的表达A.aBPLA2进行了酶活性、抑制血小板聚集活性和溶血活性的测定.结果显示，表达A.aBPLA2的酶活性与变性后复性江浙蝮蛇酸性磷脂酶A2酶活性相近，具有类似变性后复性江浙蝮蛇碱性磷脂酶A2的溶血活性，没有抑制血小板聚集活性.最后对磷脂酶A2的结构与这些活性的关系进行了讨论.]]> 1789true Km值略低于原酶，前者为5.0×10－2 g/L,后者为3.58×10－2 g/L.]]> 1788true 1787true 3O4平均粒径为20 nm的磁流体，在10 kW，100 kHz的磁场中研究该磁流体的热效应.用温度计测量不同Fe3O4含量的水、琼脂的温度变化值，探讨Fe3O4含量和介质对温度的影响，为磁流体用于肿瘤热疗提供实验依据.实验结果表明，脂质磁流体在交变磁场作用下使周围升温，升温速度及平稳时的温度和Fe3O4的含量、磁场强度及周围介质有关，含量高，场强大，平稳温度值高，介质流动性好，加快热传递，升温快.通过调节磁场强度和磁流体的量可达到所需温度值.]]> 1786true 1785true A.halys）蛇毒神经生长因子(NGF)的培养基培养PC12细胞, 观察MAPK和MAPK激酶(MAPKK)表达及MAPK的活性.结果表明，A.halys蛇毒NGF使PC12细胞的MAPK和MAPKK的表达及MAPK活性明显增加.当蛇毒NGF浓度在25～100 μg/L时，随浓度的增加，酶的表达和活性呈线性增加.由A.halys蛇毒NGF诱导的MAPK和MAPKK表达的增加依赖于蛋白激酶C(PKC).]]> 1784true 1783true 180实体瘤细胞膜上的强固定化作用增强, 弱固定化作用减弱，使自旋标记物运动自由度受到限制.结果表明，多烯脂肪酸多相脂质体作用于膜蛋白引起了膜蛋白构象的变化.]]> 1782true +RNA，依次合成单链及双链cDNA，经酶切成平均大小为400～600 bp的片段，将肾癌cDNA分为两组，分别与两种不同的接头衔接，再与正常肾cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR后，将产物与T/A载体连接构建成功cDNA消减文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增.构建成功具有高消减效率的人肾癌cDNA消减文库，非特异性cDNA片段被有效地消减，特异表达的cDNA得到富集.文库扩增后得到6 500个克隆，随机挑取350个制备质粒，酶切分析均得到400～600 bp插入片段.所构建的人肾癌cDNA消减文库为进一步大批量筛选、克隆肾癌特异性表达的未知新基因奠定了基础.]]> 1781true 1780true Q=1.8382－2.5186×10－2T (r=0.9913)；结果说明制备的pH敏前体脂质体水合形成的pH敏脂质体粒度适宜，可用于反义寡核苷酸的包封.]]> 1779true WAF1的表达在凋亡发生前即有明显下降，并持续至凋亡发生时, bcl-2的表达仅在凋亡发生时有所下降，c-myc和c-fos的表达有所上升，而p53和HER-2的表达无明显变化.用稳定转染了不同长度p21WAF1启动子片段和下游绿色荧光蛋白（GFP）报告基因的2BS-WP系列细胞进一步研究发现，其GFP的表达水平在NaBu诱导过程中下降，主要调控区域为p21WAF1启动子的TATA box上游0～－800 bp.说明NaBu诱导的人胚肺二倍体成纤维细胞凋亡与p21WAF1启动子的转录活性下降与密切相关，并且可能不依赖于p53.]]> 1778true 1777true 1776true Bacillus sp.2粗酶液通过(NH4)2SO4分级分离、Q Sepharose FF、Sephadex G-100(Ⅰ)、Hydroxyapatite和Sephadex G-100(Ⅱ)柱层析分离，纯化了一种以NADPH为辅酶的3-脱氧葡糖醛酮(3-DG)代谢酶，定性为2-羰基醛还原酶.纯化酶的比活力为63.75 U/mg，在SDS-聚丙烯酰胺凝胶上显示一条蛋白质带.该酶分子质量约为32 ku，酶反应最适pH约为6.2, 在pH 5～8, 温度25～30℃之间酶保持稳定；该酶对3-DG的Km为2.3 mmol/L.添加适量的EDTA、巯基乙醇或二硫苏糖醇能明显提高酶的活性；而碘乙酸、N-乙基顺丁烯二酰亚胺抑制酶的活性.]]> 1775true 1774true 1773true 1772true 5β1整合蛋白在细胞表面含量，发现TPA作用24 h使α5及β1含量分别增加52.3%和51.6%.应用3H-甘露糖标记N-糖链和凝集素柱层析方法分析TPA作用后细胞N-糖链总量和组分比，结果均与对照组相仿，说明是通过增加细胞合成整合蛋白α5及β1亚基含量实现的.在TPA作用于细胞的同时，加入PKC抑制剂Sphingosine,发现α5、β1含量和细胞与Fn的粘附均回复至对照组水平，提示TPA增加α5β1整合蛋白合成而增加的细胞与Fn粘附作用，是由PKC介导完成的.此外还发现酪氨酸蛋白激酶抑制剂也阻断TPA增加α5β1整合蛋白含量的作用.]]> 1771true 1770true 1769true 1768true 1767true 1766true 1765true P.pastoris中高效分泌表达HWAP-Ⅰ，依照RT-PCR的结果，人工合成编码虎纹镇痛活性肽的基因片段，与酵母表达载体pPIC9K重组，构建表达质粒pPIC9K-HWAP-Ⅰ.转化GS115宿主菌后，筛选出整合型His+MutS表达菌株.经诱导培养后，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)证明HWAP-Ⅰ在毕赤酵母中能有效分泌表达，产物的分子质量为4 ku左右，产量达80 mg/L.体外小鼠输精管阻断实验证实表达产物具有明显的生物活性.]]> 1764true 1763true 2+螯合层析及Sephacryl S200凝胶层析后, 目的蛋白被纯化.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)显示为一条蛋白质纯化条带, 分子质量为35 ku. 经纤维蛋白平板法测定比活为87 000 U/mg.经纤溶酶活化后的融合蛋白与低分子量尿激酶相比，对显色底物S2444酶促动力学性质相似.同时Fβ(15～42)/scuPA-32k具有较高的纤维蛋白的亲和性并能抑制纤维蛋白凝块的形成.]]> 1762true Ctenopharyngodon idellus）ZC7901细胞为研究模型，选用六种重金属离子进行胁迫诱导鱼类细胞凋亡试验.结果显示，在Cd2+、Cr6+、Hg2+、Cu2+、As5+、Pb2+的胁迫作用下，ZC7901细胞均出现了明显的染色质凝集、趋边化、形成凋亡小体等凋亡形态特征，核酸电泳显示DNA发生特异降解而呈现电泳阶梯，用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP切口末端标记（TUNEL）法，检测到DNA的3′-OH断端均被原位特异标记，表明六种重金属离子均能诱导鱼类细胞发生典型的凋亡.]]> 1761true 1760true 1759true 6个人脑cDNA文库转化子中，首次筛选到Ras家族G蛋白Rab3a C端，包含87个氨基酸的片段能与GIF相互作用；用PCR自人胎盘总cDNA中获得包含完整Rab3a编码序列的cDNA；通过酵母双杂交实验表明，全长Rab3a蛋白亦能与GIF相互作用.免疫共沉淀和蛋白质印迹实验进一步验证了GIF与Rab3a在哺乳动物细胞中可以相互作用; 而且, Rab3a是以GTP结合形式(GTP-Rab3a)与GIF发生相互作用.]]> 1758true i)和叠氮钠对猪心线粒体ATP合成酶（F1FO-ATPase）ATP合成活性的影响.结果发现无机磷除作为合成ATP的底物参与F1FO-ATPase的合成反应外，还对F1FO-ATPase的合成活性呈现抑制作用，在1 mmol/L ADP存在时，随着Pi浓度由0.01～10 mmol/L增加,抑制合成作用越来越强.与叠氮钠在低浓度时(小于1 mmol/L)只抑制ATP水解,不影响ATP合成的观点不同.实验结果显示0.1 mmol/L叠氮钠表观激活F1FO-ATPase的ATP合成活性，且激活程度与反应体系中所加Pi的浓度呈负相关.当固定Pi浓度（0.1 mmol/L）后，随着叠氮钠浓度的增加表观激活程度也在变化，叠氮钠与磷浓度相等时表观激活程度最大，直至叠氮钠浓度接近0.5 mmol/L时，开始呈现表观抑制现象，叠氮钠浓度高于1 mmol/L之后，就出现解偶联现象.]]> 1757true 1756true 1755true HXT7启动子进行逐步删除，并将含启动子区域长短不同的HXT7基因整合转入酿酒酵母己糖转运子缺失菌株hxtΔ(hxt1～hxt7, gal2缺失)的基因组，构建一组仅含HXT7且表达水平不一的酵母启动子突变株.将HXT7在突变株中的表达与在野生菌株（MC996A）中的表达进行比较，对它们在含50 mmol/L葡萄糖培养基中的生长速率、葡萄糖消耗性能、HXT7 mRNA及蛋白质表达水平等进行了实时测定.结果表明，当葡萄糖浓度低于5 mmol/L时，HXT7的表达量最高.高浓度葡萄糖环境下，HXT7在突变株中的表达高于在野生株中的表达，显示出不完全性葡萄糖阻遏效应.HXT7的表达水平与启动子长短和基因拷贝数有关.位于－495至－346之间的149 bp HXT7启动子区域对HXT7的表达至关重要.启动子短于346 bp，HXT7基本不表达.]]> 1754true 1753true Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus, SpltMNPV)基因组中克隆了gp37基因.分子生物学软件分析表明，在gp37基因内部存在糖基化位点.含有晚期表达基因的启动子序列(ATAAG)，推测为晚期表达的病毒膜糖蛋白基因.通过GP37蛋白的同源性比较，绘制了以gp37基因为基础的杆状病毒进化树, 发现与以多角体蛋白基因（polyhedrin）为基础所绘制的杆状病毒分子进化树有较大差异.以polyhedrin基因为基础绘制的杆状病毒分子进化树将家蚕核多角体病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus, BmNPV）与杆状病毒代表种——苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒（Autographa californica multinucleocapsid nucleopolyhedrovirus, AcMNPV）分开，根据gp37基因分析则将二者归到同一分枝，这与以egt基因为基础绘制的杆状病毒分子进化树结果一致.]]> 1752true ® 2D Elite分析电泳图谱.重复性实验结果显示，同组样品在三次不同实验中所得蛋白质斑点数目的相对标准差（变异系数）为4.43%±0.25%；同一蛋白质斑点在三次实验中等电点、分子质量和蛋白质量的相对标准差分别为8.76%±5.14%, 13.00%±4.22%和10.84%±9.16%.成年和老年小鼠脑组织2-DE图谱分别获得996和1256个蛋白质斑点，其中8个蛋白质在老年脑组织中含量降低，20个蛋白质斑点含量增加.另至少有4个蛋白质斑点在老年脑组织中缺失，14个蛋白质点为老年脑特有. 以上差异点的发现为研究脑老化和退行性疾病机理提供了有益的线索.]]> 1751true 1750true 1749true 1748true + T记忆细胞的线性和逆线性分化假说分别建立了数学模型，并研究了各种T细胞亚类的动力学.发现在优化剂量抗原入侵的条件下，两个模型均能产生记忆，并可较好地模拟实验结果.通过进一步模拟发现CD8+ T细胞记忆与抗原的存在紧密相关，再次证实了抗原在维持T细胞记忆中的作用.另外还讨论了记忆细胞寿命的问题.认为逆线性假说具有更强的反应性和记忆性.]]> 1747true 1746true 1745true 2+］i）的变化，实验结果表明TCS引起的［Ca2+］i升高和ROS形成参与了TCS诱导的JAR细胞凋亡，并且ROS形成和［Ca2+］i升高有关.共聚焦激光扫描显微术的研究结果表明，［Ca2+］i升高不是导致ROS形成的主要原因，TCS诱导产生的ROS可能是通过TCS与JAR细胞膜表面受体作用介导的.]]> 1744true 1743true 1742true 1741true 18反相色谱层析，从海葵Actinia cari中提纯到两个新的毒素多肽，命名为RSAPⅠ和RSAPⅡ，经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定RSAPⅠ和RSAPⅡ均为单一成分，相对分子质量分别为5 008和4 992.初步钠通道药理学实验表明，RSAPⅠ和RSAPⅡ对豚鼠心室肌细胞钠通道表现出活性，RSAPⅠ使钠离子内流增加，起开放作用；RSAPⅡ使钠离子内流减少，起阻滞作用.二者的圆二色谱均表现为100% β转角.]]> 1740true P＜0.05），应用雌激素治疗后Ⅰ型胶原mRNA表达较卵巢切除组增加34.1%，pro-MMP-9活性的增加明显降低.卵巢切除后骨组织MMP-9明胶酶活性明显提高，应用雌激素后MMP-9明胶酶活性明显降低（P＜0.05）表明骨Ⅰ型胶原mRNA表达减少和pro-MMP-9活性升高是绝经后骨质疏松的机理之一.]]> 1739true 1738true 1737true 1736true 1乳腺癌细胞和Lewis肺癌细胞进行攻击.通过流式细胞仪、共聚焦显微镜检测绿色荧光蛋白在小鼠各组织中的表达，通过PCR和ELISA的方法检测mIL-12、mGM-CSF基因的整合和表达情况.并考察肿瘤的受抑情况和小鼠的生存期.结果表明：在小鼠的肝、脾、小肠、肾脏和肿瘤中可检测到绿色荧光蛋白的表达和相应细胞因子基因的整合.血清中相应的细胞因子水平较对照组明显升高（P＜0.05），生存期远远超过对照组小鼠（P＜0.05）.减毒沙门氏菌可作为口服基因治疗载体，为肿瘤的预防和治疗提供一条简便、安全、有效的途径.]]> 1735true 1734true 31P核磁共振表面线圈技术，对羟苯氨酮在Langendorff模型的离体灌流心脏60 min缺血-60 min再灌注中的作用机制进行了探讨.实验结果显示给药组胞内pH值比对照组恢复得更快，但是胞内高能磷酸化合物的含量却低于对照组.羟苯氨酮对缺血-再灌注损伤的保护作用表现在提高心肌细胞的能量代谢水平，从而增强心肌细胞对离子调节恢复的能力.]]> 1733true 2+/Ca2+调蛋白依赖性基因等；8 d治疗组同源性较高的序列为：免疫球蛋白可变区基因、鼠免疫球蛋白DNA、易弯曲肽DNA、tsr glkA基因、修复蛋白A等.新发现的18个基因片段递交给GeneBank，接受号为AF240164-AF240181.结果表明：外源核酸促电离辐射损伤的小鼠肠腺修复的机理可能与一些基因、蛋白质的异常表达有关，与免疫系统的作用可能有关.]]> 1732true 1731true 1730true 1729true 2-·的机理进行了直接检测.通过对样品充氧、加入超氧化物歧化酶（SOD）抑制剂四氰乙烯（TCNE）以及原位光照检测ESR信号等手段，在PSⅡ中检测到O2-·与DMPO加合物的特征ESR信号.而在没有SOD抑制剂的情况下，光照时PSⅡ中O2-·与DMPO加合物浓度显著下降.进一步实验发现PSⅡ中O2-·产率与氧分子浓度直接正相关.O2-·产率还具有pH值依赖性，在pH值为6.0～6.5范围内，O2-·产率最高，大于此范围时则呈显著下降趋势.而PSⅡ颗粒的Tris处理也将导致O2-·产率的急剧减少.以上结果证实水裂解放氧十分活跃的PSⅡ也是高等植物叶绿体在光照下产生活性O2-·的主要部位，通常大部分的O2-·能被内源SOD清除，且O2-·的生成与PSⅡ的电子传递活性密切相关.]]> 1728true 1727true 3+、Sm3+、Cu2+已配位到脱镁叶绿素的卟啉环上，形成了镧-叶绿素a、钐-叶绿素a和铜-叶绿素a复合物.通过扩展X射线吸收精细结构谱(EXAFS)研究表明：合成镧-叶绿素a、钐-叶绿素a具有双层夹心结构.La(Ⅲ)、Sm(Ⅲ)夹于两个卟啉环之间, 与上下卟啉环上共八个N原子配位, La-N平均键长0.261 nm，Sm-N平均键长0.243 nm, 而铜-叶绿素a的EXAFS表明为一单层结构，Cu(Ⅱ)与卟啉环中的四个N原子配位，Cu-N平均键长0.197 nm.元素分析也证明镧-叶绿素a、钐-叶绿素a为双层结构，铜-叶绿素a为单层结构.]]> 1726true 3+，并以此研究了La3+跨PC12细胞（大鼠嗜铬细胞瘤细胞）膜的行为.结果表明：在模拟细胞内离子组分，pH=7.05的溶液中，测得La3+-Fura-2的表观解离常数为3.27×10-11 mol·L-1.对于PC12细胞，静息条件下La3+不能跨越细胞膜进入胞内.与钙离子通道相关的KCl和去甲肾上腺素均不能刺激稀土La3+过膜.用哇巴因（ouabain）使胞内Na+超载后，La3+可过膜进入细胞内，且过膜量与胞外La3+浓度和胞内Na+超载程度有一定的浓度依赖关系，提示La3+可以经由Na+／La3+交换机制过膜而进入细胞内.]]> 1725true 1724true 1723true 1722true 1721true 1720true 1719true 1718true Pichia pastoris）进行分泌表达，经金属离子螯合亲和层析与S强阳离子交换层析，得到纯蛋白.实验测定InB对人工合成底物S-2444的酰胺解活性为5 900 IU/mg，动力学常数为：Km,S-2444InB=56.8 μmol·L-1，kcat,S-2444InB=0.33 s-1；水解天然底物plasminogen的动力学常数为：Km,plgInB=0.397 μmol·L-1，kcat,plgInB=0.0164 s-1.InB激活plasminogen的反应在有fibrin存在条件下InB的活性为无fibrin条件下的46.3％.该突变体在体外激活plasminogen的活性与同一系统表达的野生型scu-PA基本相同.该突变体表现出较强的抗血小板聚集活性，IC50＝12.7 μmol·L-1，而野生型scu-PA无此功能.实验表明scu-PA的K区插入突变体InB是一种极具潜力的双功能溶栓分子.]]> 1717true Kmfibrin以及kcatfibrin.Kmfibrin＝4.2 μmol·L-1，远远大于无fibrin时的Km＝0.379 μmol·L-1，说明有fibrin存在时突变体InB与天然底物plasminogen的亲和性降低了.kcatfibrin＝0.107 s-1，也远远大于无fibrin时kcat＝0.0165 s-1，说明有fibrin存在时突变体InB对plasminogen的反应活性增强了.原因可能是：与fibrin结合的plasminogen的构象发生了有利于被纤溶酶原激活剂水解的变化.]]> 1716true 53外显子7～8变异、HPV6、11、16、18-DNA进行检测,以探讨它们在宫颈癌形成中的作用、相互关系和临床意义.结果表明: a.P53基因外显子7～8突变率14.29％、p53蛋白阳性率48.98％、HPV-DNA阳性率87.76％.b.P53基因突变不一定伴有p53蛋白阳性,但P53基因突变而p53蛋白阴性的标本必是HPV-DNA阳性;91.67％的p53蛋白阳性标本具有HPV-DNA阳性.c.HPV16-DNA阳性率显著高于HPV6、11、18-DNA阳性率.证明：宫颈癌的发生主要与HPV16感染有关,其次是P53基因突变所致;p53蛋白阳性由HPV感染和/或P53基因突变所致.]]> 1715true I)按照它们在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)图谱上的顺序从4.0开始依次降低; SDS-PAGE证明, 除3、4外，其余组分均只含一种多肽链，分子质量在22～34 ku之间；用shiff试剂和酚-硫酸染色, 显示1、2、6.5和7是糖蛋白，其中7的糖含量最高; 以BAEE、Chromozym UK和Chromozym PL为底物测定，7的纤溶酶活性最高.]]> 1714true 1713true oF1-ATPase膜部分Fo的四种纯化方法.结果表明，用NaBr从亚线粒体除去FoF1-ATPase的水溶性部分F1-ATPase后，再以CHAPS增溶，并经蔗糖梯度离心，可获得高纯度的Fo.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定表明，纯化的Fo含有b、OSCP（寡霉素敏感授予蛋白）、d、a、e、F6、IF1、A6L和c等9种亚基.用去污剂稀释法将纯化的Fo在脂质体上重建后，重建Fo表现较高的被动转运质子活性.这为在体外深入研究Fo的活性、构象与膜脂的关系，以及Fo与F1-ATPase的组装等提供了很好的实验模型.]]> 1712true 3H-TdR掺入实验表明PKA抑制剂typeⅢ(80 mg/L)明显提高了S期3H-TdR的掺入水平, 提示了PKA在S期进程中起阻抑作用.进一步实验表明，在PKA抑制剂typeⅢ作用下胸苷激酶(TK)活性和PCNA蛋白水平均有所提高，同时明显促进了CyclinA蛋白的表达, 并抑制了周期负调因子p21蛋白的水平，但对CDK2表达几乎无影响.结果表明, PKA可通过作用于PCNA和引擎分子CyclinA的水平和通过影响p21的表达负调于S期进程. 这可能是PKA负调HeLa细胞S期进程的分子机理之一.]]> 1711true 1710true 1709true TMXa-1 T质粒重组，然后克隆至大肠杆菌JM109菌株，筛选获得68个阳性克隆；其中24个阳性克隆测序后与GenBank资料对照，显示为细胞色素P450新序列；分子系统学研究显示，24个新基因（等位基因）分别属CYP4家族CYP4C、CYP4D、CYP4H和CYP4J等4个亚家族，其已由细胞色素P450命名委员会命名和GenBank登录上网；其中CYP4C23可能是一个假基因，CYP4H13具有一段58个碱基长度的内含子，CYP4J4V1在近3′端具有一个终止密码子TAG.]]> 1708true 2+-NTA树脂一步法纯化目的蛋白，纯度达85％以上.纯化和复性的ACTH(4-10)-GDNF融合蛋白能显著促进脊髓神经元存活，作用强于ACTH(4-10)及GDNF蛋白.]]> 1707true 1706true －5mol/L时，apoAⅠ和apoE的分泌分别增加36.6%和49.4%（P＜0.01），apoAⅡ、apoB100和apoCⅢ的分泌分别减少38.9%、31.9%和29.8%（P＜0.01）.]]> 1705true 1704true 1703true 2+-ATPase. 用大体积亲和柱和大体积低Ca2+淋洗液淋洗，可得产率、纯度和活性均较高的质膜Ca2+-ATPase. 与大豆磷脂保温后，去脂的Ca2+-ATPase的水解活力可恢复达3.32 μmol/(mg·min).SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳银染显示单一蛋白质带，分子质量约为140 ku，纯度在90%以上. 不同Ca2+浓度明显影响酶的活力.]]> 1702true 2-Fe2+-NO由水相中萃取并富集到酯相中，然后利用电子顺磁共振波谱仪(ESR)在常温下检测大体积样品中的NO.比较了几种不同的有机溶剂：正丁醇、乙酸丁酯、乙酸乙酯、三乙酸甘油酯、乙酸异戊酯等的萃取能力，发现乙酸乙酯是一种理想的提取溶剂.乙酸乙酯提取法可以使NO的量与ESR信号强度在20 μmol/L内有良好的线性，使ESR的检测灵敏度提高到200 nmol/L以下；(DETC)2-Fe2+-NO对光比较敏感，见光易于分解；复合物在乙酸乙酯中避光保存于4℃可稳定十几天而无显著的变化.]]> 1701true 1700true 1699true 1698true 1697true 1696true 2+］i（胞内自由钙离子浓度）进行了实时检测.结果发现，全长的HLA-G1表达于K562、JAR和CHO细胞的胞浆和胞膜上，它能够部分地抑制NK92的细胞毒作用. NK92与CHO和GFP-CHO细胞作用后，靶细胞［Ca2+］i出现了明显的升高，HLA-G1的表达则抑制了靶细胞［Ca2+］i的升高.结果提示：靶细胞［Ca2+］i的升高是有效的细胞杀伤作用的必要条件，HLA-G的免疫抑制功能可能与靶细胞胞内钙离子浓度升高的抑制作用有密切关系.]]> 1695true 1694true 1693true Helicobacter pylori，Hp）感染是慢性活动性胃炎和消化性溃疡的主要病因，与胃腺癌、胃黏膜相关淋巴样组织（MALT）淋巴瘤的发生亦密切相关.鉴于Hp已证实的四种粘附素保守区（AB）是外膜蛋白（OMP）和膜孔素(porin)样成分，而外膜蛋白和膜孔素样成分是优秀的疫苗候选抗原.用PCR技术扩增AB基因，将其定向插入pET-22b（+）载体，在BL21（DE3）大肠杆菌中表达.测序显示AB基因长588 bp,编码195个氨基酸.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶扫描分析，AB基因表达的蛋白质分子质量约为22.5 ku，其重组蛋白质表达量占菌体总蛋白质的29%，表达产物经亲和层析纯化后蛋白质纯度达96%.经免疫印迹证实该重组蛋白可以被AlpA免疫兔血清所识别.AB蛋白的获得为进一步研究Hp黏附素保守区的分子黏附机制和免疫防治作用提供了基础.]]> 1692true 1691true P＜0.01), LCA-糖蛋白也有类似作用.用胰酶和木瓜蛋白酶水解蛋白质部分后，形成的糖肽抑制肝癌细胞迁移的作用并不改变，甚至增强.此外直接用肝癌转移灶的组织测定了岩藻糖转移酶活性，发现α1，6岩藻糖基转移酶活性显著比正常肝组织高，而α1,3岩藻糖基转移酶活性没有显著的改变.用系列凝集素分析发现这些糖链主要能结合伴刀豆凝集素A, 也能结合E-型及L-型植物凝集素, 显示这种糖蛋白的糖链可能含有较多的高甘露糖型.这些结果提示糖链在诱癌过程中结构有了改变,使之在肝癌细胞的迁移和转移中起重要作用.]]> 1690true 1689true Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus, AcMNPV)感染斜纹夜蛾(Spodoptera litura)细胞系Sl-zsu-1，可引起典型的细胞凋亡；但可以在草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞Sf-9中复制并形成多角体.比较了AcMNPV p35基因在病毒感染两种细胞的复制和转录情况，认为p35在非受纳细胞中及时有效的表达能阻止细胞发生凋亡；共感染实验结果表明，斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedrovirus, SpltMNPV)可以抑制AcMNPV诱导的细胞凋亡并可帮助病毒进行复制，推测SpltMNPV基因组中与p35同源的p49基因挽救了细胞的自杀行为.]]> 1688true 1687true 2+依赖K+（BKCa）通道活动增强参与了缺血性脑损伤.采用膜片钳的内面向外式，观察了3 min短暂脑缺血后6 h、24 h以及48 h大鼠海马CA1区锥体细胞上BKCa通道活动的动态变化.短暂脑缺血后BKCa通道的单通道电导和翻转电位均未见明显变化，但通道的开放概率则在缺血预处理后的前24 h内显著降低.通道动力学分析显示通道关闭时间变长是短暂脑缺血后通道活动降低的主要原因，因为通道的开放时间未发生明显变化.结果提示短暂脑缺血所致的BKCa通道活动降低可能与缺血耐受的产生有关.]]> 1686true P＜0.05）;顶树突的总长度（155.67 μm±33.32 μm）较对照组（195.63 μm±34.61 μm）显著缩短（P＜0.05）;应激组大鼠海马CA3区锥体细胞出现超微结构的改变，包括细胞固缩、体积缩小、核膜皱缩、线粒体变性和粗面内质网模糊不清.这提示海马CA3区锥体细胞形态结构的改变，可能是慢性应激相关精神障碍的病理生理基础.]]> 1685true B受体）的活动都会影响该回路突触传递的短时程可塑性，而N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体则几乎没有作用.该回路很强的短时程抑制特性可能与LP核在视觉注意中的作用有关.]]> 1684true 1为材料，首次比较研究了红莲型水稻线粒体atp6基因转录本的编辑位点及各位点的编辑频率.结果表明atp6基因的转录本有18个编辑位点，其中有15个发生在密码子的第一和第二位点上，这些位点的编辑最终会导致氨基酸种类的变化.18个编辑位点在A、B和F1中没有差异，但各位点的编辑频率在引入了核恢复基因的条件下发生了较大的变化，完全编辑的比例增加.这些结果首次证明HL型细胞质雄性不育与线粒体atp6转录本的编辑有一定相关性，编辑不充分的转录产物最终会干扰线粒体功能的正常发挥.]]> 1683true 121）、可溶性血管内皮细胞膜受体（sFlk-1及ExTek）等血管生成抑制因子表达质粒转移至肿瘤局部.实验结果表明电穿孔介导GFP表达质粒肌肉内转移的效率较高，GFP可在肌细胞内持续高水平表达3周以上，而在肿瘤细胞内只能表达4～6 d，但高电压短脉冲电击组肿瘤内GFP阳性细胞数比低电压长脉冲组高2.68倍.多次电击介导IL-12表达质粒转移至肿瘤组织内,可有效地抑制小鼠膀胱癌BTT-gfp、人乳腺癌MCF-7及肝癌SMMC 7721-gfp的生长.MCF-7对血管生成抑制因子基因转移治疗较敏感，单独应用反义VEGF121、sFlk-1或ExTek即显示明确的治疗效果.SMMC 7721-gfp单独应用sFlk-1有效.小鼠膀胱癌对单独应用反义VEGF121、sFlk-1或ExTek治疗效果不理想，但联合应用sFlk-1和ExTek仍然可以有效地抑制肿瘤生长与转移，甚至使肿瘤缩小或消失.提示电穿孔技术是一项高效、安全、经济的体内基因转移方法.]]> 1682true Trichoplusia ni)细胞Tn-5B1-4中，高效表达了来自粉纹夜蛾细胞Tn-5B1-4能够抑制细胞凋亡的TnIAP蛋白.聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹分析表明，表达的重组TnIAP只有少部分是可溶性蛋白，大部分以不溶的形式存在.这一结果与以往在昆虫细胞中往往表达出可溶性蛋白不同.活性实验表明，可溶的重组TnIAP能够直接抑制caspase-9酶解Ac-LEHD-AFC的活性，也能抑制caspase-9激活HEK293细胞抽提物酶解Ac-DEVD-AFC的活性.结果进一步证明，昆虫和哺乳动物的细胞凋亡分子机制在进化上是极为保守的.]]> 1681true Sulfolobus acidocaldarius谷氨酰胺合成酶（E 6.3.1.2，Sac-GS）. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分子质量为53 ku的单一条带.测定其N端氨基酸序列为PGLPKNEHEALEFLKSNNIKWVDLQ，与其他古细菌谷氨酰胺合成酶的氨基酸序列进行比较后，发现均存在ATP结合保守序列TFMPKP（I/L/F）（F/P/Y）（G/R）.采用碱基的简并性设计出一对简并引物，以Sulfolobus acidocaldarius的基因组DNA为模板进行PCR扩增，获得780bp的DNA片段，经克隆测序后确定为谷氨酰胺合成酶基因片段，以地高辛标记的该片段为探针，将Sulfolobus acidocaldarius基因组DNA用不同的限制性内切酶分别进行单双酶组合切割，然后进行DNA印迹分析，选出了2.4 kb的BamHⅠ/HindⅢ双酶切片段，并克隆到pBluescript KS+质粒中,通过菌落原位杂交获得阳性克隆, 进行DNA全序列测定后，得到完整的1.5 kb的谷氨酰胺合成酶全基因序列,再将其克隆到pET3c载体中，在大肠杆菌BL21中进行诱导表达并进行相应的活性测定，其酶活力的最适温度为90℃.该酶在高温下所表现出的高活性充分说明其来源于耐热微生物.]]> 1680true P＜0.01）.设计了应变成梯度增加的加载方式：使细胞在500 με加载一段时间后，将应变增加到1 000 με加载同样长的时间，最后将应变增加到1 500 με加载同样长的时间.在梯度加载实验中发现，成骨细胞接收到有利于其胶原蛋白合成的信号时，大量地吸收用于合成胶原的脯氨酸，当力学刺激变为抑制信号时，储存在胞内的3H-脯氨酸又重新释放回溶液中.说明在应变逐渐增加的加载过程中，细胞会进行自我调节以适应新的机械刺激.]]> 1679true 60Co γ射线辐照突变体农林8号m为研究材料，选用360个10碱基寡核苷酸随机引物，利用随机扩增多态性DNA标记技术筛选出1个引物OPG18在农林8号和农林8号m之间表现出共显性的多态性.通过对该共显性标记的克隆和序列分析表明，突变体农林8号m与农林8号相比有29 bp DNA片段的缺失.研究结果为60Co γ射线辐照导致植物基因组DNA缺失提供了一个最直接明确的证据.]]> 1678true 1677true 1676true GFRα1.表达菌株经1 mmol/L IPTG诱导3～5 h后，GFRα1蛋白表达，并形成包涵体.凝胶自动扫描分析表明，GFRα1表达量占全菌总蛋白的21.5%，用Ni2+-NTA树脂纯化和复性后，纯度达90%以上，复性的重组GFRα1蛋白可显著介导GDNF促PC12细胞的存活和分化作用.]]> 1675true DI）d和变形恢复过程（即松弛过程）中变形恢复到最大值（DI）max一半的时间t0.5（即变形恢复半时间），将测得的结果分别代入红细胞膜的剪切弹性模量（E）公式和表面粘度（μm）公式.计算出不同发育阶段的网织红细胞的膜剪切弹性模量和表面粘度，发现网织红细胞在转变为成熟红细胞的过程中，其膜剪切弹性模量和表面粘度有明显改变.这对研究由于贫血等原因造成的网织红细胞增多情况下，全血的微观流变学特性有重要的临床意义，同时对新生网织红细胞在转化过程中膜的剪切弹性模量和表面粘度的变化规律加以系统研究，填补了网织红细胞研究方面的空白，具有重要的基础理论研究价值.]]> 1674true 1673true 1672true 1671true 1670true 1669true 1668true 1667true 1666true 2-LMP1及其三种突变体HNE2-LMP1ΔCTAR1、HNE2-LMP1ΔCTAR2、HNE2-LMP1ΔCTAR1,2及LMP1阴性的HNE2为材料，采用蛋白质印迹和报告基因法分析JNK和活化蛋白1(AP1)活化情况，结果显示HNE2-LMP1和HNE2-LMP1ΔCTAR1中磷酸化JNK蛋白表达量和AP1活性都无显著差异，而与HNE2-LMP1ΔCTAR2、HNE2-LMP1ΔCTAR1,2、阴性对照HNE2及空白载体转染细胞的JNK蛋白表达和AP1活性具有显著差异；进一步比较转染TRAF、TRADD显性负性突变体鼻咽癌细胞系HNE2-LMP1中磷酸化的JNK量和AP1活性，结果显示：TRAF-DN和TRADD-DN的导入使活化的JNK蛋白和AP-1活性显著降低，二者间无显著差异，提示TRAF和TRADD可能参与了LMP1对JNK和AP-1的活化.以上结果提示在鼻咽癌细胞系中LMP1功能结构域CTAR2通过结合TRAF/TRADD激活JNK从而活化重要的转录因子AP1.]]> 1665true 1664true -7～10-8 M的抗乙型肝炎病毒PreS1的单链抗体，高于天然库的结果（10-6～10-7 M）.测序结果表明两株抗体均为人抗体.为基因工程抗体用于临床治疗乙型肝炎奠定基础.同时证明淋巴细胞体外免疫方法构建的免疫抗体库优于大容量天然抗体库.]]> 1663true 1662true 1661true H)-吡啶酮类衍生物，并研究了它们对5-脂氧合酶的抑制作用. 发现6-取代-3-羟基-4(1H)-吡啶酮化合物(2a～2e)对5-脂氧合酶具有显著抑制作用, 特别是6-苯硫基-1-苯基-2-甲基-3-羟基-4(1H)-吡啶酮(2a)的抑制效果最好(IC50=2.52 μmol/L). 6-位没有取代基的羟基吡啶酮类化合物对5-脂氧合酶却没有抑制作用. 讨论了6-取代-3-羟基-4(1H)-吡啶酮类化合物对5-脂氧合酶的抑制作用机制.]]> 1660true Spodoptera litura nuclear polyhedrosis virus,SpltNPV）DNA转染SL-1细胞能诱导细胞凋亡.SpltNPV-DNA转染其同源细胞系斜纹夜蛾核SL-1细胞6 h后,光镜下即可见细胞膜表面突出或形成小泡，细胞碎裂成凋亡小体，18 h后，细胞100%碎裂成凋亡小体.DAPI荧光染色显示感染细胞核渐呈半月形，直至碎裂被凋亡小体包裹.被转染的SL-1细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型梯形谱带.野生型SpltNPV病毒粒子感染的SL-1细胞既无多角体的出现，也无凋亡现象的发生.]]> 1659true 13/ml和1.08×1013/ml, 单基因rAAV/ATR的滴度为6.54×1012/ml，rAAV/P21为1.06×1013/ml，为进一步的体内外实验奠定了物质基础.]]> 1658true 1657true Lumbricus bimastus）蚯蚓体内提取到一种有纤维蛋白平板溶解活性的蛋白质，采用聚偏二氟乙烯膜(PVDF)微量测序法测得蛋白质的N端氨基酸序列，依此设计简并引物，通过RT-PCR获得其对应cDNA.该cDNA全长888 bp，1～726位核苷酸对应读码框架(ORF),编码含242个氨基酸的成熟肽.终止子（TAG）位于cDNA的727～729位，其余核苷酸序列为3′端非编码区.成熟肽命名为蚯蚓纤溶酶PV242.蛋白质预测得知蛋白质等电点为4.33，含组氨酸(His44)及丝氨酸 (Ser191)两个活性位点；蛋白质由两个结构域组成，表面有活性裂隙；该蛋白质属丝氨酸蛋白酶超家族胰蛋白酶类.经国际基因库等多种查询比较未见PV242基因的报道，为首次发现的新基因，在国际基因库的输入号为GenBank AF109648.随后构建了pTrxFUS-PV242重组质粒，并在大肠杆菌GI724中获得融合蛋白TrxA/PV242的可溶性表达，采用离子交换层析法纯化表达蛋白，融合蛋白有纤维平板溶解活性.]]> 1656true 1655true 1654true 1653true SalⅠ，NotⅠ酶切位点的引物，以已构建好的质粒pGEM-T Easy/BRD7为模板，用PCR扩增出BRD7基因的完整阅读框架，并用SalⅠ，NotⅠ酶切PCR产物和原核表达载体PGEX-4T-2，然后用T4 DNA连接酶将其连接，得到重组表达质粒PGEX-4T-2/BRD7，经双酶切鉴定和测序验证，表达载体构建正确.重组表达质粒转化感受态大肠杆菌Jm105后用IPTG诱导，成功表达了一分子质量约为90 ku的融合蛋白;37℃诱导4 h后，SDS-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳后，经扫描分析该融合蛋白产量占菌体蛋白总量28.48%, 蛋白质印迹(Western-blot)证实了该融合蛋白的表达获得成功.这为BRD7基因的蛋白纯化及抗体制备，进一步开展其功能研究奠定了基础.]]> 1652true ND-4L、ND-4、COX-2、Lys-tRNA、ATP-8和ATP-6.表明NO可以诱导食管癌细胞mtDNA编码的基因过表达.另外，在ND-4L/ND-4基因的片段（10 736～11 449）上发现了三处同型单核苷酸置换（10 872 T→C, 11 001 A→G, 11 346 A→G），在COX-2/Lys-tRNA/ATP-8/ATP-6基因片段（8 011～8 589）上发现了一处单核苷酸缺失（8 380 A）.氨基酸序列分析表明，在NO诱导的EC109中可能存在着一种结构异常的ATP-8肽链（一条在N端被截短的只有11个氨基酸残基的肽链，而正常的ATP-8肽链为68个氨基酸残基）.这些研究结果为深入揭示NO对肿瘤细胞的作用机制提供了新的重要线索.]]> 1651true 1(Cyclin D1)在鼻咽癌变多阶段病变组织中的蛋白质表达与鼻咽癌变的关系，应用组织微阵列（tissue microarray）技术，采用免疫组化方法检测Cyclin D1在鼻咽癌旁粘膜上皮单纯性增生/化生(simple hyperplasia/ metaplasia,SH/SM)、异型增生/化生(atypical hyperplasia/metaplasia,AH/AM)和鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的蛋白质表达，阳性表达率分别为30.0%（3/10）、90.0%（18/20）和62.9%（39/62），其中在异型增生/化生中呈“一过性增高”.表明Cyclin D1高表达可能为鼻咽癌发生过程中的早期事件；异型增生/化生可能是鼻咽癌变的重要“关卡”.]]> 1650true +Mut+在500 ml摇瓶中培养,甲醇诱导分泌表达.上清液中重组类凝血酶是通过两步柱层析得到：Q Sepharose FF和Benzamidine-Sepharose 4BCL.与天然蛇毒类凝血酶一致，分泌表达的重组类凝血酶具有较强的酯酶活性，但精氨酸甲酯如TAME的水解活性较弱.此重组类凝血酶在37℃中性溶液中保存过夜将分解成小肽，但在0℃下很稳定.该酶的最适pH为8.0.]]> 1649true 1648true 2+对这些指标的影响.流式细胞仪对微管含量的测定显示回转后微管蛋白含量的减少，说明微管系统受到不良影响.碱性磷酸酶活性比对照组明显降低，表明模拟微重力能降低软骨细胞的钙化能力.如果在回转前加入SeO2-3和Mg2+，发现SeO2-3可以在一定程度上拮抗模拟微重力引起的微管蛋白及碱性磷酸酶活性改变，而Mg2+基本上可以完全拮抗模拟微重力对这两项指标的不良影响.]]> 1647true 1646true 1645true 1644true 1643true E.coliBL21(DE3) pET22b-mETIa高密度发酵,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a(rETIa)蛋白在E.coli中得到较高水平表达，表达量占菌体总蛋白的40%以上.经菌体破碎、包涵体变性、复性,二步柱层析纯化得到电泳纯的rETIa蛋白.测得rETIa对t-PA突变体(NTA)的抑制平衡常数Ki为8.72×10－8 mol/L.据此利用纯化的rETIa蛋白制备rETIa-Sepharose 4B亲和层析柱.直接一步纯化NTA复性液,纯化的NTA纯度达90 %以上,收率为96.2 %,纯化倍数为13.2,比活为(565.7±71.3) U/μg.]]> 1642true TM cDNA Library Construction技术，构建以真核表达载体pcDNA3.0为基础的日本鬼鲉毒腺cDNA表达文库.通过对文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析，获得94个日本鬼鲉毒腺新表达序列标签（ESTs），其中已确定全长cDNA的克隆有35个，包括溶细胞素基因、类短链神经毒素蛋白、C型凝集素、巨噬细胞迁移抑制因子、致病相关基因等，这些基因在日本鬼鲉中绝大多数为首次发现.日本鬼鲉毒腺cDNA表达文库的成功构建，为深入研究日本鬼鲉毒腺的组分及其分子作用机理奠定了基础.]]> 1641true 1640true rab5B基因Osrab5B是这类蛋白质基因在单子叶植物中的首例发现.将Osrab5B基因的编码序列按正确读码框重组到具有谷胱甘肽硫转移酶（glutathione S-transferase, GST）融合标签的pGEX-4T1表达载体中，转化大肠杆菌，获得了稳定表达目标融合蛋白的菌株，经GSTrapTM柱纯化，获得了纯化的目标融合蛋白.GTP结合试验表明，在原核细胞中表达出的GST-OsRab5B融合蛋白具有体外结合GTP的能力.]]> 1639true TM Rat cDNA Expression Array建立遗传性癫痫易感性P77PMC大鼠和正常对照Wistar大鼠的海马与大脑皮质基因表达谱，用Eagle EyeⅡStill Video System(Stratagene)图象分析仪分析两者基因表达谱差异.结果发现海马和大脑皮质中各有15个差异表达基因.海马组织中，12个基因在P77PMC大鼠中高表达而在正常对照Wistar大鼠中低表达，3个基因在正常对照Wistar大鼠中高表达，而在P77PMC大鼠中低表达；大脑皮质中，13个基因在P77PMC大鼠中高表达，而在正常对照Wistar大鼠中低表达，2个基因在正常对照Wistar大鼠中高表达，而在P77PMC大鼠中低表达. 结果说明，P77PMC大鼠与正常对照Wistar大鼠海马和大脑皮质存在多个差异表达基因，这些差异表达基因可能在癫痫的发生中扮演了重要角色.]]> 1638true 121 cDNA基因片段，与酵母表达载体pPIC9K重组，获得表达质粒p9KVEGF121.该质粒转化毕赤酵母菌GS115，用G418-YPD平板筛选高拷贝转化子，PCR鉴定VEGF121 cDNA与酵母染色体整合状态，高拷贝转化子用甲醇诱导表达.工程菌用5 L发酵罐发酵,表达产物r-hVEGF121占培养液中总蛋白量70%以上.纯化产物促进牛毛细血管内皮(BCE)细胞增殖，并强烈促进血管通透.]]> 1637true 1636true 1635true 1634true 1633true I/m:6.58/72.7 ku.它包含七个典型的LRR、一个IgC2样结构域.此外，它还包含一个N端信号肽、一个C端跨膜区.其结构特征表明它是富亮氨酸重复（leucine-rich repeat，LRR）超家族的新成员.经过人类基因组命名委员会的同意，将该基因命名为LRRC4.此外，通过序列相似性匹配还获得了定位于小鼠6号染色体的LRRC4的同源基因（GenBank 登录号: AF290542）.RNA印迹和RT-PCR检测发现LRRC4在正常人脑组织相对特异表达，而在多种原发性脑瘤表达明显下调或缺失.综合考虑LRRC4基因的序列特征及表达谱，提示LRRC4基因可能在神经系统中发挥重要作用.]]> 1632true 1631true 1630true 2+］i ）升高以及硒的抑制效应.结果表明，GSNO作用于ECV-304细胞，短时间内即可导致其胞内游离钙离子浓度升高.胞外液换为无钙液或向胞外液中加入CdCl2（1 mmol/L）对GSNO引起的［Ca2+］i升高无影响.提示，GSNO刺激主要引起胞内钙库释放.而且，一氧化氮清除剂血红蛋白（Hb）对这一过程有抑制作用，说明GSNO引起的胞内钙库释放由NO介导.经亚硒酸钠（1 μmol/L）处理的细胞，其NO引起的［Ca2+］i升高幅度明显被抑制，说明NO的这种作用可能与细胞的氧化还原状态有关.]]> 1629true 1628true 1627true 1626true 1625true 1624true 1623true 1622true 1621true ee).]]> 1620true 1619true Sn(sensitivity)和Sp(specificity)均达到84%以上.]]> 1618true 1-Pro2-Pro3-Gly4-Phe5-Ser6-Pro7-Phe8-Arg9-OH，在激肽释放酶的作用下， 从其大的前体多肽——激肽原而形成的.许多发病机理，如发炎、疼痛、哮喘等都与缓激肽有关. 它能与PC12细胞表面的受体作用，引起细胞器内的钙离子释放，在共焦显微镜下，通过观察钙指示剂Fluo-3荧光增加来监测缓激肽的生物活性.在这项研究中，利用固相肽合成方法合成了连接生物素的缓激肽，Biotin-Arg1-Pro2-Pro3-Gly4-Phe5-Ser6-Pro7-Phe8-Arg9-OH，通过对其生物活性的研究发现：a.它能保持象天然的缓激肽那样的生物活性；b.由于中性抗生物素蛋白与连接的生物素的结合引起的空间位阻阻碍它与细胞表面受体的相互作用，从而抑制了它的生物活性；c.在有自由的生物素存在的条件下，自由生物素与连接生物素与中性抗生物素蛋白的竞争结合，能够使得与中性抗生物素蛋白结合的连接生物素的缓激肽从抗生物素蛋白上脱离，因而恢复其生物活性.因此，可利用生物素和抗生物素蛋白来控制连接生物素的缓激肽的生物活性.这对于研究生物体系中生物活性的结构相关性具有重要的意义.]]> 1617true 1616true +8+双阳胸腺细胞数量减少，CD4-8+单阳胸腺细胞数增加；随着CD4+8+细胞与TSCs亲和力的增加，更多的双阳细胞进一步分化为单阳细胞，描述了胸腺基质细胞如何介导胸腺细胞从双阳向单阳分化发育的过程.]]> 1615true 2+、Cd2+和Ce3+对Ca(Ⅱ) α-淀粉酶活性影响及对其Ca2+的竞争作用.结果表明三种金属离子低浓度情况下（0.5～5 mmol/L）对α-淀粉酶具有激活现象，而较高浓度则抑制酶活力.Pb2+、Cd2+和Ce3+竞争置换α-淀粉酶中Ca2+能力的大小是：Pb2+＞Cd2+＞Ce3+，其抑制酶活作用大小：Pb2+＞Cd2+＞Ce3+.]]> 1614true ATP通道在细胞的新陈代谢与膜兴奋性的耦联中起重要作用.采用膜片钳的内面向外式记录方法，在成年大鼠海马CA1区锥体细胞上记录到一种被胞浆侧ATP和甲糖宁（tolbutamide，一种KATP通道阻断剂）抑制的Ca2+依赖性钾离子通道.在细胞膜内外的K+浓度均为140 mmol/L时，通道的电导为(204±21) pS，翻转电位为(3.57±1.13) mV，通道无整流性.通道开放概率及ATP对通道的抑制作用均呈现电压依赖性.该KATP通道与以往报道的“经典”KATP通道有显著不同，其活动受膜电位、胞内Ca2+和ATP三重调节，表明这是一种新型的KATP通道.上述结果表明在海马神经元上至少有两种性质不同的KATP通道，提示神经元可能通过不同性质的KATP通道感受细胞内的代谢状态，进而调节细胞膜的兴奋性.]]> 1613true 1612true 1611true Fv/Fm下降.分析表明，(Z+0.5A)/(V+A+Z)与NPQ呈明显正相关，而与Fv/Fm呈显著负相关，(V+0.5A)/(V+A+Z)则与之相反.由此推测，离体条件下玉米叶片中Z的环氧化和V的脱环氧化明显与非辐射能量耗散和PSⅡ光能转化过程相关.]]> 1610true 1609true 1608true Escherichia coli）细胞内分离纯化了一种小分子蛋白质，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)纯度鉴定为单一条带，经质谱分析、N端测序、同源序列比较，确定该蛋白质为大肠杆菌冷休克蛋白CspC.在此基础上，用圆二色光谱测定了其二级结构含量，初步探索了其热稳定性及与单链DNA结合后的构象变化.]]> 1607true 1606true 0-地中海贫血缺失3′端点下游11.5 kb区域内的调控顺序.确定缺失3′端点立即下游区1.7 kb片段，在人红白血病细胞K562及鼠红白血病细胞MELGM979中，可使γ-珠蛋白基因启动子驱动的荧光酶基因表达增加3.8～4.0倍，而在HeLa细胞中仅增加1.5倍.位于缺失3′端点约10 kb的一个长1.4 kb片段在K562和MELGM979中，可使γ-基因启动子驱动的荧光酶基因表达增加2.4～2.9倍，而在HeLa细胞中无增加.结果说明这两段顺序均有增强子活性，并且这种活性具有一定的红细胞特异性.进一步证明1.7 kb片段内包含多个转录调节蛋白结合模体的430 bp片段包含了1.7 kb片段的大部分增强子活性.这些结果为缺失导致增强子样顺序并入到接近Gγ-基因，是Yunnanese(Aγδβ)0-地贫缺失突变体中胎儿Gγ-珠蛋白基因，在成人期持续活跃表达原因的假设提供了实验证据.]]> 1605true 1604true 1603true P＜0.01）；但旋转24 h的E13鸡胚上述指标皆无显著改变，表明微重力对鸡胚脑细胞神经递质释放的影响与胚龄有关.鸡胚脑细胞在电脉冲刺激下谷氨酸释放的动态过程表明：脉冲电场引起的谷氨酸释放与细胞内钙离子迅速增加有关.]]> 1602true 1601true ·-2诱导莴苣叶绿体的叶绿素荧光猝灭过程.结果表明，O-·2的产生明显使光化学猝灭(qP)和非光化学猝灭(qN)增加.叶绿体内SOD被DDC抑制后，X+XO诱导的叶绿素荧光猝灭过程中，qP下降，qN上升；MV诱导的叶绿素荧光猝灭过程中，qP上升幅度不大，qN增加不明显.当碳代谢被碘乙酰胺(JAA)抑制后, qP下降，qN上升.解偶联剂NH4Cl增加质子跨类囊体膜的通透性，导致qP增加和qN降低，加入MV后qP和qN增加不明显.分析认为，-·2的产生和及时被清除对保持光合电子传递和增加跨膜ΔpH有很重要的作用，有利于叶绿体吸收的光能得到转化和耗散，在一定程度上减轻过量光能引起的光抑制损伤.]]> 1600true 1599true Synechococcus sp. PCC 7002）基因组DNA中扩增得到藻蓝蛋白β亚基基因（cpcβ）的上游序列（Pcpcβ），及编码谷氨酰胺合成酶的glnA基因片段．以Pcpcβ作为启动子、以glnA基因片段作为整合平台，构建含有小鼠金属硫蛋白-Ⅰ（mMT-Ⅰ）cDNA的同源整合表达载体pKGC-MT.通过自然转化法将整合表达载体导入聚球藻7002中，经氨苄青霉素筛选，得到遗传性状稳定的转基因藻.PCR检测证明mMT-Ⅰ基因已整合到蓝藻基因组DNA上；蛋白质印迹表明mMT-Ⅰ已在蓝藻中表达；ELISA结果显示mMT-Ⅰ在蓝藻中的表达量约为800 μg/g.]]> 1598true 1597true n=10），而在0 mV到+60 mV之间电导为（40.92±3.17） pS.通道开放概率有明显的电压依赖性(膜电位－60 mV时，Po=0.44±0.12；膜电位为+60 mV时，Po=0.86±0.06, n=10).在对称Cl－浓度（150 mmol/L）时，通道翻转电位为(－4.17±1.84) mV.当溶液中部分NaCl被葡萄糖酸钠替代后，翻转电位为：(－34.23±4.86) mV (［Cl－］i/［Cl－］o=(30 mmol/L)/(150 mmol/L))，接近氯离子通道的理论值，这表明通道具有氯离子选择性.浴槽液中分别加入氯通道阻断剂DIDS和SITS可以使+40 mV的通道开放概率从(0.83±0.06)和(0.86±0.06)分别降低到(0.12±0.05)和(0.13±0.04)（n=5），冲洗后可使开放概率基本恢复.上述研究结果显示,在成年大鼠海马CA1神经元上存在外向整流氯离子通道.]]> 1596true 1595true 2溶液孵育Wistar大鼠脑皮质匀浆液，并用蛋白质印迹和定量图像分析技术检测不同亚型calpain对tau蛋白的降解作用.研究发现：在37℃用1 mmol/L Ca2+孵育底物15 min，可见tau蛋白明显降解，并在分子质量为29 ku处出现tau蛋白降解片段；当Ca2+浓度为5 mmol/L时，tau蛋白几乎全部被降解；这种tau蛋白降解可被calpain特异性抑制剂完全逆转.进一步的研究发现，分别用μ-calpain抑制剂（0.05 μmol/L calpastatin），m-calpain抑制剂（100 μmol/L calpain inhibitor Ⅳ）或总calpain抑制剂（552 μmol/L calpeptin）与1 mmol/L Ca2+共同孵育Wistar大鼠脑皮质匀浆液，Ca2+激活的tau蛋白降解分别被抑制8.6%，92.5%和97.8%.结果表明一定浓度的Ca2+可同时激活μ-calpain和m-calpain，这两种亚型calpain均参与降解tau蛋白，但m-calpain的作用比μ-calpain更强.]]> 1594true 1593true 1592true 1591true LI）分别为61.4±27.8, 10.2±8.7(P＜0.01).较高的LI与HCC侵袭性密切相关.蛋白质印迹显示癌组织中AKR1C2表达升高.RT-PCR显示，肝癌中AKR1C2表达指数（EI）高于癌旁及正常组织，而且存在序列差异.RNA印迹显示91.2%为上调表达.原位杂交显示肝癌细胞胞浆中染色强于癌旁及正常肝.AKR1C2过表达与肝癌转移潜能有关.AKR1C2过表达刺激QGY7703细胞中DNA合成与阻止细胞凋亡.转染AKR1C2基因的QGY7703细胞在软琼脂上集落形成能力增强，并能促进QGY7703在裸鼠体内肿瘤形成能力.cDNA表达芯片显示转染AKR1C2后导致QGY7703细胞中一些基因表达改变.AKR1C2介导NF-κB阻止抗-Fas对QGY7703的抑制作用，并且在细胞内AKR1C2能与Cdk4结合，产生免疫共沉淀.AKR1C2的异常表达在启东肝癌的发生、发展及转移中可能起重要作用.]]> 1590true 1589true 2O2）所致C2C12肌原细胞凋亡中的作用，采用Hoechst 33258染色,观察H2O2 (0.5 mmol/L)处理C2C12肌原细胞不同时间后,细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率,DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征性梯状带,利用细胞成分分离后蛋白质印迹分析H2O2是否导致Smac/DIABLO从线粒体释放,采用Caspase检测试剂盒及蛋白质印迹分析Caspase-3和Caspase-9的活化,转染Smac/DIABLO基因，观察Smac/DIABLO过表达对H2O2所致的C2C12肌原细胞凋亡的影响.结果表明:H2O2处理1 h后，Smac/DIABLO从C2C12肌原细胞线粒体释放入胞浆，2 h更明显；H2O2处理4 h后，Caspase-3和Caspase-9活化，12 h达高峰；H2O2处理24 h后，C2C12肌原细胞显示特征性的凋亡形态改变，凋亡核百分率明显升高，DNA电泳出现明显“梯状”条带.与单纯过氧化氢损伤组相比，Smac/DIABLO高表达的C2C12肌原细胞经过氧化氢损伤组的Caspase-3和Caspase-9的活化、凋亡核百分率的升高、“梯状”条带的出现均更明显.结果表明，H2O2可导致Smac/DIABLO从C2C12肌原细胞线粒体释放，促进Caspase-9和Caspase-3的活化而促进细胞凋亡的发生.]]> 1588true I为4.21.将蛋白质序列通过NCBI的Blast服务器进行序列相似性分析，发现该基因编码的蛋白质和成年小鼠视网膜未知蛋白（BAB32214）同源.经与国际人类基因组命名委员会协商定名为成人视网膜假定蛋白（adult retina hypothetical protein, ARHP），GenBank登录号为AY174896.生物信息学分析表明，该蛋白质可能为一参与转录调控的核蛋白.ARHP基因定位在染色体5q35，跨越35 163 bp，含4个外显子和3个内含子.在基因的5′非翻译区有2个CpG岛.]]> 1587true P＞0.01）.丙型肝炎病毒分片段抗体检测蛋白质芯片，检测灵敏度和特异性高于ELISA法，对血清样本的确认程度与进口的RIBA试剂高度一致，具有操作简便，费用低廉的特点，是一种新型、高效的体外诊断试剂.]]> 1586true 1585true 1584true 1583true 1582true Fox c2）基因在心血管发生和发育中的作用, 通过制作小鼠的Fox c2 基因无效突变,解析该基因缺失鼠主动脉弓的异常发育状况.纯合子胎鼠从12.5天胚胎(embryo, E)开始有宫内死亡；即使完成宫内发育过程，新生鼠出生24 h后也全部死亡.这些鼠全部表现出与人的先天性心血管发育缺陷相似的B型或C型主动脉弓离断.杂合子鼠发育正常.E10.5胚胎的原位杂交分析显示，Fox c2 mRNA在第三、第四和第六弓型动脉强烈表达，而第四弓型动脉在E10.5胚胎后逐渐消失.这些结果表明，在主动脉弓形成过程中，Fox c2基因产物是左第四弓形动脉广泛改建所必需.]]> 1581true 1580true 1579true Oryza sativa L.ssp. indica)基因组全序列的过程中，叶绿体和线粒体DNA的污染问题非常严峻.应用脉冲场电泳（PFGE）技术对水稻基因组DNA进行纯化，结果表明它能够有效去除叶绿体和线粒体DNA，使其污染率从3%降低到0.2%. 同时，比较了水稻绿苗和黄化苗的DNA得率，以及HB法和NIB法制备大分子质量(HMW)DNA的异同.最后提出一套制备水稻基因组DNA的方法，包括黄化苗培养; 细胞核的分离、包埋和裂解；脉冲场电泳纯化、回收聚集在低熔点（LMP）胶中的水稻HMW DNA.用该方法所得的水稻基因组DNA，纯度高（无叶绿体和线粒体DNA污染）、基因组完整（机械剪切和降解少）、回收率高（操作过程中DNA损失少）. 另外，首次报道在融化的低熔点（LMP）胶中对水稻HMW DNA于38℃进行超声波处理，能够获得用于shotgun文库和梯度文库构建所需要的各种DNA片段(1.5～3 kb, 3～12 kb)，并且效果优于在TE中进行操作.]]> 1578true +均能够明显抑制STS诱导的神经元凋亡，并且大电导钙激活钾通道（BK）选择性阻断剂iberiotoxin和paxilline具有同样程度的抗细胞凋亡作用，表明钾通道（可能主要是BK通道）参与了STS诱导的培养海马神经元凋亡.在STS诱导神经元凋亡的早期就出现了细胞容积的显著减少，而钾通道阻断剂或升高细胞外K+均可阻断该细胞容积减少.研究结果提示细胞内钾离子的外流可能参与了凋亡性细胞容积减少，这也可能是钾通道介导细胞凋亡的重要机制之一.]]> 1577true 1576true 8 pfu/ml和0.5×108 pfu/ml的uPAR反义和正义核酸表达重组腺病毒，分别命名为Ad-uPAR(－)和Ad-uPAR(+).以不同的病毒感染指数（MOI）感染人肺巨细胞癌高转移株95D肿瘤细胞，3天后用RNA印迹法可以检测肿瘤细胞uPAR正义和反义核酸表达水平，随着MOI的升高，Ad-uPAR(－)感染的肿瘤细胞uPAR蛋白水平逐渐下降，肿瘤细胞的体外侵袭能力也明显下降，而感染Ad-uPAR(+)的肿瘤细胞无明显变化.结果表明,重组腺病毒可以表达uPAR正义和反义核酸，uPAR反义核酸可以明显抑制人肺巨细胞癌高转移株95D肿瘤细胞在体外的侵袭能力.]]> 1575true Sulfolobus acidocaldarius细胞内谷氨酰胺合成酶的表达量随着培养条件的改变有较大差异，RNA印迹表明，该差异是在mRNA水平受到调控.经DEAE-Sepharose和Sephacryl S-300两步分离酶蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和凝胶过滤测定分子质量，表明该酶为12个相同亚基组成，分子质量为630 ku的多聚体.该酶的最佳pH为7.3；对羟胺、谷氨酰胺、ADP和Mn2+的Km值分别为3.5 mmol/L、1.3 mmol/L、0.15 mmol/L和0.24 mmol/L；其γ-谷氨酰转移酶活性和生物合成酶活性的最佳温度均为90℃.Arrhenius曲线表明，γ-谷氨酰转移酶的活化能为47 kJ/(mol·K)，生物合成酶的活化能分别为29 kJ/(mol·K)（40～75℃）和10 kJ/(mol·K)（55～90℃）.对该酶的抑制剂研究发现，与其他来源的谷氨酰胺合成酶不同，甘氨酸、L-丙氨酸能明显抑制 S.acidocaldarius谷氨酰胺合成酶的活性，而常规的抑制剂如L-色氨酸、L-组氨酸、5′-AMP却没有抑制作用，甘氨酸、L-丙氨酸的抑制作用为竞争性抑制，推断该酶的活性调节与绝大多数革兰氏阳性菌一样不受腺甘酰化的影响.]]> 1574true I在4.3附近，为含糖蛋白.同时测定了该酶的热稳定性和pH稳定性.纯化过程中同时分离得到另一种药用蛋白——人尿胰蛋白酶抑制剂（HUTI）.]]> 1573true 1572true Eucommia antifungal protein, EAFP)的单晶体具有在几小时内就可长大的快速生长特性.用原子力显微成像(atomic force microscope, AFM)技术，原位实时观测了EAFP单斜晶体生长过程中的{100}表面形貌动态变化，并分别在不同的过饱和度下测量了其生长速率.结果表明，EAFP晶体生长的速率与蛋白质溶液的过饱和度相关，在过饱和度高时(σ=1.78)晶面生长极快；在中等过饱和度(σ=1.5)下，其晶面台阶的生长速率沿b, c方向分别为12 nm/s和24.2 nm/s, 比溶菌酶生长速率(6～7 nm/s)快很多；在蛋白质浓度很低的情况下，其生长速率仍与其他蛋白质相当.EAFP晶体快速生长可能与该分子尺寸较小，内部结构紧凑，分子骨架呈刚性和分子表面性质等其固有特性密切相关.沉淀剂浓度对EAFP晶体生长也有影响.过饱和度很低时，提高沉淀剂浓度会干扰晶体生长.]]> 1571true 1570true treY和麦芽寡糖基海藻糖基水解酶的基因treZ，测定了其核苷酸序列并进行了表达.其中treY编码的蛋白质有728个氨基酸、分子质量为86 ku；treZ编码的蛋白质有559个氨基酸、分子质量为65 ku.它们与已报道的其他微生物的两个海藻糖生成相关酶的基因进行同源性比较，treY和treZ的同源性分别为93%和76%（硫矿硫化叶菌P2）、97%和95%（硫矿硫化叶菌KM1）、63%和66%（嗜酸热硫化叶菌ATCC33909）、48％和50%（节杆菌Q36）、48%和52%（根瘤菌M11）、50%和52％（短杆菌）.通过PHYLIP软件进行这些基因序列的分类聚类计算，获得这几种微生物间两个酶类的蛋白质系统进化树；经过氨基酸序列比较分析还发现，所有的海藻糖生成相关酶都含有糖苷酶家族13中几个高度保守的α-淀粉酶催化活性区，推测这些海藻糖生成相关酶都可能有着共同的进化来源.]]> 1569true 4 U/ml，120 h表达产物IFN活性为3.10×105 U/ml，48～72 h表达产物IFN活性较低；48～120 h表达产物的玫瑰花结形成率均在10％以上.结果表明融合基因在家蚕细胞中得到了高效表达，表达的融合蛋白具有IFN-α2b和THY-α1的双重生物活性.]]> 1568true 1567true 1566true 1565true 1564true MTHFR基因第677位核苷酸的多态性（C→T）能影响其酶活性并与肿瘤易感性有关.为比较中国北方人群MTHFR C677T多态性与食管鳞状细胞癌（ESCC）易感性之间的关系, 通过高速实时聚合酶链反应（real-time PCR）和解链曲线（melting curve）方法分析了189名ESCC患者和141名健康对照的MTHFR C677T多态性位点的基因型.结果显示，健康对照组的MTHFR C/C（纯合野生）、C/T和T/T（纯合突变）基因型的频率分别为17.7%、38.3%和44.0%.ESCC患者的T/T基因型频率（42.3%）与健康对照组无显著差异（χ2=0.089, P＞0.05），其C/T基因型频率（49.2%）仅略高于对照组（χ2＝3.890, P＜0.05），而患者组的C/C基因型频率(8.5%)显著低于健康对照组(17.7%) (χ2=6.37, P=0.012).与C/T和T/T基因型相比，C/C基因型可显著降低ESCC的发病风险(相对风险度的比值比（OR）=0.43, 95%可信区间（CI）=0.22～0.84)，在吸烟者和有上消化道肿瘤家族史的患者中这一倾向更加明显.研究提示，在中国北方人群中, MTHFR C677T纯合野生基因型对ESCC的发病起保护作用.]]> 1563true 1562true 2+等金属离子的结合位点，推测了对Na+敏感的结构基础.这些结合位点与其生化功能相关.而且，通过结构与功能分析，讨论了蛋白质数据库(PDB)中同一个酶已有理论结构的不合理性.]]> 1561true 1560true 1559true 1558true 125I标记的人apoCⅢ为配体，利用放射性配体结合分析法观察了人肝癌细胞系HepG2细胞是否有apoCⅢ受体存在.结果证实HepG2细胞上存在高亲和力的、可饱和的、特异的apoCⅢ受体结合位点，其受体的亲和力(Kd)和apoCⅢ受体结合容量(Bmax)分别为(9.53±1.03)×10-9 mol/L和(3.28±0.31) μg/g.随后又分别研究了胰岛素及胰高血糖素对HepG2细胞apoCⅢ受体功能的影响，结果表明：胰岛素可使HepG2细胞apoCⅢ受体结合容量（Bmax）显著增加，但对受体的亲和力（Kd）无影响；胰高血糖素可使HepG2细胞apoCⅢ受体亲和力显著下降（即Kd值升高），对受体的结合容量无影响.提示人肝apoCⅢ受体的功能可能受胰岛素及胰高血糖素的不同调节.]]> 1557true 1556true 1555true 121 cDNA重组复制缺陷型腺病毒表达载体，制备重组腺病毒，该腺病毒能介导VEGF121 cDNA基因促进人脐静脉血管内皮细胞增殖，促进毛细血管管腔样结构形成.ELISA检测表明VEGF121 cDNA基因表达产物分泌至培液上清，并显示强烈血管通透作用.为进一步利用重组腺病毒介导VEGF121 cDNA进行缺血性疾病的基因治疗奠定良好的基础.]]> 1554true 1553true 1552true Pichia pastoris）表达载体pPICZαA中，获得的重组表达载体pPICZαA-FL电击转化野生型酵母菌SMD1168后，得到多株酵母工程菌SMD1168/pPICZαA-FL.经高浓度ZeocinTM筛选、表型鉴定、工程菌的诱导表达及表达产物的鉴定，最后得到高效表达gE基因去信号肽片段的酵母工程菌SMD1168/pPICZαA-FL-7.工程菌72 h培养上清的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳与蛋白质印迹结果显示，gE基因去信号肽片段表达产物大小约为80 ku，比预期的63.8 ku大.凝胶薄层扫描结合Bradford蛋白质总含量测定结果表明，表达产物占工程菌培养上清总蛋白的13.49%，表达量可达11.7 mg/L.间接ELISA结果表明重组表达产物具有良好的抗原性，能够有效地区分伪狂犬病病毒gE标准阳性与阴性血清.]]> 1551true 1, P5-Di（adenosine-5′）pentaphosphate）在其中的作用.结果显示：TRAIL可诱导Novikoff细胞凋亡，且具有剂量和时间依赖性，同时胞内钙离子浓度显著上调.Ap5A能延迟TRAIL诱导的Novikoff细胞凋亡，同时下调胞内钙离子浓度.TRAIL和Ap5A分别上调和下调胞内钙离子浓度的作用可能是其诱发和延迟Novikoff细胞凋亡的一个机制.]]> 1550true 1549true 1548true P＜0.05），接近低转移性肝癌细胞水平，但是SM3的前体分子半乳糖基神经酰胺水平并不降低，提示磺酰化作用受到了抑制.通过脑苷脂磺酰基转移酶(CST)基因的转染，使Hep3B肝癌细胞高表达SM3.发现CST转染的肝癌细胞与转移相关的行为显著改变，经黏附试验发现,CST基因转染的肝癌细胞对层粘连蛋白和玻连蛋白（vitronectin）的黏附显著增强，比未转染的或转染载体的肝癌细胞升高3～4倍.裸鼠体内试验表明，这种具有高度表达CST基因的Hep3B细胞比对照组细胞具有更高的转移能力(P＜0.05).说明磺酰化乳糖基神经酰胺可能与肝癌细胞的转移有关.]]> 1547true 1546true 1545true 1544true V、扩散系数D及随机参数r，将三者随ATP的浓度［ATP］及外力F的变化进行了曲线拟合，并同大量实验结果进行了比较，定性半定量地分析了分子马达在拖动负载运动时的动力学行为.]]> 1543true Hp）保守区（AB）蛋白的体外安全性、免疫原性和黏附作用，以确定AB在Hp疫苗研制中的应用价值.ELISA法测定Hp感染者血清中抗AB抗体，四唑盐比色法（MTT）测定T细胞对AB的增殖反应，流式细胞术检测AB致T细胞表达FasL的作用，二苯胺（DPA）法测定AB致T细胞凋亡率，光镜计数法研究AB抗体对Hp与胃癌细胞黏附的影响.ELISA法共检测了55份血清，以快速尿素酶实验(RUT)作为平行对照，两法的评价判断一致性程度的指标卡帕系数为0.76. 同时，低剂量AB即可刺激Hp+T细胞的增殖.体外安全性实验表明，AB无明显调节T细胞表达FasL的作用以及无明显致Hp－T细胞凋亡的作用. AB抗血清能部分阻断Hp与胃癌细胞系的黏附，在光镜下表现为经抗AB兔血清预处理后，每细胞周围黏附的细菌数较免疫前兔血清预处理组显著减少（P＜0.05）.研究表明AB是安全的、具有免疫原性的Hp菌体成分，既可以刺激体液免疫，又能够提高细胞免疫，并且其抗体还可防止Hp与胃上皮细胞的黏附.]]> 1542true 1541true Km、vmax和Ea分别为2.67 mmol/L、0.118 mmol/(L·min·mg)和37 kJ/mol， 其碳结构类似物的相应值分别为3.56 mmol/L、0.084 mmol/(L·min·mg)和61 kJ/mol.]]> 1540true 1539true 2+，在pH 6～9之间稳定.家蝇蛹凝集素对Escherichia coli, Bacillus subtilis和Salmonella typhi有抑制作用.]]> 1538true 1537true I＜3.8.测得ARSP1 N端25个氨基酸序列为：I(V)IGGT(S)N(D)ASPGEFPWQLSQTRGGSHS，N端序列比较结果显示其与丝氨酸蛋白酶类高度同源.体外实验中，不仅通过凋亡细胞的相差显微观察验证了ARSP1的细胞杀伤活性，而且进一步通过荧光抗体技术对其直接杀伤细胞活性进行了定位研究.Schiff's试剂糖蛋白染色法鉴定ARSP1为糖蛋白（或糖肽），纤维蛋白平板法测得ARSP1同时具有纤溶酶和纤溶酶原激活酶活性，进一步通过苯甲磺酰氟(PMSF)对其纤溶酶活性的抑制实验，证明属于丝氨酸蛋白酶类.]]> 1536true 1535true P＜0.05)；而STAT3蛋白及磷酸化水平在三组骨髓细胞之间无显著差异(P＞0.05).说明Ras/ P44/42 MAPK途径可能在γ射线诱发的小鼠白血病中发挥一定的作用，而JAK/STAT3途径并未参与这一癌变过程.]]> 1534true PTEN过表达对HEK293细胞凋亡和细胞周期停滞的作用，以野生型PTEN和PTEN突变子(T910G)表达质粒分别转染无PTEN表达的人胚肾293细胞，采用细胞质梯度DNA方法检测细胞凋亡，以流式细胞仪分析细胞周期.发现PTEN过表达能够诱导人胚肾293细胞质中出现梯度DNA，293细胞发生凋亡,PTEN过表达改变细胞周期分布，G0/G1期细胞增加13%，S期细胞下降15%.PTEN突变子对细胞凋亡和G1细胞停滞的影响略弱于野生型PTEN.PTEN基因过表达明显下调血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的蛋白激酶B(PKB)和p42,p44-促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化水平，PTEN突变子对p42,p44-MAPK磷酸化水平的调节作用略弱于野生型PTEN.PTEN通过抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡而影响细胞生长.]]> 1533true P＜0.01).同一组织对不同波长的激光及其线偏振激光的光学特性也有显著性差异(P＜0.01)，正常膀胱组织对同一波长的激光及其线偏振激光的光学性有明显差异，而膀胱癌组织对同一波长的激光及其线偏振激光的光学特性则没有明显差异.膀胱癌组织对532 nm和808 nm激光及其线偏振激光的前向散射通量i(x)、后向散射通量j(x)、总散射通量I(x)的衰减均较正常膀胱组织的明显要大得多，且其i(x)均明显较j(x)要强.]]> 1532true 1531true 1530true 1529true 30），第二组的基因转录频率较低（≤10）.对寡核苷酸（主要是四核苷酸、五核苷酸）的出现频率进行统计比较分析，探测到一批寡核苷酸，它们在第一组内含子中出现的频率显著高于在第二组内含子中出现的频率，同时也显著高于与第一组内含子相邻的外显子中的出现频率.其中一些寡核苷酸与实验研究得到的转录调控元件相同.从这批寡核苷酸在内含子和外显子序列中的分布看，高效转录基因内含子的序列结构确实有利于基因的转录.]]> 1528true 1527true -的转运活性，结果发现去除后20个(Lys892～Val911)氨基酸残基后，离子转运活性明显下降，而去除后32个(Asn880～Val911)后，离子转运没有进一步下降，说明Lys892～Phe895 4个氨基酸残基在带3蛋白的离子转运过程中发挥重要作用.]]> 1526true 1（缺乏玉米黄质Z和单环氧玉米黄质A）、lut2（缺乏lutein）和lut2-npq1（双突变体,同时缺Z和lutein），及其对照野生型（WT）在强光诱导下叶绿素荧光猝灭的特性.与WT相比，3个突变体的叶绿素a/b没有明显的差异，Fv/Fm则有不同幅度的增加，缺乏lutein的突变体lut2和lut2-npq1的叶黄素循环库（V+A+Z）显著增大.缺乏Z的突变体npq1和lut2-npq1在强光下，荧光的非光化学猝灭（NPQ）的诱导受到明显抑制，lut2的NPQ形成也受到部分抑制.强光处理9 min后，3个突变体和WT的NPQ大小顺序为WT＞lut2＞npq1＞npq1-lut2.强光诱导过程中突变体的光化学猝灭(qP)都小于WT.强光下突变体显示较弱的抗光抑制能力，其抗光抑制能力的强弱顺序为：WT＞lut2＞npq1＞lut2-npq1.结果表明叶黄素循环不但与NPQ的形成直接相关也与qP有关.]]> 1525true 1524true 1523true Ito)的影响，采用全细胞膜片钳技术记录应用BmkTXKβ前后的Ito电流. 结果显示BmkTXKβ（1 μmol/L）使心房肌细胞Ito（刺激电压为+50 mV）从（13.63±0.87）pA/pF减少到（7.98±0.78）pA/pF，抑制率为41.4% (n=16, P＜0.001).冲洗后, Ito部分恢复至(11.18±0.82)pA/pF (n=6, P＜0.01,与给药后比较).在0.01～100 μmol/L范围内BmkTXKβ呈浓度依赖性地抑制Ito，IC50的均值为0.95 μmol/L (n=10, P＜0.01)，但无频率依赖性(n=6，P＞0.05). 1 μmol/L的BmkTXKβ可使Ito通道的失活动力学曲线明显左移，V1/2分别为（－23.6±2.7） mV和（－35.3±3.6） mV（n=8，P＜0.05），曲线斜率基本不变.同时可使Ito通道的恢复过程明显减慢，恢复曲线右移,τ值从（51.2±8.5） ms延长至（93.5±13.4） ms（n=9，P＜0.01）,但不影响其激活过程.据此推断BmkTXKβ对家兔心房肌细胞Ito具有显著的抑制作用，主要作用于失活过程，延长该通道的恢复时间.]]> 1522true 1521true 1520true 32P标记的黄瓜花叶病毒（CMV）RNA3 cDNA片段和卫星RNA全长cDNA作为探针，定量测定CMV基因组RNA和卫星RNA的含量变化，结果显示：二者均具有明显的寄主效应和时间效应.在16～20℃条件下，接种不携带卫星RNA的分离物CMV-R3，15天、30天和75天时，CMV基因组RNA负荷量呈显著下降的趋势.在第15天，RNA3的负荷量以烟草>心叶烟>克里夫兰烟>番茄的顺序表现为不同寄主的显著性差异.相同条件下接种携带高拷贝卫星RNA的分离物CMV-RS，在5天和15天之间基因组RNA和卫星RNA负荷量均呈现上升的趋势，同时测得其基因组RNA和卫星的负荷量具有相似的寄主效应和时间效应，但程度不同.第15天时，二者负荷量以烟草＞心叶烟＞番茄的顺序表现寄主效应的显著性差异.在18～21℃条件下，接种携带坏死卫星RNA的CMV强毒株HC4，第5天、第10天和第15天时，基因组RNA和卫星RNA的负荷量均以番茄＞心叶烟＞烟草的顺序表现出显著性差异，并表现出明显的时间效应.不同来源CMV分离物还存在寄主选择性差异.]]> 1519true 1518true o-十四烷酰佛波醇-13-乙酯（12-o-tetradecanoylphorbol-13 -acetate,TPA）诱导的人永生化食管上皮细胞恶性变中基因的差异表达情况时，曾获得中性粒细胞明胶酶相关lipocalin（neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL）等新的食管癌癌变相关基因.为深入研究这些癌变相关基因在食管癌中以蛋白质-蛋白质或蛋白质-DNA相互作用为基础的功能网络调控关系，建立了一个食管癌cDNA酵母杂交文库.采用Trizol试剂从一种新的人食管癌细胞（SHEEC，由人永生化食管上皮细胞转化而来）中提取细胞总RNA，采用Oligotex mRNA Kit从细胞总RNA中制备PolyA+ mRNA，采用SuperScriptTM Choice System For cDNA Synthesis Kit合成cDNA，以PolyA+ mRNA为探针，化学发光法监测cDNA合成的质量，以pGADT7为载体构建了SHEEC细胞的cDNA酵母杂交文库.文库的滴度为1.19×109 cfu/ml，重组片段大小主要集中在0.5～6.0 kb，重组率为50％.在此基础上，应用酵母单杂交技术手段对该文库中的NF-κB元件结合因子进行了筛选，在SD/-his/-leu/［＋15 mmol/L 3-AT］缺陷培养基平板上共获得了约360个单克隆.按照平板上酵母单克隆直径的大小，选择直径大于2 mm者91个，提取质粒进行酶切鉴定和一对一酵母单杂交验证实验，结果获得了30个阳性重组子，并随机取其中的9个阳性重组子进行测序和GenBank/BLAST同源分析，发现某些基因编码的蛋白质产物在关键氨基酸残基位点上与p65和p50的NF-κB元件结合域公共序列具有高度一致性.这些实验结果表明，所构建的人食管癌cDNA酵母杂交文库是成功的.]]> 1517true 1516true 1515true 2O2作用体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞4次，使之出现不可逆的衰老表型.提取年轻细胞及H2O2处理早老细胞的mRNA，以荧光物Cy3标记年轻细胞cDNA,Cy5标记H2O2处理的细胞cDNA，并与点有4 096条人类基因的芯片杂交，利用计算机数据处理判断基因是否存在表达差异.结果显示：有123种基因的表达变化较显著，这些基因参与细胞周期进程、细胞代谢及蛋白质修饰、细胞外基质及细胞骨架蛋白的形成和调节、炎症反应、调节受体酪氨酸蛋白激酶和G蛋白耦联受体信号转导.]]> 1514true r为筛选基因,构建成4×κB基序为增强子、SV40为基本启动子的报告基因载体p4κB-EGFP和p4κB-d2EGFP.两载体分别与p65载体瞬时共转染HEK293细胞,通过比较不同时相点EGFP和d2EGFP的调控表达，证明p4κB-d2EGFP是较理想的NF-κB反应性绿色荧光蛋白(GFP)报告基因载体.将p4κB-d2EGFP稳定转染HEK293细胞，从而获得NF-κB反应性报告细胞株HEK-d2EGFP.应用NF-κB“圈套”寡核苷酸(TFD)与p65载体瞬时共转染HEK-d2EGFP，1 mg/L NF-κB和2 mg/L NF-κB TFD组对p65蛋白诱导调控表达的d2EGFP具有明显拮抗作用.结果表明，NF-κB反应性d2EGFP报告系统可特异、灵敏、动态地反映和监测NF-κB的活性变化.]]> 1513true 1512true E.coli alkaline phosphatase, EAP, EC 3.1.3.1）是一个非特异性二聚体磷酸单酯酶. 采用易错聚合酶链反应(error prone PCR)的方法，在原有高活力突变株的基础上，对EAP远离活性中心催化三联体的区域进行定向进化，经两轮error prone PCR，获得催化活力较亲本D101S突变株提高3倍、较野生型酶提高35倍的进化酶4-186，并对该酶的催化动力学特征进行了分析. 进化酶基因的DNA测序表明4-186含两个有义氨基酸置换：K167R和S374C，二者既不位于底物结合位点，也不位于酶的金属离子结合位点.]]> 1511true 1510true 33P-dATP进行标记，与含有16 150个基因和表达序列标签(EST)的cDNA表达阵列膜杂交，获得基因表达图谱.Array Gauge软件分析NAG7基因的重表达所导致的鼻咽癌细胞HNE1基因表达谱改变，并用RNA印迹对微阵列杂交结果进行验证.结果分析表明，2倍以上的差异表达基因或EST 179个，其中表达上调的91个，表达下调的88个；已明确基因表达产物的上调基因29个，下调基因37个.在差异表达基因中，涉及基因转录调控、信号转导、细胞生长、细胞代谢和细胞凋亡等基因.RNA印迹证实生长阻滞特异蛋白1（gas 1）基因表达上调.特别值得关注的是， 先前的蛋白质组研究结果亦发现NAG7基因可导致生长阻滞特异蛋白1表达上调，说明gas 1基因在NAG7重表达的HNE1细胞中具有重要作用，这为深入研究NAG7基因的作用环节和机理提供了重要的线索.]]> 1509true 28～123，应用荧光光谱和圆二色谱技术观测GM1对APP28～123构象的影响.结果表明：APP28～123与GM1水溶液和含GM1的脂质体孵育后，其荧光强度明显增强，最大发射峰位蓝移20 nm；APP28～123在溶液中的二级结构以α螺旋为主，峰位在208 nm和222 nm，而APP28～123与PC/GM1脂质体或GM1水溶液孵育后，其二级结构虽以α螺旋为主，但摩尔椭圆度(θ)值明显增强. 以上结果表明GM1改变了APP28～123二级结构，提示GM1引起APP分子构象的改变，可能影响APP分子正常生理功能和跨膜转运过程.]]> 1508true 1507true 1506true 1505true Eriocheir sinensis）眼柄视神经节端髓X器官（MTXO）三种类型神经内分泌细胞对0.01～5mmol/L γ氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）的反应，并结合选择性拮抗剂和激动剂的使用进行了GABA受体研究.在电流钳模式下，依据不同Nernst Cl－电位，三种类型细胞均对GABA产生去极化或超级化反应.在电压钳模式下，GABA激活Cl－通道电流（IGABA）.IGABA在灌流GABA后约1 200 ms内激活，800 ms内达到峰值，没有明显的脱敏反应，反转电位接近Nernst Cl－电位.IGABA幅值呈浓度依赖性，激活阈值为0.01 mmol/L，约在0.5 mmol/L达到饱和.药理学实验结果表明，中华绒螯蟹眼柄神经内分泌细胞GABA受体是Cl－通道蛋白，对Cl－离子通道阻断剂Picrotoxin和Niflumic acid敏感，但是对GABAA受体拮抗剂Bicuculline和GABAC受体激动剂cis-4-aminocrotonic acid (CACA)和trans-4-aminocrotonic (TACA)均不敏感.]]> 1504true 1503true Kip1表达下降.用流式细胞术检测悬浮培养诱导的细胞失巢凋亡，发现超表达蛋白激酶B能抑制细胞失巢凋亡.上述结果提示蛋白激酶B能促进肝癌细胞增殖，抑制细胞凋亡.]]> 1502true 1501true H）、个人识别能力（DP）、偶合率（PM）、非父排除率（EPP）和多态性信息总量（PIC）等群体遗传学数据.结果表明，这9个STR基因座多态性好，灵敏度高，可用于人类遗传分析及法医学中的亲子鉴定和个人识别.]]> 1500true lox P系统由Cre位点特异重组酶和可被Cre特异性识别的lox P位点构成，该系统广泛用于条件性基因敲除和表达，以研究基因功能.为了表达和纯化一种细胞可透过性Cre重组酶(即His6-NLS-Cre-MTS);经IPTG诱导，在BL21(DE3)宿主菌成功表达His6-NLS-Cre-MTS融合蛋白，通过His-Bond Ni-NTA树脂分离并纯化了该蛋白质，随后借助细胞和非细胞的重组系统成功检测了His6-NLS-Cre-MTS的生物活性.细胞可透过性Cre重组酶提供了一种快捷而高效的在细胞和在体水平进行遗传操作的新工具.]]> 1499true 1498true Pleurotus ostreatus)中，检测表明，hITF在侧耳新鲜菌丝体中的表达量约为1 000～2 000 ng/g，最高约达2 250 ng/g.体内生物学活性研究证实，口服转hITF侧耳可有效地防止乙醇诱导的大鼠胃溃疡，其中的两种主要活性成分侧耳多糖和hITF均有预防治疗的功效.]]> 1497true TM PAMAM dendrimers分子是一类新型的高分枝、辐射状对称的树状高分子，在生理条件下其表面具有高密度的正电荷，可以通过静电相互作用与核酸形成复合物后，介导遗传物质进入细胞.研究了G3, G3.5, G5, G7, G7.5, G9各代dendrimers分子与DNA结合后介导其转染细胞的能力，并初步评价这种复合物转染对细胞活力的影响.实验证实，全代的PAMAM dendrmers皆可与DNA结合，并可在体外培养的细胞中介导高效的DNA转染.PAMAM dendrimer/DNA复合物很稳定，在较大的pH值变化范围内(pH 2～10)不解离.PAMAM dendrimers可保护与之复合的DNA分子免受限制性内切酶的降解.在一定的电荷比范围内，高代数的dendrimers分子与DNA形成的复合物对培养细胞的转染效率高于低代数dendrimer分子，复合物所介导的转染效率在不同的细胞系之间也有差异.在有效作用浓度范围内（≤1.3×10-1 g/L），PAMAM dendrimers/DNA复合物对被转染细胞无毒性.但是，未与DNA复合的dendrimers分子在较低浓度时则表现出毒性，表明StarburstTM PAMAM dendrimers分子可作为新型的低毒非病毒DNA载体，用于介导DNA对体外培养细胞的转染. 这些前期观察，为将纳米级高分子聚合物dendrimers分子作为基因转运载体应用于体内提供了初步的实验依据.]]> 1496true cTnI）和肌钙蛋白C（TnC）基因，利用人工合成的可编码19个中性氨基酸残基为主的DNA序列（Linker），将cTnI和TnC基因连接，插入到质粒pET15b中，将鉴定正确的重组pET15b质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中，用异丙基-β-D–硫代半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白质表达.结果在大肠杆菌中成功实现了全长cTnI-C融合蛋白（cTnI-linker-TnC）的稳定可溶性高表达，在摇瓶中表达量可达21 mg/L.利用目的蛋白N端的组氨酸“标签”（His-tag），经一步Ni2+-Sepharose柱亲和层析纯化，得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)纯蛋白质.经初步研究，cTnI-C具有较好的免疫原性和稳定性，有望成为cTnI测定系统可溯源的候选参考物质，推进cTnI检测的标准化进程.]]> 1495true P＜0.01).研究结果为mip/ctxB融合基因DNA疫苗的研制提供了初步的实验依据.]]> 1494true P＜0.05）；慢性应激下，右利、双利组显著高于相应正常对照组，左利、双利组也显著高于急性应激下相应组（P＜0.05）.b.NO水平：急性应激下，左利组腹腔巨噬细胞培养上清中NO无显著变化，右利、双利组呈升高趋势，右利显著高于左利（P＜0.05）；慢性应激中，三组NO水平均显著高于相应正常对照组（P＜0.05）.c.IL-1β水平：急性应激下，左利组IL-1β水平显著低于相应正常对照组，P＜0.05；慢性应激下，左利、双利组与正常对照组相比均有所降低，但无统计学意义（P＞0.05），右利组则显著高于相应正常对照组（P＜0.05）.上述研究结果提示，小鼠在暴露于天敌——猫应激下，脑不对称可影响HPA轴活性及巨噬细胞功能.]]> 1493true 1492true 1491true PC-1的生物功能和进化保守状况，从小鼠肾脏中克隆了全长cDNA序列，命名为mPC-1（GenBank Acc No.AY048852）.mPC-1基因cDNA全长为2 193 bp，主要定位于小鼠染色体3A1-A2区域.mPC-1基因最大开放阅读框编码的蛋白质由224个氨基酸组成，与人PC-1蛋白编码区存在82%的序列一致性，含有coiled-coil结构域和PEST结构域.生物信息学分析表明，由6个外显子组成的mPC-1基因与mD52高度同源，其中，第一外显子代表该基因的特异性序列，实验证据显示mPC-1基因具有自己的启动子，推测mPC-1与小鼠mD52可能是重叠基因.对小鼠20种组织器官和不同发育阶段的胚胎组织cDNA的RT-PCR检测证实，该基因主要在前列腺、肾和眼组织中表达，在胃和平滑肌中有少量表达，在其他组织中表达很弱或不表达.而mD52基因则几乎广泛存在于小鼠的各个组织器官中，因此，两个基因虽然序列上高度重叠却是独立调控的.综上所述，mPC-1基因可能是一个与人PC-1基因结构功能类似的新基因.]]> 1490true 1489true 1488true －36，根据本研究观察到的数据计算，匹配概率为1.90×10－23；而与随机抽取的1头鲁西黄牛及褐斯坦牛的基因型分别在23和20个位点上完全不同.]]> 1487true 1486true 15随机肽库中筛选与西非单叶豆凝集素(GS-I-B4）特异性结合的噬菌体展示肽.得到一个小肽序列为SCTALSFPSFAFLARGT,其与人血清中天然抗体的结合可以被蜜二糖（melibiose）竞争性地抑制，同时该小肽还能抑制人类天然抗体介导的猪红细胞的凝集反应.因此，筛选到的小肽能作为人天然抗α-Gal抗体的抑制肽.]]> 1485true 1484true 1483true P＜0.05)；右利鼠左侧皮层SOCS-3表达显著高于左利鼠左侧皮层(P＜0.05).b.海马中SOCS-3表达：左利鼠右侧海马SOCS-3表达显著高于左侧海马(P＜0.05)；右利鼠左侧海马SOCS-3表达显著高于左利鼠左侧海马(P＜0.05).c.右利鼠下丘脑中SOCS-3显著高于左利鼠(P＜0.05).上述研究结果提示，Balb/c小鼠脑中SOCS-3表达与脑不对称性有关.]]> 1482true 1481true 1480true cry3A和cry3A+vhb基因的植物表达载体pBCry3A和pBC3Vhb,并通过根癌农杆菌介导转化了马铃薯. 对转化再生植株进行PCR和DNA印迹分析表明，外源基因已整合到马铃薯基因组中, 且连续三代无性繁殖后转基因仍存在. ELISA分析表明cry3A基因在转基因植株中得到了高效表达, 在单转cry3A植株中最高表达量达0.1%, 转cry3A与vhb双基因株系中为0.065%. 水涝试验显示，转双基因且vhb mRNA的RT-PCR呈阳性的马铃薯植株,对低氧胁迫有较好的耐受性, 表明获得的上述转双基因马铃薯株系可能会具有很好的抗虫和耐涝性能.]]> 1479true XYL1、木糖醇脱氢酶基因XYL2和木糖异构酶基因xylA. 并在此基础上以共转化策略超表达下游关键酶木酮糖激酶基因XKS1. 与亲本菌株相比，用pMA91和YEp24质粒表达XKS1的重组菌株，木酮糖激酶（xylulokinase，XK）活性分别提高了14和6.7倍. 在限氧条件下，重组菌株对木糖和葡萄糖的共发酵结果显示，表达XYL1，XYL2以及XKS1的重组菌株HSXY-251木糖消耗为12.4 g/L，提高了120.9%，乙醇产量达到9.4 g/L，提高了36%，副产物木糖醇产量为0.7 g/L，下降了84.9%.]]> 1478true 1477true 1476true neo基因单拷贝整合的诱捕ES细胞，其中14株细胞表达有活性的β半乳糖苷酶.将3株诱捕ES细胞分别经显微注射引入到受体囊胚中，再植入假孕母鼠的子宫中使其发育成小鼠.两株细胞得到了程度不同的嵌合体小鼠，其中一株诱捕ES细胞整合至生殖系.利用质粒拯救实验获得了诱捕载体整合位点附近的基因组序列，通过序列比对发现被诱捕的基因可能是一个新基因.X-gal染色结果显示，该基因的表达局限于小鼠腹部及肢芽的部位.]]> 1475true R因子和Rfree分别为0.197和0.247，键长偏差为0.001 77 nm，键角偏差为1.96°.结构测定显示P450cam四突变体（F87L/Y96F/L244A/V247A）和P450cam野生型的整体构象无重大变化，突变后活性口袋变大而疏水性增加，这与突变设计预期目标一致.]]> 1474true 1473true Ng突变体的雌蛾性附腺不能正常分泌胶状粘性物质.分别对家蚕（Bombyx mori）的正常及Ng突变体雌蛾性附腺分泌部组织的蛋白质进行提取，并采用双向凝胶电泳和计算机辅助分析方法，对提取的蛋白质混合物进行分离和比较分析，并对主要差异表达的蛋白质用质谱鉴定.实验结果表明，用银染法，平均每张电泳图谱可以分离约700个蛋白质点，其中大部分的蛋白质点分布在pH 4～8 范围内，其分子质量主要集中在30～70 ku区域.比较分析发现一些差异表达蛋白，其中No2, 3蛋白质点经质谱鉴定为肌动蛋白A3，该蛋白质只在化蛹后期正常雌性附腺组织中特异表达，而Ng突变体中肌动蛋白A3的缺失，暗示了肌动蛋白A3可能与家蚕雌性附腺的胶状粘性物质的胞外分泌有关.]]> 1472true 1细胞蛋白条带3鉴定的p53相互作用蛋白之一HSP78进行了验证.首次在鼻咽癌细胞中鉴定了9个p53结合蛋白，为阐明鼻咽癌中p53蛋白聚集及失活的机制提供了重要依据和线索.]]> 1471true 1470true Nicotiana benthamiana)中克隆了PME基因，并测定了全序列(GenBank登录号AY238968).序列分析显示该基因由两个保守的结构域组成(PMEI和pectinesterase). DNA印迹结果表明,该基因在基因组中存在多个拷贝，蛋白质印迹表明,植物总蛋白中存在两种形式的PME蛋白，但RNA印迹结果显示,在烟草细胞中只检测到全长的PME转录产物.酵母双杂交结果表明,PME与水稻矮缩病毒Pns11(具有非特异的核酸结合活性)之间存在相互作用，而没有检测到PME与已知的运动蛋白Pns6之间的相互作用，推测Pns11蛋白可能参与了水稻矮缩病毒粒子的运动.]]> 1469true 1468true 1467true 1466true 6个克隆中筛选得到14个阳性克隆，并在酵母体系中通过不同方法得到验证.在此基础上，选取在双杂交中作用明显的51号克隆,与CEP65作GST pull-down实验, 结果证明, CEP65与51号阳性克隆蛋白确能相互作用. 生物信息学分析发现, CEP65与51号阳性克隆蛋白相互作用, 可能通过WW结构域或者蛋白激酶C对细胞的增殖与分化起到调节作用.]]> 1465true 1464true ras基因邻近，在肿瘤病人中经常存在染色体11p15.5部位的变异和异常.RI可能与细胞的生长和分化有关, 因此，RI 可能还具有尚未知的生物学作用.为了进一步了解RI的潜在功能以及探讨RI与肿瘤浸润、转移的关系, 将人的核糖核酸酶抑制因子基因的cDNA通过逆转录包装细胞PA317,并转染到B16小鼠黑色瘤细胞中, 用转染空载体和未转染的B16细胞作为对照.通过PCR, RT-PCR, 蛋白质免疫印迹, 免疫荧光分析鉴定，获得稳定表达人核糖核酸酶抑制因子的细胞株.结果显示, 转染的RI基因在体外能显著地抑制细胞增殖和细胞迁移，增加了细胞的粘附以及改善细胞的恶性形态，B16，B16 pLNCX，B16 pLNCX-RI 3种细胞的倍增时间分别为(24.98±0.16) h, (25.62±0.28) h, (32.64±1.11) h.与对照组相比，转RI的细胞粘附率增加17.8%和19.5%而迁移降低了61.4%和60%.转RI的细胞比对照组细胞较平展，核仁和分裂相较少，胞质嗜碱性减弱，提示细胞增殖活性降低和恶性表型的改善. 将3种B16细胞静脉注射到C57BL/6小鼠中, 结果表明, 转染RI基因的实验组显著地抑制了肿瘤的转移, 与两个对照组相比,荷瘤小鼠有更长的存活时间, 少得多的转移节结, 更低的肿瘤血管密度和肺重量.结果显示,RI的表达可能与黑色瘤的转移有关, 提示RI能显著地抑制肿瘤的转移,可能由于其与抑制血管作用,增加细胞粘附,降低细胞迁移及增殖有关.]]> 1463true 1462true PDX-1基因在骨髓间充质干细胞中的表达情况及生物学功能的发挥，构建了含PDX-1基因的重组腺病毒载体. 酶切PDX-1基因并连入穿梭质粒pAdTrack-CMV.用电穿孔法使穿梭质粒pAdTrack-CMV-PDX-1与病毒骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组.利用脂质体介导重组腺病毒载体转染293细胞，包装出完整的腺病毒.分离、培养、扩增骨髓间充质干细胞.用重组腺病毒感染间充质干细胞.用荧光显微镜、RT-PCR、免疫荧光染色等方法检测PDX-1、胰岛素基因及蛋白质的表达，用放射免疫分析法检测转基因细胞分泌胰岛素情况.结果表明:通过测序、PCR、酶切等鉴定PDX-1基因已正确插入穿梭质粒中，并与病毒骨架质粒重组.重组腺病毒滴度为6.3×107 PFU/ml.通过荧光显微镜观察证实重组腺病毒可高效感染骨髓间充质干细胞，经RT-PCR、免疫荧光染色证实转染pAd-PDX-1后培养7天的细胞中有PDX-1及胰岛素基因的表达.这些转基因的细胞向胞外分泌的胰岛素量为(15.21±3.50) mIU/L.]]> 1461true 1460true 1459true 1458true 1457true 1456true 1455true PC-1基因是在人前列腺癌细胞中克隆的新基因，表达水平随前列腺癌恶性程度增加而升高，其表达产物具有转录因子的一些特征.为研究PC-1分子的转录激活功能，首先应用酵母双杂交系统将PC-1全长以及不同区段的cDNA克隆到表达载体pAS2-1中，然后分别转化酵母细胞株CG-1945. lacZ和His3报告基因激活的检测结果表明,该分子具有转录激活活性并将该活性定位于N端的46个氨基酸区域.此外，将PC-1分子不同区段的cDNA分别克隆至表达载体pZHO1中，将它们与报告基因质粒pTRE-luc共转染哺乳动物细胞COS7和C4-2，Firefly荧光素酶相对活性的检测结果表明,该分子N端的46个氨基酸区域具有转录激活活性.]]> 1454true 3 、α5和β1分布的调控作用，建立了体外周期性拉伸应变装置，并应用胞外基质蛋白——纤连蛋白（Fn）、胶原蛋白Ⅳ（Col Ⅳ）裱衬基底膜，激光共聚焦显微镜分析了在应变为15％，频率为40次／min的拉伸刺激下，正常人肺上皮细胞H727表面α3、α5和β1整联蛋白的再分布.结果表明：在人肺上皮细胞H727中，α3、α5和β1整联蛋白是对拉伸应变敏感的膜受体，周期性拉伸刺激可诱导其激活，使之发生分布的重组，并向基底层转移，形成局部粘附连接，增强了整联蛋白受体与其特异性配体的结合能力.结果提示：一个有效的局部粘附连接的形成是受体聚集和配体占据共同启动的一个协调反应，该反应可能参与了细胞响应机械应力的起始过程，可能进一步通过力-化学信号的耦合或张力整合的形式，最终对细胞的生物学行为产生影响.]]> 1453true 1452true 1451true 1450true Ercc6l(GenBank Acc.No AY172688)，然后通过RT-PCR在小鼠胚胎心脏成功克隆了该基因.Ercc6l在小鼠基因组中由两个外显子和一个内含子组成，定位于X染色体，最大开放阅读框（ORF）编码一个含1 240个氨基酸的假定蛋白质.该假定蛋白质含有SNF2蛋白的8个保守基序（SNF2结构域）.通过与SNF2家族各亚家族的成员进行多重比对，初步确认Ercc6l属于ERCC6亚家族成员.将Ercc6l编码区克隆到pEGFP-C3然后转染HeLa,3T3 和B16细胞，融合蛋白主要定位于胞浆.BLAST搜索检索出69条小鼠EST与Ercc6l同源，这些EST主要来自胚胎和肿瘤组织.对小鼠不同发育时期的多种组织进行RT-PCR，发现Ercc6l在胚胎期强表达，出生产后表达显著下调.这些结果提示Ercc6l在胚胎发育和肿瘤发生中可能具有重要作用.]]> 1449true 1448true 1447true Plutella xylostella)幼虫血淋巴中分离获得2种β-1,3-葡聚糖结合蛋白，分子质量分别为75.9 ku和83.2 ku，主要存在于幼虫血浆中，但血细胞中未检出.研究表明，β-1,3-葡聚糖结合蛋白能特异性地识别β-1,3-葡聚糖，并显著激活幼虫血淋巴中的酚氧化酶原（ProPO），与昆布多糖共存时所激活的酚氧化酶（PO）活性显著高于两者单独存在时的PO活性.与4株根虫瘟霉(Zoophthora radicans)菌丝裂解液共存时，β-1,3-葡聚糖结合蛋白能激活幼虫血淋巴中的ProPO，使PO活力显著高于该菌原生质体裂解液所激活的PO活性.显然，β-1,3-葡聚糖结合蛋白只有特异性地识别根虫瘟霉细胞壁中的β-1,3-葡聚糖后才能激活幼虫血淋巴中的ProPO，表明虫霉原生质体可逃避寄主免疫反应.此外，β-1,3-葡聚糖结合蛋白对不同菌株所激活的PO活性存在差异，各菌株所激活的PO活性由高到低依次为：ARSEF1342＞ARSEF2699＞F99101＞ARSEF1100，这与各菌株对小菜蛾的毒力强弱相一致，即菌株逃避寄主免疫识别的能力与其毒力相关.]]> 1446true 32P-dCTP标记NAP1基因片段，与含15种正常成人组织的多组织RNA印迹膜杂交，结果表明NAP1基因在淋巴结和气管中高表达，转录本大小约为0.6 kb，在其他组织中不表达.NAP1蛋白质与滤泡树突状细胞（follicular dendritic cell, FDC）的一种分泌肽前体（FDC -SP）（AF435080）同源，与其他已知蛋白质无明显同源性.NAP1基因定位在染色体4q13，基因组跨越9 179 bp，含5个外显子和4个内含子.采用差异RT-PCR检测了40例经病理诊断为低分化鳞状上皮癌的鼻咽活检组织及其对侧相应部位的正常鼻咽组织中该基因的表达差异.在40例鼻咽癌中，NAP1基因表达下调的有17例（42.5%），表达上调的有6例（15%），无明显表达差异的有17例（42.5%）.原位杂交和免疫组化结果显示该基因在正常鼻咽和鼻咽癌组织间质中的树突状细胞中表达，在其他间质细胞和鼻咽上皮中均不表达.以上结果表明，NAP1为树突状细胞的一种新的多肽，该基因在鼻咽癌组织中表达下调的原因，及其与鼻咽癌发生、发展的关系值得进一步探讨.]]> 1445true 1444true Bmwh3为材料,建立了有效的RNAi技术体系，结果表明，成功诱导第三白卵突变表型的有效注射时间为产卵后8 h内，wh3dsRNA的有效浓度须大于2.0 g/L.在发育胚胎的第三天注射wh3dsRNA，同样可诱导第三白卵突变的另一表型——半透明蚁蚕，根据实验结果初步推测,Bmwh3不仅参与眼色素和卵浆液膜色素前体的转运，还可能参与胚胎体壁色素前体的转运.]]> 1443true geo作为报告基因，对所克隆的基因类型没有选择性.将绿脓杆菌外毒素、2A序列、IL-2受体穿膜区以及新霉素磷酸转移酶的基因依次融合构建新型报告基因——peo，该报告基因能够特异性地甄别具有信号肽编码序列的基因.为验证peo对信号肽编码序列的特异性甄别作用，以peo为报告基因，构建了3种质粒载体，分别模拟用基因陷阱载体进行筛选时可能出现的3种情况，通过转染HeLa细胞、G418筛选以及碱性磷酸酶检测，证明peo能够有效地区分信号肽和非信号肽编码序列，以peo为报告基因改造的基因陷阱载体可以用于分泌蛋白基因的筛选.]]> 1442true 1441true 1440true 1439true 2(cPLA2)在此过程中的作用.MTT法测定细胞存活率；相差显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡；3H-花生四烯酸(3H-AA)预标法测定PLA2活性；蛋白质印迹检测cPLA2磷酸化；激光共聚焦显微镜检测单个细胞内钙离子浓度的变化.结果表明，MM-LDL(100～300 mg/L)作用后的HUVECs呈现凋亡典型的形态特征，凋亡率随MM-LDL浓度的增加而上升.MM-LDL能引起胞内钙离子浓度增加，cPLA2的活化及磷酸化.15 μmol/L AACOCF3和5 mmol/L EGTA在抑制cPLA2活性的同时，部分抑制MM-LDL诱导的HUVECs凋亡.加入外源性AA(50 μmol/L)能逆转AACOCF3引起的凋亡抑制.结果提示，cPLA2参与了MM-LDL诱导HUVECs凋亡的信号传递.]]> 1438true Trametes gallica)的表达基因.利用木质素生物降解模式菌株黄孢原毛平革菌（Phanerochaete chrysosporium）的cDNA制备研究所用微阵列.在含有2 596个cDNA片段的芯片上共检测到172个阳性克隆，其中有165个克隆的荧光信号比值（Cy-5/Cy-3）在0.5和2.0之间，占所检测阳性克隆数的95.9％.对应于在限氮条件下生长５天和12天的粗毛栓菌培养物，分别有３个和４个时序特异性差异表达基因.随机挑取122个克隆进行测序和序列比对，发现所测序列中有118个能够很好地定位于黄孢原毛平革菌的基因组上.结果显示，粗毛栓菌与黄孢原毛平革菌在表达序列上存在较大差异，表明这两种真菌之间存在着较远的亲缘关系.通过同源性比对分析，发现２个令人感兴趣的克隆，一个对应于黄孢原毛平革菌过氧化物酶基因lpoB的部分片段，另一个为编码一种热激蛋白的基因.]]> 1437true β、凋亡抑制蛋白-1、磷酸甘油酸变位酶1、组织蛋白酶B、桥粒胶蛋白3.上述发现有助于了解耐药结核分枝杆菌入侵早期导致的巨噬细胞蛋白质组表达变化，为深入研究耐药结核分枝杆菌-宿主相互作用提供了探索方向.]]> 1436true Pseudomonas exotoxin A,PE)的抗癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA）免疫毒素CEA(Fv)/PE38/KDEL和PE35/CEA(Fv)/KDEL.用流式细胞术经间接免疫荧光法测定免疫毒素的抗原结合活性.免疫毒素的内化(internalization)通过间接免疫荧光标记的方法在激光共聚焦显微镜下进行检测，采用流式细胞术进行免疫毒素内化的定量分析.细胞凋亡采用FITC-annexin V/PI双荧光染色方法进行分析.用噻唑蓝(MTT)法测定免疫毒素的靶细胞杀伤功能.对两种形式的免疫毒素在各个功能阶段的性质进行研究和比较，全面展现了免疫毒素发挥生物学功能的过程及各个生物作用过程之间的相互影响，为详尽的机制研究和免疫毒素的进一步优化改造提供了重要的依据.]]> 1435true 1434true 1433true 1432true 1431true 1430true 0代小鼠，经PCR检测和DNA印迹分析证实有8只小鼠（4♂，4♀）为整合人α-乳清蛋白基因的转基因阳性小鼠，整合率为11.7%，整合拷贝数在1至8之间.利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测和蛋白质印迹分析,4只雌性F0代转基因阳性小鼠全部表达了人α-乳清蛋白.放射免疫测定法测定,含量分别为0.62 g/L、0.48 g/L、0.56 g/L、3.21 g/L；同时测定F0代50号转基因公鼠的后代阳性母鼠（50-2号）乳样中人α-乳清蛋白含量也达到1.03 g/L，证明由原代转基因公鼠遗传给后代的人α-乳清蛋白基因亦获得了稳定的表达.所构建的人α-乳清蛋白转基因载体具有结构较小，表达量高，可以稳定遗传等优点.为利用人α-乳清蛋白基因改善牛乳成分和品质奠定了基础.]]> 1429true 2+浓度以4.0 mmol/L为最好；RNA提取方法采用磁珠法效果较好；本方法的检测灵敏度最低可达5个拷贝的体外转录RNA分子，特异性100%，Ct值的CV值小于5%.对临床确诊的42份SARS病人血清和漱口水标本的检测结果表明，该方法的检出率为79%，与荧光抗体检测法的符合率为70%.上述结果表明，该方法建立的荧光定量RT-PCR技术能够快速准确、特异、敏感地对SARS病毒核酸进行定量分析，为临床SARS冠状病毒RNA的检测提供了新的，更为有效的检测方法.]]> 1428true 1427true 1426true 1425true CMV-IE)仅在S期激活，应用这类启动子表达外源蛋白需要宿主细胞不停增殖，这对于连续持久大规模培养的宿主细胞不现实.而人延伸因子1α亚基启动子(PEF-1α)不受细胞周期限制，且启动子强度高于PCMV-IE，对于大规模外源蛋白的生产较为理想.首先构建了基于PEF-1α启动子的哺乳动物细胞表达载体pED5，在增殖缓慢的CHO细胞中，此载体表达外源蛋白的能力是应用PCMV-IE启动子表达载体的4.1倍.由于启动子一般仅能决定基因转录的本底水平，而转录激活因子(transcription activators)对基因转录的影响更大，所以另把两个人工转录激活结构域AH和VP2接到λ噬菌体cⅠ蛋白的C端，它们通过cⅠ蛋白结合于已插入到PEF-1α启动子的TATA框上游约200 bp的λ噬菌体OR2-OR1序列上，而被“征募”到PEF-1α启动子TATA框附近，从而促进基因的转录.把上述元件均整合进一个表达载体中，构建了两个新型表达载体pER-AH和pER-VP2.pER-AH表达外源蛋白的能力比不含转录激活因子的表达载体略高，而pER-VP2表达外源蛋白的能力则比不含转录激活因子的表达载体高2.7倍.]]> 1424true 1423true Dolichos lablab）中分离得到了这种多亚基的凝集素——FRIL（Flt3 receptor-interacting lectin），并对它进行了核酸和蛋白质序列分析.免疫细胞分析显示，它的受体是CD34+造血干/祖细胞所特有的.在培养基中添加这种凝集素可长期维持CD34+细胞存活和增殖能力.以Flt3配基（FL）作为对照，在28天的培养时间内，相对于FL，FRIL可维持细胞较高的G0/G1期比例（80%以上G0/G1期）和长期培养中（14天以上）1.5倍以上的集落形成量.可见FRIL通过滞留造血干/祖细胞于G0/G1期而维持它们的自我更新潜能.]]> 1422true ®-T Vector 载体，测序，再经酵母双杂交和GST pull down蛋白质结合实验验证其结合作用，应用反映GR转录活性的CAT报告基因检测JAB1对GR的调节活性.结果在人骨髓cDNA文库中,筛选到42个X-α-gal检测变蓝且含有pACT2质粒序列的克隆，其中有5个克隆的序列皆为Jun活性区结合蛋白JAB1的一部分.酵母双杂交和蛋白质结合实验表明，JAB1与COS7真核表达的GR-LBD在体外有结合作用.JAB1加强GR转录激活的能力.]]> 1421true 1420true 1419true asd基因插入重组表达质粒，使抗生素抗性失活，并与弗氏志贺氏菌FWL01构成宿主-载体平衡致死系统. 通过蛋白质印迹结果表明，在没有抗生素条件选择的情况下，可稳定表达肠毒素大肠杆菌定居因子抗原CS6. 重组菌通过口服和鼻饲免疫小鼠后，可以诱生CS6血清IgG抗体；同时可以检测到分泌型IgA产生，表明重组菌可以诱导相应的黏膜免疫反应.]]> 1418true 1417true 1416true 1415true 1414true 1413true 1412true 4个/孔,激动剂孵育时间为8 h,每孔DMSO终浓度小于1％和α-MSH终浓度为1 μmol/L时，系统Z'-因子接近0.7，能够用于MC4R激动剂的高通量筛选.]]> 1411true 1410true +/H+ antiporter (napA-2)具有局部的同源性.以上结果表明，mdnr411是一个功能完全未知的小鼠糖尿病肾病相关新基因.mdnr411 cDNA的成功克隆，为进一步研究其生物学功能及其在糖尿病肾病发生、发展过程中的作用创造了条件.]]> 1409true 1408true 1407true Helicobacter pylori，Hp）粘附素保守区（AB）的减毒鼠伤寒沙门菌X4072（pYA248-AB）的免疫治疗效果，以及可能的免疫治疗机制，以确定X4072（pYA248-AB）在Hp疫苗研制中的应用价值.建立Hp感染小鼠模型，在该模型中评价X4072（pYA248-AB）治疗Hp感染的效果，运用细菌培养法观察Hp根除率及定植量的改变，流式细胞术分析免疫后小鼠脾细胞亚型，IL-2和IL-4细胞依赖株的细胞测活法检测细胞因子，ELISA法检测小鼠血清及肠液中抗AB抗体产生情况.结果表明，免疫治疗后疫苗治疗组根除率为53.3%，显著高于X4072（pYA248）和PBS对照组（P＜0.01）.未根除Hp的小鼠，疫苗治疗组Hp的定植密度明显低于其他两组（P＜0.01）.应用流式细胞仪分析免疫小鼠脾CD4+/CD8+ T淋巴细胞的比值时，发现疫苗治疗组和鼠伤寒菌对照组的比值均显著高于PBS对照组（P＜0.05），而疫苗治疗组的比值又显著高于鼠伤寒菌对照组（P＜0.05）.进一步对细胞因子进行分析发现，与PBS对照组相比免疫治疗组和鼠伤寒菌对照组IL-2和IL-4明显升高(P＜0.05).同时，免疫治疗组与鼠伤寒菌对照组相比,IL-4增高明显(P＜0.05).针对AB的抗体测定结果发现，仅在免疫治疗组的小鼠肠液中检测到了IgA抗体.免疫治疗组IgG抗体滴度较其他两组明显升高，第二次加强免疫后2周即上升至1∶10 000.动物实验表明,X4072（pYA248-AB）能根除或显著降低Hp在小鼠胃内的定植，其可能的免疫治疗机制包括提高CD4+/CD8+比值，诱导Th1和Th2反应以及产生针对AB的特异性抗体.]]> 1406true 1405true C.elegans),拟南芥(A.thaliana), 果蝇(D.melanogaster)和人类(human)，核苷酸水平的识别精度为92.5%～97.1%，外显子水平的识别敏感性为83.7%～94.5%，特异性为87.8%～97.1%.预测能力优于GeneSplicer等剪切位点检测软件.]]> 1404true 1403true IC50为46 μmol/L.通过DNA ladder胶电泳和流式细胞仪检测，凋亡细胞的AO/EB染色等方法证明celecoxib能够诱导K562细胞凋亡，这一效应与Caspase-3蛋白表达上调和裂解激活有关,当阻断Caspase-3的活性，celecoxib诱导的K562细胞凋亡明显受抑.利用RT-PCR分析技术及蛋白质印迹，证明K562细胞存在COX-2 mRNA和COX-2蛋白表达；而且，K562细胞COX-2蛋白表达可被IL-1β诱导性刺激，从而确认K562细胞为COX-2表达阳性细胞；celecoxib在较高浓度(80～160μmol/L)既可抑制K562细胞COX-2 mRNA表达，也可下调COX-2蛋白质表达，提示celecoxib抗K562白血病细胞活性与COX-2的抑制相关，其抗白血病的分子机制部分涉及到COX-2依赖性途径.]]> 1402true 1401true 1400true 1399true 1398true ® 3报告基因载体并与pRC/CMV-hCREG质粒共转染VSMCs也证实，CREG蛋白过表达可增强SM α-actin基因表达.上述研究提示,CREG蛋白可能是调控VSMCs表型转换的重要分子.]]> 1397true 1396true AtNHX2基因是拟南芥NHX基因家族的一员，编码了一种液泡膜中的Na+/H+反向运输体并对拟南芥的耐盐能力起着重要的作用.采用PCR扩增的方法克隆了拟南芥AtNHX2基因启始密码子上游约2.8 kb的DNA片段，并将其克隆到植物表达载体pCAMBIA1301-1中，通过基因枪轰击洋葱表皮瞬时表达的方法,初步检测启动子的活性.将重组质粒pCAMBIA1301-1/AtNHX2 promoter转化拟南芥并筛选纯合子.AtNHX2 promoter-GUS分析显示AtNHX2在所有的组织中均有表达,包括根尖.在保卫细胞中检测到了强烈的GUS表达，这一结果表明，AtNHX2对特殊细胞的pH调控和K+自身稳定方面起着重要的作用.AtNHX2启动子的活性可被NaCl抑制,并且抑制的强度和NaCl的浓度成正相关. 300 mmol/L KCl处理可增强启动子的活性，说明NaCl和KCl是在转录水平上调控AtNHX2的表达.在老叶中GUS活性比在新叶中GUS活性强，这说明了AtNHX2优先将有毒的离子积累在老叶中，从而有利于植物的正常发育.在根毛细胞中也观测到了强烈的GUS活性，这就暗示了AtNHX2在扩大的液泡中储存Na+.]]> 1395true 1394true -13 mol/L水平，抑制血小板的IC50在10-6 mol/L水平上.]]> 1393true 1392true E.coli BL21(DE3), IPTG诱导表达,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹检测小鼠canstatin N端片段的表达. 结果表明,IPTG诱导原核表达载体pET-mCanN在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中高效表达, 小鼠canstatin N端片段表达量约占菌体总蛋白量的18%, 小鼠canstatin N端片段主要以包涵体形式存在,包涵体经过洗涤、裂解、Ni-spin column亲合柱层析以及蛋白质复性等步骤纯化后,获得了纯度约为92%的重组小鼠canstatin N端片段. 鸡胚绒毛尿囊膜(chicken embryo choriollantoic membrane,CAM)实验表明，原核表达的小鼠canstatin N端片段能有效地按剂量依赖的方式抑制鸡胚新生血管的形成.]]> 1391true 6个/ml和1×106个/ml两种密度接种到支架材料上，于旋转壁式生物反应器(RWV)内进行三维组织工程骨的构建.并将所构建的骨组织分别进行倒置显微镜(inverted microscope)、扫描电镜(SEM)、碱性磷酸酶(ALP)、矿化结构和AO/EB双重荧光染色等生物学性能检测，以及对培养过程的营养物质代谢情况进行监控和分析.结果表明，在RWV中培养的骨组织生长良好，分泌大量胶原纤维，并有矿化基质和新骨样组织形成. 由上述结果可断定，通过RWV内部流体对流所产生的应力刺激，可提高成骨细胞碱性磷酸酶的活性表达，并加速矿化结节的形成，从而完成成骨细胞的快速增殖与分化以及工程化组织的三维构建.]]> 1390true 1389true Deinococcus radiodurans）基因组序列中一功能未确定的开放阅读框（ORF），其氨基酸序列和已报道的海藻糖合成酶的氨基酸序列有约60％的同源性.将这段ORF克隆到大肠杆菌进行表达，并进行功能鉴定.实验表明这段ORF序列所编码的是一种海藻糖合成酶，它能将麦芽糖分子转化成海藻糖分子，以30％的麦芽糖为底物时能将约65％的麦芽糖转化成海藻糖.重组酶性质初步研究表明,在pH 7.0，最佳温度30℃转化麦芽糖效率最高.]]> 1388true 1387true DPYD基因）所编码的二氢嘧啶脱氢酶（DPD酶）是氟化嘧啶类抗肿瘤药物代谢的主要限速酶，其活性存在显著的个体差异，并因此影响药物的疗效和毒副作用.大部分编码低/无活性酶的突变型等位基因是由于基因中的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）造成的，检测这些SNPs是预测患者对药物的反应和实现个体化给药方案的基础.制备并优化了用于检测DPYD基因中6个已知SNPs所编码的等位基因（DPYD*2，*3，*4，*5，*9，*12）的基因芯片，建立了该芯片的基因分型标准.并利用该芯片检测了肿瘤患者（112例）、肾病患者（83例）和健康者（45例）中DPYD突变型等位基因的发生频率.在受试人群中，突变型等位基因DPYD*5和DPYD*9平均发生率分别为32.08%和11.25%，未发现DPYD*2，*3，*4，*12突变型等位基因.而且以上单碱基突变的发生率在肿瘤患者、肾病患者和健康者间以及男性、女性肿瘤患者间无显著性差异，表明其与疾病的发生或性别无显著性关联.对20例标本的基因分型结果采用直接测序法进行验证，19例基因芯片分型结果与直接测序法结果相一致.DPYD*5、DPYD*9突变型等位基因在受试人群中具有较高的发生率.利用基因芯片能够对其实现快速准确的检测.]]> 1386true -5以上.用噬菌体表面展示技术筛选遍在蛋白结合肽，所筛选的结合肽可与遍在蛋白特异性结合，其中结合肽VAPHHAYAPMRT对细胞增殖有明显的浓度调控作用，即低浓度促进细胞生长，高浓度强烈抑制细胞的生长.]]> 1385true 1384true 2细胞,这种试剂进入细胞后,经氧化还原反应生成的自由基与线粒体自身代谢产生的自由基类似,然后观察自由基对细胞mtDNA的氧化损伤与损伤后DNA修复的动力学变化.由于线粒体的正常功能为修复机制所必需,采用MTT细胞活力实验检测不同浓度四氧嘧啶处理下线粒体酶活力,发现9 mmol/L四氧嘧啶培养细胞1h后,线粒体琥珀酸脱氢酶功能在撤去药物后0,2,8和24 h时间点均无明显变化.提取各组细胞的mtDNA,用EndoⅢ和Fgp两种酶切除受氧化损伤的核苷酸,然后用碱性琼脂糖凝胶电泳分离大小不等的mtDNA,进行DNA印迹实验,地高辛-抗体-碱性磷酸酶系统显色,检测完整与断裂的mtDNA量,利用Poisson公式（s=－lnP0/P,P0为未断裂链光密度值,P为所有链光密度值总和）计算一个mtDNA分子的平均损伤频率,结果显示,9 mmol/L四氧嘧啶处理细胞1 h,链平均损伤频率由对照的0.11个/分子增加至5.60个/分子,明显增加了mtDNA上核苷酸的氧化损伤,除去药物后8 h,绝大部分损伤可被修复,损伤频率减至0.40个/分子,除去药物后24 h核苷酸的氧化损伤恢复至正常水平.采用接头介导PCR（LM-PCR）检测MTTL1基因区域内单个核苷酸的损伤与修复动力学.这种方法可以检测各组mtDNA上MTTL1基因75 bp区域内单个核苷酸损伤的部位及频率.结果显示,人MTTL1基因存在20个易受氧化损伤的核苷酸热点,经与相应区域内文献报道的16个突变热点比较,有12个热点部位重合,而修复未显示热点部位或区域.结果提示,自由基对核苷酸的选择性氧化损伤是决定mtDNA点突变发生及发生部位的主要原因.]]> 1383true 1382true 6个克隆中，筛选到一株能与P37相互作用的阳性克隆，序列测定表明，该阳性克隆编码人视网膜色素上皮细胞蛋白（Norpeg蛋白）.在此基础上经GST-Pull Down实验，进一步证实Norpeg蛋白确能与P37相互作用，为进一步研究P37对细胞的作用机制奠定了基础.]]> 1381true 7 U/mg.]]> 1380true 1379true 1378true 1377true 3H］LDL观察两组细胞摄入OxLDL的量，实验发现，两组细胞摄入Ox-r［CL-3H］LDL的量逐渐增加.但是，反义寡核苷酸处理组摄入Ox-r［CL-3H］LDL的量从24 h后明显低于未用反义寡核苷酸处理组，在48 h和96 h时间点，统计学处理，两组差别有显著性.观察ACAT的活性发现，ACAT相对活性从6 h到48 h表现为增加，但从48 h到96 h，ACAT相对活性趋于稳定.在48 h时间点，两组比较差别有显著性，反义寡核苷酸处理组的活性明显低于未用反义寡核苷酸处理组.相关分析发现，ACAT的活性与adipophilin蛋白的表达量有一定的联系，但不是直线相关.结果表明，adipophilin表达的高低与细胞摄入外源性脂蛋白，与ACAT的活性有一定的联系.提示adipophilin与脂滴的代谢功能密切相关，且ACAT有可能是其潜在的位点.]]> 1376true 1375true P＞0.05），PPAR-γ的蛋白质和mRNA表达水平亦相似（P＞0.05）；16w SHR LVWM/BM和ISWM/BM较同龄WKY明显增高（P＜0.01），而PPAR-γ的蛋白质和mRNA水平显著降低（P＜0.01），16w SHR RVWM/BM与16wWKY相比差异无显著性（P＞0.05），PPAR-γ的蛋白质表达水平亦无显著性差异（P＞0.05），mRNA水平较WKY略减弱（P＜0.05）.实验结果提示，长期压力负荷过重导致SHR LV和IS心肌代偿性肥厚，肥厚心肌中PPAR-γ蛋白质和mRNA表达水平显著降低，推测心肌细胞PPAR-γ表达受抑制，可能参与了高血压心室重塑的发生机制.]]> 1374true 1373true 1372true 1371true 1370true 1369true 1368true 1367true 1366true 1365true 1364true 1363true 1362true 1361true 1360true 1359true 1358true 1357true 1356true 1355true 1354true 1353true 1352true 1351true 1350true 1349true 1348true 1347true 1346true 1345true 1344true 1343true 1342true 1341true 2( ＋ )/CREG 和 pLXSN( － )/CREG. 以带绿色荧光蛋白 (green fluorescent protein ， GFP) 的空载体 pLNCX( ＋ )/GFP 和正常 HITASY 为对照，用磷酸钙共沉淀法将重组逆转录病毒载体转染 293 细胞，包装出完整的逆转录病毒后，感染 HITASY. 经 G418 筛选，获得稳定感染的细胞克隆 . 应用免疫荧光染色、蛋白质印迹等方法检测 CREG 和平滑肌分化标志蛋白α- 肌动蛋白 (SMα -actin) 表达，同时通过刮伤实验、慢速显微摄像技术检测细胞迁移能力以及用明胶酶谱方法分析细胞基质金属蛋白酶 (matrix metalloproteinase ， MMPs) 的活性 . 结果表明： pLNCX2( ＋ )/CREG 稳定感染的 HITASY 中 CREG 和 SMα-actin 蛋白表达上调， MMP-2 和 MMP-9 活性升高，细胞迁移速度加快； pLXSN( － )/CREG 稳定感染的 HITASY 中 CREG 和 SMα -actin 蛋白表达下调， MMP-2 和 MMP-9 活性降低，细胞迁移速度减慢 . 上述研究提示 CREG 在诱导血管平滑肌细胞分化的同时促进细胞迁移 .]]> 1340true 1339true E204Q和三突变体 BRI119T/T121S/A126T. 通过功能研究发现， BR 蛋白的单突变体 BRE204Q的 M 态寿命为 7.10 ms ，三突变体 BRI119T/T121S/A126T的 M 态寿命为 8.23 ms ，均较野生型 BR 蛋白 (6.23ms) 有所延长，三突变体表现得更为显著，其 M 态延长时间可超出野生型的 32％. 同时单突变体 BRE204Q和三突变体 BRI119T/T121S/A126T的质子泵功能也均有改变，都比野生型 BR 蛋白有所下降，其中三突变体 BRI119T/T121S/A126T下降得更为明显.]]> 1338true SacⅠ位点的特定引物 PCR 分别扩增制备 protein A 的 A 、 B 、 C 、 D 抗体结合结构域和 protein L 的 B3 抗体结合结构域，各结构域 DNA 片段经 SacⅠ酶切后，再随机连接形成各种不同长度的分子组合文库，将该文库呈现在噬菌体表面构建了噬菌体展示 Ig 结合分子单结构域随机组合文库，所建组合文库容量为 2.3×106个菌落形成单位，滴度为 4.1×1011TU/ml ， 包含各种单结构域片段，并以随机方式连接 . 用人 Ig 对该文库进行 4 轮亲和筛选，随机挑选 36 个代表性的阳性克隆进行序列测定分析表明，亲和筛选获得了多种非天然形式存在的新的 Ig 结合分子结构，其中 32 个克隆具有由 protein L 的单结构域和 protein A 的单结构域间隔重复排列而成的特征性 (MDPL-MDPA)n 结构 . 对噬菌体展示 Ig 结合分子单结构域随机组合文库的体外分子进化研究的尝试，为 Ig 结合分子的结构和功能研究提供了一新的途径，也为 Ig 结合分子的定向改造打下基础 .]]> 1337true 4S)3的 IIn-linker-UK 融合蛋白在 CHO 细胞中表达时出现明显的降解 . 为了解决此问题，利用分子生物学方法，对 IIn-UK 融合蛋白进行了分子改造，包括置换连接肽，改变两个半分子 (moiety) 的相对位置，以及对连接肽附近明确的蛋白酶位点进行突变等方法，并分别研究了改造后的 11 种 IIn-linker-UK 或 UK-linker-IIn 突变体在 CHO 细胞中分泌性表达时的稳定性，最终筛选到一种抗降解的突变体 .]]> 1336true 1335true 1334true 1333true 1332true 1331true 1330true 1329true 1328true 1327true 1326true 1325true 2O2 所致核仁损伤中的作用，采用分子克隆技术分别构建了 4 个真核表达载体， pcDNA3.1(-)-HSP70WT (HSP70 野生型)， pcDNA3.1(-)-HSP70ΔNLS (核定位信号缺失突变体 )， pEGFP-N1-HSP70WT， pEGFP-N1- HSP70ΔNLS. 向传代培养的 C2C12肌源细胞培养液中加入终浓度为 1.0 mmol/L 的 H2O2 模拟体外氧化应激 . 甲苯胺蓝染色细胞核仁发现，正常细胞仅有一个位于中央的、浓染致密的核仁颗粒 . 过氧化氢处理后 3 h ，可见明显的核仁分离 . 热休克反应处理的细胞及转 pcDNA3.1( － )-HSP70WT 细胞则能明显抑制氧化应激所致的核仁分离 . 荧光蛋白示踪及核仁蛋白质免疫印迹分析显示， H2O2处理后 1 h ， HSP70WT 由正常时的细胞浆定位转为细胞核及核仁定位，而 HSP70ΔNLS 在 H2O2处理后仍定位于细胞浆，同时丧失了抑制核仁分离的作用 . 上述结果提示，野生型 HSP70 能显著抑制氧化应激所致细胞核仁分离，核定位信号通过介导 HSP70 向细胞核及核仁移位而决定 HSP70 对核仁损伤的保护作用 .]]> 1324true 3H-TdR 掺入实验结果表明，野生型 LIF 因子能显著抑制鼠骨髓白血病细胞系 M1 的增殖. 而 29 位氨基酸突变的 LIF 因子则完全丧失了以上功能，但所发现的突变没有显性负的作用. 结果充分说明， LIF 中高度保守的 29 位氨基酸对 LIF 功能的维持具有重要的作用.]]> 1323true 1322true Schistosoma japonicum， Sj) 新的疫苗候选基因并进行免疫效果研究，用 Sj 雌虫抗原免疫家兔制备血清，对Sj成虫 cDNA 文库进行免疫筛选，将获得的新基因 ( 命名为Sj-F1， GenBank 登录号为 AY261995) 克隆入原核表达载体 pTWIN1 和真核表达载体 pcDNA3 ，经 PCR 、限制性酶切筛选和鉴定阳性重组子. 将 pTWIN1/Sj-F1 质粒转化大肠杆菌 ER2566，在低温和低 IPTG 浓度下诱导表达可溶性重组融合蛋白 (rSj-F1/intein2)，并经 SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 和蛋白质印迹 (Western blot) 分析鉴定. 将 pcDNA3/Sj-F1 质粒转化大肠杆菌 ER2502 ，大量制备 DNA 疫苗. 用重组融合蛋白和 DNA 疫苗免疫小鼠，末次免疫后 2 周用Sj尾蚴进行攻击感染. 感染后 42 天剖杀冲虫，计算减虫率和减卵率. 感染前采血用 ELISA 法检测抗体. 免疫保护效果测定显示：重组蛋白疫苗以 FCA 作佐剂经皮下免疫和以壳聚糖作佐剂经粘膜免疫分别获得了 28.07%、 24.69% 的减虫率和 48.30% 、 46.38% 的减卵率； DNA 疫苗 (pcDNA3/Sj-F1) 单独免疫获得了 18.47% 的减虫率和 35.06% 的减卵率；用 DNA 疫苗启动免疫后用重组蛋白疫苗经皮下加强免疫，减虫率和减卵率分别提高到了 40.42% 和 56.17%；用 DNA 疫苗启动免疫后用重组蛋白疫苗经黏膜加强免疫，减虫率和减卵率增高更明显，分别提高到了 42.38% 和 62.87%. 结果表明，Sj-F1 重组蛋白疫苗及 DNA 疫苗均可诱导小鼠产生部分抗血吸虫感染的保护力，两者联合免疫保护效果优于单一疫苗.]]> 1321true 2=10.214 ， P＜0.005). NM23-H1、 DJ1 和 TIM1 三者的共同表达，可能与低分化鼻咽鳞癌的发生发展有关.]]> 1320true 1319true 1318true 1317true 1316true 1315true SilencerTM 3.1-H1 hygro 相比， pSL 和 pESL 对 p53 基因表达具有更高的干涉效率. 结果显示：干涉载体 pSL 和 pESL 能高效特异地下调目的基因表达，可作为哺乳动物中基因功能分析的有效工具.]]> 1314true 1313true 3) ，表达后获得可溶性融合蛋白， 3C 蛋白酶酶切后的蛋白质混合物经 Glutathione-Sepharose 4B 亲和层析纯化，最终获得可溶性、高纯度的 5 段多肽 . 应用 LearnCoil-VMF 软件与 ExPASy 系列软件对蛋白质结构与功能进行预测与分析 . 分子筛实验结果表明， F 蛋白的 HR1 与 HR2 可形成六聚体结构，圆二色谱实验结果则表明，六聚体蛋白富含 α 琢螺旋结构 .]]> 1312true P<0.01) decreased in hypertensive subjects. In vitro incubation with ( － )epicatechin caused an increase in GSH and — SH content, the effect was more pronounced in hypertensive erythrocytes. Similar results were obtained with L-ascorbic acid. The observed decrease in the level of GSH and — SH groups in hypertension is an indicator of oxidative stress condition. Observation of an increase in red cell GSH content and the protection of membrane — SH group oxidation by ( － )epicatechin in hypertensive subjects is a convincing reason to suggest that high dietary intake of foods rich in catechins may help to reduce oxidative stress and concomitant free radical damage in hypertensive patients.]]> 1311true 1310true Kd) 测定和 Clustal W 软件包分析适配子一级结构 . 经过 8 轮循环筛选，随机 ssDNA 库与 HCV NS3h 的结合率从 0.45% 上升到 29.5%. 所有的一级结构没有共同的同源序列，但可分 5 个家族，其中 4 个家族具有共同的保守序列 . 解离常数测定表明，寡核苷酸适配子 H2 与 HCV NS3h 特异结合的亲和力最高，Kd值为 140 nmol/L. 适配子 H2 (10 μmol/L) 在体外对 HCV NS3h 的活性具有一定的抑制作用，抑制率达 44%. 利用随机寡核苷酸文库获得了抗 HCV NS3h 的寡核苷酸适配子 .]]> 1309true OF1-ATPase 抑制剂 ( 寡霉素 ) 对光滑球拟酵母胞内 ATP 水平、葡萄糖消耗速度、糖酵解途径关键酶的影响 . 在培养液中添加 10 mg/L 鱼藤酮和抗霉素 A ，相对于对照组，胞内 ATP 分别下降了 43% 和 27.7% ，使糖酵解关键酶磷酸果糖激酶 (PFK) 的活性分别提高 340% 和 230% ，从而导致葡萄糖消耗速度增加 360% 和 240% ，丙酮酸生成速度提高了 17% 和 8.5%. 改变胞内 ATP 水平并不影响糖酵解途径其他关键酶 HK 、 PK 活性 . 微量的寡霉素 (0.05 mg/L) 可使胞内 ATP 含量下降 64.3% ，当培养液中寡霉素浓度达到 0.4 mg/L 时，细胞不能继续生长，葡萄糖消耗速度和丙酮酸的生成速度却随着寡霉素浓度 ( 小于 0.6 mg/L) 的增加而增加 . 表明氧化磷酸化途径中， ATPase 决定着 ATP 的生成 . 降低胞内 ATP 含量能显著提高 PFK 活性 (r2=0.9971) ，葡萄糖消耗速度 (r2= 0.9967) 以及丙酮酸生产速度 (r2= 0.965) ，葡萄糖消耗速度的增加是糖酵解途径中关键酶 PFK 活性 (r2 = 0.9958) 和 PK 活性 (r2= 0.8706) 增加所导致的 . 这一结果有利于揭示真核微生物细胞中氧化磷酸化与中心代谢途径 ( 酵解 ) 的关系 .]]> 1308true 1307true 1306true 2+ 亲和层析纯化达到电泳纯，纯化的 rSEC2 蛋白经蛋白质印迹检测，并能有效刺激人外周血单个核细胞的增殖，被 rSEC2 刺激的外周血单个核细胞在体外对肿瘤细胞的生长有显著的抑制作用 .]]> 1305true 1304true 1303true 1302true 1301true 1300true 1299true 1298true 1297true 1296true + 离子具有与 K+ 离子相类似的位能曲线，但是其在通透过程遇到的位垒要比 K+ 离子的位垒高，因而所对应的通透率也就小于钾离子的通透率，而钠离子的的通透率仅仅是钾离子通透率的 0.0067%. 文中所涉及的系统仅仅包含 269 个原子，而用分子动力学虽然也可以得到相近的结果，但是它的系统大小为 41 000 个原子 .]]> 1295true 1294true 1293true 1292true 1291true 1290true 1289true 1288true 32P- 特异底物标记技术检测 GSK-3 和 PP-2A 活性，并进一步测定了细胞内脂质过氧化产物丙二醛含量，细胞内过氧化氢酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性 . 结果显示：褪黑素不仅对 CA 引起的抗氧化酶活性降低和脂质过氧化的保护作用强于经典抗氧化剂维生素 E ，而且对τ蛋白磷酸化的保护作用也强于经典抗氧化剂维生素 E ；褪黑素可同时激活 PP-2A 又抑制 GSK-3 ，而维生素 E 同时抑制两种酶的活性 . 研究提示：褪黑素既通过抗氧化作用，也通过调节细胞内磷酸化平衡对抗 CA 对神经细胞的毒性作用 .]]> 1287true 1α亚基对调控 ATPase 在植物御冷性反应的作用，以及α亚基在植物低温信号转导中的作用提供了新的线索 .]]> 1286true 1285true 1284true 1283true 1282true 1281true 1280true 3的明显上调基因14个，而Ratio < 0.33的明显下调基因13个. 比较伴有淋巴结转移的乳腺癌组织和其相应淋巴结转移癌组织，分析筛选了27个表达差异基因，应用数学线性微分方程方法初步构建乳腺癌转移相关基因表达调控网络的线性微分方程模型，通过分析模型中重要节点、通路的生物学意义，判定网络的数学特性，初步表明，调控网络的可靠性和乳腺癌转移的形成是与多基因、多通路异常引起的细胞恶性转化相关.]]> 1279true 1278true 1277true 1276true 1275true 1274true 1273true 1272true 1271true 1270true 1269true 1268true 1267true 1266true 1265true 1013) 筛选胸苷酸合成酶 (thymidylate synthase ， TS) RNA 亲和肽的研究，通过精密的实验设计，建立了一套完整有效的筛选方法，并对实验条件进行了优化 . 已进行了 8 轮筛选，结果表明，以 mRNA 体外展示技术获得的多肽分子，可以与 TS mRNA 亲和 . 将测序结果与初始肽库进行比较，发现亲和肽中碱性氨基酸及芳香族氨基酸含量明显增加，说明其在与 RNA 结合中具有重要作用 . mRNA 展示技术作为一种大容量文库的体外筛选方法，将广泛应用于与固定化靶物质具高度亲和性及特异性的多肽和蛋白质的筛选 .]]> 1264true 1263true 1262true 1261true 1260true 1259true 1258true 1257true 1256true 1255true 2006/9/15 0:00:00 1254true 2006/9/15 0:00:00 1253true psy) 的全长cDNA及基因组DNA. 其全长cDNA包括1 200个碱基，编码400个氨基酸，基因组DNA包括5个外显子，4个内含子. 系统发育分析结果显示，绿藻的八氢番茄红素合成酶基因形成一个进化枝，它们与高等植物的psy亲缘关系比较近. 通过Genome Walking的方法，分离了psy基因约1 kb的5′侧翼序列. 将含有TATA-box 和CAAT-box的297 bp的序列与LacZ报告基因构成嵌合的表达载体，用基因枪法转化雨生红球藻. lacZ的瞬间表达检测结果表明，这段上游序列能够驱动lacZ表达，具有启动子活性.]]> 2006/9/15 0:00:00 1252true 2006/9/15 0:00:00 1251true 2006/9/15 0:00:00 1250true 2+-ATPase (SERCA2a) 的分布，结果表明，相当数量的SERCA2a分布在膜质微区，并且有正常的生理功能. 上述研究结果表明，在心肌浆网膜上有膜质微区的存在，进一步证明膜质微区不仅存在于细胞质膜，也普遍存在于细胞器膜.]]> 2006/9/15 0:00:00 1249true Sulfolobus solfataricus 和 Sulfolobus shibatae 的DNA连接酶具有很高的同源性，尤其在与功能紧密相关的6个保守结构基序的一致性更高. JP2连接酶表现出高的DNA缺口连接活性，在二价金属辅因子的选择方面，JP2连接酶更倾向于Mn2+ 离子而不是Mg2+、Ca2+ 及其他离子. 不同温度时的热稳定性测试显示：JP2连接酶在50～80℃时为较适连接温度，当温度不超过85℃时，连接酶的活性在5 h内保持相对稳定，但在90℃以上活性则很快降低. 还分离纯化了JP2的分子伴侣———TF55，并将其应用于增加JP2连接酶的热稳定性研究. 结果表明：在体外85℃时，分子伴侣未增加连接酶的热稳定性，可能的原因是在85℃体外状态下TF55本身就表现出不稳定性.]]> 2006/9/15 0:00:00 1248true Sry 基因的调控网络，采用 siRNA 技术使 Sry 基因沉默，探讨了有效沉默 Sry 基因的途径和最佳条件. 设计、合成针对小鼠 Sry 基因的发夹状寡核苷酸链,退火后连入真核表达载体pSilencer 4.1-CMV neo vector，构建以小鼠 Sry 基因为靶点的 siRNA 干涉载体 pSilencer 4.1/Sry217及 pSilencer 4.1/Sry565，通过尾静脉注射法将载体质粒导入妊娠小鼠体内，于小鼠妊娠第 11.5 天，即 11.5 dpc (days post coitum，性交后天数) 取出胚胎，采用双重 PCR 法对胚胎进行性别鉴定，鉴定为雄性的胚胎采用半定量 RT-PCR 法检测Sry 基因的表达量，研究不同干扰序列、不同注射时间及注射剂量对 Sry 基因表达量的影响. 研究结果，确定了质粒的最佳注射时间为 9.5 dpc，注射剂量为 20 μg，注射干扰质粒 pSilencer 4.1/Sry565 对 Sry基因的抑制效率达 85% 左右. 结果表明，siRNA 可以显著抑制雄性胚胎 Sry 基因的表达.]]> 2006/9/15 0:00:00 1247true 2006/9/15 0:00:00 1246true ATP) 的阻断剂格列本脲 (glibenclamide，glyb)，对针刺诱导的大鼠CSD过程中软脑膜动脉血管舒缩过程的影响. 实验中观测到软脑膜血管的初始小收缩 (initial slight constriction，ISC) 相对于对照组显著减弱，其中应用10 μmol/L glyb时，74.5%的ISC被完全抑制，100 μmol/L glyb时则有96.2%的ISC完全消失. 相对于CSD发生前，软脑膜动脉血管大幅舒张 (large dilation，LD) 的峰值也分别显著增强了(53.8 ± 19.3) %和(59.8 ± 19.6) %. 结果表明，可能是神经元上的KATP在CSD过程中被glyb阻断从而抑制了软脑膜动脉血管的收缩.]]> 2006/9/15 0:00:00 1245true 2006/8/14 0:00:00 1244true 49RKKRRQRRR57模拟物9个精氨酸(R9)与GDNF(ΔN39)活性片段融合表达，获得纯度达95%以上的GDNF(ΔN39)-R9融合蛋白. 将GDNF、GDNF(ΔN39)、GDNF(ΔN39)-R9分别加入原代培养的中脑多巴胺能神经元和转染GDNF受体GFRα1和Ret的PC12细胞中，观察它们的神经营养活性和毒性. 运用脑微血管内皮细胞株B-Endo 3，观察GDNF(ΔN39)-R9蛋白穿越血管内皮细胞膜的功能；运用脑血管内皮细胞和Matrigel铺板模拟血脑屏障，Transwell法检测Tat-GDNF(ΔN39)蛋白穿越脑血管内皮细胞和外周胶质膜的能力. 结果显示：GDNF(ΔN39)-R9蛋白具有类似GDNF的神经营养活性，促进原代培养的中脑多巴胺能神经元和稳定表达GFRα1和Ret受体的PC12-GFRα1-Ret细胞株的存活，没有显示毒性，并且能很好地穿过脑微血管内皮细胞层和模拟的血脑屏障.]]> 2006/8/14 0:00:00 1243true 2006/8/14 0:00:00 1242true 10-dB值大和频率调谐曲线对称指数大于零的神经元，其特征频率偏向频率调谐曲线高频端的概率更高. 结果提示，经验可改变大鼠听皮层神经元的特征频率，为深入研究中枢神经元功能活动可塑性的机制提供了重要实验资料.]]> 2006/8/14 0:00:00 1241true LAG1是从酵母中克隆的与酵母寿命相关的基因，随酵母生命衰老而表达发生变化. 对大鼠中同源基因LASS1进行克隆、测序和序列分析，发现其mRNA序列不同于GenBank中的预测序列，开放阅读框包含1 053碱基对，编码蛋白由350个氨基酸组成，内含Lag1蛋白家族保守的Lag1p motif和TLC结构域. 从新生、1月龄、6月龄、12月龄和24月龄大鼠脑顶叶皮质提取总RNA，用半定量RT-PCR及RNA印迹方法对LASS1在大鼠脑皮质中的表达随年龄变化情况进行分析. 结果表明，出生后LASS1表达量随年龄增加而增高，至6月龄达高峰，然后随年龄增加而逐渐下降，至24月老龄鼠达最低. 衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)对鼠脑皮层染色发现，神经元阳性染色随年龄增长明显增加. 大鼠LASS1基因表达在正常衰老过程中发生变化，为进一步研究该基因的作用奠定了基础.]]> 2006/8/14 0:00:00 1240true 2006/8/14 0:00:00 1239true 2006/8/14 0:00:00 1238true 2006/8/14 0:00:00 1237true 2CO3后，GSK-3活性降低，PP-2A活性及表达恢复，tau蛋白在Ser198/Ser199/Ser202和Ser396/Ser404位点磷酸化水平降低. 研究提示：糖尿病大鼠皮层GSK-3升高可能抑制PP-2A的活性，升高的GSK-3和降低的PP-2A协同促进tau蛋白的磷酸化.]]> 2006/8/14 0:00:00 1236true 2006/7/17 0:00:00 1235true 2006/7/17 0:00:00 1234true 2006/7/17 0:00:00 1233true 2006/7/17 0:00:00 1232true SjHGPRT基因不完整的3′端和5′端进行扩增、测序，用电子软件拼接，获得SjHGPRT全长cDNA (1 270 bp)，经序列分析，推断该片段含有编码SjHGPRT基因的完整阅读框，其编码基因与曼氏血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (SmHGPRT) 全长编码基因碱基一致性为82%，其理论推导的氨基酸组成与曼氏血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶的一致性约为83%. 将其编码基因克隆到表达载体pQE30上，在大肠杆菌M15中获得准确、高效表达，表达产物分子质量约为28 ku. 用日本血吸虫成虫抗原免疫血清对表达产物进行蛋白质印迹检测，在预测位置上出现明显的识别条带. 重组蛋白动物免疫保护性结果显示：在虫荷、每克肝卵、每克粪卵和雌子宫内卵数方面，疫苗组与对照组比较差异均具有显著性 (P < 0.05，P < 0.01). 结果表明，日本血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (SjHGPRT) 全长cDNA成功克隆并在大肠菌中得到表达，表达产物具有良好的抗原性和动物免疫保护效果，是一种潜在的具有部分免疫保护性的抗血吸虫病疫苗候选分子.]]> 2006/7/17 0:00:00 1231true 13空间群，其晶胞参数为a=b=c=113.2Å，α=β=γ=90°. 计算可得马修斯系数为3.6 Å3·Da-1，据此可估计在一个不对称单位中含有两个单亚基. 据目前所知，这是第一个关于野生型的脱氧胞嘧啶核苷酸脱氨酶的结晶学报道.]]> 2006/7/17 0:00:00 1230true 2006/7/17 0:00:00 1229true 1代小鼠转基因阳性率为41%. 经DNA印迹证明：外源基因已经整合到子代转基因动物的基因组内并能遗传给后代. 将F1代阳性鼠与正常ICR鼠交配，产生F2代转基因鼠，F2代转基因阳性率37%. 上述实验结果表明，建立的体内系统转基因方法简便、高效，适用于大规模制备转基因动物，特别适用于一些大型家畜.]]> 2006/7/17 0:00:00 1228true 58，体外具有促进人胚肺成纤维细胞2BS增殖的作用，N端测序显示与哺乳动物几丁质酶蛋白家族成员具有高度同源性. 生物信息学分析表明，来源于人的结肠、肾和胃的几个表达序列标签 (EST) 克隆和大鼠的这一蛋白质序列匹配. 随后成功地从人肾RNA样品中克隆到一组 cDNA，其序列及相应的氨基酸序列彼此高度相似，并与 GenBank 中的几个人几丁质酶蛋白高度相似. 和人基因组序列比较，揭示这些分子可能来自于同一基因，为可变剪切的产物.]]> 2006/7/17 0:00:00 1227true VvSUC27 cDNA以反义方向插入到含有CaMV 35s启动子的真核表达载体pBI121载体中，然后转化到烟草(Nicotiana tobacum cv. Samsun) 植株中. 转反义VvSUC27 cDNA的烟草植株在含有20 g/L蔗糖的培养基上能够正常生长发育，但是通过切片观察，发现其根部发育较弱，且叶片叶绿体含量增加. 可溶性糖测定发现，转基因烟草根部蔗糖含量只有野生型烟草的51%. 14C蔗糖吸收实验发现转基因烟草转运外界蔗糖的能力大大降低.]]> 2006/7/17 0:00:00 1226true 2006/6/14 0:00:00 1225true 2006/6/14 0:00:00 1224true 2006/6/14 0:00:00 1223true M-A校正. 并采用迭代策略减弱基准芯片方法对基准芯片选择的敏感性. 在标准测试集上，同几种已知的方法进行了对比分析.]]> 2006/6/14 0:00:00 1222true NGR-及六肽长度对小分子肽与DMS53细胞的粘附非常重要. 用抗整合素、E-cadherin、NCAM及ICAM的抗体或多肽阻断小分子肽与DMS53细胞表面的相应受体结合，未见明显的阻断效应. 小分子肽与DMS53细胞表面的结合位点有待于进一步证实.]]> 2006/6/14 0:00:00 1221true mu值分别为2.24和2.45 kJ·mol－1·M－1，去折叠活化能的差值为22 kJ·mol－1. 时间分辨的荧光发射谱和圆二色谱可以用天然态和完全变性态的谱图通过一个固定的比例参数进行重建. 结果表明，过去被广泛接受的存在着变性中间体的机制是不正确的，而apoazurin在天然态存在至少两种构象的假设是合理的.]]> 2006/6/14 0:00:00 1220true 2006/6/14 0:00:00 1219true 2(＋)/CREG及pLXSN(－)/CREG制备稳定感染HITASY细胞模型，观察CREG蛋白过表达及表达抑制对人VSMCs分化的影响并探讨其调控机制. 结果显示：pLNCX2(＋)/CREG稳定感染细胞呈分化表型，细胞细长变成组织样聚集生长趋势，细胞中CREG蛋白和平滑肌分化标志蛋白平滑肌α-肌动蛋白(SM α-actin)表达显著增加，同时SM α-actin相关调控因子———血清反应因子(SRF)入核转位，RhoA总蛋白表达上调，以Rho激酶特异性抑制剂Y-27632作用后，CREG诱导的SM α-actin表达下调的同时SRF出核转位；pLXSN(－)/CREG稳定感染的细胞体积变大，细胞极性消失，呈无序生长，细胞中CREG和SM α-actin蛋白表达显著降低，同时伴有SRF出核转位及RhoA总蛋白表达下调. 免疫共沉淀分析发现，CREG蛋白能被分泌到VSMCs培养基中表达，并可与细胞膜受体6-磷酸甘露糖/胰岛素样生长因子Ⅱ型受体 (M6P/IGF2R) 发生直接相互作用. 用蛋白磷酸酶PP2A特异性抑制剂okadaic acid减少M6P/IGF2R在细胞膜表面分布，可明显抑制CREG过表达引起的RhoA、SRF和SM α-actin表达. 上述结果提示，在体外培养的人VSMCs中，CREG可能作为一种分泌型蛋白质通过与细胞膜受体M6P/IGF2R相互作用，依次激活SM α-actin蛋白相关调控因子RhoA和SRF引起SM α-actin表达增加，促进VSMCs向分化表型转换.]]> 2006/5/12 0:00:00 1218true P值法和增、删、改相互作用的方法对聚类结果进行预测能力分析和稳定性分析. 结果表明，模块化聚类方法具有较高的预测准确度和覆盖率，有很好的容错性和稳定性. 此外，模块化聚类分析得到了一些具有高预测准确度的未知蛋白质的预测结果，将会对生物实验有指导意义，其算法对其他具有相似结构的网络也具有普遍意义.]]> 2006/5/12 0:00:00 1217true P < 0.01)；SW组hMSCs-HA载体复合体术后4周与8周表达骨钙素mRNA，而对照组则无表达. 提示hMSCs经适宜能量冲击波作用后与HA载体复合植入裸鼠体内具有成骨作用，适宜能量的冲击波作为一种新的促进hMSCs成骨分化的方法，可应用于组织工程领域.]]> 2006/5/12 0:00:00 1216true 2006/5/12 0:00:00 1215true Tm为64.6℃. 在低浓度盐酸胍存在下，TIM的热稳定性降低. 讨论了二体蛋白质的可能去折叠机制，证明在使用的实验条件下磷酸丙糖异构酶去折叠过程中二级结构与三级结构的变化是同时发生的，其去折叠遵循观察不到二体解离的表观二态过程.]]> 2006/5/12 0:00:00 1214true Helicobacter pylori，Hp) 尿素酶 (Ure) β亚基为靶蛋白，分析筛选出优势线性表位序列，Fmoc法固相合成上述线形表位的多聚抗原肽(MAPs)，高效液相色谱仪 (HPLC) 纯化后，用机器人点样仪按一定的矩阵排列形式点印至硝酸纤维素膜上，2%的小牛血清封闭，塑料壳体封装制备成MAPs微阵列成品. 随机抽样经质控血清鉴定后用于随机人群血清试验并与ELISA 检测结果进行比较. 筛选、合成并鉴定出4 条MAPs. 用该MAPs微阵列检测的Hp和HCMV阳性及阴性质控血清结果均与质控血清情况相符，120份随机血清检测结果与用重组抗原和病原微生物裂解物抗原包被的ELISA 法检测结果相比具有较好的一致性，Ure-1、Ure-2 和PP150 三种MAPs的灵敏度和特异性均大于90%. MAPs微阵列片间质控试验结果变异系数小于7%，示重复性良好. MAPs微阵列是一种快速、高通量、自动化的分析平台，该平台在预防性疫苗的开发和蛋白质组学的研究中具有较大的前景.]]> 2006/5/12 0:00:00 1213true α原子来代替. 采用非格点模型，以相对熵作为优化函数，进行蛋白质三维结构预测. 为了与基于相对熵方法的蛋白质设计工作进行统一，采用了新的接触强度函数. 选用蛋白质数据库中的天然蛋白质作为测试靶蛋白，结果表明，采用该模型和方法取得了较好的结果，预测结构相对于天然结构的均方根偏差在0.30～0.70 nm之间. 该工作为基于相对熵及HNP模型的蛋白质设计研究打下了基础.]]> 2006/5/12 0:00:00 1212true 2006/5/12 0:00:00 1211true 2006/5/12 0:00:00 1210true NTR (或者TROY) 发挥对中枢神经纤维再生的抑制作用. 新近克隆的跨膜蛋白LINGO-1是该信号途径的另一个重要组成成分和调节分子. LINGO-1特异表达于中枢神经系统，神经元上的LINGO-1被证明参与调节中枢神经再生的抑制信号，而少突胶质细胞表达的LINGO-1分子参与负调节少突胶质细胞的髓鞘化过程. 为探讨LINGO-1分子在神经元凋亡过程中的作用，利用包含LINGO-1分子胞外段LRR和IgC2结构域的Fc融合蛋白作为功能性拮抗剂，研究LINGO-1对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用. 利用成熟的Hoechst标记凋亡细胞的方法，观察到经LINGO-1-Fc蛋白预处理2 h能够显著阻止小脑颗粒神经元的凋亡. 仅包括LRR结构域的GST-LINGO-1与LINGO-1-Fc蛋白，虽同样具有与颗粒神经元的结合活性，但是GST-LINGO-1不能有效地阻止低钾诱导的细胞凋亡. 这些结果提示，LINGO-1-Fc蛋白能够阻止低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡，并且这种作用可能是IgC2结构域依赖的.]]> 1209true 1208true 6f复合物、光系统Ⅰ以及ATP合酶4个超分子复合物组成. 利用分裂泛素化酵母双杂交系统研究光合类囊体膜蛋白间的相互作用. 将叶绿体psbA基因编码的D1蛋白作为诱饵蛋白，以叶绿体基因psbD 编码的D2蛋白、petB编码的Cytb6蛋白作为靶蛋白，分别共转化酵母菌株后进行相互作用分析. 实验结果表明，诱饵蛋白D1能与来源于同一复合物光系统Ⅱ的D2蛋白发生相互作用，而与来源于细胞色素b6f复合物的Cytb6.蛋白没有互作. 这一结果表明，分裂泛素化酵母双杂交系统可以用于检测光合膜蛋白间的相互作用，从而为研究光合膜蛋白生物发生的调控机理提供一个有效的工具.]]> 1207true vs (185.85±9.45) g，P < 0.05). 实验结果预示，利用注射肌肉特异异位表达GHRH蛋白可能促进动物生长.]]> 1206true CS-ACS2) 片段 (GenBank 登记号为：DQ115884～DQ115886和DQ115875～DQ115879). 经测序分析，3个雌雄同株性别类型品种的序列完全相同. 与之相比，5个强雌性和全雌性品种中存在8个单核苷酸多态性(SNPs)标记，SNPs标记为4个A←→G和4个T←→C之间的转换.在8个SNPs中，有1个SNP位于内含子区域，其余7个SNPs都位于外显子区域. 在7个位于外显子区域的SNPs中，有3个为非编码区的SNPs，4个为cSNPs. 而在4个cSNPs中，有3个导致了编码的氨基酸序列改变. 研究结果表明，与雌雄同株性别类型相比，雌性系中均存在单核苷酸的变异，这提示ACC合酶基因CS-ACS2的单核苷酸变异可能与黄瓜雌性系的发生形成有关. 另一方面，根据SNP多态性还发展了一个酶切扩增长度多态性(CAPS)标记C-MT700.利用CAPS标记C-MT700能将强雌性优良品种MT-705与其他黄瓜品种相区别，该标记在黄瓜育种生产上具有一定的应用价值. 此外，研究获得的SNPs标记和CAPS标记丰富了黄瓜的分子标记种类.]]> 1205true OsGME1基因在冷胁迫条件下表达水平上调，这和先前水稻冷胁迫蛋白质组学研究的结果是一致的. 而OsGME2和OsGME1基因在用赤霉素处理条件下表达水平均下调，暗示赤霉素可能通过调节GME基因的表达来调控植物体内的抗坏血酸合成.]]> 1204true 1203true 1202true COI1同源的新基因，命名为OsCOI1. OsCOI1编码595个氨基酸. 推测的OsCOI1编码蛋白有一个F-box motif和16个富含亮氨酸的重复序列，这与拟南芥COI1相似. OsCOI1在氨基酸水平上和COI1有很高的同源性(74%). 经半定量RT-PCR法和RNA印迹分析，表明水稻中OsCOI1表达水平在经茉莉酸甲酯和脱落酸处理后呈明显变化，但不受水杨酸和乙烯的影响，说明OsCOI1可能在茉莉酸信号途径和脱落酸途径中具有特定功能.]]> 1201true cryst达到0.109. dimo-BmK M1结构显示，在不对称单位中的两个M1分子在同一位置 (残基9-10之间) 都清晰地存在顺式肽键. 立体化学分析显示，这一肽键的几何参数和局部结构与mono-BmK M1中的 (9-10) 顺式肽键基本相同. 这一结果表明，非脯氨酸顺式肽键9-10的存在与结晶环境无关，是BmK M1分子的固有结构特征. 在此基础上，综合分析了与顺式、反式肽键相关的结构元素，发现与残基 (8-19) 序列模体-KPXNC- (X为任意氨基酸) 所决定的特征回折结构可能是分子内在的主要结构因素，其中第8位残基是Lys或Asp对决定肽键是顺式还是反式有关键作用. 近来的突变实验及其晶体结构测定已证实，Lys8/Asp8是 (9-10) 肽键顺式/反式异构的结构开关，它们对该类分子与不同种属钠通道作用的专一选择性具有重要作用. 通过BLAST搜索，发现在其他18个蛋白质中也存在相同的序列模体-KPXNC-，推测在这些蛋白质的相应肽键位置也可能存在反常的脯氨酸顺式肽键.]]> 1200true 1199true 1198true 1197true 1196true 1195true 2006/3/16 0:00:00 1194true 1193true 1192true 1191true 1190true 1189true 1188true 1187true 1186true 1185true 0.05)；激光作用降低了Na+ 通道的激活阈值电位和峰值电位，对照组通道电流在－40 mV激活，－30 mV达峰值, 激光照射组通道电流在－60 mV激活，－40 mV达峰值；激光照射改变了Na+ 通道半数激活电压和斜率因子，对照组和激光照射组的半数激活电压分别为(－42.091±1.537) mV和(－54.971±1.846) mV (n＝8，P < 0.01)，斜率因子分别为(1.529±0.667) mV和(2.634±0.519) mV (n=8，P < 0.05). 结果表明，弱激光照射海马神经元可改变Na+ 通道的激活特性，从而影响动作电位的去激化过程，进而会引起神经元细胞生理功能发生变化.]]> 1184true 1183true 1182true 1181true 1180true 1179true 1178true 1177true 1176true 0.05). 进一步在高频缺失区域内，采用定位候选克隆策略、生物信息学技术及RT-PCR技术筛选、鉴定与儿童ALL相关的候选肿瘤抑制基因及其cDNA片段. 在D6S1709～D6S301之间筛选到一个在儿童ALL细胞中低表达的EST (GenBank登录号：AA403058)，与正常外周血单个核细胞比较，在15例ALL患者中有10例表达下调 (P < 0.05). 采用数字化差异表达分析显示，位于6q16.3～21区域内的AMD1基因、PPIL6基因和WASF1基因在肿瘤组织中的表达丰度要低于正常组织 (P < 0.05). 上述结果为进一步在6q16.3～21区域克隆肿瘤抑制基因提供了线索.]]> 1175true 1174true 1173true 1172true 1～42肽注射到大鼠双侧海马 (以Aβ42～1反序列肽为对照)，实时定量PCR（RT-qPCR）检测发现，Aβ1～42上调了外周血T细胞中巨嗜细胞炎症蛋白 (macrophage inflammatory protein-1α，MIP-1α) 的表达，同时免疫荧光分析显示，脑内的Aβ1～42也引起了脑微血管内皮上MIP-1α受体 (CCR5) 的表达增加，以及伴随的脑实质内T细胞数量的增加. 然而，大鼠腹腔内注射抗MIP-1α中和抗体则阻断了Aβ1～42所致的脑内T细胞数量的增加. 提示脑内Aβ沉积能诱导外周血T细胞MIP-1α依赖性迁移入脑.]]> 2006/12/15 0:00:00 1171true 2006/12/15 0:00:00 1170true ＋的导管细胞及胰岛素阳性细胞出现. 推测BTC及BTCe对体外长期培养的大鼠胰岛具有一定的保护作用，可能通过促进胰腺内PDX-1＋的导管细胞及胰岛素阳性细胞的增殖、诱导对STZ诱导的糖尿病大鼠的高血糖具有一定缓解作用.]]> 2006/12/15 0:00:00 1169true 99mTc标记噬菌体肽库，研究了肽库在体内分布. 体内分布实验结果显示，99mTc-噬菌体主要分布在肝和脾中，而心脏、肌肉、脑和胰腺这些器官或组织中的分布非常低. 99mTc-噬菌体在胃、肠和骨中的累积，随着时间延长在不断升高，其他器官中的吸收则在不断降低. 从5 min到30 min，99mTc-噬菌体在血中清除迅速. 当噬菌体在体内循环足够长的时间后，一些噬菌体颗粒可以穿透血管进入并内化在器官或组织中. 总之，为了筛选具有高特异性和亲和性的肽，应该根据靶器官和筛选部位的不同，在筛选前确定合适的噬菌体在体内的循环时间.]]> 2006/12/15 0:00:00 1168true lip3) 开放阅读框完整序列，该基因编码一个由315个氨基酸残基组成、预计分子质量为34.557 ku酶蛋白(Lip3)；氨基酸序列上的GFGNS (GXGXS) 和G-N-S-M-G (GXSXG) 在许多脂肪酶中有很高的保守性，它们是水解机制所必需的序列，也是丝氨酸水解酶中最保守的序列. 构建了lip3基因重组表达载体，并在大肠杆菌中获得表达，采用镍离子亲和层析柱对表达的酶蛋白Lip3进行纯化，得到约35 ku蛋白条带，酶学性质的分析表明，该酶的最适作用温度为25℃，在0℃时表现为最高活力的22%，最适pH值为8.0，对热敏感，35℃热处理60 min剩余酶活为10%，以硝基苯棕榈酸酯为底物，Lip3的酶促反应常数Km值随着反应温度的升高而升高，是典型的低温酶.]]> 2006/12/15 0:00:00 1167true 2006/12/15 0:00:00 1166true Penicillium chrysogenum) 中首次克隆了一个谷胱甘肽S-转移酶（GST）基因，定名为PcgstA. 该基因的开放阅读框长840 bp，含有两个内含子,编码一个238 氨基酸残基的蛋白质. 其推断的氨基酸序列与一些已经鉴定的丝状真菌GST具有50%左右的序列一致性. PcgstA的完整编码区经RT-PCR扩增、验证，插入原核表达载体pET11a，转化大肠杆菌BL21(DE3)-RP菌株，表达得到重组PcGSTA蛋白. 酶活测定证实，重组PcGSTA具有GST活性，其对底物CDNB(1-chloro-2, 4-dinitrobenzene)的比活为(0.159 ± 0.031) μmol/(min·mg). 利用TaqMan探针法，对PcgstA的表达情况进行了比较. 结果表明，在添加了侧链前体苯乙酸的青霉素生产培养基中，PcgstA的表达水平和在不含苯乙酸培养基中的表达相比明显下调，显示了该基因与苯乙酸代谢的关系.]]> 2006/12/15 0:00:00 1165true 2006/11/17 0:00:00 1164true 2006/11/17 0:00:00 1163true n=8) 首先接受200 ms声音条件刺激，间隔600 ms后，再被给予200 ms吹气非条件刺激，多次重复配对，建立追踪性眨眼条件反应. 对照组动物 (n=8) 接受非配对出现的上述两种刺激. 采用在体单细胞外记录技术，研究习得条件反应豚鼠的齿状回颗粒细胞在条件反应巩固过程中的放电活动. 结果显示：a. 通过14天的训练，条件反射组动物均建立了追踪性眨眼条件反应，而非配对组动物则没有建立该条件反应；b. 齿状回颗粒细胞在追踪性眨眼条件反应的巩固过程中表现出不同的活动模式，如在声音条件刺激、间隔期或吹气非条件刺激出现后活动的增强. 这些结果提示：齿状回可能参与巩固追踪性眨眼条件反应所需的神经环路，其颗粒细胞在追踪性眨眼条件反应巩固过程中可能编码不同的信息.]]> 2006/11/17 0:00:00 1162true 2006/11/17 0:00:00 1161true 2006/11/17 0:00:00 1160true P < 0.05，P < 0.01)，听觉剥夺7天后再给予纯音暴露则又使NR2B表达水平明显提高 (P < 0.05)，呈现双向调节趋势. 听觉剥夺和纯音暴露对生后42天龄组大鼠听皮层NR2B表达不再产生明显调节作用 (P > 0.05). 结果提示，在大鼠生后发育关键期，听觉剥夺、经验可改变听皮层NMDA受体NR2B蛋白表达水平. 研究结果为研究感觉功能发育可塑性的机制提供了重要实验资料.]]> 2006/11/17 0:00:00 1159true 25-35加入培养基造成PC12细胞神经损伤模型，分别以高、中、低剂量rhGIP作用于此模型，通过MTT (2-(4,5-dimethylthia-zol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 法测定PC12细胞的活性. 结果显示，成功克隆了人GIP基因，诱导表达的rhGIP占细胞总蛋白质的35%，部分可溶，部分以包涵体形式存在. 经过诱导表达的重组蛋白质分子质量约为26 ku，与理论值相符. 纯化后的rhGIP具有免疫活性. 优化诱导表达条件为表达菌生长密度A600值0.50，IPTG浓度0.5 mmol/L，温度37℃，诱导表达时间4 h. 裂解上清液经固定化金属亲和层析一步法层析后，表达的水溶性rhGIP融合蛋白的最后得率为1.2 mg/L菌液，纯度为85%. 纯化后的rhGIP能够使SD大鼠胃液pH值增高，其抑制胃酸分泌作用与生理盐水对照组比较差异有显著性 (P < 0.05)，而rhGIP组和标准品GIP组比较差异无显著性. 在高血糖背景下，注射rhGIP 15 min后，大鼠血浆血糖浓度较基础血糖显著降低 (P < 0.05)，30 min时与单独注射葡萄糖的模型对照组比较，差异无显著性，而rhGIP组和标准品GIP组其差异不显著. 在rhGIP对神经细胞的营养和对PC12细胞免受神经损伤和缺氧损伤影响的研究中发现，用rhGIP培养PC12细胞32 h后，rhGIP组NO含量极显著低于正常对照组 (P < 0.01)，细胞存活较多，神经突起延伸较好，中、高剂量rhGIP组均较神经损伤和缺氧损伤组活性显著升高 (P < 0.05)，且细胞活性呈剂量依赖关系，rhGIP组与标准品GIP组差异不显著，与正常对照组亦无显著差异. 研究结果表明，已得到高效表达的rhGIP融合蛋白，该蛋白质具有免疫活性，具有抑制胃酸分泌和降低大鼠血浆血糖浓度的生理活性，并且对神经细胞有营养和保护作用.]]> 2006/11/17 0:00:00 1158true IFRG) 的全长cDNA (登录号：AJ584672). 利用RT-PCR证明IFRG在兔卵母细胞和植入前胚胎中均有表达，这将为深入研究IFN在早期胚胎中的作用机制提供理论参考，卵巢原位杂交表明IFRG在成熟卵泡 (类型5) 的颗粒细胞中有表达，在初级和次级卵泡的膜鞘细胞和粒层细胞中有很高的表达，鉴于这些细胞与卵泡的发育密切相关，推测IFRG在卵泡的发育、成熟和排卵中发挥重要作用.]]> 2006/11/17 0:00:00 1157true E. tenella) 杂交株F2的RNA为模板，应用反转录聚合酶链式反应 (RT-PCR) 技术扩增了杂交株F2的Rhomboid蛋白家族相关基因，将PCR产物克隆至pMD18-T 载体中，构建出克隆质粒pMD-Rhomboid. 以KpnⅠ、PstⅠ双酶切重组质粒pMD-Rhomboid和鸡痘病毒载体质粒pUTA2，并将纯化的Rhomboid基因亚克隆至鸡痘病毒载体pUTA2复合启动子下游，构建出真核表达重组质粒pUTA-Rhomboid. 采用脂质体转染技术，将该质粒转染FPV 282E4株感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中，通过BrdU药物加压筛选，并通过RT-PCR和蛋白质印迹等方法检测，筛选出一株球虫鸡痘重组病毒rFPV-Rhomboid. 进一步经CEF扩增病毒后，免疫雏鸡，监测免疫指标. 结果表明：重组病毒接种鸡外周血中的CD4+、CD8+含量显著高于非免疫对照组 (P < 0.05)；与对照组相比，重组病毒对鸡的增重效果差异显著 (P < 0.05)，对E. tenella的攻击具有一定的保护作用，显示出较好的应用前景.]]> 2006/11/17 0:00:00 1156true Glycine max) N2899种子萌发0 h、8 h、36 h、60 h 4个时期蛋白质的差异表达情况进行了研究. 结果发现，在考马斯亮蓝染色的双向电泳pH3～10胶上，PDQuest图像分析软件可识别的点约350个，其中表达量变化2.5倍以上的蛋白质点有24个，而绝大部分大豆种子贮藏蛋白在萌发期尚未降解. 在萌发的第一阶段，24个差异表达蛋白中有10个蛋白质的丰度发生变化. 第二阶段，差异表达蛋白的种类和量增加，其中15个蛋白质是动态变化的，14个蛋白质在胚根突破种皮时表达量达到峰值，表明吸胀后种子内的生命活动越来越强. 对这24个蛋白质点进行胶内酶解，用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定均获得肽质量指纹图谱. 搜索大豆的UniGene库初步鉴定出6个蛋白质，分别是核苷二磷酸激酶、热激蛋白、硫氧还蛋白、35 ku种子成熟蛋白及种子成熟蛋白PM36. 对这些蛋白质在种子萌发过程中可能的作用进行了讨论.]]> 2006/11/17 0:00:00 1155true Glechoma hederacea) 叶片中的一种糖基化植物新蛋白. 如同其他糖基化蛋白，通过免疫学方法探测Gleheda 的过程中通常受到一些不相干糖蛋白的妨碍，为此制定了抗Gleheda特异性多克隆抗体的纯化方案. 免疫血清蛋白经硫酸铵选择性沉淀后，分别以Gleheda和刺槐外源凝集蛋白 (RPA) 结合在Sepharose 4B作为亲和配体，采用亲和层析法连续纯化2次，然后进一步采用离子交换层析Q Fast Flow提纯. 经每一步骤提纯得到的抗体组分对Gleheda的特异性，均同时采用双向免疫扩散检验和Western blot分析. 结果表明，以Gleheda为配体，亲和纯化制备得到的抗体组分对叶片粗提物中的许多植物 (糖) 蛋白仍然表现交叉反应. 为除去由植物糖蛋白中的聚糖所引起这些非特异性交叉反应抗体，接着以RPA为配体再次进行亲和纯化，Western blot分析显示，抗体的特异性得到提高但并非除去了所有非特异性交叉反应的抗体. 最后进一步采用离子交换层析制备得到仅抗Gleheda蛋白的特异性抗体组分，此抗体组分适用于免疫探测研究. 该抗体纯化制备程序简易而高效，而且不需要昂贵的设备.]]> 2006/11/17 0:00:00 1154true z, αA, αB, αC)”以及2个“连结环”(ZA loop，BC loop). 通过生物信息学等综合分析，预测BRD7可能具有上述特征. 依据上述分析结果，构建了BRD7的Bromodomain相关缺失突变体，通过肽段结合实验分析上述突变体与乙酰化组蛋白3结合的能力. 结果表明，ZA loop与BC loop的完整性对于BRD7结合乙酰化的组蛋白3有着重要的意义. 同时通过免疫荧光分析，证实了ZA loop与BC loop的完整性能够影响BRD7的亚细胞定位. 最后，证实了BRD7与CBP可能存在交互作用. CBP不仅具有乙酰化转移酶活性(HATs)，能够对组蛋白末端进行乙酰化修饰，并且作为一种重要的细胞转录因子广泛参与细胞的各种生物学活动.]]> 2006/10/18 0:00:00 1153true 2006/10/18 0:00:00 1152true 2006/10/18 0:00:00 1151true P<0.05). 利用高效液相色谱法检测到诱导后的细胞可分泌多巴胺. 结果表明，Wnt3a可促进神经干细胞向多巴胺能神经元前体细胞分化，再通过抗坏血酸的诱导作用，在体外可获得大量的多巴胺能神经元，这些神经元有分泌多巴胺的功能.]]> 2006/10/18 0:00:00 1150true Hp)攻击3次，5周后处死小鼠，行胃组织快速尿素酶试验、Hp的定植半定量、炎症程度及其炎症活动度的评分. RT-PCR检测小鼠脾淋巴细胞中γ-干扰素 (INF-γ) 和白细胞介素-4 (IL-4)表达. 脂质体疫苗电镜下负染，显示粒径为 (0.7±0.2) μm. PBS组、空白脂质体组、UreB重组蛋白+CT组、脂质体包裹UreB重组蛋白组、脂质体包裹UreB重组蛋白和CT组、脂质体包裹 (UreB+Kat+CT) 组的免疫保护率分别为0(0/11)、 0(0/11)、58.3%(7/12)、54.5%(6/11)、63.6%(7/11)、75.0%(9/12)，UreB重组蛋白+ CT组免疫保护率与脂质体包裹UreB重组蛋白组比较无显著性差异 (P>0.05)，脂质体包裹UreB重组蛋白+CT组免疫保护率与脂质体包裹 (UreB+Kat+CT) 组比较有显著性差异 (P<0.05). 各疫苗组Hp定植评分均明显低于PBS和脂质体对照组 (P<0.01)，且UreB+Kat双价疫苗组较三个单价疫苗组比较也有显著性差异 (P<0.05). 疫苗组不仅能降低Hp的定植，而且能减轻Hp造成的小鼠胃黏膜的局部慢性炎症反应 (P<0.05)，但各疫苗组间比较未见显著性差异(P>0.05). Hp攻击后，与对照组比较，各疫苗组脾淋巴细胞INF-γ mRNA水平较低 (P<0.05)，而IL-4 mRNA水平则较高 (P<0.05)，各疫苗组间比较未见显著性差异(P>0.05). 研究表明，在小鼠Hp感染模型中脂质体能部分代替霍乱毒素的免疫佐剂作用，在Hp攻击后，未经免疫小鼠体内诱导以Th1为主应答，免疫小鼠体内则诱导以Th2为主的免疫应答.]]> 2006/10/18 0:00:00 1149true SalⅠR-/M- 向 SalⅠR/M宿主转移的质粒频率下降表明线型和环型的质粒都是以双链的形式转移的。上述研究结果表明SLP2衍生的线型质粒和环型质粒以相似的与细胞膜/胞壁功能相关的机理进行接合转移。]]> 2006/10/18 0:00:00 1148true Xist基因 DNA甲基化状况，以体外受精囊胚 (IVF) 和供体细胞作对照. 克隆囊胚Xist基因处于较低程度的DNA甲基化状态，其中，FFB来源的克隆囊胚Xist基因DNA甲基化程度为43%，而FOV来源的克隆囊胚仅为17%. 在体外受精囊胚中, Xist基因DNA甲基化处于中等状态，为49%. 然而，在体细胞中，Xist基因的甲基化程度较高，FFB为66%，FOV为63%. 这些结果说明，Xist基因DNA甲基化是可以被重编程的，所检测的CpG岛可能调节Xist基因的表达. 结合已发表的实验数据，在同一个体中，FFB来源的克隆囊胚发育率比FOV的低，但其克隆牛胎儿的妊娠率和产犊率比FOV的高，这暗示不同供体核克隆囊胚的重编程是有差异的，并可能影响到胚胎及个体的发育.]]> 2006/10/18 0:00:00 1147true 2006/10/18 0:00:00 1146true 2006/10/18 0:00:00 1145true Km值，并结合培养细胞中的实验，研究GSK-3β对tau蛋白磷酸化作用的位点特异性. 结果显示，GSK-3β催化tau蛋白多个位点的磷酸化，其中包括Thr181、Ser199、Ser202、Thr205、Thr212、Thr217、Thr231、Ser396和Ser404，对不同的位点磷酸化作用，其Km值不同，GSK-3β对Ser396的Km值最低，即对Ser396位点的亲和性最高，催化其磷酸化的能力最强. 在培养的细胞中，也显示了GSK-3β的表达引起Ser396位点的磷酸化最明显.]]> 2007/6/13 0:00:00 1144true 2007/4/24 0:00:00 1143true M-T，并成功构建重组表达质粒PET-32a(+)-wzy1-1，将阳性重组质粒转化于受体菌BL21(DE3)感受态细胞中，经IPTG诱导表达，进行表达产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测. 结果表明，表达蛋白位于37 ku处，小麦类脱水素基因获得高效表达. 表达蛋白经Ni2+琼脂糖凝胶亲和层析和透析袋电洗脱法纯化后，对兔子进行免疫，制备的抗血清通过ELISA检测到较高的多克隆抗体效价. 蛋白质印迹结果显示，利用纯化的蛋白质制备的兔抗血清可以很好地和所表达的蛋白质带特异性结合，且郑引1号小麦幼苗进行干旱处理，提取粗蛋白，SDS-PAGE，蛋白质印迹检测显示，在分子质量28 ku处出现特异的蛋白质条带，这说明所制备的抗血清可以与小麦叶片所表达的dehydrin蛋白特异性结合，证明其具有良好的免疫原性.]]> 2007/3/20 0:00:00 1142true IC50=(54.56 ± 5.18) μmol/L，IC50=(28.29 ± 1.32) μmol/L. 这些多肽可用于治疗艾滋病新药的开发应用及整合酶结构及作用机制的研究.]]> 2007/4/11 0:00:00 1141true 2007/4/11 0:00:00 1140true 2007/5/30 0:00:00 1139true 2007/8/13 0:00:00 1138true 12/ml，培养上清原始滴度达到1.3×108 tu/ml，高出目前常用制备体系产量1个数量级. 上述结果表明，新型慢病毒载体制备体系已初步建立，为今后该系统的大规模应用提供客观的科学依据.]]> 2007/8/13 0:00:00 1137true Escherichia. coli)脂肪酸合成的关键酶. 生物信息学分析显示，粪肠球菌基因组中有2个与大肠杆菌fabF同源的基因：fabF1和fabF2，缺少与fabB同源的基因. 用粪肠球菌(Enterococcus faecalis)V583总DNA为模板，PCR扩增 fabF1和 fabF2基因， 以pBAD24为载体，构建了重组质粒pHW13(fabF1)和pHW14(fabF2). 体内体外研究显示： fabF1基因能互补大肠杆菌fabB突变， FabF1具有β酮脂酰ACP合成酶Ⅰ(FabB)活性；fabF2能互补大肠杆菌fabF突变，FabF2 具有β酮脂酰ACP合成酶Ⅱ(FabF)活性. 同时发现粪肠球菌FabF2不同于大肠杆菌FabF，它还拥有微弱β酮脂酰ACP合成酶Ⅰ(FabB)活性，可使大肠杆菌fabB突变株产生少量的不饱和脂肪酸. 上述结果表明，FabF类酶 (FabF like enzyme) 同样可以具有β酮脂酰ACP合成酶Ⅰ(FabB) 活性.]]> 2007/8/13 0:00:00 1136true P < 0.05)而GPX活性不变，CAT/CuZn-SOD和GPX/CuZn-SOD活性比率下降(P < 0.05)，同时MDA含量升高(P < 0.05). 增生性瘢痕、瘢痕疙瘩之间比较均无差异. 上述结果表明，在病理性瘢痕中，氧化酶XO，抗氧化酶CuZn-SOD、CAT以及GPX的活性改变可能是引起活性氧水平升高的原因之一，在抗氧化剂选择上，CAT可能较为合理.]]> 2007/5/8 0:00:00 1135true 2007/6/11 0:00:00 1134true 2007/8/13 0:00:00 1133true 2007/8/13 0:00:00 1132true 2007/5/16 0:00:00 1131true Nicotiana glutinosa)的影响. 首先利用PCR方法导入突变位点，构建了2b蛋白不表达的人工突变体Fny-CMVΔ2bpro，然后通过平行接种野生型Fny-CMV和Fny-CMVΔ2bpro，分析二者侵染后心叶烟的症状表现、叶绿素含量、光合速率以及叶绿体超微结构变化. 结果显示：接种30天，Fny-CMV侵染的心叶烟表现重花叶、畸形和矮化症状，植株的光合速率和叶绿素含量显著降低，叶绿体形态和结构发生明显病变. 但是，Fny-CMVΔ2bpro侵染的心叶烟植株仅表现轻微花叶或不表现明显症状，与健康对照相比，其光合速率和叶绿素含量没有显著差异，叶绿体形态和结构亦未出现明显病变. 由此可见，野生型病毒侵染导致的相对低的光合速率和叶绿素含量，与2b蛋白引起的叶绿体形态和结构的破坏有一定的相关性. RNA杂交分析结果显示：2b蛋白的致病性与CMV子代RNA在寄主体内的积累量有关，不表达2b蛋白使得CMV基因组 RNA1和RNA2含量显著下降，其亚基因组RNA4 (编码CP蛋白)含量降低尤为显著.]]> 2007/4/24 0:00:00 1130true 2007/5/8 0:00:00 1129true 2+染色技术、激光共聚焦显微镜技术及5种信号阻断剂，SB203580(p38MAPK特异抑制剂)、PD98059 (MEK-1/2MAPK特异抑制剂)、LY294002(PI3Ks特异抑制剂)、细胞松弛素B(微丝结构阻断剂)、EGTA (Ca2+螯合剂)，探讨力学信号的基本传导途径. 结果显示：3%的拉伸应变能明显提高细胞内Ca2+水平；细胞微丝结构破坏后，延迟了3%拉伸应变对细胞内Ca2+水平增加的影响；细胞外Ca2+螯合后，拉伸应变不能促进细胞内Ca2+水平的升高，该结果提示，拉伸应变对细胞内Ca2+水平的影响主要通过细胞外Ca2+的内流实现. 5种信号阻断剂能完全阻断干细胞向成骨细胞分化过程中关键基因骨钙蛋白 (osteocalcin，OCN)和OSX mRNA的表达. p38MAPK途径、MEK-1/2MAPK途径被阻断后， 拉伸应变激活了OCN和Osterix(OSX，与成骨细胞分化相关的关键基因) mRNA的表达；PI3Ks途径阻断后， 拉伸应变部分激活了OCN和OSX mRNA的表达；细胞微丝破坏及胞外Ca2+螯合后， 拉伸应变不能促进OCN和OSX mRNA的表达. 上述结果表明：力学信号通过Ca2+信号、细胞微丝结构以及PI3Ks信号途径引起细胞的应答反应和生物学效应.]]> 2007/6/22 0:00:00 1128true FCU)作为序列特征，主要因为它既包含了基因密码子使用偏性的信息，也包含了基因所编码蛋白的氨基酸组成信息，支持向量机利用这些信息进行水平转移基因分析和预测，可以提高预测的准确性. 另外，提出了基于分链的水平转移基因预测新方法，即将细菌基因组前导链和滞后链上的基因区别对待，分别进行水平转移基因预测. 结果显示，基本预测方法要优于目前预测结果最好的Tsirigos 等提出的基于八联核苷酸频率的打分算法，命中率的相对提高率最高达31.47%，而基于分链的方法对水平转移基因的预测取得了更好的结果.]]> 2007/5/23 0:00:00 1127true 2007/5/15 0:00:00 1126true 2007/3/20 0:00:00 1125true P < 0.01)，且显著低于DNA四价苗和BCG组(P < 0.05). 3次免疫后，BCG加强组外周血中CD4+ 和CD8+T淋巴细胞显著增多(P < 0.05)；经4种抗原分别刺激，BCG加强组脾细胞产生的抗原特异性IFN-γ和IL-2水平显著高于其他免疫组，其中Ag85B抗原诱导产生的IFN-γ浓度为1 250 ng/L，IL-2浓度为230 ng/L，分别是DNA四价苗组的1.6，1.7倍(P < 0.05)，是BCG组PPD诱导产生相应细胞因子浓度的2.6倍和2.2倍(P < 0.05)；此外，BCG加强组肺脏中分泌穿孔素的淋巴细胞数量也显著增加(P < 0.05). 结果表明，DNA初发免疫、BCG加强免疫法能显著提高小鼠CD4+，CD8+T细胞介导的免疫应答，增强小鼠抗结核杆菌感染能力，是提高结核病疫苗免疫效果的新途径.]]> 2007/5/31 0:00:00 1124true +/VEGFR-2+，进一步传代培养，流式细胞术鉴定CD133+/VEGFR-2+/CD34+细胞纯度达70%以上. 传代细胞可在体外形成血管样结构，并表达内皮细胞特异性标记物vWF. 结果表明通过微孔法能成功地从大鼠骨髓分离到EPCs.]]> 2007/5/24 0:00:00 1123true 2007/4/13 0:00:00 1122true 2007/5/28 0:00:00 1121true squint过量表达、缺失Nodal信号的MZoep突变体或野生型30%外包期胚胎的RNA与Affymetrix斑马鱼寡核苷酸芯片杂交. 发现与野生型样本相比，在squint 过量表达的样本中，265个转录本的表达显著增强 (log2 ratio＞1)，111个转录本的表达显著减弱 (log2 ratio＜－1)；在MZoep样本中，表达显著增强的 (log2 ratio＞1)转录本有1 495个，表达显著减弱 (log2 ratio＜－1) 的有550个. squint 过量表达使26个转录因子基因的表达增强，11个转录因子基因的表达减弱；另一方面，MZoep突变体中表达增强的转录因子基因为69个，表达减弱的转录因子基因为30个. 这些结果为进一步研究Nodal信号的转导机理和生物学功能提供了有益的数据.]]> 2007/5/15 0:00:00 1120true 2007/4/23 0:00:00 1119true 2007/5/22 0:00:00 1118true C.elegans中最小的小分子热休克蛋白家族成员HSP12.1具有类分子伴侣活性，以胰岛素、乙醇脱氢酶和溶菌酶做底物发现HSP12.1能够一定程度地抑制底物的热聚集，虽然这种活性较一些经典的分子伴侣蛋白(线虫中的HSP16.1)要低. 与此不同，另外3种和其分子质量相近的sHSP12s (HSP12.2、HSP12.3和HSP12.6)却没有检测出这样的类分子伴侣活性，虽然它们在一级结构上有很高的相似性. 另外，在大肠杆菌中表达HSP12.1蛋白能够提高细菌在高温环境下的生存率，45℃处理后的生存率比未表达HSP12.1的菌高4倍左右，不过在线虫中是否发挥同样的功能还不是很清楚. 从研究结果来看，C端“尾巴”结构域对sHSP发挥类分子伴侣活性不是必要的，在HSP12.1中没有C端“尾巴”结构域也有类分子伴侣活性就证明了这一点. N端结构域可能在发挥类分子伴侣活性中发挥比较重要的作用，当然α-crystallin结构域也可能参与到发挥这样的功能当中.]]> 2007/5/16 0:00:00 1117true 2007/5/29 0:00:00 1116true E.coli BL21 (DE3) plysS，得到的转化子经IPTG诱导后获得可溶性表达，并经蛋白质印迹检测进一步鉴定.表达产物经Ni2+亲和纯化层析、脱盐后在原代培养的大鼠皮质神经元进行生物学活性检测，结果显示，TAT PTD-Ngb融合蛋白可以转运入皮质神经元内，在48 h内可检测到其存在，并能提高缺氧条件下皮质神经元存活率、减少缺氧诱导的皮质神经元的凋亡. 这一结果为进一步研究TAT PTD-Ngb的神经保护机制提供了线索，并可能为神经系统疾病尤其是脑血管疾病、神经系统退行性疾病提供了一个新的治疗策略.]]> 2007/4/4 0:00:00 1115true 2007/5/16 0:00:00 1114true ahyI，ahyR的突变菌株，来系统分析嗜水气单胞菌AH-1Ⅲ型分泌系统基因，揭示它们由QS系统调控. 在ahyI突变菌中，TTSS分泌效应因子(effector) aexT 量显著提高.通过构建LacZ-TTSS基因启动子融合表达，进一步表明QS系统负调控编码TTSS 组分的基因.]]> 2007/5/29 0:00:00 1113true 2007/5/21 0:00:00 1112true Arg和pchp53Pro；脂质体2000转染肝癌细胞株Bel-7402；24 h后利用荧光显微镜以及流式细胞仪检测GFP的表达；RT-PCR、蛋白质印迹检测p53基因的表达；利用Hoechst 33258、 Annexin V/PI染色，检测p53促使肿瘤细胞的促凋亡情况. 结果表明：GFP荧光表达载体在Bel-7402细胞中能有效表达；RT-PCR及蛋白质印迹检测到精氨酸型和脯氨酸型p53 基因在Bel-7402细胞内表达；Hoechst 33258染色及Annexin V/PI染色检测细胞凋亡实验没有得到明显的细胞凋亡结果. 结果表明：实验所构建的肿瘤抑制载体在肝癌细胞Bel-7402能有表达，并能形成外源性p53蛋白，但没有检测到明显的p53促使肝癌细胞调亡的结果. 这可能与p53对hTERT的负调控作用有关.]]> 2007/4/16 0:00:00 1111true OR 1.57；95% CI，1.09～2.27；P = 0.016). 在对性别进行分层后的联合分析中，在男性中经过调整后的比值比具有弱显著性水平：在血管紧张素转换酶基因的DD基因型中，TT对CC的比值比是0.11；95% CI，0.01～0.99；P=0.049；在G蛋白beta3亚基基因的CC+CT基因型中，DD/ID对Ⅱ的比值比是1.52；95% CI，1.01～2.29；P = 0.047. 结果暗示，血管紧张素转换酶基因或附近的某个基因是具有男性性别倾向的高血压易感侯选基因，同时，在血管紧张素转换酶基因基因的D等位基因和G蛋白beta3亚基基因的825C等位基因之间，可能存在具有上位效应的基因-基因相互作用.]]> 2007/4/6 0:00:00 1110true ↓CGG序列更容易甲基化. 由此可以推测，不同剂量的高半胱氨酸引起细胞损害效应的机制也不同，在低、中度高同型半胱氨酸血症，高半胱氨酸主要通过干扰高同型半胱氨酸的代谢途径影响基因表达表型修饰，在高度高同型半胱氨酸血症可能氧化应激、凋亡、炎症等发挥了更重要的作用.]]> 2007/4/23 0:00:00 1109true 2007/4/12 0:00:00 1108true 2007/4/10 0:00:00 1107true 2007/4/17 0:00:00 1106true GhPRP3和GhPRP5在10 dpa 纤维中特异表达，而GhPRPL在子叶中优势表达. GhPRP4 和 GhPRP6 在所分析的组织中都有表达，GhPRP4 mRNA在下胚轴中最丰富，在花药中次之，而GhPRP6在10 dpa纤维中表达最强，在10 dpa胚珠中次之. 此外，GhPRP3，GhPRP5基因表达受纤维发育调节，表明它们可能在棉纤维发育中起重要作用.]]> 2007/4/17 0:00:00 1105true 7000修饰的PLL-EGF，PEG20000修饰的PLL-EGF对表皮生长因子受体(EGFR)的结合和解离速率，评价PEG修饰对PLL-EGF靶向功能呈现的影响. 结果表明，PEG7000的修饰降低了EGF和EGFR之间的结合速率，提高了解离速率，整体减弱了靶向分子的靶向结合能力. PEG20000的修饰进一步减弱靶向分子功能的呈现. 因此在进行靶向型聚阳离子基因输送系统设计时，考察PEG修饰对靶向结合能力的影响程度非常重要. 该研究结果也对其他基因载体系统的设计提供必要的参考.]]> 2007/4/16 0:00:00 1104true 2007/4/20 0:00:00 1103true 2007/4/10 0:00:00 1102true P < 0.05)；裸鼠体内研究，接种pcDNA3.1(＋)/STGC3/CNE2细胞实验组的移植瘤体积和重量均小于对照组，差异有显著性意义(P < 0.05)；实验组中，雌性裸鼠组移植瘤体积和重量均小于雄性组，差异有显著性意义(P < 0.05)，雌性裸鼠组移植瘤生长最慢，而对照组中雄性与雌性裸鼠组间瘤块的差异无显著性意义(P > 0.05)；接种pcDNA3.1(＋)/STGC3/CNE2细胞的雌性裸鼠组移植瘤，阻滞于G0/G1期细胞数大于其他各组(P < 0.05). 上述体内外研究结果显示，雌激素可能具有增强STGC3基因对CNE2细胞系的生长抑制作用.]]> 2007/4/6 0:00:00 1101true P < 0.01). 此体内实验研究结果与前期体外实验结果一致，进一步证明STGC3基因对肿瘤细胞生长具有抑制作用.]]> 2007/3/27 0:00:00 1100true 2007/3/21 0:00:00 1099true 2007/3/20 0:00:00 1098true 0TFPI、m1TFPI和m2TFPI. 将上述4种TFPI cDNA与表达质粒pPic9连接，转染大肠杆菌，通过PCR和DNA测序确认重组质粒，转染酵母细胞GS115，甲醇诱导表达重组蛋白. 采用层析方法纯化TFPI重组蛋白，用 125I标记重组蛋白，静脉注射给药，比较四者在SD大鼠体内血浆代谢清除速度. 用底物显色法测定重组蛋白抑制凝血因子Xa(Fxa)的活性，比较各株TFPI重组蛋白突变体在体内、体外对FXa的抑制作用及肝素对各株TFPI重组蛋白功能的影响. 结果显示，相比野生型TFPI重组蛋(mTFPI)而言，3株羧基端突变体m0TFPI、m1TFPI、m2TFPI在SD大鼠体内血浆代谢清除时间均有不同程度延长，其生物代谢半衰期分别是mTFPI的1.5倍、1.9倍和大于2倍，与m-TFPI相比，3个rTFPI突变体在体内、体外抑制FXa的作用无明显减弱，与肝素的结合能力及协同能力也无明显减弱. 结果表明，m0TFPI、m1TFPI和m2TFPI在生物半衰期得到明显延长的同时，仍保持良好的抑制Fxa的生物活性.]]> 2007/3/2 0:00:00 1097true 2007/3/27 0:00:00 1096true 2007/3/21 0:00:00 1095true 2007/3/9 0:00:00 1094true 6 U/mg的水平，且A的活性大于B的活性. 上述结果初步表明设计的合理性，为其进一步的开发和应用奠定了基础.]]> 2007/3/20 0:00:00 1093true 2007/3/27 0:00:00 1092true 2007/3/19 0:00:00 1091true XhoⅠ/ClaⅠ双酶切以及DNA序列分析验证目的基因；利用脂质体转染技术将pLNCX2-SelS或pLNCX2转染至人脐静脉内皮细胞(ECV304细胞)，RT-PCR检测重组基因SelS的表达；MTT方法检测转染后过氧化氢(H2O2)对内皮细胞增殖能力的影响；硫代巴比妥酸法测定暴露于H2O2中不同转染组细胞脂质过氧化产物丙二醛含量. 结果表明：成功构建真核表达载体pLNCX2-SelS；转染后重组SelS mRNA表达水平是内源性水平的1.76倍；H2O2对ECV304细胞损伤后，高表达SelS组细胞活性增强、H2O2诱导产生的丙二醛减少. 上述结果表明，高表达SelS可保护内皮细胞免于H2O2诱导的细胞损伤，其作用机制与抗氧化有关.]]> 2007/3/27 0:00:00 1090true 10-dB值大和频率调谐曲线对称指数大于零的神经元，特征频率偏移到频率调谐曲线高频端的比例增加更为明显 (P < 0.01). 诱导特征频率完全偏移的时程和特征频率恢复的时程也与动物的年龄相关，随着年龄增长，诱导和恢复时程都明显延长(P < 0.05). 结果提示，大鼠听皮层神经元特征频率的可塑性与生后年龄相关，为深入研究中枢神经元功能活动可塑性的机制提供了重要实验资料.]]> 2007/3/27 0:00:00 1089true 412的衰减加快，这与金属阳离子加入到蓝膜溶液中时的现象是完全不同的(这个过程中M412的衰减是减慢的). 同时研究了pH和温度对无水肼与蓝膜之间相互作用的影响. 在无水肼加入到蓝膜溶液中时，重组反应的灵敏度是pH和温度依赖的. 在pH 4.8到pH 2之间，灵敏度随酸性的增加而降低. 在20～40℃之间，无水肼与蓝膜溶液的反应灵敏度随着温度的升高而降低.]]> 2007/3/2 0:00:00 1088true Opg基因组第二外显子序列剔除掉. 通过胚胎干细胞 (ES) 基因打靶获得了正确重组的ES细胞克隆，ES细胞显微注射后获得嵌合体小鼠，交配传代获得杂合子和纯合子小鼠. RT-PCR和蛋白质印迹实验结果显示，纯合子小鼠没有Opg基因的表达. 纯合子小鼠骨量丢失明显，骨生物力学指标明显下降，发生严重的骨质疏松，此外，还有50%以上的纯合子小鼠在早期出现动脉中层钙化. 小鼠破骨功能亢进，与此同时，成熟成骨细胞数量增加，矿化功能强于野生型. Opg基因缺失小鼠骨中钙和磷大量流失，而血清中水平没有变化，这提示钙磷代谢异常不是OPG缺失导致动脉钙化的原因. 对建立的Opg基因敲除小鼠模型进一步深入的研究，将有助于说明动脉钙化和骨质疏松症相互联系的分子机制，为防治骨质疏松症和动脉钙化的并发提供理论基础支持.]]> 2007/2/6 0:00:00 1087true 2007/2/8 0:00:00 1086true 1C亚单位，而无Cav1.3α1D亚单位的表达；利用全细胞膜片钳技术在NSCs上记录到了L-型钙电流，证明了NSCs所表达的L-型钙通道具有功能. 进一步对细胞进行药理学干预，发现L-型钙通道的激活不仅可以促进胚胎NSCs的增殖，而且使增殖的NSCs向神经元分化的比例显著增加. 以上结果表明，Wistar大鼠胚胎海马NSCs表达功能性的L-型钙通道；L-型钙通道参与了胚胎NSCs增殖和分化的调控.]]> 2007/2/8 0:00:00 1085true 2007/2/9 0:00:00 1084true GRE3基因为对象，检测酿酒酵母双链RNA介导的基因沉默效应. 以pESC-LEU为骨架，构建重组质粒psiLENT-GRE3并用于转化酿酒酵母YPH499. 用RT-PCR检测到诱导1 kb RNA双螺旋和136 bp loop结构引起的GRE3基因表达下调. 结果表明，双链RNA介导的基因沉默技术，能够用作降低酿酒酵母某一特定基因表达水平的工具. 并有助于理解芽殖酵母的RNA干扰现象.]]> 2007/2/8 0:00:00 1083true 2007/2/13 0:00:00 1082true topA+ gyrB225)细胞中被发现. 现在大肠杆菌DM800(topA－ gyrB225)细胞中也发现了这种结构，这说明超凝集DNA的形成与细胞内旋转酶活性降低有直接关系，而与拓扑异构酶Ⅰ的存在与否无关. 体外实验的结果显示，具有很强的正超螺旋松弛活性的拓扑异构酶Ⅳ可以将超凝集DNA完全松弛，这也证明质粒DNA的超凝集结构与超螺旋结构在细胞内是可以互变的. 使用原子力显微镜对分离到的pBR322 DNA超凝集结构进行分析，并与普通超螺旋进行比较，结果表明，超凝集DNA分子的结构发生了巨大的变化，其分子长度比正常超螺旋分子缩短了约30%，宽度和高度则增加了60%，结构更接近于A型DNA. 另外，原子力显微镜研究结果表明，氯喹的嵌入并非改变了超凝集DNA的超螺旋状态，而是使其打结并最终压缩成一团.]]> 2007/2/6 0:00:00 1081true 2007/2/12 0:00:00 1080true 2007/2/9 0:00:00 1079true 2的剪应力作用效果比0.5 N/m2明显，梯度变化的作用方式在作用效果上与最后一个梯度水平相当的恒定剪应力单独作用没有显著差异，在加载的24 h内剪应力对OPG、ODF表达的影响始终存在. 这种影响使得OPG/ ODF的平衡向着OPG占优的方向发展，这种变化意味着骨吸收会受到抑制，提示力学刺激可能通过OPG/ODF调控系统对骨代谢平衡进行调控.]]> 2007/2/12 0:00:00 1078true 2007/1/16 0:00:00 1077true 2007/1/16 0:00:00 1076true 2007/1/18 0:00:00 1075true 2007/1/15 0:00:00 1074true 2007/1/17 0:00:00 1073true smu.776基因编码一段含有385个氨基酸的蛋白质，其功能可能为依赖于腺苷甲硫氨酸的甲基转移酶. smu.776 的DNA片段被克隆到表达载体pET28a后，在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中过量表达得到很好的产量. 产物Smu.776蛋白通过Ni2+亲和柱和分子筛柱层析两步得到纯化. 采用悬滴气象扩散法得到了Smu.776蛋白的晶体. X射线衍射分辨率达到2.0 Å，晶体属单斜空间群C2，晶格参数为a=168.47 Å，b= 50.66 Å，c=53.96 Å，β=104.22°. 每个最小不对称单元内含有一个蛋白质分子，溶剂含量为51.3%.]]> 2007/1/16 0:00:00 1072true Staphylococcus epidermids) 是一种条件致病菌，SarA(Staphylococcal accessory regulator A)是该菌中一个全局性调控因子，它控制着细胞中许多与毒性相关的基因表达. 报道了SarA在转录水平直接调控atlE、lipA和zinC基因的表达. RT-PCR和lacZ报告基因的分析结果显示，在表皮葡萄球菌ATCC35984中，SarA对atlE (自溶酶基因) 表达起负调控作用，而对lipA (脂肪酶基因) 和zinC (膜相关锌金属蛋白酶基因) 的表达则有正调控作用. 生物信息学分析表明，SarA控制atlE，lipA和zinC 3种基因表达可能是通过与被调控基因上游的特定DNA序列的结合来实现的，该DNA结合区保守并富含AT碱基. 根据已报道的金黄色葡萄球菌中SarA的结合位点序列，利用Omiga软件分析并推测了SarA结合atlE，lipA和zinC的可能区域. 基于SarA是一种多功能的毒素相关调控因子，结果提示，SarA能调控众多因子，可以作为防治表皮葡萄球菌感染的一个药物筛选靶点.]]> 2007/1/16 0:00:00 1071true 32P]ATP的放射性活度，探讨黄色黄素对重组人CK2全酶以及细胞内CK2活性的影响；采用多重RT-PCR检测CK2α、α' 和 β亚基的mRNA表达水平；Lineweaver-Burk作图法分析CK2的酶动力学机制. 发现黄色黄素能显著抑制重组人CK2全酶(IC50=0.86 μmol/L)以及HL-60细胞内的CK2活性，其作用效果均强于阳性对照TBB. 另外，黄色黄素作用2h可使CK2α和α'亚基的mRNA表达下降，对β亚基则无明显的影响. 酶动力学分析表明，黄色黄素与ATP呈竞争性抑制CK2的活性，与酪蛋白则呈混合性抑制CK2的活性.研究说明，黄色黄素是一种有效的细胞内蛋白激酶CK2抑制剂.]]> 2007/1/17 0:00:00 1070true 2007/1/16 0:00:00 1069true Streptococcus mutans) 是最主要的龋齿致病菌. 其中Smu_195c为一个约10 ku (86个氨基酸) 的蛋白质，序列比对结果显示，它没有包含保守的结构域，功能也是未知的. 为揭示其功能，在大肠杆菌BL21 (DE3) 中表达了N端结合了6个His的编码Smu_195c 的DNA片段. 通过悬滴法得到了两种不同晶系的晶体. 第一种属于空间群P6122 或 P6522，晶格参数为a = b = 62.93 Å, c = 90.63 Å, γ = 120°；第二种属于空间群P41212 或 P43212，晶格参数为 a = b = 57.97 Å, c = 103.51 Å. N端带有His的蛋白质长出的晶体属于第一种，而切掉N端的6个His后的蛋白质长出的晶体两种都有.]]> 2007/1/16 0:00:00 1068true 2007/2/6 0:00:00 1067true 2007/1/16 0:00:00 1066true 2007/2/6 0:00:00 1065true 2007/1/15 0:00:00 1064true P值均小于0.05. 进一步构建HSP70真核重组质粒并瞬时转染A549细胞后，能显著增加A549细胞中HSP70表达，同时采用MTT和流式细胞术及基因组DNA琼脂糖凝胶电泳检测发现，HSP70过表达能显著抵消Act D所致细胞增殖抑制及凋亡，转染HSP70重组质粒组与转染空载体组相比P值小于0.05. 上述结果提示，HSP70在肺腺癌组织中高表达，高表达的HSP70在降低肺腺癌细胞对Act D的敏感性及促进癌细胞增殖与抑制凋亡等方面发挥了重要作用.]]> 2006/12/14 0:00:00 1063true 2007/1/15 0:00:00 1062true 1～10) mRNA在人胸膜间皮细胞上的表达. 成功建立人胸膜间皮细胞体外培养模型，鉴定证实为间皮细胞，人胸膜间皮细胞上AQP1～10 mRNA均有表达，AQP1、AQP9、AQP10表达丰富. 人胸膜间皮细胞存在AQP1～10 mRNA的表达，结合已知水通道蛋白的功能，证实人胸膜间皮细胞参于胸腔内液体转运.]]> 2007/1/15 0:00:00 1061true 2007/1/15 0:00:00 1060true 2006/12/13 0:00:00 1059true 10 gc的8型重组病毒载体注射到小鼠体内，2周后，小鼠血浆中有明显的基因表达，1个月至2个月期间多数小鼠表达量达到高峰，然后表达水平下降，直到4个月后血浆中尚维持明显的表达量. 凝血实验显示，表达的人凝血因子Ⅸ具有生物活性. 免疫组化实验显示，病毒载体已进入体内多组织器官中表达. 说明8型AAV病毒载体经腹腔注射后已经血液循环运送到其他组织，并在肌肉、肝脏、肾脏和心脏等器官明显表达，表达产物具有凝血活性.]]> 2007/1/15 0:00:00 1058true L. diolivorans基因组DNA中扩增出了假定的二醇脱水酶激活因子基因 (gldG、gldH) 全序列，补全了GenBank 中该基因序列的未知部分，构建了表达质粒pSE-gldGH，以E. coli BL21为宿主，进行诱导表达. 表达产物的变性与非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明：gldGH表达产生 68 ku、13 ku两个蛋白质，它们经金属螯合亲和层析与凝胶过滤得到共纯化，纯化产物即假定的激活因子为分子质量约325 ku的蛋白质聚合体，由这两个蛋白质以等摩尔量组成，因此假定的激活因子可能为α4β4亚基结构. 以L. diolivorans二醇脱水酶为对象，进行激活实验，结果证实gldGH表达产物具备二醇脱水酶激活因子的功能.]]> 2007/1/15 0:00:00 1057true 2007/1/15 0:00:00 1056true 2007/1/15 0:00:00 1055true U2afbp-rs基因以及非印记基因eIF-4C基因表达量的变化，以探明小鼠卵细胞质对克隆胚细胞核中印记基因表达的调控．结果表明，克隆胚供体核基因组DNA在核移植后并没有发生主动去甲基化．孤雌桑椹胚核移植后重组胚中U2afbp-rs基因和eIF-4C基因的表达水平要显著低于对照孤雌胚，但其表达量变化规律与对照孤雌胚相同，说明了卵细胞质对供体核印记基因的表达具有一定的调控作用．]]> 2007/6/11 0:00:00 1054true PRSS1) 5个外显子进行测序，并分析其各自的临床特征．在4例胰腺炎患者中均出现了PRSS1基因杂合突变，但两家系PRSS1基因突变的位点不同，且临床表现差异较大，其中家系1出现6例糖尿病患者且发病年龄较家系2明显延迟，平均发病年龄为29岁，分析其PRSS1基因发现3号外显子336位碱基存在G→A杂合性突变，为中性突变，表达的氨基酸从赖氨酸(Lys)→赖氨酸 (Lys)，同时在同一外显子的361位碱基还存在另一个G→A杂合性突变，造成121位的丙氨酸 (Ala) 被苏氨酸 (Thr) 所取代，胰蛋白酶原的空间结构发生改变，其与抑制因子的结合位点消失，“保护失败”而产生有活性的胰蛋白酶，造成胰腺自身的消化．而家系2未发现糖尿病患者，其胰腺炎患者的血清肿瘤标志物不增高，先证者 (Ⅲ8) 在胰腺炎发病过程中表现为CD4+T /CD8+Tcell和乙肝表面抗体 (anti-HBs) 随病程进展逐渐降低，而Ⅲ7不表现出此现象，分析其PRSS1基因发现3号外显子361位碱基同样存在G→A (c.361 G→A) 突变，而且在415位还存在一个杂合性突变点T→A(c.415 T→A)，其中c.415 T→A不存在于Ⅲ7．胰蛋白酶原基因存在多种形式的突变，而且与临床表型相关．]]> 2007/12/19 0:00:00 1053true PIC=0.621～0.640)，圈养大熊猫遗传多样性水平(a群体：A=5.48，Ho=0.475，He=0.696；b群体：A=5.24，Ho=0.453，He=0.719；圈养野生群：A=3.80，Ho=0.514，He=0.725)高于6个濒危物种(Ho=0.210～0.390，He=0.150～0.430)但低于3个非濒危物种(Ho=0.620～0.710)，圈养大熊猫遗传多样性水平都保持在较高水平，但圈养群遗传多样性水平与圈养野生群相比有所降低．F统计量及基因流Nm分析结果证明，a、b两群体间遗传分化程度不高(Nm=2.610，Fst=0.087 4 ，Fit=0.411 6)，存在个体交换和一定程度的近交，b群体近交程度高于a群体(a群体Fis=0.322 1，b群体Fis=0.398 3)．因此，现阶段圈养大熊猫的管理重点是避免近交和遗传多样性丧失，将圈养大熊猫种群作为同一管理单元，把纠正大熊猫系谱中的错误、科学选择大熊猫个体进行群体间交流作为关键点，利用微卫星技术保持和提高大熊猫种群的遗传多样性水平．]]> 2007/7/5 0:00:00 1052true －)对大肠杆菌的失活作用和形貌变化的影响．实验所用的O－ 自由基由新研制的O－ 发生器制备, 其中[Ca24Al28O64]4+·4O－ (缩写为C12A7-O－)材料是O－ 发生器中发射O－ 的部分． 实验结果表明, 大肠杆菌的失活率随O－ 强度的变化而变化，在O－ 强度为1.5 μA /cm2 时，细胞的死亡率大大加强，作用120 min后，细胞死亡率超过3个对数量级．通过场发射扫描电子显微镜观察发现O－ 对细胞结构具有破坏作用．通过丙二醛 （MDA）的形成证实了O－ 诱导大肠杆菌发生脂质过氧化反应过程的存在，这可能是大肠杆菌死亡的潜在原因． 当1.5 μA /cm2的O－ 流通入到大肠杆菌悬浊液后，丙二醛浓度开始升高，15min后达到最高值1.2 μmol/g，然后缓慢下降．结果显示，原子氧自由基阴离子能失活大肠杆菌，诱导脂质过氧化反应，这对发展一种新的净化微生物污染方法和研究微生物与原子氧自由基阴离子相互作用具有潜在的意义．]]> 2007/6/8 0:00:00 1051true Glycine soja) 和3个栽培大豆 (Glycine max) 的种子贮藏蛋白差异情况．结果发现，在考马斯亮蓝染色的双向电泳pH 4～7的胶上，经过PDQuest图像分析软件平均可检测到550个左右的蛋白质点．进一步分析发现，表达量变化2.5倍以上的点有10个，其中大部分蛋白质仅在栽培大豆中检测到．对这10个蛋白质点进行了胶内酶解，用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定均得到了肽质量指纹图谱．搜索大豆UniGene库和NCBI库共鉴定出5个蛋白质，主要是与大豆抗性、抗营养以及种子萌发相关的蛋白质，包括大豆血凝素，种子成熟蛋白PM24，糖结合蛋白，胰蛋白酶抑制剂p20以及成熟多肽．对这些蛋白质可能的作用进行了讨论．]]> 2007/7/2 0:00:00 1050true +/H+ 反向运输体可将细胞质中的Na+转运到液泡内储存，以减少胞内Na+的毒性.但木本植物如杨树是否有同样的机制目前还不清楚．以欧洲山杨的愈伤组织为材料，捣碎破碎愈伤组织细胞，经过差速离心和不连续蔗糖梯度离心得到纯化的欧洲山杨液泡微囊．通过液泡V-ATPase建立质子梯度，该液泡能够利用此梯度调控Na+的转运，表明液泡膜上存在Na+/H+ 反向运输体活性 (表观米氏常数Km是11.4 mmol/L)．Na+/H+ 反向运输体的抑制剂——氨氯吡嗪咪能明显抑制转运体的活性．该Na+/H+ 反向运输体也可以转运K+，但亲和能力比Na+低30%．该结果首次证明木本植物的液泡膜上存在Na+/H+ 反向运输体．初步功能研究表明，愈伤组织在盐胁迫条件下，Na+/H+反向运输体活性明显下降，提示该机制可能与山杨不耐盐有关．]]> 2007/6/7 0:00:00 1049true 2+浓度, 免疫沉淀法测定Cdk-5活性, 放射性配体结合实验检测PKA的活性，蛋白质印迹检测Tau蛋白磷酸化的水平．结果提示：在DM大鼠海马神经元, Ca2+浓度升高，Cdk-5及PKA活性升高，Tau蛋白在Ser198/Ser199/Ser202和Ser396/Ser404位点的磷酸化增强．Cdk-5的特异性抑制剂roscovitine可降低DM大鼠Cdk-5活性，但不能降低PKA活性，使Tau蛋白在Ser198/Ser199/Ser202位点磷酸化水平降低，但不降低Ser396/Ser404位点的磷酸化，roscovitine处理正常大鼠后，上述酶的活性及Tau蛋白的磷酸化无明显变化．首次从整体水平上证实DM大鼠海马Cdk-5及PKA活性升高，协同促进Tau蛋白在Ser198/Ser199/Ser202位点和Ser396/Ser404位点的磷酸化，神经元内游离Ca2+浓度升高可能起重要作用．]]> 2007/5/29 0:00:00 1048true 2007/8/9 0:00:00 1047true Danio rerio)是生物学领域中公认的研究脊椎类生物的模式生物．胸苷酸合成酶(thymidylate synthase, TS)是DNA从头合成的限速酶，多年来一直作为肿瘤化疗的重要靶酶．前期的研究表明，人和大肠杆菌中TS能与自身的mRNA结合，在翻译水平上具有反馈抑制自调控现象．斑马鱼作为药物模型的研究已成为热点研究领域，为了探讨斑马鱼的胸苷酸合成酶的调控规律，以及与人TS的相关性，利用原核表达，纯化获得高均一性斑马鱼TS蛋白，采用凝胶迁移研究了TS和其mRNA的体外结合，采用免疫共沉淀：RT-PCR技术研究了它们在体内的相互作用，实验结果表明，斑马鱼的TS在体内外均与自身的mRNA存在特异性的相互作用．研究说明，斑马鱼和人的TS具有高度生物学过程相关性，为构建斑马鱼抗肿瘤药理模型提供了理论基础．]]> 2007/9/4 0:00:00 1046true 2007/6/11 0:00:00 1045true 2007/9/12 0:00:00 1044true 2007/6/7 0:00:00 1043true MRF4是肌肉发生调节因子家族的一员，其对肌肉的发育有重要的调节作用．对于养殖鱼类，生长速度是很重要的经济指标，而肌肉的发育对鱼类的生长非常重要．制备了MRF4的多克隆抗体以分析在鱼类中MRF4的功能．通过采用大肠杆菌表达系统及pET-30表达载体对牙鲆肌肉发生调节因子MRF4进行了体外重组表达．所得到的MRF4重组蛋白为可溶性的．在自然条件下，经金属离子螯合柱纯化后，得到了电泳纯的融合蛋白，通过免疫新西兰大白兔制备MRF4的多克隆抗体．蛋白质印迹分析显示：重组蛋白能被抗组氨酸标签的抗体及所制备的多克隆抗体识别，而且这一多克隆抗体能检测到内源性的MRF4蛋白，从而进一步证明了抗血清中含有MRF4的抗体．MRF4融合蛋白的成功表达及其多克隆抗体的制备为进一步深入研究其在牙鲆肌肉发育过程中的分子机制奠定了基础．]]> 2007/5/16 0:00:00 1042true 2007/5/23 0:00:00 1041true 2007/5/31 0:00:00 1040true +细胞和HSC，经基因芯片杂交获得31个造血干细胞相关miRNAs，其中22个为低表达，9个为高表达；经实时定量RT-PCR验证miR-520h显著升高，CFC实验表明其可增加多种集落形成，具有促进HSC向祖细胞分化的作用．上述结果表明，人脐血HSC具有自身特征性miRNAs，参与并调控HSC生物学功能，为深入探讨miRNAs在造血系统发育中的作用打下基础．]]> 2007/9/12 0:00:00 1039true 2007/6/15 0:00:00 1038true 2007/5/22 0:00:00 1037true 2007/4/28 0:00:00 1036true lasRantisense并转化铜绿假单胞菌，经酶切、PCR及测序鉴定重组载体. RT-PCR检测LasB基因和LasI基因mRNA的表达，NAD法测定外毒素A的活性，紫外分光光度计测定绿脓菌素的产生水平. 用转化pUCP18/lasRantisense质粒菌株感染大鼠呼吸道并进行病理组织切片检查. PCR扩增出约720 bp片段，与GenBank (No：NC_002516)报道的基因片段大小一致，构建了LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense，并成功转化铜绿假单胞菌,且有效表达,使转化菌的毒力因子弹性蛋白酶、外毒素A和绿脓菌素表达水平均降低. 与标准株感染的大鼠比较，转化pUCP18/lasRantisense质粒菌株感染的大鼠支气管炎症明显减轻. 上述结果表明，LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense 可以降低铜绿假单胞菌的毒力.]]> 2007/5/29 0:00:00 1035true 2007/5/29 0:00:00 1034true Hind Ⅲ和BamHⅠ酶切位点的目的基因VEGF165，与pEGFP-C1构建重组质粒pEGFP-VEGF165，将PEG-PEI作为基因载体，与pEGFP-VEGF165通过自组装成DNA复合物，使其转染脐静脉内皮细胞(HUVEc)，测定发荧光细胞百分数获得转染率，利用ELISA、RT-PCR检测VEGF的表达，用MTT法考察VEGF165转染HUVEc后对内皮细胞生长的影响. 结果显示，形成PEG-PEI共聚物后可显著降低PEI的细胞毒性. 作为基因载体介导pEGFP-VEGF165转染HUVEc后，在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白表达，转染率与接枝PEG的量及N/P有关，PEG-PEI(5-25-1)在N/P=30时转染率达到最大值，比PEI显著提高. 转染后血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达及mRNA水平均有显著提高，且可有效地刺激内皮细胞增殖. 研究表明，PEG-PEI共聚物可做为基因载体，有效地介导pEGFP-VEGF165基因的传递.]]> 2007/10/22 0:00:00 1033true 2007/6/28 0:00:00 1032true 2007/4/13 0:00:00 1031true xynA和xynB序列设计引物，PCR扩增获得574 bp、594 bp的目的基因片段．两段DNA分别用EcoRⅠ/BamHⅠ、BglⅡ/HindⅢ酶切后，连接到载体pET-28a(+)的多克隆位点，构建了xynA和xynB融合表达载体pET-xynAB，即在木聚糖酶A和B之间引入了7个氨基酸的寡肽序列(GlyGlyGlySerGlyGlyGly)．将pET-xynAB转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导，SDS-PAGE检测到了一条约50 ku的特异性表达条带．Ni-NTA柱纯化后的特异性蛋白经8 mol/L脲素变性，梯度透析使蛋白质复性．酶学性质分析表明，该重组木聚糖酶的最适催化温度为50℃，最适pH值为4.4．在pH 2.4～5.4范围内，酶的相对活性都在75%以上，重组酶在80℃保温30 min还有近50%的残余酶活．不同种类的金属离子对重组酶的活力影响不同．]]> 2007/5/25 0:00:00 1030true 2007/5/9 0:00:00 1029true 2007/8/8 0:00:00 1028true P < 0.05，P < 0.01)．淋巴结转移性鼻咽癌、肺癌、结、直肠癌和喉癌组织中的NGX6 mRNA阳性率显著降低(P < 0.05，P < 0.01)．NGX6 mRNA阳性率与鼻咽癌、肺癌和结、直肠癌临床分期有关，临床Ⅱ期、Ⅲ期或Ⅳ期癌组织NGX6 mRNA阳性率明显低于其相应的临床Ⅰ期癌(P < 0.05，P < 0.01)．研究表明，鼻咽癌、肺癌、胃癌和结、直肠癌中存在低水平的NGX6 mRNA，NGX6 mRNA可作为鼻咽癌、肺癌和结、直肠癌侵袭、转移和临床进展预测的分子标志．]]> 2008/6/12 0:00:00 1027true 2008/6/12 0:00:00 1026true waf1的表达，抑制cyclin B1的表达，槲皮素诱导OE33细胞中GADD45β和14-3-3σ的表达，抑制cyclin B1的表达．采用荧光定量 RT-PCR和Western-blot进一步验证基因芯片的分析结果，并比较了6种化合物对上述基因mRNA表达水平和蛋白质表达水平的影响．结果表明，p21waf1、GADD45β、14-3-3σ和cyclin B1为介导黄酮和黄酮醇诱导KYSE-510和OE33细胞G2/M周期停滞的目标基因．]]> 2008/5/29 0:00:00 1025true Ihh以及Ptch1表达阳性细胞．发现骨骺损伤骨桥形成过程中，完全损伤区中心没有软骨细胞特异的因子Col2a1和 ColⅩ以及Ihh和Ptch1的表达，但是完全损伤区和周围正常软骨交界间存在次损伤软骨区，存在软骨细胞凋亡，有Col Ⅹ的表达，Vimentin检测发现，在此区和周围正常软骨间有正常肥大区软骨细胞异常分化而来的成纤维样细胞并形成软骨外膜样结构，次损伤区和软骨外膜结构逐渐被骨桥替代，在此过程中软骨外膜样结构存在Col1a1、Ptch1和Ihh的表达，提示Ihh可能参与骨桥形成过程．提出骨桥形成过程中损伤中心区域存在膜内化骨，边缘区域存在软骨化骨作用机制．]]> 2008/5/29 0:00:00 1024true P < 0.05)，LE组与其对照LC组相比，EEG的theta波段能量无明显差异(P > 0.05)；LTP检测显示，LE组与对照LC组相比，兴奋性突触后电位(EPSP)斜率升高( P < 0.01)；Fluoro-Jade-B染色显示，LE组与对照LC组相比，给予TBOA 2周后细胞变性明显增加．结果提示，癫痫持续状态后，海马神经元损伤，TBOA导致谷氨酸转运体功能障碍，加重癫痫所至神经元损伤，对海马区突触可塑性产生影响．]]> 2008/5/8 0:00:00 1023true wx2进行表位分析预测，PCR扩增基因中编码2个表位的片段W2b和W2a，成功构建新基因的单表位疫苗质粒pcDNA3-W2b、pcDNA3-W2a和双表位疫苗pcDNA3-W2b2a，接种小鼠，观察表位疫苗的免疫保护作用．将表位疫苗分别通过肌肉注射免疫小鼠，对照组注射pcDNA3空质粒．ELISA法检测血清IgG抗体水平，取脾细胞用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群．各组小鼠末次免疫后第4周每只小鼠经腹腔注射弓形虫速殖子500个，观察小鼠的生存时间．结果显示，pcDNA3-W2a2b双表位疫苗组小鼠血清IgG抗体水平显著高于对照组(P < 0.05)，且pcDNA3- W2a2b双表位疫苗组小鼠脾细胞CD4+T与CD8+ T淋巴细胞比值明显低于两单表位疫苗组，pcDNA3-W2a2b双表位疫苗组小鼠存活时间明显长于两单表位疫苗组(P < 0.05)．实验结果表明，弓形虫新基因wx2表位疫苗能够诱导小鼠产生抗弓形虫感染保护性免疫，并且弓形虫pcDNA3-W2b2a双表位疫苗的免疫保护性优于pcDNA3-W2b、pcDNA3-W2a两单表位疫苗．]]> 2008/6/19 0:00:00 1022true lfr (leaf and flower related mutant)，它在叶子和花的发育过程中表现出较明显的表型．为进一步研究该基因编码蛋白的生物学功能及其分子作用机制，构建了pGEX-2TGST∶LFR 融合蛋白重组表达载体，将重组质粒转化到工程菌中诱导表达菌体蛋白，经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，结果表明，融合重组蛋白成功获得了高效表达，分子质量在77 ku左右．重组蛋白经谷胱甘肽S-转移酶(GST)标签蛋白亲和层析法纯化，SDS-PAGE制备胶割胶富集，电洗脱法纯化后得到纯度较高的抗原．经对新西兰兔进行5次免疫，获得了多克隆抗血清．采用免疫吸附方法对抗血清进行了纯化，结果得到只识别LFR重组蛋白的抗血清．进一步提取拟南芥野生型及突变体的核蛋白，经蛋白质印迹检测，结果显示，在分子质量50 ku左右处出现特异的蛋白质条带，证明所制备的抗血清可以与拟南芥LFR蛋白特异性结合．]]> 2008/5/8 0:00:00 1021true 2·)，该过程中产生的O2·在高等植物光合作用活性氧自由基代谢中具有重要作用．莱茵衣藻光系统结构与高等植物非常相近．应用新型高特异性自旋捕获-ESR方法及四唑氮蓝还原法，首次在莱茵衣藻的类囊体膜和PS Ⅱ 中检测到O2·的生成，通过与有关菠菜的ESR实验结果对比发现两者的O2·产生分子机制可能极为相似．相比高等植物，单细胞莱茵衣藻具有结构简单、遗传背景清晰与基因组测序工作完备等诸多特点．因而，针对莱茵衣藻的O2·分析可能为深入研究高等植物光合系统中的活性氧代谢机制提供新的契机．]]> 2008/5/29 0:00:00 1020true 2008/5/29 0:00:00 1019true 2008/4/11 0:00:00 1018true 2008/8/20 0:00:00 1017true 2008/4/17 0:00:00 1016true P < 0.1)，接种密度越大，MSCs越容易生长，能够培养出MSCs的几率就越大，其次为细胞因子，添加细胞因子能有效地刺激MSCs的生长．在高接种密度的基础上，添加细胞因子IL-3(15 μg/L)和GM-CSF (5 μg/L)，可大大提高UCB-MSCs体外原代培养的成功率，从30%左右提高到90%以上．流式细胞检测结果显示，所分离培养的细胞表达间充质干细胞的抗原(CD13+、CD29+、CD44+、CD105+、CD166+)，不表达造血细胞的抗原(CD34-、CD45-、HLA-DR-)，并能够向成骨、软骨及脂肪方向分化，这与源于骨髓的间充质干细胞相一致．所建立的培养方法能够为UCB-MSCs的临床应用提供大量优质的种子细胞．]]> 2008/4/17 0:00:00 1015true 2008/4/8 0:00:00 1014true 2008/4/8 0:00:00 1013true 2008/6/12 0:00:00 1012true Xenorhabdus nematophila BP基因组粘粒文库中筛选出的一个对棉铃虫有较强口服杀虫活性的克隆．采用亚克隆结合primer-walking DNA测序技术对粘粒XnBP83的插入片段进行序列测定．该插入片段全长38 939 bp，其中包括5个与杀虫活性相关的tc类基因xptA1、xptB1、xptC1、xptA2、 xptD1．序列分析显示：a．插入片段中的xptD1不完整，与X. nematophila PMFI296 XptD1相应氨基酸序列有99%的相似性．b．BP xptA1读码框全长7 569 bp, 编码2 520个氨基酸，与PMF1296的XptA1氨基酸序列有98%的相似性, 两者在第2 200～2 223氨基酸区域连续有23个氨基酸不同．c．BP xptB1读码框全长3 051 bp，编码1 016个氨基酸，与PMF1296 XptB1氨基酸序列有98%的相似性，在第620～650氨基酸之间有28个氨基酸差异．d．BP xptC1读码框全长4 225 bp，编码1 408个氨基酸，与PMF1296的XptC1氨基酸序列有96%的相似性．在BP的第232氨基酸后插入了一个TAQRYLAK的氨基酸序列，在第627～646氨基酸区域内，有18个氨基酸不同． e．BP xptA2读码框全长7 574 bp，编码2 524个氨基酸，与PMF1296的XptA2氨基酸序列有90%的相似性，在BP品系XptA2的第788～855氨基酸和第1 630～1 784氨基酸有两个明显变异区．将XnBP83培养物上清和沉淀饲喂棉铃虫、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾和粉纹夜蛾，结果表明XnBP83对所测昆虫有广谱杀虫活性．]]> 2008/6/12 0:00:00 1011true 8的初级噬菌体抗体库，全长ScFv基因的插入率为80%．用人肝癌细胞系HepG2和人肝细胞系QSG-7701对抗体库进行三轮正负淘选和富集后，从中随机挑取533个克隆进行ELISA筛选，得到179个阳性克隆，阳性率为33.6%．将179个阳性克隆进一步进行其他细胞系的鉴定，发现克隆A82对肝癌细胞系HepG2、人胚肾上皮细胞系HEK293呈强阳性反应，免疫组织化学结果显示与人肝细胞癌组织有特异性反应，而不与正常肝组织反应．且A82的相对亲和力为2.4 mol/L，解离常数Kd为5.32×10-9 mol/L，显示其亲和力较高．对克隆A82进行测序分析，结果表明：A82全长742bp，含linker cDNA序列45 bp，重链可变区基因与人胚系IgVH3-23有94.3%的同源性，轻链可变区基因与人胚系IgV4-2有94.9%的同源性，V-D-J分别属于VH3-23-D2-21-JH6 - linker-V4-2-JL2．由上述结果可见， 应用体外抗原致敏方法和EBV转化技术联合噬菌体抗体库技术，构建了库容量达1×108的全人源抗肝癌单链抗体库，通过细胞ELISA和免疫细胞化学鉴定，获得的噬菌体抗体克隆A82具有较强的特异性，为肝癌的临床诊断及导向治疗奠定了基础．]]> 2008/6/12 0:00:00 1010true 2008/4/17 0:00:00 1009true 2008/1/8 0:00:00 1008true 2008/1/8 0:00:00 1007true P < 0.01)．利用放线菌素D阻断RNA转录后，每隔2 h从稳定转染的HEK293细胞中提取总RNA，用RNA印迹分析GFP mRNA的稳定性．结果显示GFP-AUR mRNA较GFP mRNA不稳定．这些结果提示，在 SDCT2β 3′非翻译区的AU富含区内存在基因表达负调控区，该区可降低mRNA的稳定性、促进mRNA的降解，从而在转录后水平调控基因的表达．]]> 2008/4/17 0:00:00 1006true 2008/5/29 0:00:00 1005true PRMT5构建到pGEX-4T-1表达载体上，所得到GST标签的重组蛋白可溶性很低．为此，通过在其N端缺失不同氨基酸序列来增加其表达量，而且其中有一个缺失突变体的活性并没有发生改变．同时，还发现PRMT5 N端的前15个氨基酸对其甲基转移酶的催化活性很重要．]]> 2008/4/8 0:00:00 1004true -/-小鼠骨髓内皮祖细胞的动员作用及其增殖、迁移和黏附的影响．12只8周龄雄性apoE-/-小鼠随机分为AMD3100组(2.5 mg / (kg·2d))和对照组(PBS 0.1 ml/2d)，高脂高胆固醇饲料喂养12周后，差速贴壁法结合微孔法分离培养小鼠骨髓细胞，免疫荧光鉴定CD133/VEGFR-2 双阳性细胞为内皮祖细胞；MTT比色法、Transwell、黏附试验分别检测细胞的增殖、迁移和黏附能力；通过计数典型内皮祖细胞克隆形成单位，观察次级集落单位的大小及细胞密度，检测各组内皮祖细胞的克隆形成能力；RT-PCR和Western blot 检测内皮祖细胞上CXCR4 mRNA和蛋白质表达水平．与对照组比较，AMD3100组骨髓源性内皮祖细胞的增殖、迁移、黏附和克隆形成能力均显著低于对照组，其CXCR4mRNA和蛋白质表达均显著低于对照组．结果表明：持续注射AMD3100可抑制骨髓源内皮祖细胞的增殖、迁移、黏附和克隆形成能力，并下调CXCR4的表达．]]> 2008/4/8 0:00:00 1003true IK)电流并使其激活电压曲线向超极化方向移动．碳酸锂(50 μmol/L)可以抑制PDBu的反应．进一步的研究表明，预先加入MEK/ERK抑制剂U0126(20 μmol/L)，碳酸锂不能逆转PDBu对IK的作用．因此，PKC和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/ERK级联反应通路可能在钾离子通道的磷酸化调节中起作用．另外，AC-cAMP 和GC-cGMP的交互作用也可能参与碳酸锂对PKC激活作用的调节，成为其神经保护作用的机制之一．]]> 2008/4/17 0:00:00 1002true 2008/5/29 0:00:00 1001true 2O3)是中国传统中药砒霜的主要有效成分，最早应用于血液系统肿瘤的治疗，随后研究表明其对实体瘤也具有抑制细胞增殖并诱导凋亡的作用．早期研究发现，1.0 μmol/L的As2O3可以体外诱导骨肉瘤细胞系MG-63细胞凋亡，进一步的cDNA芯片分析、RT-PCR、RNA印迹证实细胞凋亡与As2O3干预后IEX-1基因表达下调有关．IEX-1为早期诱导应答基因，调节细胞生长和凋亡．通过荧光素酶分析，EMSA、蛋白质印迹等实验，发现As2O3干预骨肉瘤细胞系MG-63后能诱导p53蛋白表达上调，增加的p53蛋白通过与IEX-1的启动子结合，转录抑制IEX-1的转录，导致IEX-1基因表达下调．进一步证实了IEX-1与骨肉瘤的重要关系，同时也阐明As2O3诱导IEX-1基因表达下调的转录调控机制．]]> 2008/4/17 0:00:00 1000true P < 0.05)，PRL-R蛋白表达增强 (P < 0.05)，信号转导通路分子STAT5、MAPK表达加强．研究认为，miR-138抑制小鼠乳腺上皮细胞的增殖．miR-138在乳腺上皮细胞调控的靶序列是PRL-R，抑制其表达而发挥作用．miR-138通过调控STAT5、MAPK信号转导通路而调控乳腺上皮细胞增殖．]]> 2008/4/17 0:00:00 999true lox系统可以介导DNA的定点插入和定点删除，可利用其实现转基因动物中“友好位点”的重复利用及标记基因的有效删除．为直观地评估该系统介导的以上两种重组反应的效果，通过标记基因并利用大鼠乳腺癌细胞系SHZ-88进行了模型研究．首先构建了两个载体：a．整合载体pTE-lox2272-DsRed-loxP-GFP-loxP，含有红色荧光标记基因DsRed和绿色荧光标记基因GFP；b．置换载体pT-lox2272-neo-loxP，含有筛选标记基因neo，用以置换DsRed基因．然后，用整合载体转染SHZ-88细胞，并随机挑取了3个同时表达DsRed和GFP的稳定整合细胞克隆．随后用置换载体和Cre表达载体PBS185对以上每个克隆分别进行了3次共转染，通过G418筛选并扩增培养后，总共获得1 070个克隆．通过分析标记基因DsRed和GFP在这些克隆中的表达情况：Cre介导的删除效率为91.1%，定点置换效率为29.3%．最后对部分克隆进行了PCR和DNA印迹鉴定，分子鉴定结果与发光的表型状况一致．这一方法为Cre/lox系统在转基因家畜生产中的进一步应用提供了实验依据．]]> 2008/4/17 0:00:00 998true NGAL)基因的过表达具有明显的12-O-十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯(12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate，TPA)诱导性，在启动子-152～-60区段存在着一种新型的TPA反应元件(TPA response element，TRE)，但是该元件的结合蛋白尚未被鉴定出来．采用寡核苷酸DNA亲和层析法(oligonucleotide trapping)从食管癌细胞中分离纯化了NGAL基因TRE结合蛋白；经SDS-PAGE进一步分离，银染显示目标蛋白带．人工切取各目标蛋白带进行MALDI-TOF-MS分析，通过Mascot软件搜索NCBI数据库，根据蛋白质的功能、细胞定位和分子质量大小等指标确定8个核蛋白因子：C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β、FAM54A、KLF15、KLF10和YY-1．最后，利用RT-PCR验证了这些核蛋白因子表达的TPA反应性，结果表明C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β和KLF15等编码基因的转录表现出了明显的TPA反应性，提示可能是食管癌细胞中应答TPA刺激，参与NGAL基因过表达的转录激活因子．]]> 2007/12/19 0:00:00 997true P < 0.05)．珍珠质自然涂层钛表面有利于MC3T3E1细胞的生长、增殖和分化，表明了珍珠质涂层能提高种植体表面的生物相容性，有可能会促进种植后的骨整合.]]> 2007/12/18 0:00:00 996true +CD25+ T细胞分化．通过荧光标记单克隆抗体染色结合流式细胞术，观察不同剂量Jagged-1/Fc在不同时间对淋巴结细胞向CD4+CD25+T细胞分化的影响，观察Jagged-1/Fc诱导T细胞内细胞因子的变化； 藉ELISA法检测Jagged-1/Fc诱导分化的T细胞分泌TGF-β1、IL-4和IL-10的水平．结果显示，超过500.0 μg/L剂量的Jagged-1/Fc使CD4+CD25+ T细胞百分比明显增高，诱导时间需要4～6天，抗Jagged-1单抗能抵消Jagged-1/Fc的诱导作用，用DAPT阻断Notch信号通路的活化也能抑制Jagged-1/Fc的诱导作用，Jagged-1/Fc诱导分化的T细胞培养上清中IL-4和IL-10的水平明显增高，TGF-β1无明显变化，胞内IL-4，IL-10，IL-2和TNF-α的水平也呈增高趋势．上述结果表明，可溶性Jagged-1/Fc嵌合蛋白在体外可诱导小鼠淋巴结细胞向CD4+CD25+ 调节性T细胞分化．]]> 2007/12/28 0:00:00 995true LCRG1)是一个喉癌候选抑瘤基因，为进一步深入研究其转录调控机制，应用5′RACE技术确定了该基因的转录起始位点，然后在对人LCRG1基因进行生物信息学分析的基础上，通过PCR定向克隆和酶切亚克隆策略，构建了11种含不同长度LCRG1启动子荧光素酶报告基因重组体．启动子活性分析表明，－169～＋127 区域的启动子活性最高．研究提示，LCRG1 基因转录所必需的基因启动子序列在－169～＋127范围内．]]> 2008/2/3 0:00:00 994true n = 3)，其中相差5倍以上3个．胶内酶解和肽质量指纹图谱分析后鉴定， W1为热休克蛋白Hsp20家族成员，W2、 W3为转座酶，推测它们可能与里默氏杆菌的毒力密切相关．]]> 2007/12/19 0:00:00 993true 2-整合素(Mac-1)的配体抑制炎症过程中Mac-1介导的嗜中性粒细胞与血管内皮细胞的黏附．通过选择性化学修饰方法制备了具有低抗凝血活性的高碘酸氧化-硼氢化钠还原肝素(RO-肝素)，系统地研究了它对Mac-1介导的嗜中性粒细胞黏附的抑制作用．结果表明，显著失去抗凝血活性的RO-肝素仍能有效地抑制Mac-1介导的嗜中性粒细胞与ICAM-1重组蛋白、转染ICAM-1 cDNA的COS-7细胞和人脐静脉内皮细胞黏附．为深入阐明拮抗Mac-1介导的白细胞黏附的分子机制和筛选抗炎症药物提供了有价值的实验证据．]]> 2008/2/3 0:00:00 992true 2+ 或1 mmol/L EGTA条件下都能与钙调素结合，说明其存在不依赖于Ca2+的CaM结合特性．GUS染色分析表明，AtIQD26具有普遍的组织表达特性，尤其是在新生的组织中表达量较大；融合荧光蛋白定位显示，AtIQD26在细胞核与质膜附近有分布．AtIQD26与钙调素空间分布的相似性，预示着它们在植物生长发育过程中可能共同发挥作用．]]> 2007/12/27 0:00:00 991true 2008/4/16 0:00:00 990true 2008/6/12 0:00:00 989true 2008/2/3 0:00:00 988true 2007/11/20 0:00:00 987true 2008/1/8 0:00:00 986true 2008/2/3 0:00:00 985true 2007/12/18 0:00:00 984true I 5～9， 分子质量为10～100 ku区域处．Gene Ontology分类发现它们参与体内代谢等过程，应用NetNGlyc对它们进行糖基化位点预测，并通过蛋白质免疫沉淀联合凝集素亲和印迹对其中的结合珠蛋白前体，α烯醇化酶的核心岩藻糖基化进行了再验证．以上结果提示，凝集素层析、2-DE联合MALDI-TOF-MS/MS分析是一种鉴定某种特定类型糖蛋白的高通量检测方法，所建立的表达谱可用于发现疾病发生、发展中相关的异常核心岩藻糖基化蛋白质．]]> 2008/4/16 0:00:00 983true 2007/12/28 0:00:00 982true 2008/1/25 0:00:00 981true 2007/12/19 0:00:00 980true 2008/4/16 0:00:00 979true SC法．最后，将建立的方法应用于肝癌细胞模型HepG2和HepG2-HBx细胞系的差异蛋白质组表达研究．质谱鉴定结果用聚类分析软件Cluster3.0进行分析，最后鉴定出107个重叠蛋白，其中9个蛋白质表达上调(Ratio > 1.75)，6个蛋白质表达下调(Ratio < 0.5)，这些蛋白质均与肝癌发生和恶化密切相关．结果表明，该技术操作简单、方便，具有较高的灵敏度和动态范围，利用该方法进行差异蛋白质组研究和发现生物标志物在理论和临床上具有十分重要的意义．]]> 2007/11/8 0:00:00 978true 2007/11/20 0:00:00 977true 2007/11/8 0:00:00 976true 2007/12/18 0:00:00 975true P ＜ 0.05)，外分泌腺则无上述基因的表达．胰腺导管中mafa，mafb，cmaf均有表达，肯定了导管上皮细胞向内分泌细胞分化的潜能，而c-maf在导管中的表达高于胰岛，提示导管上皮c-maf的下调可能有助于导管上皮细胞向内分泌细胞的分化成熟．]]> 2007/10/19 0:00:00 974true 2007/11/20 0:00:00 973true 2007/11/29 0:00:00 972true 2008/3/7 0:00:00 971true P < 0.05)，荧光定量PCR结果与微阵列结果相符．这些结果提示，NOR1基因对肝癌HepG2细胞的生物学行为的影响可能与它对细胞信号转导，细胞周期调控，转录、翻译调控相关基因的表达影响有关．]]> 2008/2/3 0:00:00 970true 2007/10/15 0:00:00 969true 2007/8/22 0:00:00 968true 1 (FB1) 是一种真菌毒素，是鞘脂生物合成途径中关键酶神经酰胺合酶 (ceramide synthase) 的竞争性抑制剂．FB1在动植物细胞中均能够诱导PCD．为了探索植物PCD的机制，通过筛选拟南芥抗FB1的突变体，分离鉴定了11个fumonisin B1 resistant (fbr) 突变体．遗传分析表明，这些突变体分别是由9个相同或者不同的遗传座位突变造成的．对其中一个代表性的突变体fbr136进行了详细的表型分析和初步遗传定位．fbr136对其他PCD诱导剂，例如H2O2或paraquat也表现出一定的抗性或耐受性，而且在fbr136突变体中FB1不能正常诱导PR1基因的表达，说明fbr136突变体PCD的发生可能受到阻碍．硝基四唑(Nitroblue tetrazolium，NBT) 染色表明，FB1 处理fbr136突变体后产生和积累活性氧(reactive oxygen species)比野生型植物显著降低，暗示其抗凋亡表型可能与活性氧的产生有关．推测FBR136可能是FB1在诱导PCD过程中，从鞘脂含量变化到活性氧积累变化这一途径的一个重要的调控因子．fbr136被定位于染色体Ⅲ上，与以往鉴定的抗FB1突变基因的定位都不同，因此，FBR136可能是FB1诱导PCD信号途径中的一个新基因．]]> 2007/11/7 0:00:00 967true 2007/10/19 0:00:00 966true 2007/9/12 0:00:00 965true 2007/8/20 0:00:00 964true 9～1∶210．构建的A/AA/6/60 6个内部基因的病毒骨架拯救系统，为深入研究冷适应减毒人流感病毒的基因功能和新型疫苗研发奠定了基础．]]> 2007/9/21 0:00:00 963true 125I-rT3作为底物，结合离子交换层析技术测定甲状腺D1活性，此外，应用竞争结合放射免疫分析方法对甲状腺组织激素进行了检测．结果显示：碘缺乏时，D1 mRNA表达和D1活性均显著升高，甲状腺组织内T3与T4水平均显著降低，但T3 / T4明显升高；碘过量可明显抑制D1 mRNA表达，但对D1活性并无显著影响，甲状腺组织内T3 / T4有所下降．上述结果提示，甲状腺Ⅰ型脱碘酶在甲状腺功能调节中具有重要的作用， 碘缺乏时D1 mRNA表达及活性的上调可促进T4向T3的转化，以满足机体代谢的需要，而过量碘对D1基因表达的抑制可防止过多的T3对机体的损伤，具有重要的生理意义．]]> 2008/1/4 0:00:00 962true P < 0.05)，凋亡细胞数增加2.86倍(P < 0.01)，SPF增加33.8 %(P < 0.05)，PI增加59.7 %(P < 0.01)，G0/G1期下降27.7 % (P < 0.01)，凋亡相关蛋白P53下降54.7%(P < 0.01)、Caspase-3增加2.2倍(P < 0.01) 和Bcl-2降低21.7% (P > 0.05)，提示，G6PD缺陷可能通过下调P53蛋白表达和上调Caspase-3的表达，抑制G2/M期向G0/G1期转换的进程，促进A375的凋亡，机理有待于进一步探讨．]]> 2008/2/25 0:00:00 961true 2＋依赖的，且能被甘露糖、葡萄糖、N-乙酰葡糖胺所抑制；C1q或抗C1qR单克隆抗体能部分抑制MBL与Raji细胞结合；重组人MBL-CRD蛋白或MBL-CLR蛋白均能抑制MBL与Raji细胞结合，两者联合应用则可完全阻断这种结合．研究资料表明，B淋巴细胞系Raji细胞表达Ca2＋依赖性、糖敏感的MBL受体，包括对CLR特异和CRD特异的两种受体，前者为MBL和C1q的共同受体．进一步的功能研究显示，高浓度MBL (10～50mg/L)对Raji细胞的生长具有显著抑制作用，且呈剂量依赖关系．提示MBL作为一种重要的模式识别分子，不仅发挥天然免疫功能，而且可能在调节获得性免疫应答中起一定作用．]]> 2007/10/15 0:00:00 960true 305TEKFSFAKNPVDTGHG320)、E45-1( 355VTVNPFVATSSA366)、E48-1( 377PFGDSYIV384)和E49( 385VGRGDKQINHHWHKAG400) 4个线性抗原表位．分别将4个抗原表位融合蛋白免疫小鼠，制备各抗原表位单因子血清，结果经体外病毒中和试验表明，E39为具有病毒中和活性的抗原表位．试验结果为进一步分析JEV E蛋白结构与功能以及诊断试剂和表位疫苗的研究提供了重要工作基础．]]> 2007/8/28 0:00:00 959true P < 0.05)，但其表达水平与肺鳞癌的临床分期无明显相关性；免疫组化结果显示，HP-2在肺鳞癌组织中的表达水平高于癌旁正常支气管上皮组织(P < 0.05)．研究结果提示：HP-2是候选的肺鳞癌血清分子标志物，血清中HP-2水平对肺鳞癌诊断可能具有一定的参考价值；肺鳞癌组织中HP-2表达上调可能是患者血清中HP-2表达升高的原因之一．]]> 2007/10/19 0:00:00 958true n = 6, P < 0.01)，蛋白质免疫印迹、免疫荧光染色方法检测证实干涉后NRSF蛋白表达水平明显降低．RT-PCR实验表明干涉NRSF后下游基因开始表达，荧光素酶活性分析表明，干涉NRSF后胰岛素启动子活性增强了2.4倍 (n = 3，P < 0.01)．上述结果表明，成功构建NRSF的慢病毒干涉载体并获得稳定干涉NRSF的HeLa细胞株，干涉NRSF后，其下游基因特别是胰岛素基因开始表达．这一研究工作有助于我们进一步了解NRSF在胰岛细胞发育分化中的调控作用．]]> 2008/2/3 0:00:00 957true TM 2000转染体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞，应用荧光定量PCR、RT-PCR检测cyclin D1 mRNA的干扰效果, 应用MTT法、流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期的变化,应用免疫组织化学染色检测成纤维细胞中cyclin D1、CDK4、P16、pRb蛋白表达的影响．主要结果如下：a．靶向cyclin D1的特异性siRNA序列可以高效地抑制成纤维细胞cyclin D1基因表达，对照组与实验组在mRNA水平其表达抑制率分别为63.68%和92.83% (P < 0.01)；b．可以显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖，改变细胞周期分布，G0/G1期细胞比例显著高于各对照组 (P < 0.05)，细胞分裂被阻滞；c．免疫组化染色发现，转染72 h后，过表达的cyclin D1、CDK4和pRb蛋白，在瘢痕疙瘩成纤维细胞中均出现了不同程度的表达下调，而低表达的P16则呈上调表现．由上述结果可见，构建的靶向cyclin D1的RNAi表达质粒，可有效地抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞cyclin D1基因表达，通过改变G1期相关周期蛋白的水平，影响G1/S期的进程，显著地抑制成纤维细胞的增殖．]]> 2007/9/12 0:00:00 956true 2007/10/19 0:00:00 955true to)的功能，对维持心电稳定性具有重要的调节作用．在哺乳细胞系COS-7表达系统利用膜片钳全细胞记录方式，研究了两种LQT6相关的突变体I57T和V65M对Kv4.3通道功能的影响，从MiRP1对Ito功能调控的改变探讨LQT6引起心律失常的电生理机制．结果表明，KCNE2与Kv4.3共表达后对通道功能具有明显的调控作用，使通道的激活和失活明显减慢，电压依赖性失活发生正向移位，同时加快Kv4.3通道从失活中的恢复．I57T与Kv4.3共表达的通道，门控动力学以及通道的恢复特性更接近Kv4.3单独表达的通道，表现为丧失KCNE2的功能 ——“loss of function”，而V65M的作用则与之刚好相反，对Kv4.3门控动力学和恢复特性的调节较KCNE2更强，同时，使通道电流密度明显降低，表现为增强KCNE2的功能——“gain of function”．由此推论，KCNE2对Ito功能有重要的调节作用，发生在KCNE2基因上的突变，无论是增强(V65M)还是减弱(I57T)KCNE2的功能都可能通过改变Ito在心脏电稳定性中的贡献，从而使心脏在某些条件下发生心律失常．]]> 2007/8/28 0:00:00 954true 2007/11/8 0:00:00 953true －)是一种性质活泼的自由基，可引起强的氧化性损伤，介导了一氧化氮(NO)的大部分毒性作用．应用全细胞膜片钳技术，探讨ONOO－对脑片海马神经元电压门控钠通道电流(INa)和神经元兴奋性的影响．结果表明，ONOO－供体SIN-1(10，500，2000 μmol/L)可浓度依赖性抑制INa电流峰值．SIN-1与ONOO－清除剂尿酸共处理，并不影响INa．500 μmol/L的SIN-1可使INa的I-V曲线上移，并可抑制其失活后恢复过程，但对INa的激活和失活过程无影响．SIN-1还可抑制动作电位发放频率和幅值．脑片预处理腺苷酸环化酶(adenylate cyclase, AC)抑制剂MDL-12, 330A (25 μmol/L)和NEM (50 μmol/L)对SIN-1的作用无影响．然而，预处理鸟苷酸环化酶(CG)抑制剂ODQ可抑制SIN-1对INa的作用．以上结果提示，ONOO－通过cGMP-INa-AP信号级联系统作用于海马神经元，与PKA和蛋白巯基亚硝化途径无关，这可能是ONOO－神经毒性的机制之一．]]> 2007/9/28 0:00:00 952true 2007/9/12 0:00:00 951true S-转移酶Zeta类(AtGSTZ)是一种与细胞代谢和环境净化密切相关的多功能酶．应用易错PCR和多轮DN A洗牌技术构建了AtGSTZ随机突变文库，再利用pH指示剂颜色改变法对突变文库进行筛选，获得了9个二氯乙酸脱氯活性提高的突变子．其中，NN23含25个氨基酸突变，比活力提高120%，NN20含24个氨基酸突变，比活力提高102%，EC1含2个氨基酸突变，比活力提高47%，其他6个为单点突变，比活力分别提高9%～60%．酶学分析显示，所有进化酶对底物二氯乙酸的催化效率和对谷胱甘肽的亲和力以及个别进化酶的复性能力都得到不同程度的提高，但热稳定性均没有明显改善．同时，对一系列与AtGSTZ空间折叠及催化活性相关位点进行了讨论．]]> 2007/8/21 0:00:00 950true -/-)小鼠在1、2和3月龄3个年龄段主动脉以及14天、1、2和3月龄4个年龄段肝脏中动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)重要相关基因的时序表达特点，并通过血清生化检测结合主动脉根部病理形态学特征的分析，探讨AS重要相关基因时序表达特点与AS早期病变的关系．在主动脉检测的9条AS相关基因中，apoE-/-与野生型(WT)小鼠相比，1、2和3月龄时IL-1β的mRNA表达水平均显著上调．1月龄时VCAM-1、IκB和TGF-β，2月龄时PDGF-α和CD36，3月龄时TNF-α和MMP2的mRNA表达水平均显著上调，其他年龄段无显著变化．在肝脏检测的2条AS相关基因中，C反应蛋白(CRP)的mRNA表达水平在14天到2月龄时无显著变化，3月龄时显著上调．NF-κB在各年龄段apoE-/-小鼠主动脉和肝脏中的基因表达量与同龄WT小鼠相比均无显著差异．不同年龄段的apoE-/-小鼠血清TC、TG和LDL-C水平均明显高于同龄WT小鼠．2月龄apoE-/-小鼠主动脉内膜出现散在的脂质沉积，并随年龄增长逐渐加重．上述结果显示，时序表达上调的AS重要相关基因构成了以NF-κB为核心的复杂调控网络，它们之间相互作用，共同参与慢性炎症过程，在apoE-/-小鼠AS的早期发生发展中发挥重要作用．]]> 2007/9/5 0:00:00 949true 2008/2/3 0:00:00 948true 2007/8/15 0:00:00 947true fgf genes)作为FGF信号通路中可诱导的拮抗分子相继在斑马鱼，小鼠，和人类中被鉴定出来，并进行了相应的功能研究．目前对于Sef蛋白本身稳定性的研究还未见报道．对c-Cbl对Sef稳定性的影响进行了研究．免疫荧光实验表明Sef能够和c-Cbl蛋白在细胞中发生共定位，随后的免疫共沉淀实验证明Sef能够和c-Cbl发生相互作用．体内泛素化实验表明c-Cbl能够使Sef发生明显的泛素化作用．这种泛素化最终导致了Sef本身的剂量依赖性的降解．针对c-Cbl的siRNA表达也使Sef稳定细胞系的表达水平得到恢复．结果表明，c-Cbl对Sef的泛素化及降解可能作为一种调控拮抗因子的蛋白质水平从而最终调节信号通路的一种机制．]]> 2007/5/31 0:00:00 946true 2007/11/8 0:00:00 945true 2007/11/29 0:00:00 944true 30 (human mini-proinsulin des B30)的cDNA，将其插入大肠杆菌和酵母菌的穿梭质粒pPIC9K．用电转移的方法将重组质粒HMPIDesB30/pPIC9K转入甲醇酵母GS115．用含不同G418浓度的YPD平板筛选高拷贝重组子．经优化条件下的高密度发酵，发酵液用SIPI-40大孔树脂吸附，大孔吸附树脂洗脱液经SP柱进一步纯化后，再用10～20 mmol/L Zn2+沉淀，能得到纯度为95%的HMPIDesB30．通过16.5% Tricine SDS-PAGE、HPLC和质谱分析，表达产物分子质量与理论分子质量相符，经高密度发酵，表达量可达1.0 g/L．纯化回收率可达60%．说明人胰岛素原类似物HMPIDesB30能在甲醇酵母中高效分泌表达，并能通过经济有效的方法纯化．]]> 2007/7/13 0:00:00 943true 2007/9/12 0:00:00 942true At.f)是能够利用Fe2+和硫化矿来获取能量的一种化能自养菌．这种细菌在金属硫化矿的生物浸出中起着重要的作用．在硫化矿的生物浸出过程中，浸矿细菌通常会遇到多种胁迫条件，如温度的变化、营养成分的缺失和pH值的变化等，这些因素会影响到细菌的活性．因此对在胁迫条件下这类细菌的应急反应生理机制的研究具有重要的意义．SELDI蛋白质芯片技术是近年一种高通量的蛋白质组学研究技术．测定了以Fe2+为能源正常条件培养的At.f和磷酸盐缺失培养At.f的生长情况，绘制了相应的生长曲线；采用NP20蛋白质芯片，对At.f总蛋白的蛋白质芯片上样量进行了优化．在此基础上，采用IMAC-Cu、SAX2、WCX2 三种特异性SELDI蛋白质芯片技术，获取了磷酸盐缺失培养At.f与正常条件培养的At.f的比较蛋白质图谱，采用软件对比较蛋白质图谱进行分析，发现了磷酸盐缺失培养At.f的13个明显差异表达的蛋白质分子，为进一步分离鉴定这些差异表达蛋白质奠定了基础．]]> 2007/11/8 0:00:00 941true 2007/7/5 0:00:00 940true Vmax =(19.426±1.669)倍；Km = (0.486±0.106) μmol/L，MLCK片段对磷酸化HMM和S1的ATP酶活性也有相似的刺激作用．体外肌丝运动研究表明，随着MLCK片段浓度的增加，磷酸化肌球蛋白与肌动蛋白结合的数量不断增加，肌丝运动的速度也随之增加．上述结果表明，MLCK的C端非激酶活性具有调节磷酸化的肌球蛋白ATP酶活性及肌丝运动的作用．]]> 2007/8/28 0:00:00 939true P < 0.05)，第二次水迷宫RS组第1天～第2天的逃避潜伏期较对照组仍显著延长，具有显著性差异(P < 0.05)，第三次测试各组之间差异无统计学意义．搜寻策略显示，在第一次Morris测试时RS组第3天～第4天边缘式搜寻比例明显高于对照组，具有显著性差异(P < 0.01)，同时RS组第3天～第4天趋向式搜寻比例明显低于对照组，具有显著性差异(P < 0.01)，而第二次和第三次水迷宫测试3组间趋向式和直线式搜寻策略无明显差异．在记忆实验中，原平台象限游泳距离与总距离的比值，RS组第三次较对照组显著降低，有统计学意义(P < 0.05)；另外RS组1～3天趋向式搜寻比例均明显低于对照组，有显著性差异(P < 0.05)．CaMK Ⅱ原位杂交显示，各组CaMK Ⅱ mRNA在海马均有明显表达，但是在齿状回和门区RS组表达明显低于对照组，具有统计学意义(P < 0.01)．研究表明，新生期反复长程惊厥能够对学习和记忆功能产生远期的损害，可能与海马记忆分子CaMK Ⅱ表达下调有关，而单次长程惊厥对学习记忆无明显影响．早期运动训练能够明显改善反复惊厥所致的学习能力损害，但对记忆能力效果仍较差．]]> 2007/7/11 0:00:00 938true 2008/10/29 0:00:00 937true 2008/5/8 0:00:00 936true 2008/6/19 0:00:00 935true 2008/7/16 0:00:00 934true P < 0.01)，生长受阻．进一步研究揭示，细胞周期在G0/G1期发生停滞，其中Ago1(P < 0.01)和Ago4(P < 0.05)的作用尤为明显，但并不引发凋亡．虽然具体调控机制尚不清晰，但在人类肿瘤细胞中Argonaute蛋白可直接或间接地参与细胞周期进程的调控．]]> 2008/5/27 0:00:00 933true INa)，对延迟整流钾通道电流(IK)和瞬时外向钾通道电流(IA)虽然也有抑制作用但无统计学意义．由于乌拉坦不影响突触传递，因此它可能通过抑制INa使自发放电的阈值升高而降低放电频率，同时，由于参与的通道数量或活性降低而使得ISI的复杂度下降，长时程相关性弱化．]]> 2008/8/20 0:00:00 932true 2008/6/19 0:00:00 931true 2008/7/16 0:00:00 930true IC50)明显高于K562细胞株，加入维拉帕米后，苯妥英纳和卡马西平对K562/Dox 细胞的IC50明显下降，逆转倍数分别为2.5和1.5．进一步研究发现，K562/Dox细胞内苯妥英纳和卡马西平的浓度均显著少于其药敏K562细胞，仅分别为正常K562细胞的23.6%和32.2%．当加入维拉帕米后，K562/Dox细胞内抗癫痫药物浓度明显升高(P < 0.05)．由此证明，高表达的P-糖蛋白参与了细胞的药物转运，在难治性癫痫的耐药机制中扮演重要角色．]]> 2008/8/19 0:00:00 929true 2008/10/13 0:00:00 928true Bt cry1Ac和编码膦丝菌素乙酰转移酶基因bar的甜菜叶绿体转化载体pSKARBt/bar，以甜菜叶绿体基因组中atpB/rbcL做同源片段，以甜菜叶绿体16S启动子和终止子为调控基因，以bar基因为筛选标记基因．基因枪法转化甜菜叶柄，经筛选获得抗性转基因植株．对转基因植株进行外源基因Bt cry1Ac和bar的PCR检测、DNA印迹分析，结果表明：外源基因Bt cry1Ac和bar确已导入到甜菜叶绿体基因组中．转基因植株除草剂抗性鉴定及其离体叶片虫试鉴定结果表明：转基因植株具有较强的杀虫活性和抗除草剂特性，表达了相应的蛋白质．研究结果还表明：bar基因在植物叶绿体转化中，既可以用作抗性基因，又可用作转化体筛选的标记基因．建立了甜菜叶绿体转化体系．]]> 2008/11/3 0:00:00 927true 2008/9/16 0:00:00 926true 2008/10/29 0:00:00 925true 2008/5/8 0:00:00 924true 2的影响未见报道．为了研究Daxx增加肝HepG2细胞对药物敏感性的影响及机制，为开发药物新的药理作用提供理论依据，分别转染pEGFP-C1和pEGFP-C1-Daxx这两个载体到HepG2细胞．实验分组如下：(1)正常对照组(未转染细胞组)；(2)pEGFP-C1空载体转染组(HepG2/ GFP细胞)；(3)pEGFP-C1-Daxx表达载体转染组(HepG2/ GFP-Daxx细胞)．筛选稳定细胞株，用逆转录聚合酶链反应检测mRNA的表达；用过氧化氢孵育24 h诱导细胞凋亡，采用MTT法和流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot 检测蛋白质的表达．经G418筛选稳定的细胞运用RT-PCR技术分析其mRNA，结果显示，转染绿色荧光蛋白Daxx表达载体的细胞Daxx的mRNA明显上调；用荧光显微镜观察到Daxx蛋白主要定位于细胞核．用过氧化氢诱导HepG2细胞凋亡，观察到过氧化氢呈浓度依赖性地抑制HepG2细胞活性．正常对照细胞、HepG2/ GFP、HepG2/ GFP-Daxx 3组细胞的IC50值分别是0.72、0.76、0.49 mmol/L．并且运用流式细胞仪检测到HepG2/ GFP-Daxx组细胞凋亡率明显高于转染空载体质粒组与未转染组((42.9±8.42) vs (27.3±6.38) or (28.5±4.71))．提示HepG2/ GFP-Daxx细胞对过氧化氢的反应性较未转染细胞和HepG2/ GFP敏感．还运用Western-blot检测到活化的caspase3在Daxx转染组细胞表达最强，达到(204.66±19.68)%，而未转染和HepG2/ GFP组细胞分别是(100±3.1)%、(107.39±20.1)%，进一步说明了Daxx可以增加HepG2细胞对于过氧化氢的敏感性．同时，观察到过氧化氢处理24 h后，Daxx转染组细胞磷酸化的JNK表达明显高于空载体转染组和未转染细胞组．上述结果表明： a．Daxx可以增加肝HepG2细胞对过氧化氢诱导的细胞凋亡敏感性；b．Daxx蛋白敏化过氧化氢诱导的HepG2细胞凋亡可能与协同增加JNK活性有关．]]> 2008/6/19 0:00:00 923true FDDV在体内的生物学特性，特别是在免疫马血浆中低拷贝存在状态的形成原因，使用连续给予地塞米松的方法，对EIAVFDDV免疫马匹进行了免疫功能抑制．连续给药10天后，以植物血凝素(PHA)作为刺激原的淋巴细胞非特异性增殖实验表明，实验马匹的免疫系统功能受到了明显抑制．使用实时RT-PCR对免疫抑制前后实验马匹体内EIAVFDDV的载量进行了定量检测．结果显示，EIAVFDDV免疫马匹体内的病毒载量在2匹马中未见升高，1匹马体内略有增高，但仍处于EIAVFDDV在免疫马匹体内载量的正常范围．作为对照，强毒株隐性携带马的病毒载量提高了约25 000倍，并出现了典型的临床症状．实验结果提示，致弱后病毒特有的生物学特性，而非免疫压力，是EIAV疫苗株在宿主血浆中低拷贝存在的主要原因．同时，在免疫系统功能受抑制状态下，疫苗株在免疫马体内仍然表现出了相对稳定的低拷贝复制状态，进一步显示了EIAVFDDV在应用中的安全性．]]> 2008/5/8 0:00:00 922true beclin 1通过自噬作用调节细胞生长，但在胃癌和直结肠癌中其表达水平和调控机制仍不清楚．通过检测胃癌和直结肠肿瘤组织中beclin 1基因的表达水平，及DNA异常甲基化和杂合子缺失对其表达的影响，发现与癌旁组织相比，35%的胃癌标本和30%的直结肠癌标本中beclin 1基因表达显著下调．同时发现，beclin 1基因5′端存在一高密度CpG岛，在胃癌和直结肠癌中beclin 1的启动子区域和第二个内含子区域存在甲基化，而杂合子缺失仅在胃癌中发生．这些发现表明beclin 1基因的异常甲基化和杂合子缺失对其在胃癌和直结肠癌中的表达起调控作用．]]> 2008/6/19 0:00:00 921true P < 5%水平下显著的QTL，其中在2号染色体上有9个，分别影响白细胞总数、中性粒细胞数、平均红细胞体积、血红蛋白含量、平均红细胞血红蛋白浓度、血小板总数、平均血小板体积、血小板分布宽度和血小板压积，在7号染色体有7个，分别影响白细胞总数、中性粒细胞数、平均红细胞血红蛋白浓度、血红蛋白含量、血小板总数、平均红细胞体积和红细胞分布宽度变异，在8号染色体上有6个，分别影响中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比、平均红细胞血红蛋白浓度、血小板总数、血小板压积和平均红细胞体积．为尽可能地避免由于多重检验所造成的假阳性率的升高，我们采用了控制假检出率(false discovery rate, FDR)的方法来对这22个QTL进行进一步检验，发现有14个达到FDR < 5%显著水平，其中又有9个达到FDR < 1%显著水平．]]> 2008/8/19 0:00:00 920true C. elegans)体壁肌细胞结构和功能的变化，一方面用于验证太空试验，同时比较两种处理结果的异同，以便于评价地面模拟微重力的有效性．经过14天19.5 h旋转模拟微重力处理后，对线虫生存率和运动能力进行了观察，并检测了几个重要的肌相关基因表达和蛋白质水平．模拟微重力下线虫生存率没有明显变化，但运动频率显著下降，爬行轨迹也发生了轻微改变，运动幅度降低，提示线虫运动功能出现障碍．从形态学上观察发现：肌球蛋白A(myosin A)免疫荧光染色显示模拟微重力组肌纤维面积缩小，而肌细胞致密体(dense-body)染色可见荧光亮度下降．这些结果直接提示模拟微重力使线虫出现了肌萎缩．随后Western blotting 试验结果揭示，模拟微重力组线虫体壁肌的主要结构蛋白——myosin A含量减少，进一步确证了微重力性肌萎缩发生．在基因水平，旋转后抗肌萎缩蛋白基因(dys-1)表达明显上升，而hlh-1，unc-54，myo-3和egl-19的mRNA 水平均下调，提示dys-1在骨骼肌感知和传导力学信息方面有重要作用，而hlh-1，unc-54，myo-3和egl-19则分别从结构和功能两个途径促进了微重力性肌萎缩的发生和发展．本次试验所得到的结果同太空飞行试验结果十分相似，一方面强化了太空试验结论，另一方面说明在地面上模拟微重力对生物体进行研究是有效可行的，将有助于提高太空试验的质量．]]> 2008/7/9 0:00:00 919true FAT-2基因cDNA序列，通过优化密码子，构建真核表达载体，稳定转染细胞，经抗生素筛选获得稳定整合FAT-2基因的CHO细胞．PCR和RNA印迹(Northern blot)验证了基因的整合和表达．气相色谱分析细胞的脂肪酸含量表明，FAT-2基因的表达显著提高了转基因细胞中亚油酸的含量，亚油酸含量为阴性对照细胞的2.4倍．研究结果表明，低等动物△12脂肪酸脱氢酶可以重建哺乳动物多不饱和脂肪酸合成途径，并利用细胞中的油酸合成亚油酸．上述研究为进一步利用转基因技术促进农业动物合成多不饱和脂肪酸从而提高食品营养价值奠定基础．]]> 2008/6/19 0:00:00 918true P < 0.01)．免疫13L-BC小鼠对静脉注射LPS诱发内毒素休克的保护作用体现在血压下降幅度明显低于对照动物，在LPS 2630攻击后1、2、3及4 h时两组动物血压明显差别(P < 0.05、P < 0.01、 P < 0.05及 P < 0.01)，而LPS 7261攻击后1、2、3及4 h时两组动物血压差别则略小于LPS 2630组(P > 0.05、P < 0.05、 P < 0.05及 P < 0.01)．上述结果证明，LPS表位模拟肽13L交联物免疫小鼠可产生针对细菌攻击及内毒素休克的保护性效应，提示该模拟肽作为LPS交叉保护性疫苗候选的可行性．]]> 2008/7/16 0:00:00 917true Trp的氨基酸接受茎中除两对半碱基以外的特异性元件，设计并完成了4种水稻线粒体tRNATrp向枯草杆菌tRNATrp的突变体 (MPB0， G1A和U5G/A68C；MPB1，C2G/G71C；MPB2，C4G/G69C；MPB3，C2G/G71C和C4G/G69C)，体外转录并用枯草杆菌和人这两种不同种属来源的色氨酰 tRNA 合成酶(TrpRS)测定了这些 tRNATrp 分子的氨酰化活力(Kcat/KM)．结果表明，这些突变体具有被枯草杆菌TrpRS氨酰化的能力，与野生型水稻线粒体tRNATrp相比，MPB0被枯草杆菌TrpRS氨酰化的活力提高了5倍，MPB1和MPB2被枯草杆菌TrpRS氨酰化的活力分别提高了40和53倍，MPB3则提高了140倍，为野生型枯草杆菌tRNATrp的34%，而人色氨酰 tRNA合成酶氨酰化这4个突变体的活力都很微弱．揭示了水稻线粒体tRNATrp氨基酸接受茎上的2个碱基对C2/G71和C4/G69的突变，对枯草杆菌TrpRS的识别起重要作用，由此推测，接受茎上的2个碱基对C2/G71和C4/G69也是线粒体tRNATrp重要的特异性元件．]]> 2008/6/10 0:00:00 916true 1H NMR和多变量统计分析相结合的组织代谢组学方法，不仅能有效区分不同类型的脑肿瘤，而且还可以为脑肿瘤提供丰富的代谢组信息，这些信息对研究肿瘤发生发展的机制具有潜在的意义．]]> 2008/5/29 0:00:00 915true 2008/8/19 0:00:00 914true 2008/6/19 0:00:00 913true Alpinia oxyphylla)中提取的原儿茶酸对人脂肪干细胞体外增殖的影响，并对其作用机制进行了初步的探讨．人脂肪干细胞能在体外分化为神经元样细胞，并对凋亡的PC-12细胞起到保护作用．原儿茶酸能够促进人脂肪干细胞的增殖，且呈现明显的剂量依赖性和时间依赖性．流式细胞术检测细胞DNA含量的结果显示，原儿茶酸处理组细胞S期所占比例明显增加，其中，1.5 mmol/L原儿茶酸处理组细胞S期所占比例与对照组相比增加2倍以上．同时，该组细胞G2/M期所占比例明显增加，G0/G1期所占比例明显下降．蛋白质免疫印迹结果显示， 1.5 mmol/L原儿茶酸处理组细胞周期素D1(cyclin D1)的表达明显升高．cyclin D1-siRNA转染显著抑制了原儿茶酸对人脂肪干细胞体外增殖的促进作用．流式细胞术检测细胞表面标志物，成骨诱导和脂肪诱导的结果显示，原儿茶酸处理后，人脂肪干细胞仍保持间充质干细胞多分化潜能的特性．上述结果提示，原儿茶酸有可能在人脂肪干细胞介导的干细胞移植治疗中发挥作用．]]> 2008/10/23 0:00:00 912true IC50)为(58.07 ± 2.42)，明显高于对照组RMG-Ⅰ(28.83 ± 3.57)和 RMG-Ⅰ-C(25.71 ± 8.24)的IC50(P < 0.01)，后两者间无统计学差异(P > 0.05)，流式细胞仪分析证实3组细胞均存在凋亡，经30 mg/L、60 mg/L卡铂处理后细胞再进行流式细胞仪检测，RMG-Ⅰ-H的相对凋亡率分别为(20.43 ± 0.71)%和(38.11 ± 0.33)%，为对照组的49%～63%，明显低于对照组(P < 0.05)，2个对照组间比较无统计学差异 (P > 0.05)，荧光染色和透射电镜直接观察了细胞形态变化，每个浓度组RMG-Ⅰ-H的凋亡程度均低于RMG-Ⅰ和RMG-Ⅰ-C．说明细胞表面Lewis(y)抗原含量增加的同时，卵巢癌细胞对卡铂的耐药性增强．]]> 2008/3/25 0:00:00 911true GTL2基因是在人和鼠中已被鉴定的印记基因，它作为一种RNA调解分子调控目的mRNA的转录. 为了研究GTL2基因在自然繁殖牛和体细胞核移植牛中的印记状态，首先应用PCR-SSCP方法对GTL2基因多态性进行检测，鉴定自然繁殖牛和体细胞核移植牛中的杂合子，进而利用RT-PCR-SSCP技术对GTL2基因在杂合子牛的心、肝、脾、肺、肾、大脑中的表达状态进行分析．研究结果表明：GTL2基因在自然繁殖牛的被检测的6个组织中均表现为单等位基因表达，在体细胞核移植牛的心和肝中表现为单等位基因表达，而在大脑、脾、肺、肾中为双等位基因表达，GTL2基因在体细胞核移植牛的部分组织中表达紊乱有可能是造成体细胞核移植牛器官发育异常和核移植效率低下的原因之一．]]> 2008/9/2 0:00:00 910true ξ选择-2时，总的预测精度分别为87.9%和89.9%，对组成性的供体端和受体端剪接位点，阈值ξ选择-1，总的预测精度分别为92.8%和94.3%．]]> 2008/5/8 0:00:00 909true C. elegans)体壁肌细胞结构和功能的影响．经过近15天太空飞行后对其生存率和运动能力进行了观察，并检测了5个重要的肌相关基因的表达和3种蛋白质含量．太空研究是在动物的整体水平进行的，而不是就单个细胞的研究．经历太空飞行后线虫生存率没有明显变化，但运动频率变慢，爬行轨迹也发生了改变，提示线虫运动功能出现障碍，这些数据揭示：微重力下秀丽线虫肌肉发育发生了变化．肌球蛋白A(myosin A)免疫荧光染色观察发现，太空飞行组肌纤维面积缩小，肌细胞致密体(dense-body)荧光亮度下降．这些形态学观察直接提示太空组线虫出现了肌萎缩．但是，肌动蛋白(F-actin)荧光染色显示两组并无明显差别．基因表达水平的分析结果显示，在太空飞行组动物中dys-1表达明显上调，同时hlh-1, myo-3, unc-54和egl-19 基因表达下调．抗肌萎缩蛋白(dystrophin，由dys-1编码)是抗肌萎缩蛋白-糖蛋白复合物(DGC)的主要组成成分，而该复合物在微重力下增多，提示肌细胞是为了接受更多的力学刺激以维持细胞内外的力学平衡，所以该复合物在肌细胞的重力感知中起关键作用．基因hlh-1, myo-3, unc-54和egl-19 表达下调，说明它们分别从结构和功能两个途径促进了微重力性肌萎缩的发生．最后， Western blot结果提示，太空组线虫体壁肌内肌球蛋白A减少，进一步确证了太空飞行中线虫有肌萎缩发生．]]> 2008/10/23 0:00:00 908true 2008/9/16 0:00:00 907true 2009/3/30 0:00:00 906true 2009/3/26 0:00:00 905true 2009/5/14 0:00:00 904true 2009/5/13 0:00:00 903true C)，并对二者的溶解性和活性进行了比较．实验结果表明：F185K 突变后INC溶解性显著提高，活性有一定程度降低．对WT和F185K INC体系进行了1800 ps的分子动力学模拟．模拟结果表明：F185K INC功能loop区柔性和蛋白质整体运动性降低，使蛋白质活性降低，F185K突变后盐桥网络的变化驱动了INC局部构象改变，引起INC表面的部分疏水残基被包埋，亲水残基暴露，相对亲水溶剂可接近面积增大，同时，突变后INC与水之间形成氢键的数量增加，与水之间作用加强，以上变化使INC溶解性提高．分子动力学模拟与实验结果相吻合．为理解蛋白质溶解性和对蛋白质进行可溶性改造提供了一定的理论依据．]]> 2009/5/18 0:00:00 902true 2009/6/8 0:00:00 901true -/- 小鼠TLR4及多种炎症因子的表达和动脉粥样硬化病变程度的改变，以探讨TLR4途径在动脉粥样硬化病变发生中的作用．5周龄雄性apoE-/- 小鼠50只，随机分成4组：基础饮食组对照组(n=12)、高脂饮食组对照组(n=12)、基础饮食+EGCG组(n=13)、高脂饮食+EGCG组(n=13)．给药14周后处死动物，从主动脉根部连续冰冻切片，油红O染色观察主动脉窦处动脉粥样硬化(As)斑块面积，定量分析主动脉粥样硬化斑块大小及占管腔的面积百分比，采用Real time-PCR检测主动脉TLR4 mRNA和CD14mRNA的表达，蛋白质印迹检测TLR4和CD14蛋白表达，ELISA检测小鼠血清中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)，肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度．研究结果提示：EGCG显著减轻apoE-/- 主动脉窦部的动脉粥样硬化病变，高脂对照组的主动脉窦AS斑块面积为(2.37±0.08) mm2，高脂饲料+EGCG组的主动脉窦AS斑块的面积为(1.05±0.13) mm2，EGCG组小鼠主动脉窦粥样斑块面积比相应对照组明显减少(P < 0.05)，高脂饮食+EGCG组小鼠TLR4蛋白表达显著降低(P < 0.05)，MCP-1，TNF-α的含量减少，与高脂饮食对照组相比差异有显著性(P < 0.05)．TLR4信号转导途径在高脂所致的AS发生当中有着重要作用，该信号途径的激活至少是AS发生当中的一个重要环节．]]> 2009/7/9 0:00:00 900true 2009/5/27 0:00:00 899true 2009/5/13 0:00:00 898true R基因和常染色体β-actin DNA．为转基因哺乳动物细胞的分离培养和核移植胚胎的鉴定提供可靠的方法，缩短了转基因动物的研制周期，降低生产成本，同时为进一步通过核移植技术获得转基因克隆兔提供了条件]]> 2009/4/24 0:00:00 897true 2009/3/30 0:00:00 896true tak1和tak2基因表达的影响．结果表明，光强与温度调节LHCⅡ蛋白磷酸化，也会在转录水平和蛋白质水平上影响tak1和tak2基因表达．LHCⅡ蛋白磷酸化对光响应趋势与TAK1蛋白水平变化相同．此外，低光照促进tak2基因表达，tak2基因转录表达受温度的影响较小．tak1和tak2基因表达调控方式不同，可能与启动子响应元件的不同相关．]]> 2009/5/25 0:00:00 895true 2009/4/15 0:00:00 894true CYP72B1基因和AUR3基因启动子含有3个相同的调控模序GAGACA、AAGAAAAA、ATCATG，它们分别承担了AuxRE元件、GT元件和GT辅助元件的功能．其中，ATCATG模序是目前尚未报道过的调控元件，与AAGAAAAA模序的距离相对恒定．基于调控元件识别结果，构建了CYP72B1基因和AUR3基因响应光、生长素和油菜素内酯的转录调控模型，模型显示：光信号和生长素、油菜素内酯信号在CYP72B1基因和AUR3基因的转录调控元件上相互交叠，而生长素和油菜素内酯信号则在转录因子ARF水平上相交．]]> 2009/7/9 0:00:00 893true 2009/3/10 0:00:00 892true 2009/3/26 0:00:00 891true nicastrin( NCT )基因的转录调控机制，确定了其在人脑中的转录起始位点以及其编码区上游大小不等片段的转录起始活性．EMSA分析证实NCT启动子区的4个AP-1结合位点和2个NFAT结合位点能够与相应的转录因子结合，能够改变转录因子调控能力的定点突变和PDTC诱导使得NCT启动子在HeLa细胞和大鼠皮质神经元中的启动活性都有所改变．以上结果说明：AP-1和NFAT确实参与了人类NCT基因的转录调控．]]> 2009/3/26 0:00:00 890true 2009/5/5 0:00:00 889true 2009/5/27 0:00:00 888true 2009/3/11 0:00:00 887true 2009/4/8 0:00:00 886true 2009/3/11 0:00:00 885true 2009/2/24 0:00:00 884true 2009/3/12 0:00:00 883true 2009/3/27 0:00:00 882true amide) 和 temporin-Lb (LFRHVVKIFEKYLamide)．合成的 temporin-La 和 temporin-Lb肽具有很强的抗菌活性，尤其是对革兰氏阳性细菌．溶血性测定结果表明，temporin-La 浓度高至250 mg/L 时对兔红细胞仍无溶血活性，而 temporin-Lb 具有较弱的溶血活性(半数致死浓度LC50 ≈ 230 μmol/L)．通过透射电镜观察 temporin-La 和 temporin-Lb 处理过的金黄色葡萄球菌的细胞结构，发现它们都能直接地杀死细菌，但作用机制不一样．]]> 2009/5/14 0:00:00 881true P < 0.001)，尤以72 h为著；下调GnT-Ⅴ表达可增强LoVo细胞的黏附能力( t = -3.357，P < 0.01)，而显著抑制LoVo细胞的趋化运动能力( t = 44.051，P < 0.001)；划痕实验结果也显示抑制GnT-Ⅴ表达延长LoVo细胞的愈合时间；用Matrigel胶介导的细胞侵袭实验结果显示，LoVo GnT-Ⅴ/1564和LoVo GnT-Ⅴ/NC的穿膜细胞数分别为(5.10 ± 1.25)个和(39.55 ± 2.16)个，GnT-Ⅴ/1564组较阴性对照组明显减少( t = 61.626，P < 0.001)．结果表明，靶向GnT-Ⅴ的shRNA真核表达质粒可以显著降低GnT-Ⅴ的表达，从而抑制LoVo细胞的增殖、迁移和侵袭能力，因此，该GnT-Ⅴ的siRNA序列可能成为治疗结直肠癌的有效靶点．]]> 2009/3/30 0:00:00 880true 2009/2/3 0:00:00 879true +细胞，CD45-细胞不具有形成造血克隆的能力.在肝上皮细胞分化潜能上，流式分选获得的CD49f+/Sca-1+细胞与未分选细胞无明显差异.该模型的克隆源性通过细胞混合实验进行证明.研究结果表明，改进的胎肝来源的HPP-CFC可能代表了一个新的造血向肝上皮细胞分化的单克隆模型，为研究胎肝中造血和非造血细胞的发育关系提供了一个新的切入点.]]> 2009/2/2 0:00:00 878true 2009/4/24 0:00:00 877true 2009/2/23 0:00:00 876true 2009/4/13 0:00:00 875true 2009/2/23 0:00:00 874true HGPRT基因的表达，为进一步通过核移植技术建立HGPRT RNAi转基因兔模型创造条件．]]> 2009/1/10 0:00:00 873true 2008/12/22 0:00:00 872true mCaM2，随后，大肠杆菌重组表达突变蛋白的电泳迁移率及45Ca2+覆盖分析表明，得到了编码失去钙结合能力的钙调素的突变基因mCaM21234, mCaM21234突变钙调素中所有4个钙结合EF-hand结构域中的关键氨基酸谷氨酸均突变为谷氨酰胺．在酵母双杂交体系中，作为诱饵蛋白的突变钙调素mCaM21234与我们前期体外方法报道的钙不依赖性钙调素结合蛋白AtIQD26存在相互作用．这将为钙不依赖性钙调素结合蛋白提供有用的体内研究工具，有利于我们全面认识钙-钙调素-钙调素结合蛋白信号途径．]]> 2009/2/10 0:00:00 871true P < 0.05)，100 nmol/L pGhrelin对猪脂肪前体细胞增殖有极显著促进作用(P < 0.01)．上述结果表明，pGhrelin可以下调Caspase-3的活性与基因表达，促进脂肪细胞增殖，抑制脂肪细胞凋亡，其机制可能与Caspase-3依赖性凋亡调节信号通路有关．]]> 2009/3/11 0:00:00 870true LRRC4是一个新发现的胶质瘤抑瘤基因，它在多种胶质瘤细胞系和胶质瘤组织表达缺失或下调，前期研究结果表明胶质瘤细胞和组织中LRRC4的编码区未发生突变、缺失或重排．为了获得LRRC4作为胶质瘤抑瘤基因的进一步证据，采用去甲基化制剂5-Aza-CdR处理LRRC4表达缺失的SF126和SF767胶质瘤细胞，MSP和RT-PCR检测表明，LRRC4的启动子在表达缺失的SF126和SF767细胞存在完全的甲基化，而5-Aza-CdR能逆转LRRC4启动子的甲基化状态，恢复LRRC4的表达．MTT法测定显示，5-Aza-CdR使SF126和SF767胶质瘤细胞增殖受到明显抑制，并呈时间和剂量的依赖性．同时流式细胞仪检测显示，5-Aza-CdR使SF126和SF767胶质瘤细胞周期阻滞于G0/G1期．因此，5-Aza-CdR能抑制胶质瘤细胞SF126和SF767增殖并干扰其细胞周期，LRRC4启动子异常甲基化是其在胶质瘤细胞中表达缺失的重要机制，5-Aza-CdR能逆转LRRC4基因的甲基化，恢复LRRC4的表达，为LRRC4作为胶质瘤去甲基化治疗的靶标提供了科学依据．]]> 2009/3/27 0:00:00 869true P < 0.05)．提示：M-CSF可上调cyclinD1/D3和CDK2/6的mRNA表达，促进HeLa细胞的增殖．]]> 2009/3/30 0:00:00 868true 2009/3/26 0:00:00 867true 2009/3/11 0:00:00 866true 2009/3/11 0:00:00 865true E. coli BL21/pET23b-adinbitor表达rAdinbitor，通过Ni Sepharose 6 Fast Flow亲和层析柱对rAdinbitor进行纯化，纯化蛋白经Western blotting鉴定．用纤连蛋白(fibronectin，FN)诱导C6细胞．通过免疫沉淀和免疫印迹检测不同浓度的rAdinbitor对FN诱导的C6细胞中黏着斑激酶(FAK)、MEK1/2、Caspase-3的表达以及对FAK、ERK1/2活性的影响．研究表明：各实验组不同浓度的rAdinbitor均能明显降低FAK、MEK1/2的表达，对Caspase-3的表达起促进作用，并对ERK1/2的磷酸化有明显的抑制作用；除10 mg/L rAdinbitor对FAK磷酸化无明显抑制作用外，其余浓度的rAdinbitor对FAK的磷酸化起了明显抑制作用．这说明rAdinbitor对FAK及其下游Ras-MAPK传导通路的抑制在其抑制C6增殖过程中起了重要作用，Caspase-3表达升高提示，rAdinbitor可能通过抑制ILK及其下游的PI-3K/Akt途径起到了促进细胞凋亡的作用.]]> 2009/1/8 0:00:00 864true 2009/4/13 0:00:00 863true Deinococcus radiodurans)中类胡萝卜素的生化合成基因及其在该细菌抗辐射机制中的生物学作用，通过有机溶剂提取及LC-MS技术分析了D. radiodurans所产类胡萝卜素物质的主要组分，运用PCR及基因同源重组技术，对该菌中类胡萝卜素生化合成途径的八氢番茄红素合成酶(phytoene synthase，crtB)及八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase，crtI)基因进行了缺失突变，通过表型观察及HPLC定量分析突变株所产类胡萝卜素的组分变化确证突变株构建成功．野生株及crtB 与crtI基因缺失突变株对电离辐射和H2O2的敏感性差异比较分析显示，和野生株相比，两种突变株对不同剂量电离辐射和不同浓度H2O2的敏感性更强．crtB及crtI基因功能研究表明，这两个关键性合成基因的缺失，导致突变株不能催化合成类胡萝卜素生化合成途径中的重要中间体——番茄红素及一系列下游产物．通过λ原噬菌体紫外线诱导系统、电子自旋共振 (ESR)及DMPO自旋捕集技术，分别在体内和体外评价了其类胡萝卜素的抗氧化能力．结果表明，两种类胡萝卜素对超氧阴离子(O2·)及羟自由基(·OH)均表现出较强的清除作用．上述研究结果为探究D. radiodurans的类胡萝卜素合成基因和生物学功能，及类胡萝卜素在D. radiodurans抗辐射机制中的作用提供了新的直接实验证据．]]> 2008/12/18 0:00:00 862true Helicobacter pylori)对胃上皮细胞间隙连接超微结构的影响，从细胞间隙连接角度探讨H. pylori致癌机制．将不同H. pylori菌株与BGC-823细胞共培养24 h或 48 h，用原位固定与原位包埋法透射电镜观察细胞间隙连接超微结构变化．对70例胃癌患者，用快速尿素酶试验、碱性品红染色和14C尿素呼气实验检测H. pylori，PCR法检测H. pylori CagA基因，及透射电镜观察胃上皮细胞间隙连接超微结构变化．结果显示，未加H. pylori组BGC-823细胞可见较多细胞连接及连接复合体，加H. pylori各组细胞的连接数、单位周长连接数与单位周长连接长度均小于未加H. pylori组，而细胞间隙最小宽度大于未加H. pylori组(P < 0.001或P < 0.005)，且CagA+ 的NCTC J99组、临床株GC 01组和NCTC 11639组细胞连接数、单位周长连接数均小于CagA- 的NCTC 12908组(P < 0.001或P < 0.05)，NCTC J99组与临床株GC 01组细胞单位周长连接长度短于NCTC 12908组(P < 0.001)．胃癌患者H. pylori感染组细胞连接数、单位周长连接数与单位周长连接长度均小于无H. pylori感染组，细胞间隙最小宽度大于无H. pylori感染组(P < 0.001)，且CagA+ H. pylori感染者细胞连接数、单位周长连接数与单位周长连接长度均小于CagA- H. pylori感染者，细胞间隙最小宽度大于CagA- H. pylori感染者．上述结果表明，胃上皮细胞间隙连接改变与H. pylori感染，特别是CagA+ H. pylori感染有关．]]> 2009/1/10 0:00:00 861true 2008/12/29 0:00:00 860true 1/κ，其靶分子为Stx2的A亚单位，与Stx2的B亚单位或Stx1不结合．在体外中和试验中S2C4可有效中和Stx2对Vero细胞的杀伤作用，同样，S2C4可中和致死量的Stx2及其亚型Stx2c和Stx2vha对小鼠的毒性作用．该抗体有望成为治疗产志贺毒素大肠杆菌感染的候选分子．]]> 2008/12/19 0:00:00 859true vs 28%，χ2=28，P < 0.05)．RT-PCR和免疫组织化学染色结果显示：14-3-3σ基因完全甲基化的组织样本无14-3-3σ表达，不完全甲基化的组织样本14-3-3σ表达显著降低，14-3-3σ基因甲基化与鼻咽癌淋巴结转移及鼻咽癌临床分期正相关． 研究结果表明，鼻咽癌组织14-3-3σ基因存在高频甲基化，14-3-3σ基因甲基化导致14-3-3σ表达降低或缺失，14-3-3σ表达水平与鼻咽癌淋巴结转移及其临床分期相关．]]> 2009/1/6 0:00:00 858true 2009/3/11 0:00:00 857true P < 0.05)．用PLGA微球包裹各种质粒，并注射到家兔后肢胫前肌．观察家兔生长情况，并于注射后0，15，30，45天时分别采集家兔血液，检测血液中IGF-Ⅰ浓度．结果显示，三质粒注射组动物体重变化及血液中IGF-Ⅰ浓度均高于对照组．注射后30天时，P-G-P组增重较对照组提高81% (P < 0.01)，P-G组比对照组提高15%(P > 0.05)，P-P组比对照组高7%(P > 0.05)．另一方面，P-G-P组动物血液中IGF-Ⅰ含量比分别比P-G、P-P及对照组提高16.68% (P > 0.05)，17.14%(P > 0.05)，50.46%(P < 0.05)．以上结果揭示：给动物注射PLGA微球包裹的共表达GHRH与PACAP质粒，可以增强动物体内生长激素(GH)的分泌，并促进动物生长．通过上述研究发现，肌肉注射PACAP表达质粒可以促进家兔的生长，PACAP和GHRH 共表达可以起到协同作用．这可能为动物的促生长研究提供新的方法．]]> 2009/1/10 0:00:00 856true 2009/2/10 0:00:00 855true P < 0.01)．RT-PCR检测发现妊娠合并糖尿病小鼠的胚泡igf-1表达下调，且与葡萄糖的浓度成正相关．凋亡相关基因bcl-2和bcl-xl的表达随着体外IGF-1培养浓度的增加而表达上调，而p53基因和凋亡相关基因Bax的表达则下调．细胞凋亡实验显示，随着IGF-1浓度的增加，体外培养胚泡细胞的凋亡逐渐降低，当IGF-1浓度达到100 μg/L时，几乎未发现细胞凋亡．因此，高血糖能抑制胚泡细胞的生长发育，导致igf-1的表达下调，而IGF-1能抑制胚泡细胞的凋亡，有利于胚泡细胞的生长发育．]]> 2009/2/24 0:00:00 854true 2009/1/10 0:00:00 853true sacB作为反向可选择性标记基因，利用同源重组的原理，建立了一种可对农杆菌基因进行准确插入、删除和位点置换的突变方法，所获突变体不带任何不需要的外源DNA序列．通过详细研究同源序列的长度对农杆菌同源重组效率和突变体产生概率的影响，以及对农杆菌中的同源重组机理的分析，提出了优化该突变体产生方法的方案，即通过设计不等长的上下游同源序列和选择其中一种类型的单交换重组体来筛选二次交换重组体的方法，可以显著地提高理想突变体的产生概率．研究结果对如何提高突变体的产生概率和减少突变体筛选的工作量具重要的参考价值．利用该方法成功地获得了两个基因被同时删除而且不含抗性标记的农杆菌突变株．]]> 2008/10/24 0:00:00 852true P < 0.01)，而SNP4位点AA基因型产绒量显著高于AB型和BB型 (P < 0.05)，单倍型组合H7H7与产绒量和绒纤维细度均有显著相关(P < 0.05)．IGF-Ⅰ基因可能是影响绒山羊产绒性状的主要候选基因．]]> 2008/10/29 0:00:00 851true 2008/10/21 0:00:00 850true 3)在鼻咽上皮细胞NP69中的转化作用机制，采用逆病毒感染的方法，将浓缩的逆病毒RV-LMP1和RV-LMP1Δ232～351分别感染鼻咽上皮细胞NP69，建立NP69-LMP1与NP69-LMP1Δ232～351稳定表达细胞系．通过绘制生长曲线、平皿克隆形成试验和软琼脂集落形成试验比较野生型和突变型LMP1对NP69细胞增殖的影响，运用蛋白质组学方法鉴定NP69-LMP1与NP69-LMP1Δ232～351细胞间的差异表达蛋白，选用实时荧光定量RT-PCR与Western blot对其中部分蛋白质点差异表达进行验证．结果发现：a．突变型LMP1Δ232～351促NP69细胞增殖的能力较野生型LMP1明显降低(n=3，P < 0.05)；b．鉴定了LMP1-CTAR3在NP69细胞中参与调节的16个蛋白质(表达上调的蛋白质8个，下调的8个)．c．实时荧光定量RT-PCR和Western blot证实了部分上述蛋白质的差异表达．以上结果说明，LMP1-CTAR3是其发挥促细胞增殖的重要活性部位，可能通过参与调节G蛋白和异柠檬酸脱氢酶等蛋白质的表达而起作用．]]> 2008/10/21 0:00:00 849true 5细胞注射到裸鼠眼前房内，连续观察眼内肿瘤细胞生长情况并拍照记录．通过转染肿瘤细胞株检测E2F1转录水平，筛选到1个能明显抑制肿瘤细胞内E2F1表达的shRNA序列，并使细胞周期中S期细胞数减少．经Ad-shE2F1感染的RB肿瘤细胞与对照相比较，其在裸鼠眼前房内肿瘤生长减缓．结果说明，有效抑制hE2F1表达的shRNA具有抑制体内外人视网膜母细胞瘤生长的作用．]]> 2008/11/18 0:00:00 848true 2008/12/5 0:00:00 847true 2008/11/18 0:00:00 846true 2008/12/17 0:00:00 845true P < 0.01)和 nm23-H1、TIMP-2蛋白低表达(P < 0.05)．临床Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期鼻咽癌和淋巴结转移鼻咽癌中MT1-MMP 、MT2-MMP和 Ezrin蛋白阳性表达显著高于临床Ⅰ期鼻咽癌和无转移癌(P < 0.05，P < 0.01)，但临床Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期鼻咽癌和淋巴结转移鼻咽癌中nm23-H1蛋白的阳性表达显著低于临床Ⅰ期鼻咽癌和无转移癌(P < 0.05)．鼻咽癌组织中MT1-MMP与MT2-MMP ( r = 0.308, P < 0.001), nm23-H1与E-cad( r = 0.167, P < 0.05)及TIMP-2( r = 0.279, P = 0.001)，E-cad与TIMP-2( r = 0.279, P = 0.001)的蛋白质表达呈显著正相关．MT1-MMP与E-cad (r = -0.188, P < 0.05)及TIMP-2(r = -0.233, P < 0.05)，Ezrin与 E-cad( r = -0.204, P < 0.05)的蛋白质表达呈显著性负相关．聚类分析显示，鼻咽癌MT1-MMP、MT2-MMP和Ezrin蛋白共同阳性表达显著高于慢性炎性鼻咽上皮(P < 0.05)，但nm23-H1、E-cad和TIMP-2蛋白在鼻咽癌组织中的共同阴性显著高于癌旁上皮和慢性炎性鼻咽上皮(P < 0.05, P < 0.01)．多因素分析和有效性评估发现，MT1-MMP蛋白能较好地独立预测鼻咽癌淋巴结转移和临床进展．上述研究结果提示，多个肿瘤转移基因的蛋白质高表达，转移抑制基因的低表达和这些基因的蛋白质表达失平衡在鼻咽癌淋巴结转移和临床进展过程中起重要作用．MT1-MMP蛋白可作为预测鼻咽癌淋巴结转移的较好分子标志．]]> 2009/4/3 0:00:00 844true 2008/12/17 0:00:00 843true LCRG1基因( laryngeal carcinoma related gene1，LCRG1 )是一个新的喉癌候选抑瘤基因，其转录调控机制一直未被阐明．通过限制性内切酶酶切介导对LCRG1基因 (-169～+127)区域进行剪切体分析，将LCRG1基因最小启动子定位于-169～-57．应用连接体扫描突变体分析，将关键顺式作用元件确定在-137～-122．生物信息学提示该区存在SP1、E2F1/DP1、EKLF和ZF9转录因子结合位点．利用已知反式作用因子与报告基因质粒进行共转染，提示Spl为有效的反式作用因子，且能上调LCRG1基因的表达．凝胶迁移阻滞实验确定LCRG1基因关键的顺式作用元件区域具有Spl结合位点．LCRG1基因启动子-137～-122片段在该基因表达过程中可能起重要作用，为LCRG1基因功能研究提供了新的证据．]]> 2009/2/10 0:00:00 842true ibeT在大肠杆菌K1株致病过程中的作用，构建了ibeT基因缺失的大肠杆菌K1株，细菌在细胞内存活试验结果显示，ibeT基因缺失抑制了大肠杆菌K1株在人脑微血管内皮细胞中的生长．利用激光共聚焦扫描显微镜观察到，在细菌侵袭进入人脑微血管内皮细胞后，与野生型相比，ibeT基因缺失突变株较多地滞留在溶酶体内；透射电镜结果进一步显示，ibeT基因缺失使大肠杆菌K1株逃逸ECV(含有大肠杆菌的囊泡)的能力发生了下降，继而使其在细胞浆内的复制减少．利用体外模拟的弱酸性环境，检测大肠杆菌菌体胞内的缓冲容量，发现ibeT基因缺失突变株菌体胞内的缓冲能力较野生型低．这些结果提示，在大肠杆菌K1株侵袭进入人脑微血管内皮细胞后，ibeT基因有利于大肠杆菌降解ECV膜，避免与溶酶体融合，进而促使大肠杆菌逃逸进入细胞浆并进行复制．]]> 2008/11/10 0:00:00 841true 2008/9/22 0:00:00 840true 2008/10/6 0:00:00 839true -6，含量为19.56 g/L．2F7在体内与正常组织的交叉反应极少，对HUVEC、CHO-TM5有特异性结合，并可识别细胞裂解液还原条件下分子质量为105 ku左右的蛋白质多肽．2F7的解离常数Kd约为1.22×10-9 mol/L．实验结果表明，通过采用新的技术路线，直接应用hTM表达细胞株免疫小鼠，成功制备了具有高度特异性与高亲和力的抗hTM mAb，为其他来源困难的蛋白质mAb制备提供了可借鉴的技术方案，同时2F7的研究鉴定为进一步应用抗hTM mAb进行hTM生物学功能及临床意义研究提供了新的物质基础．]]> 2009/2/9 0:00:00 838true 2008/11/3 0:00:00 837true 2008/11/11 0:00:00 836true 2008/10/29 0:00:00 835true P < 0.05)，AMPK抑制剂Compound C能够明显减少由Caffeine 引起的GLUT4 mRNA的增长(P < 0.05)，也能够明显降低由AICAR/Caffeine复合刺激引起的GLUT4 mRNA的表达(P < 0.05)，与此一致的是，Caffeine能引起肌细胞AMPKα1蛋白磷酸化增加(P < 0.05)，但不影响AMPKα2的磷酸化，Compound C能够抑制由Caffeine引起的AMPKα1蛋白磷酸化(P < 0.05)．相反CaMK特异的抑制剂KN93能完全抑制由Caffeine引起的GLUT4 mRNA增长，但KN93却不能交叉抑制由AICAR所诱导的GLUT4 mRNA的增长(P < 0.05)，也不能阻止由AICAR/Caffeine复合刺激所引起的GLUT4 mRNA的表达(P < 0.05)．上述结果提示，CaMK和AMPK在调节肌细胞GLUT4基因中并不是完全相互独立的，而是彼此密切联系共同作用，AMPK可能位于CaMK途径的下游来调节收缩肌细胞GLUT4 mRNA的表达．]]> 2008/11/1 0:00:00 834true n=39)及生理盐水对照组(NS组，n=21)．RS组隔日腹腔注射青霉素，按体重5.60×106 U/kg，连续6次，NS组以同样方法腹腔注射生理盐水．于末次惊厥后1.5、3、6和12 h透射电镜观察海马凋亡及自噬，于末次惊厥后1 h进行脑电记录，于末次惊厥后24 h 原位末端标记凋亡法(TUNNEL)检测海马凋亡细胞．分别于P51～P56、P81～P84、 P92～P95 进行3次Morris水迷宫实验，检测大鼠的学习记忆能力．最后，采用Timm染色观察海马苔藓纤维发芽，实时定量RT-PCR测定海马CaMKⅡα、PRG-3、CCK、ZnT-1和ZnT-3的表达．结果如下：a．电镜显示末次惊厥后1.5～12 h可见大鼠海马本部神经元内溶酶体被激活，自噬小体形成，12 h自噬和凋亡同时存在；TUNNEL显示凋亡细胞明显增多(P < 0.05)．b．RS组末次惊厥后3～5 min脑电图记录显示额叶丛集放电，棘波和尖波阵发．c．Morris水迷宫实验显示，第1次测试各组逃避潜伏期均呈逐渐下降趋势，但RS组第5天潜伏期明显高于NS组，具有显著性差异(P < 0.05)，RS组第2次水迷宫测试中第1天潜伏期明显高于NS组，具有统计学意义，第3次水迷宫第2天的潜伏期仍明显高于NS组，具有统计学意义．d．在Morris水迷宫搜寻策略分析中采用秩和检验，第1次水迷宫对照组在第4天和第5天成绩明显优于RS组，具有统计学意义(P < 0.01)，第2次和第3次水迷宫中对照组3天成绩均明显优于RS组，具有统计学意义(P < 0.05)．e．Morris记忆实验显示：3次记忆测试平台象限路径与总路径之比，RS组3次记忆测试均明显低于NS组，有显著性差异(P < 0.05)．f．Timm染色显示，RS组海马齿状回内分子层和CA3区锥体细胞层可见明显异常增生苔藓纤维，对照组未见发芽．g．在实时定量RT-PCR试验中，方差分析显示RS组海马CaMKⅡα和ZnT-1表达明显低于NS组(P < 0.05)，聚类分析和相关分析表明，NS组CaMKⅡα、PRG-3、CCK、ZnT-3这4个基因具有共聚特征，并且各个基因之间具有显著相关性，而RS组仅海马CaMKⅡα和ZnT-1具有明显的共聚现象且呈正相关．本研究表明，幼年大鼠青霉素点燃后不仅能够造成海马神经元早期损伤(包括自噬和凋亡增加)，而且产生远期的学习和记忆功能损害，并可能与海马记忆分子CaMKⅡ及ZnT-1表达下调有关．]]> 2008/11/18 0:00:00 833true cis9，trans11-CLA和trans10，cis12-CLA是共轭亚油酸(CLA)二种抑瘤活性最强的主要单体．在以前报道二者诱导乳腺癌细胞凋亡的工作基础上，进一步探讨共轭亚油酸单体诱导乳腺癌细胞SKBr3凋亡的途径及机制．采用RT-PCR和　　Western blot等方法，证实了CLA在SKBr3细胞中可显著提高PPARγ 的转录及蛋白质表达水平，并发现CLA对PPARγ与凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和caspase3的表达影响呈同步相关性，并表现出时间和剂量依赖性．通过PPARγ 抑制剂GW9662实验表明它们之间存在协同关系．首次提出了PPARγ -Bcl-2-Caspase3信号通路的SKBr3细胞凋亡途径，为CLA有望作为PPARγ新型调节剂诱导肿瘤细胞凋亡在临床应用提供实验证据．]]> 2008/12/9 0:00:00 832true 2009/1/10 0:00:00 831true ezrin基因转录的分子机制却不清楚．为了探明ezrin基因的转录调控机制，以肺癌细胞A549为材料，首先采用双荧光素酶报告基因分析系统检测ezrin基因5′侧翼嵌套缺失序列和位点突变序列的转录活性，鉴定肺癌细胞中ezrin基因的基本启动子区以及关键的顺式作用元件Sp1结合位点 (-75/-69) 和AP-1结合位点 (-64/-58)．其次，利用凝胶电泳迁移率变动分析证明，肺癌细胞核蛋白提取物能够与ezrin基因含有关键顺式作用元件的DNA序列结合，形成DNA-核蛋白复合物，而且Sp1结合位点和AP-1结合位点与重组蛋白rhSp1和rhAP-1的结合具有位点特异性．最后，利用瞬时转染实验证实，转录因子Sp1和AP-1 (由c-Jun和c-Fos组成的异源二聚体) 分别通过Sp1结合位点和AP-1结合位点，增强ezrin基因基本转录活性，而且，过表达转录因子Sp1、c-Jun或c-Fos上调了Ezrin蛋白表达．研究确定，肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的关键顺式作用元件是Sp1结合位点 (-75/-69) 和AP-1结合位点 (-64/-58)，与之作用的转录因子Sp1和AP-1对于ezrin基因的转录激活作用至关重要．]]> 2008/10/13 0:00:00 830true P < 0.01)．说明CRMP-1具有明显的突起生长抑制作用．]]> 2008/9/15 0:00:00 829true 2008/9/22 0:00:00 828true 18O/16O分别标记两种样本酶切后的多肽混合物．结合纳升级液相色谱(Nano-HPLC-MS/MS)定量地鉴定胃癌细胞和胃黏膜良性上皮细胞的差异表达蛋白．共筛选出78个差异表达蛋白，其中42个蛋白质在胃癌组织中表达上调，36个蛋白质下调．Western blot 技术验证了其中几个差异蛋白(moesin, periostin, annexin A2, annexin A4)的表达，与蛋白质组学研究的结果一致．LCM技术结合18O稳定同位素标记的定量蛋白质组学技术，为研究胃癌发生机制、筛选胃癌的分子标志物提供了新的思路，亦为诸如胃癌等复杂体系蛋白质的分离鉴定提供了新的技术选择．]]> 2008/10/21 0:00:00 827true pcsk9基因沉默后对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导THP-1源性巨噬细胞凋亡的影响，用不同浓度oxLDL 处理THP-1源性巨噬细胞48 h，Hoechst33258染色检测细胞凋亡，RT-PCR、Western blot分别检测pcsk9 mRNA、NARC-1蛋白的表达．应用Lipofectamine2000转染3对pcsk9 siRNAs进THP-1源性巨噬细胞中，筛选出最有效的siRNA再转染入THP-1源性巨噬细胞，24 h后加入oxLDL处理 48 h，Hoechst33258染色观察细胞评价细胞凋亡，流式细胞术计数检测细胞凋亡率．结果发现，75 mg/L oxLDL处理THP-1源性巨噬细胞48 h后，Hoechst33258染色可见大量凋亡细胞．同时RT-PCR、Western blot检测发现，pcsk9 mRNA和NARC-1蛋白质表达量均随oxLDL浓度的增加而增加，75 mg/L oxLDL组增加最明显．不同浓度siRNA转染THP-1源性巨噬细胞后，RT-PCR筛选出3对siRNAs的终浓度为80 nmol/L均可出现明显的沉默效应．选取此浓度在蛋白质水平检测基因抑制情况，筛选出最有效的一对siRNA．将筛选出来的siRNA转染细胞24 h后，再用oxLDL处理48 h，Hoechst33258染色及流式细胞计数结果显示，转染siRNA组凋亡明显被抑制．结果表明，在本研究的浓度范围内，随着oxLDL浓度增加pcsk9的表达随之增加，同时，THP-1源性巨噬细胞凋亡也明显增加，75 mg/L oxLDL最明显，pcsk9 mRNA和蛋白质的表达也在该浓度最高．提示pcsk9 siRNA能有效抑制pcsk9基因的表达，从而有效抑制由oxLDL诱导的THP-1源性巨噬细胞的凋亡．]]> 2008/8/1 0:00:00 826true 2008/10/13 0:00:00 825true SCN3A基因的启动子及其上游调控区的特征，采用5′-Full RACE方法对人及小鼠SCN3A基因的转录起始点进行了准确定位，通过序列测定及对比分析证明：确定人和小鼠SCN3A基因的转录起始点均为“A”，人SCN3A基因转录起始点位于翻译起始点上游约27 kb处，而小鼠位于翻译起始点上游约31 kb处．人SCN3A基因5′非翻译区存在两个5′非翻译外显子，而小鼠只有一个5′非翻译外显子．人和小鼠SCN3A基因核心启动子区(-80 ～+70)的同源率高达96.0%，存在相同的启动子核心元件，BRE/和TATA；在-400至+200区段内预测到人存在而小鼠不存在的转录因子有PHR1、GATA-1、FOXN2、NF-1及AP-4，小鼠存在而人不存在的转录因子Sp、Sp3及GBF．人和小鼠SCN3A启动子区特征的异同将为进一步研究该基因在人和小鼠的表达调控机制提供重要线索．]]> 2008/8/19 0:00:00 824true 1～3)，用脂质体的方法转染OGT-siRNA1～3进入HEK293T细胞，通过RT-PCR检测OGT-siRNA1～3对OGT mRNA的抑制．将pEGFP/OGT与OGT-siRNA1～3共转染HEK293T细胞，24 h后在倒置荧光显微镜下观察各组GFP/OGT的表达，根据GFP/OGT的表达量来评价OGT-siRNA1～3对OGT基因表达的抑制率．将筛选出的具有最佳沉默效果的OGT-siRNA与质粒pCI/ tau441共转染HEK293T细胞，48 h后Western blot检测tau蛋白糖基化与磷酸化修饰的变化．OGT-siRNA3在100 nmol/L的终浓度时对OGT基因的抑制效率最高．与Mock组相比，对OGT基因mRNA及蛋白质水平的抑制率分别可达80.0%与51.3%左右．OGT基因表达的下调使tau蛋白糖基化水平下降，而磷酸化水平增高，证实tau蛋白的糖基化负调节其磷酸化,葡萄糖摄入减少或代谢降低可能在AD的发生发展中起关键作用．]]> 2008/12/17 0:00:00 823true P < 0.05)，而且PIWIL4在卵巢癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(P < 0.01)．MTT实验和克隆形成实验结果显示，转染PIWIL4-siRNA的ES-2细胞生长活性和克隆形成率明显低于对照组(P < 0.05)．由此得出结论：PIWIL4在卵巢癌细胞系ES-2细胞表达较高，且它在卵巢癌组织中的表达明显上调，同时PIWIL4-siRNA可有效抑制ES-2细胞的生长活性和增殖能力，提示PIWIL4可能与卵巢癌发生、发展相关．]]> 2008/9/22 0:00:00 822true 2008/10/29 0:00:00 821true Dlc8)基因开放阅读框架并对其序列进行分析．探讨Dlc8基因在家蚕胚胎、头、丝腺、中肠、皮肤、血液、脂肪和马氏管等组织中的分布．在细胞水平，应用RT-PCR和实时定量RT-PCR方法分析大梯度强磁场(large gradient high magnetic field, LGHMF)重力模拟环境(0 g、1 g、2 g)对家蚕Dlc8基因表达的影响．在整体水平，应用实时定量RT-PCR方法分析Dlc8基因在家蚕胚胎反转期和整个胚胎期对LGHMF模拟失重环境的响应．克隆的家蚕Dlc8基因开放阅读框架长度为270 bp，编码89个氨基酸．家蚕Dlc8基因推导的氨基酸序列与拟南芥(Arabidopsis thaliana)、果蝇(Drosophila melanogaster)、线虫(Caenorhabditis elegans)、热带爪蟾(Xenopus tropicalis)、小鼠(Mus musculus)、人类(Homo sapiens)等6个物种Dlc8基因的氨基酸序列同源性分别为67%、96%、91%、95%、92%、92%．信号肽分析结果显示，该蛋白质为非分泌蛋白，不存在糖基磷脂酰肌醇锚定位点．家蚕Dlc8分子质量与等电点分别为10.34 ku和6.81．Dlc8基因在家蚕的胚胎、头、丝腺、中肠、皮肤、血液、脂肪、马氏管中稳定表达．在细胞水平，家蚕Dlc8基因表达对重力变化较敏感，对磁场变化不敏感．在整体水平，Dlc8基因在家蚕胚胎发育的不同时期对重力的响应不同．整个胚胎发育期Dlc8基因在模拟失重条件下表达量与对照组接近．家蚕Dlc8基因可以作为重力生物学效应研究的分子靶标．该研究为深入探讨家蚕Dlc8基因重力生物学效应机制奠定了基础．]]> 2008/10/29 0:00:00 820true 2008/12/17 0:00:00 819true 2008/11/18 0:00:00 818true 2008/8/19 0:00:00 817true 2008/8/20 0:00:00 816true spindlin1为作者所在研究组克隆并命名的肿瘤相关新基因，之前研究表明spindlin1蛋白定位于细胞核，并有可能通过对TCF-4通路的调节参与对肿瘤细胞生长和周期的调控．为进一步探索spindlin1的作用机制，明确spindlin1结构与功能的关系，在生物信息学分析及晶体结构解析的基础上，构建系列突变表达载体，首先以spindlin1蛋白亚细胞定位为指标，观察野生型及系列突变体spindlin1蛋白的亚细胞定位，并进一步检测野生型及突变体spindlin1对TCF-4荧光素酶报告基因转录活性的调控作用，以明确spindlin1定位与功能的关键位点．结果表明：Ser14＋Ser84、Ser84＋Ser99、Ser14＋Ser84＋Ser99位点Ser到Ala的联合突变能使野生型融合蛋白在细胞核内集中分布的特性消失，成为全细胞弥散分布，而Ser14、Ser84、Ser99各位点的单独突变或Ser14＋Ser99联合突变对spindlin1蛋白的细胞核内分布没有影响．与此同时，对TCF-4荧光素酶报告基因活性的分析表明，Ser14＋Ser84、Ser84＋Ser99、Ser14＋Ser84＋Ser99的联合突变使spindlin1对其活性的激活作用消失或降低．上述结果表明，Ser84是spindlin1细胞定位与功能发挥的关键位点，其作用发挥需要Ser14与Ser99的协助．]]> 2008/10/29 0:00:00 815true S-布洛芬的特异性催化抗体．其Kcat, app/Kuncat, app达1.6×104．进一步地将催化抗体运用到W/O微乳体系(反胶束)中进行布洛芬酯的选择性水解研究，其动力学研究证明其催化过程同样遵循Michaelis-Menten方程．考察了pH值和温度对催化初速度影响，wo(体系中水和琥珀酸二辛酯磺酸钠(AOT)的摩尔比) 对催化初速度影响呈现为钟罩型，最适的wo为21．]]> 2008/8/21 0:00:00 814true 2008/8/20 0:00:00 813true CgGPD已经被克隆出来，但是具体的功能，特别是与酿酒酵母GPD1和GPD2基因的功能比较值得进一步研究．以酿酒酵母渗透压敏感型的gpd1/gpd2和gpd1突变株为宿主，分别导入CgGPD、GPD1和GPD2基因，比较分析了CgGPD、GPD1和GPD2基因在高渗透压胁迫条件下和厌氧环境中的表达调控，及其对细胞甘油合成能力的影响．研究发现，GPD1基因受到渗透压诱导表达，GPD2基因在细胞厌氧条件下起着氧化还原平衡调节作用，而CgGPD基因不仅能够在渗透压胁迫条件下通过过量快速合成甘油调节渗透压平衡，而且能够在厌氧培养环境中互补GPD2基因的缺失，使gpd1/gpd2缺失突变株能够正常生长，同时提高了突变株的甘油合成能力．结果表明，CgGPD基因在gpd1/gpd2缺失突变株中既具有GPD1基因的功能，又能发挥GPD2基因的功能．]]> 2008/9/22 0:00:00 812true 2008/8/1 0:00:00 811true 2008/7/14 0:00:00 810true 2008/10/29 0:00:00 809true P < 0.05)．进一步检测凋亡、基因组DNA甲基化和整体转录活性，结果显示，高浓度的5-AZA-CdR导致8-细胞和早期桑椹胚发生早期凋亡，而低浓度的5-AZA-CdR引起8-细胞和早期桑椹胚基因组DNA甲基化的降低和转录活性的降低，并且这种降低呈浓度依赖性．所以加入低浓度的5-AZA-CdR时，胚胎的DNA甲基化降低，引起转录活性的降低，进而导致胚胎发育的停滞．]]> 2008/11/18 0:00:00 808true 2008/11/4 0:00:00 807true 2008/7/7 0:00:00 806true 2008/8/20 0:00:00 805true 2008/6/16 0:00:00 804true 2008/8/1 0:00:00 803true mdr1表达量增加．N糖基取代的沙利度胺新衍生物STA-35可显著抑制KB/TAX细胞及其亲本KB生长，与TAX联合应用时可降低KB/TAX细胞对TAX的耐药指数．此外，STA-35(5～20 μmol/L)可浓度依赖地提高KB/TAX细胞中罗丹明123的蓄积量、抑制P-gp的表达，但对mdr1基因表达无明显作用．研究表明，N糖基取代的沙利度胺新衍生物STA-35能够逆转KB/TAX细胞对TAX的耐药性，可能的分子机制与其抑制P-gp功能和蛋白质表达相关．]]> 2008/9/16 0:00:00 802true 2008/9/22 0:00:00 801true 2008/11/3 0:00:00 800true 2O2和NaCl的强烈诱导，但植物激素对其表达的影响较弱．H2O2和NaCl的诱导效果呈现出时间及剂量的相关性，当用0.5 mmol/L H2O2处理12 h或用500 mmol/L NaCl处理24 h，此时OsPHGPx表达量达到最大值．对H2O2清除剂二甲基硫脲处理的水稻幼苗，外源H2O2的再处理并不能诱导OsPHGPx的表达，而NaCl的诱导效果并不受影响，说明H2O2可能并不介导NaCl诱导OsPHGPx的表达．这些结果为进一步研究OsPHGPx在水稻中生物学功能奠定了基础．]]> 2008/9/11 0:00:00 799true 2008/8/19 0:00:00 798true D10Wsu52e基因编码，在进化上十分保守，但该蛋白质的生物学功能并不清楚．为此，首先通过细胞组分分离的方法研究了FAAP蛋白分布的细胞组分，结果表明FAAP主要存在于细胞质和细胞膜中．细胞蛋白表达量分析表明，细胞中FAAP与黏连蛋白受体(LR)表达量呈现正相关性．同时，细胞黏附实验表明，FAAP与LR对细胞黏附影响类似，也能够抑制细胞的黏附．这些实验结果为深入研究FAAP蛋白功能提供了依据．]]> 2008/6/19 0:00:00 797true 2008/9/16 0:00:00 796true 2008/10/29 0:00:00 795true ca基因并构建原核表达质粒，在E． coli BL21中诱导表达．以获得的三株抗JSRV-CA蛋白的单克隆细胞分泌的McAb为一抗，应用Western blot对分段表达的CA蛋白进行肽探针扫描，初步鉴定了三株单抗识别的线性表位，并应用非竞争性ELISA法测定了三株单抗的功能性亲和常数．为建立特异性的病原诊断方法、分析CA蛋白的功能及疫苗设计奠定了基础．]]> 2008/10/29 0:00:00 794true 2009/8/7 0:00:00 793true Saccharomyces cerevisiae的一个转录抑制因子，参与控制细胞的多重药物耐受性，并可能与细胞胁迫应答相关．利用PCR方法扩增RDR1基因片段，将其克隆至高拷贝表达载体pYES2/NTA上并诱导Rdr1蛋白在酵母细胞中过表达．为了揭示转录抑制因子Rdr1在胁迫应答中的作用，比较了RDR1过表达细胞、RDR1缺失突变体细胞和野生型细胞在过氧化氢处理、热胁迫和高盐处理条件下的生长状态，结果显示，RDR1过表达导致细胞对上述3种胁迫作用更敏感，而RDR1缺失则使细胞对这些胁迫作用的耐受性不受影响或有一定增强．为了揭示上述不同细胞在胁迫条件下生长状态的差异与细胞内抗氧化酶活性之间的关系，测定并比较了RDR1过表达细胞、RDR1缺失突变体细胞和野生型细胞中超氧化物岐化酶(superoxide dismutase SOD)、过氧化氢酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase G6PDH)、谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase GR)的活性．结果表明，RDR1缺失突变体细胞具高活性的SOD、过氧化氢酶、G6PDH和GR，而Rdr1过表达细胞中SOD、过氧化氢酶、G6PDH和GR的活性较低．RDR1对SOD和过氧化氢酶活性的影响要大于G6PDH和GR．细胞抗氧化酶活性的变化初步揭示，RDR1过表达细胞对胁迫的敏感和RDR1缺失突变体细胞对胁迫耐受性增加的原因．为转录抑制因子Rdr1在胁迫应答中的负调控作用及其机理提供了初步的遗传学和生物化学证据．]]> 2009/8/25 0:00:00 792true 2009/7/27 0:00:00 791true KATP )增加(61.4 ± 13.6)%，促进KATP通道开放．特异阻断κ-阿片受体不能阻止IKATP增加，而非特异性阻断阿片受体或特异阻断δ-阿片受体均可阻止IKATP增加．结果表明, 吗啡后处理促进KATP通道开放与δ-阿片受体的激活有关．]]> 2009/7/15 0:00:00 790true 2009/9/7 0:00:00 789true WKY大鼠，apelin-13预孵育，能减少SHR和WKY大鼠血管对新福林的缩血管反应性，增加对乙酰胆碱的舒张反应性；b．NOS抑制剂LNNA阻断NO形成后，血管环对apelin-13的舒张反应明显抑制，且SHR组较WKY组对apelin的舒张反应减少更明显，提示apelin-13的舒血管效应至少部分依赖NO通路，而SHR高血压大鼠NO通路障碍减弱了apelin对血管的舒张作用；c．ERK1/2抑制剂PD98059预孵育后血管环对apelin-13表现出浓度依赖性的收缩，与去除内皮后apelin-13的收缩血管效应趋势一致，血管收缩张力SHR＞WKY大鼠，PD98059逆转了apelin-13引起的血管舒张效应；d．Apelin-13促大鼠VSMCs ERK1/2磷酸化增加并呈剂量依赖性和时间依赖性，ERK1/2抑制剂PD98059可以减少apelin-13诱导ERK1/2的磷酸化．结果表明，自发性高血压大鼠离体血管环对apelin-13舒张反应性降低， NO通路和ERK1/2通路介导了apelin-13的舒张血管作用．]]> 2009/7/27 0:00:00 788true 2009/10/15 0:00:00 787true 2009/9/27 0:00:00 786true 2009/7/9 0:00:00 785true 2009/7/9 0:00:00 784true presenilins双基因敲除小鼠(dKO小鼠)表现出类似阿尔茨海默症(AD)的大部分神经退行性病症，如Tau 蛋白磷酸化、神经元凋亡、皮层萎缩以及认知能力受损等．为探讨presenilins功能缺失、神经退行性症状与单胺类递质变化的相关性，利用毛细管电泳法检测6、9和12月龄dKO小鼠皮层、海马及其他前脑部位中各单胺类神经递质的含量．结果显示，与对照组相比，dKO小鼠皮层中单胺类神经递质在6月龄时显著降低，而随着年龄的增长，神经退行性病变加剧，递质浓度也均明显上升，在海马区，dKO小鼠单胺类递质则呈上升趋势，但仅6月龄时5-羟色胺和肾上腺素及12月龄时各递质的上升有统计学意义，前脑其他部位5-羟色胺和多巴胺递质在6、9月龄时与对照组相近，在12月龄时则显著降低，而去甲肾上腺素和肾上腺素在6月和12月龄时均呈降低趋势，且均有统计学差异(6月龄肾上腺素除外)．实验表明，单胺类神经递质在presenilins双基因敲除的小鼠前脑各区域中的水平均发生了随龄化的变化，且在前脑皮层、海马与前脑其他区域的变化趋势各有不同，而单胺类递质的变化是presenilins双基因敲除导致的直接结果还是间接结果，单胺类递质在AD样神经退性行病变中的作用如何，还有待于进一步的研究．]]> 2009/8/25 0:00:00 783true 2009/6/26 0:00:00 782true 24～Met41缺失使TLR4与MD-2结合能力明显下降；LPS刺激后TLR4聚合迅速增加，而缺失Glu24～Met41的TLR4不能聚合．上述结果提示，TLR4的Glu24～Met41不仅是结合MD-2的区域，并且还参与了LPS刺激后TLR4的聚合作用．]]> 2009/6/30 0:00:00 781true 2009/9/7 0:00:00 780true BHC80基因表达主要集中在中枢神经系统部位． 应用吗啡啉修饰的反义寡核苷酸技术抑制BHC80基因表达，显示胚胎红细胞减少并堆积在PBI区，用胚胎期红细胞标志βe3 globin以及造血过程中的重要转录因子gata1、c-myb、lmo2的胚胎整体RNA原位杂交实验显示，BHC80基因表达下调使gata1标记胚胎红系前体细胞增殖增多并且分化延迟，导致红细胞减少和PBI区红细胞堆积． 血管内皮标志基因flk-1的RNA探针原位杂交和荧光显微造影显示，BHC80基因表达下调组血管与对照组相比清晰可见无明显差异．]]> 2009/8/7 0:00:00 779true ABCE1基因表达，Western blot 分析ABCE1蛋白的表达，MTT法检测细胞的活性，流式细胞仪分析细胞周期，ELISA法检测细胞凋亡．结果显示：质粒的转染效果较满意，阳性率约为42.70%；在实验组，细胞活性和生长指数明显受到抑制，细胞凋亡明显增加，与对照组比较差异显著(P < 0.05)．上述结果显示，RNA干扰ABCE1基因可显著抑制肺癌细胞(95-D/NCI-H446) RNA的转录、蛋白质的表达，并增加细胞凋亡，为进一步研究ABCE1基因提供必要的基础．]]> 2009/8/7 0:00:00 778true S. aureus ATCC2592、Streptococcu ATCC55121)、G-细菌(E． coli ATCC25922)、真菌(C． albicans ATCC2002)均具有良好的抑菌活性．对家兔红细胞无溶血活性，对人血液凝固无影响．目前未见有从绵羊生殖道分离纯化得到抗菌肽的报道，并且这一研究结果进一步证实抗菌肽在多种动物生殖道天然免疫防御方面起着重要作用．]]> 2009/2/10 0:00:00 777true 2009/7/21 0:00:00 776true 2009/7/15 0:00:00 775true 2009/5/27 0:00:00 774true 2009/6/19 0:00:00 773true 2009/6/30 0:00:00 772true 2009/5/13 0:00:00 771true -7 mol/L 的胰岛素培养基中培养24 h，建立胰岛素抵抗细胞模型．分别用不同浓度的胰岛素和FGF-21处理模型细胞，采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(GOD-POD)法检测细胞对葡萄糖的摄取情况，并检查胰岛素与FGF-21的协同作用．利用实时荧光定量PCR检测FGF-21对模型细胞葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)mRNA表达的影响，蒽酮法检测模型细胞糖原合成量，探讨FGF-21对胰岛素抵抗细胞模型葡萄糖摄取的影响及机制．结果发现，用高浓度胰岛素处理HepG2细胞24 h后，细胞对胰岛素的敏感性显著降低，说明成功建立了胰岛素抵抗细胞模型，抵抗状态可维持48 h，未发现细胞形态学变化．FGF-21能改善胰岛素抵抗模型细胞的葡萄糖摄取，参与肝糖原的合成，并与胰岛素产生协同作用．实时荧光定量PCR结果发现，FGF-21作用模型细胞后，细胞的GLUT1 mRNA表达量显著增加，说明FGF-21促进模型细胞摄取葡萄糖的作用机制与其增加GLUT1的表达有关．]]> 2009/6/30 0:00:00 770true 2009/9/14 0:00:00 769true 2009/5/5 0:00:00 768true 2010/6/3 0:00:00 767true Mash2在胚胎发育和器官形成过程中起着非常重要的作用．为了探求核移植过程中Mash2基因DNA 甲基化的表观重编程是否充分，利用亚硫酸氢盐测序法对出生48 h内死亡的体细胞核移植牛和正常对照牛肺脏中Mash2基因的DNA甲基化状态进行分析．结果显示，尽管位于Mash2基因启动子和第一个外显子处的CpG岛在正常牛和克隆牛中甲基化水平都不高(20.04%，5.55%)，但克隆组的甲基化水平仍显著低于正常对照组 (P < 0.05)．甲基化模式正常组中9N3有5种不同的形式，9N4仅1种；而克隆组9C3和9C5也分别是1种．推测Mash2基因的异常DNA甲基化很可能是导致克隆牛肺脏发育异常的一个重要原因．]]> 2010/6/10 0:00:00 766true Geobacillus stearothermophilus) CICC 20156中克隆获得羧酸酯酶基因，构建黑曲霉和毕氏酵母表达质粒，将重组质粒分别转化毕氏酵母GS115和黑曲霉pyrG基因缺陷株M54．SDS-PAGE和Western blot检测显示：携带His标记的外源蛋白在转化真菌宿主中均获得了高效分泌性表达，毕氏酵母和黑曲霉表达的外源蛋白分子质量均约为29 ku，蛋白质浓度分别为30.7 mg/L和15.3 mg/L．生物学活性测定表明，毕氏酵母与黑曲霉表达的羧酸酯酶单位蛋白酶活分别为22 671 U/mg和21 438 U/mg．酶学性质研究显示，两种表达系统表达的重组羧酸酯酶的酶学特性基本一致，它们在40～70℃范围内均显示较好的酶活性，最适反应温度为60℃．70℃处理30 min，毕氏酵母和黑曲霉表达重组羧酸酯酶残余酶活分别为 76.7%和67.6%，显示出良好的热稳定性．在pH 6.5～8.5的范围内显示较高酶活性，最适pH为8.0．上述研究首次实现了具有良好热稳定性的嗜热脂肪芽孢杆菌羧酸酯酶在黑曲霉和毕氏酵母中高效异源分泌性表达，其中毕氏酵母羧酸酯酶的产量要高于黑曲霉的酶产量，但考虑到重组黑曲霉表达外源性蛋白无需使用任何诱导剂，黑曲霉菌表达热稳定性羧酸酯酶可能具有更好的应用前景．]]> 2010/7/14 0:00:00 765true 2010/6/10 0:00:00 764true 2010/6/29 0:00:00 763true 2010/5/27 0:00:00 762true 2010/6/3 0:00:00 761true 2010/6/17 0:00:00 760true 2010/6/10 0:00:00 759true Nbs1是c-Myc的靶基因．染色质免疫沉淀实验显示，c-Myc招募组蛋白乙酰化酶p300复合物到Nbs1启动子区，引起了组蛋白H4的乙酰化，定位在Nbs1启动子区的相邻的两个E-box对c-Myc的结合是必要的．上述结果说明c-Myc减弱阿霉素的作用部分是通过调控Nbs1来实现的．这也提示了c-Myc在阿霉素诱导的DNA损伤修复中起作用．]]> 2010/3/24 0:00:00 758true 2010/4/20 0:00:00 757true 2010/5/12 0:00:00 756true 2010/5/20 0:00:00 755true ABCE1对肺癌(95-D和 NCI-H446)细胞的作用．使用RNA干扰技术，抑制ABCE1基因的表达，通过Western blot 分析及FACS检测，观察ABCE1基因对E-钙黏附蛋白在95-D/NCI-H446细胞表达的影响；运用transwell 侵袭实验，观察M95-D/ NCI-H446细胞侵袭力的变化．RNA干扰ABCE1基因后，实验组与对照组相比，在48 h后可显著抑制肺癌(95-D和 NCI-H446)细胞ABCE1蛋白的表达，同时，伴随E-钙黏附蛋白的高表达，以及细胞侵袭力的降低． ABCE1基因与E-钙黏附蛋白相关，抑制ABCE1基因可增加肺癌95-D/NCI-H446细胞的E-钙黏附蛋白的表达，减低细胞的侵袭力．]]> 2010/5/12 0:00:00 754true 2010/5/20 0:00:00 753true 2010/5/27 0:00:00 752true 2010/5/12 0:00:00 751true 2O2)分别处理原代培养的贝外套膜组织迁出细胞，实时相对定量PCR检测engrailed、BMP2和Smad3的mRNA表达水平，统计分析结果表明，三者具有显著的相关性．上述所有结果为进一步研究贝类生物矿化的发育和信号转导机制提供了新的思路和基础．]]> 2010/3/24 0:00:00 750true 2010/3/9 0:00:00 749true 2010/4/28 0:00:00 748true 2010/3/23 0:00:00 747true TM不仅具有抗氧化活性，而且还具有很好的DNA修复和免疫功能．Batch-2是一种新的水溶性钩藤提取物，而它的自由基清除能力及神经保护作用还未见报道．首先检测了batch-2对六羟多巴胺诱导的SH-SY5Y细胞损伤的神经保护作用机制，然后利用红外光谱、HPLC和分光光度技术对batch-2的组成成分进行了分析．结果表明，batch-2具有清除各种自由基的能力，尤其是对羟自由基的清除(25 mg/L的batch-2对羟自由基的清除率为60%)，batch-2可剂量依赖性地抑制6-羟多巴胺诱导的细胞凋亡、脂质过氧化水平、线粒体膜电位的降低和细胞内活性氧和一氧化氮的增加．同时，batch-2抑制了由6-羟多巴胺诱导的SH-SY5Y细胞内iNOS和NF-κB蛋白的上调．结果表明，batch-2对六羟多巴胺诱导的SH-SY5Y细胞损伤的神经保护作用是通过清除活性氧和一氧化氮、抑制iNOS和NF-κB表达实现的．成分分析表明，batch-2中的多酚和奎宁酸含量分别为6.43%和0.095 8%．上述结果显示，batch-2的抗氧化机制部分类似于EGCG．对于帕金森病的预防，batch-2是一个潜在具有很好的神经保护作用的天然抗氧化剂．]]> 2010/6/10 0:00:00 746true 2O2易感性，减少胞内ROS和[NO]i．c-Jun氨基端激酶(JNK)是氧化胁迫导致细胞损伤的重要信号途径．实验结果显示花青素可以有效地抑制氧化胁迫对JNK的激活．提示花青素的抗氧化胁迫作用与JNK信号途径有关．因此，花青素可以作为一种氧化胁迫因子的清除剂来保护AD模型细胞，有望用于AD的辅助治疗．]]> 2010/3/24 0:00:00 745true 2010/5/20 0:00:00 744true ras基因突变检测可用于大肠癌的早期筛查与诊断，并有利于筛选出抗表皮生长因子受体靶向药物治疗有效的大肠癌患者，以实现肿瘤的个体化治疗．采用以倾斜式热辐射原理建立的微流控温度梯度毛细管电泳(temperature gradient capillary electrophoresis，TGCE)基因突变检测系统，实现了对98例石蜡包埋大肠癌组织中K-ras基因突变的高灵敏度筛查，突变阳性检出率为47.96%，显著高于PCR产物直接测序的23.47%．克隆测序显示该方法至少能检测到2.08%的K-ras基因突变体．K-ras基因突变与临床病理学参数的关系分析显示，直肠癌中K-ras基因突变率明显高于结肠癌(P < 0.05)，而与年龄、性别、组织学类型和肿瘤分期等无显著相关性．该检测方法为肿瘤早期诊断和指导临床用药提供了一种灵敏度高、检测速度快、便于大规模筛查的有效手段.]]> 2010/3/23 0:00:00 743true Hipposideros armiger)自然状态下的恒频-调频发声信号为声刺激，在5只听力正常的大蹄蝠上记录了下丘神经元的声反应和恢复周期(n = 93)．结果发现，根据神经元恢复率达50%时的双声刺激间隔(inter pulse interval，IPI)，可将其分为长时恢复型(long recovery，LR；47.4%)、中等时间恢复型(moderate recovery，MR；35.1%)和短时恢复型(short recovery，SR；17.5%)．每种类型依据其恢复率随IPI增加而呈现的不同变化又可进一步分为单IPI反应区神经元，多IPI反应区神经元，以及单调IPI反应神经元．LR，MR和SR型神经元恢复率达50%时的平均IPI分别为(64.0 ± 24.8)，(19.6 ± 5.8)和(7.1 ± 2.4) ms (P < 0.001)，相对应的平均理论每秒声脉冲数分别为(18.2 ± 7.0)，(55.4 ± 15.7)和(171.3 ± 102.9) Hz (P < 0.001)．结果提示，单IPI和多IPI反应区神经元具有特殊IPI反应特性，能对蝙蝠捕食和巡航期间所处的时相做出准确判断，而单调IPI反应神经元对IPI变化的敏感性较强，但时相判断性较差．另外LR，MR和SR型神经元恢复周期和理论脉冲跟随率的平均结果均能与这种蝙蝠回声定位期间3个时相的发声行为相匹配，且神经元恢复周期参与决定声脉冲跟随率，满足了蝙蝠巡航、捕食的行为学需要．]]> 2010/3/23 0:00:00 742true INK4a通过抑制CDK4/6的活性而在细胞周期进行中发挥重要的作用，研究发现，组蛋白乙酰转移酶p300能促进p16INK4a启动子活性，而组蛋白去乙酰化酶HDAC3/4能够逆转由p300介导的p16INK4a启动子活性的增加，HDAC3/4能够降低p16INK4a mRNA和蛋白质的水平．染色质免疫沉淀(ChIP)实验结果表明转染p300表达质粒能够逆转由HDAC3/4介导的p16INK4a启动子组蛋白的低乙酰化状态．此外，免疫荧光实验结果表明HDAC4的核质穿梭起着重要的作用．免疫印迹和染色质免疫沉淀实验证明HDAC的抑制剂丁酸钠盐(NaBu)能通过诱导组蛋白的高乙酰化而促进p16INK4a的表达．基于这些实验结果，推测出可逆的组蛋白乙酰化参与p16INK4a基因转录调控的模型．]]> 2010/2/23 0:00:00 741true 2010/3/23 0:00:00 740true 2010/3/23 0:00:00 739true 2010/3/11 0:00:00 738true 2010/3/24 0:00:00 737true IC50分别由(1 978.2 ± 90.3) mg/L和(1 875.6 ± 83.2) mg/L，降低到(1 123.5 ± 54.2) mg/L和(1 084.5 ± 60.6) mg/L，逆转倍数分别为1.76和1.73．同时动物实验发现，耐药组大鼠在给予XIAP反义寡核苷酸后，ADT明显高于对照组(P < 0.05)， ADD时程也明显缩短．上述结果证明，XIAP在耐药的K562/Dox细胞株存在高表达，下调XIAP在K562/Dox细胞株表达可以改善K562/Dox对卡马西平和苯妥英钠的耐药性．而且下调XIAP表达可以协助AEDs改善耐药大鼠的电生理活动，提示XIAP参与了难治性癫痫的耐药．]]> 2010/1/26 0:00:00 736true P < 0.001)，内皮脂酶蛋白表达较对照组上调2.54倍(P < 0.001)．蛋白酶体抑制剂MG132干预明显抑制180 mmHg培养诱导的内皮脂酶 mRNA的表达，MG132干预组内皮脂酶mRNA表达约为180 mmHg培养组的50% (P < 0.05)．结果说明，高静水压上调内皮脂酶 mRNA和蛋白质的表达，其机制可能与核因子-κB活化有关．]]> 2010/2/23 0:00:00 735true +数量以及CD4+/CD8+的比值，表明茶树花多糖能增强机体对肿瘤的防御，在一定程度上归功于其对免疫调节作用．]]> 2010/1/26 0:00:00 734true 45为野生型rBTI 的作用位点．稳定性分析表明，rBTI、aBTI 和fBTI 均具有很高的热稳定性及酸碱稳定性．采用MTT 比色法分别检测野生型和突变型抑制剂对肿瘤细胞生长的抑制作用．结果表明，突变前后的3种抑制剂对HL-60 和EC9706 细胞的生长均显示出很强的抑制作用，并且具有明显的浓度依赖性和时间依赖性．通过研究不仅确定了rBTI 的作用位点，而且获得了两种新型蛋白酶抑制剂，且作用位点的改变并不影响其对肿瘤细胞的生长抑制作用．为进一步研究胰蛋白酶抑制剂的结构与功能的关系以及抗肿瘤药物的研制提供了新的思路．]]> 2010/1/21 0:00:00 733true BADH2和双子叶植物拟南芥GR7基因片段在烟草叶片中的转录后剪接加工进行分析．结果表明，一些重要剪接调控元件在植物中保守存在，而烟草瞬时表达系统可以作为研究高等植物剪接调控的重要工具，快捷灵敏地检测基因的剪接加工方式．]]> 2010/3/9 0:00:00 732true OsWRKY89基因启动子中的UV-B反应相关元件，分析了转启动子不同缺失片段与gus融合基因的水稻幼苗，发现在该启动子中存在UV-B反应元件，位于基因翻译起始位点上游-1 213～-1 188之间的25 bp区域，碱基序列为AAGATCTACCATTGCTCTATAGCTT．结合OsWRKY89和UV-B诱导上调表达基因启动子序列分析发现，该元件区在水稻UV-B反应基因启动子上具有高度的保守性，而且与已知保守的光反应元件位置邻近，表明该区域在水稻UV-B反应的转录调控中可能具有重要功能．]]> 2010/4/20 0:00:00 731true 2010/5/7 0:00:00 730true 2010/2/4 0:00:00 729true 2010/2/4 0:00:00 728true 2010/3/9 0:00:00 727true 2010/2/4 0:00:00 726true 2010/1/21 0:00:00 725true 2010/1/21 0:00:00 724true 2010/1/19 0:00:00 723true Anabaena sp. PCC 7120藻胆体核亚基ApcD结合色素PCB的体内重组中，发现色素蛋白在提纯前后最大吸收峰和荧光峰发生了红移，从提纯前的605 nm及633 nm变为提纯后的650 nm及665 nm．为了研究该现象的原因，构建了ApcD的8个突变体，重组结果显示：突变体ApcD (Y88I) 色素蛋白在提纯后的吸收光谱和荧光光谱较提纯前均多出一个峰，分别为668 nm，690 nm；ApcD(W59Q)、ApcD(Y73A)、ApcD(W87E) 色素蛋白在提纯前后的吸收光谱和荧光光谱一致；ApcD (M126S)、ApcD (Y116S)、ApcD (M160T) 色素蛋白在提纯前后的吸收光谱一致，而提纯后的荧光峰位置较提纯前分别红移了5 nm、7 nm和10 nm；ApcD (M115I) 色素蛋白在提纯前后的吸收光谱和荧光光谱均发生了红移，从提纯前的605 nm和633 nm变为提纯后的638 nm和655 nm．这些色素蛋白在酸性尿素溶液变性条件下的最大吸收峰始终在662 nm，表明辅基色素仍然是藻蓝胆素；在对PCB-ApcD、 PCB-ApcD (Y116S) 及PCB-ApcD (M160T) 的圆二色谱分析发现，该两个氨基酸的突变均对脱辅基蛋白所连接的色素构象产生了一定的影响，而对重组蛋白的二级结构没有影响．]]> 2010/1/26 0:00:00 722true Bacillus sp. I121为实验材料，分析了该嗜盐菌质膜上的盐胁迫响应蛋白．为此，通过蓝色温和凝胶双向电泳(BN/SDS-PAGE)对纯化的质膜组分进行了差异蛋白质组学研究．经MALDI-TOF/TOF质谱分析，鉴定了8个盐胁迫响应蛋白．盐胁迫诱导上调表达的蛋白质包括ABC型转运蛋白、3-磷酸甘油透性酶、嘧啶核苷转运蛋白和甲酸脱氢酶，下调表达的蛋白质包括琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase)铁硫亚基、黄素蛋白亚基、细胞色素b556亚基以及分子伴侣DnaJ的同源蛋白；酶活力测定结果表明胁迫条件下上述蛋白质的活性变化与表达量变化相一致．这些蛋白质中绝大多数属于高度疏水的跨膜蛋白，主要负责物质跨膜运输及能量代谢．上述结果表明，中度嗜盐菌Bacillus sp. I121可通过加快跨膜物质运输，同时抑制TCA循环完成盐胁迫条件下相容性溶质脯氨酸和四氢嘧啶的合成与积累．也进一步证明，蓝色温和凝胶双向电泳不仅可用于线粒体、叶绿体中蛋白质复合物的分析，也同样适用于细胞质膜上高度疏水蛋白复合物的比较研究．]]> 2010/3/22 0:00:00 721true IC50 值为(1.03 ± 0.04)g/L．该部分酶解液通过纯化获得 ACE 抑制肽，IC50 值为(0.009 4 ± 0.000 2)g/L，相当于(27.36 ± 0.14)μmol/L，序列经鉴定为 Val-Glu-Pro．Lineweaver-Burk 图和 Dixon 图表明该 ACE 抑制肽为非竞争性抑制剂，Ki 值为(23.59 ± 0.54)μmol/L．体外稳定性实验显示，该抑制肽在胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶等胃肠蛋白酶的消化下能够保持良好的抑制活性，表明螺旋藻源 ACE 抑制肽可以用于降血压功能食品和药剂方面，具有很好的发展前景．]]> 2009/12/15 0:00:00 720true L 和 YFP-Bax 质粒，发现 BimL 可以促进 Bax 发生聚集，并且它们二者之间不是直接发生相互作用．上述结果证明，BimL在 TNF-α 诱导神经细胞凋亡过程中起到了重要作用， BimL 在 TNF-α 诱导分化 PC12 细胞凋亡的过程中间接激活了 Bax．]]> 2010/1/27 0:00:00 719true 2009/11/30 0:00:00 718true 2009/12/23 0:00:00 717true 2009/12/23 0:00:00 716true 2010/1/27 0:00:00 715true n=3，P < 0.05)；b．hTERT启动子调控rVBMDMP基因的表达具有抑制肺癌A549细胞的生长和裸鼠成瘤作用(n=6，P < 0.05)；c．rVBMDMP基因表达能促进肺癌A549细胞凋亡和Caspase-3蛋白表达．以上结果说明，hTERT启动子调控rVBMDMP基因表达后，通过提高Caspase-3的表达水平，促进细胞凋亡而抑制肺癌A549细胞的生长．]]> 2010/2/4 0:00:00 714true 2010/1/21 0:00:00 713true 3O4磁核，以壳聚糖为包裹材料包被自制的磁核，采用乳化交联法制备了具有核-壳结构的磁性高分子微球-壳聚糖磁性微球，并偶联肝素配基得到了一种新型亲和磁性微球，应用SEM、FT-IR、XRD等对微球的粒径、形貌、结构和磁响应性进行了表征．考察了该亲和磁性微球对凝血酶的分离纯化性能，并与传统的DEAE离子交换色谱法进行了比较．结果表明，所得亲和磁性微球具有较窄的粒径分布、形状规整，粒径在50 nm左右．对凝血酶一步吸附纯化获得了比活为1879.71 U/mg的酶，得率85%，纯化倍数11.057，而传统柱层析法得率为72%，纯化倍数仅为5.33．制备了壳聚糖亲和磁性微球，并将磁分离技术应用于凝血酶的分离纯化，得到了较好的效果，这将对于凝血酶的纯化及生产具有一定参考价值．]]> 2009/11/30 0:00:00 712true a = b =35.2Å, c= 233.3Å.]]> 2010/1/21 0:00:00 711true 4(LDH-C4)基因突变在男性不育发病中的作用，利用LDH-C4特异性底物对100名不明原因男性不育症患者的精子LDH-C4进行活性显色，用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对LDH-C4活性低下的患者进行LDHC基因PCR产物的突变筛查，对DHPLC峰形异常的PCR产物进行序列测定．筛选到一组精子LDH-C4活性明显下降的患者，其中1名患者的LDHC基因PCR产物在DHPLC中呈异常洗脱峰．对这一PCR产物进行序列测定，发现患者LDHC基因第5外显子的115位碱基发生了T→A的杂合改变(GenBank登录号GU479375)，该突变使LDHC基因的178位密码子由原来的TTG(编码亮氨酸)变为TAG(终止密码子)，形成截短的C亚基．T克隆-测序进一步证实了该无义突变的杂合状态．这是在人类LDHC基因上发现的第一个突变，提示LDHC基因突变可能是男性不育发病的原因之一．]]> 2010/2/8 0:00:00 710true FDDV12的跨膜蛋白gp45在马体内发生高频率261W位点翻译终止突变，使该蛋白质C端出现154个氨基酸的截短．为了探讨该截短对EIAV疫苗株生物学特性的作用，以EIAV弱毒疫苗株感染性克隆为骨干，构建了gp45截短型感染性病毒株，检测该截短突变对EIAV疫苗株在体外培养的马外周血单核细胞由来的巨噬细胞(MDM)、驴MDM和驴胎皮细胞(FDD)中的复制．实验结果表明，gp45截短型毒株在马和驴MDM中复制能力比未截短型毒株显著降低(P < 0.01)，特别是在马MDM中此差异更明显．相反，截短型毒株在FDD中的复制能力则显著高于未截短型毒株(P < 0.01)．此外，结果显示gp45截短型毒株在马MDM中的低水平复制降低了EIAV对其靶细胞诱导的凋亡．以上结果提示，EIAV疫苗的gp45截短型毒株是适应在体外FDD细胞中传代致弱的变异，该变异导致疫苗株在EIAV体内主要靶细胞巨噬细胞中复制能力的降低，导致毒力进一步减弱．]]> 2009/12/18 0:00:00 709true 2009/12/29 0:00:00 708true pSilencer2.0-U6质粒定向连接，构建靶向PCNA基因的siRNA真核表达载体pShPCNA，经DNA测序证实与设计完全一致．随后采用WST法及克隆形成抑制观察细胞增殖抑制情况、划痕实验来观察细胞迁移能力，流式细胞术、Hoechest 33258染色、细胞线粒体膜电位改变检测细胞凋亡．在转染HepG2细胞48 h后，pShPCNA组细胞PCNA mRNA表达明显下调，并出现明显的增殖抑制作用，明显抑制细胞克隆的形成和细胞的迁移力，且呈剂量-效应关系．流式细胞术检测发现：pShPCNA组细胞明显阻滞于G0/G1期，并出现明显的亚二倍体凋亡峰，出现明显的早期凋亡细胞群．荧光显微镜检测表明，细胞线粒体膜电位降低，并且细胞出现核固缩、凋亡小体等凋亡形态学变化．上述结果表明，成功构建了靶向PCNA基因的siRNA真核表达载体pShPCNA,pShPCNA转染HepG2细胞48 h后，能够显著抑制细胞的生长增殖、诱导细胞凋亡、细胞周期阻滞于G0/G1期．]]> 2009/11/30 0:00:00 707true 2009/12/29 0:00:00 706true 2009/12/24 0:00:00 705true Igf-1基因剪接变异产生，拉伸刺激会促使成骨细胞表达力生长因子．比较分析了MGF及其羧基端E肽(MGF-Ct24E)对成骨细胞前体细胞MC3T3-E1分化的影响．结果显示：MGF和MGF-Ct24E具有显著激活胞外信号调节激酶1/2(Erk1/2)的作用，并降低了成骨细胞碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原的表达，促进了骨桥蛋白(OPN)的表达，减少了核心绑定因子(core binding factor 1,Cbfα-1)的核转运量，对成骨细胞的分化具有延迟效应，这种效应通过抑制剂PD98059抑制Erk1/2的活化得到逆转；MGF还能显著激活磷脂酰肌醇3-激酶信号通路中的蛋白激酶B(Akt)，该活化作用对成骨细胞分化是必需的，钙沉积分析显示长期培养下的细胞MGF促进了矿化节结的形成．这些结果说明，MGF-Ct24E对成骨细胞的分化具有抑制作用，这种作用与Erk1/2的活化有关，MGF因为包含E肽和IGF-1部分，能分别激活Erk1/2和Akt，因此对成骨细胞分化表现出双重效用，在成骨细胞分化早期，具有一定的延迟效应，而在分化晚期对成骨细胞分化表现出促进作用．]]> 2010/1/7 0:00:00 704true 2+浓度的变化．实验结果表明：暴露于0.1mT，0.5mT和1.0mT电磁场海马神经元的ROS水平和Ca2+浓度都比对照组有显著性提高(P < 0.01)．暴露于0.1mT和0.5 mT电磁场的ROS水平和暴露于0.1mT电磁场的Ca2+浓度与自由基清除剂+电磁场(Trolox+EMF)组比较没有差异(P > 0.05)，暴露于1.0mT电磁场的ROS水平和暴露于0.5mT和1.0mT电磁场的Ca2+浓度比Trolox+EMF组有显著性提高(P < 0.01)．表明电磁场可以促进细胞自由基的产生，并且ROS水平与胞内Ca2+浓度有正相关性．]]> 2010/1/7 0:00:00 703true 2009/12/18 0:00:00 702true 2009/11/25 0:00:00 701true DHFR)在斑马鱼咽弓发育过程中的作用．石蜡切片以及软骨染色结果显示，DHFR表达阻抑导致斑马鱼咽弓以及腭发育明显异常，而DHFR过表达可部分挽救上述发育异常表型．TBX1和HAND2在咽弓发育中有重要作用．通过胚胎整体原位杂交以及Real-time PCR技术检测TBX1和HAND2表达水平．DHFR表达阻抑后TBX1和HAND2的表达降低，DHFR过表达可使TBX1和HAND2的表达增加．上述结果表明，DHFR在斑马鱼咽弓发育过程中扮演重要角色，DHFR通过影响TBX1和HAND2的表达而调控咽弓的形成和分化．]]> 2009/12/28 0:00:00 700true 2009/11/30 0:00:00 699true 2009/12/15 0:00:00 698true P < 0.05)，克隆形成能力显著降低(P < 0.01)，瘤细胞群体中处于G0/G1 期细胞数增加，S期细胞数减少，细胞阻滞于G0/G1 期．Tet 调控NPCEDRG基因表达CNE2 细胞系成功建立，恢复NPCEDRG表达能部分逆转CNE2的恶性表型，证明NPCEDRG 是一个鼻咽癌相关的抑瘤基因．]]> 2010/1/7 0:00:00 697true P < 0.05)； Lewis y单克隆抗体处理后RMG-I-H细胞p38MAPK mRNA水平降低(P < 0.05)，不同浓度SB203580(0.1 mmol/L，1 mmol/L，10 mmol/L)作用下RMG-I-H细胞的凋亡率分别为(15.927±0.861)%、(18.187±0.481)%及(33.565±0.912)%，明显高于空白组和对照组(P < 0.05)，SB203580处理后caspase-3的mRNA和蛋白质水平均明显高于空白组和对照组(P < 0.05)，卡铂处理后p38MAPK 及caspase-3 mRNA水平均增加，SB203580处理后，caspase-3mRNA水平增加．说明Lewis y抗原介导的卵巢癌细胞凋亡与p38MAPK信号通路有关，可能通过p38MAPK信号通路抑制卵巢癌细胞凋亡，引起耐药性．]]> 2009/12/15 0:00:00 696true P < 0.05)．但Chk2 siRNA转染后加入15 mg/L DADS，与单独15 mg/L DADS作用相比，细胞周期G2/M期比例差异不明显(P > 0.05)．Chk1和Chk2下游分子的改变显示，DADS可抑制BGC823细胞中CDC25C和cyclinB1表达(P < 0.05)，但Chk1基因沉默后加入DADS，CDC25C和cyclinB1表达却不被抑制(P > 0.05)，Chk2基因沉默后对DADS抑制CDC25C和cyclinB1表达的作用无影响．由此得出结论， Chkl基因沉默可消除DADS诱导BGC823细胞G2/M期阻滞作用，DADS阻滞G2/M期可能是通过Chk1/CDC25C/cyclinB1信号通路起作用．]]> 2009/12/11 0:00:00 695true 2009/12/11 0:00:00 694true 2009/11/6 0:00:00 693true 2009/12/15 0:00:00 692true MRS2 基因编码线粒体镁离子转运蛋白，MRS2缺失会导致酵母线粒体镁离子浓度下降、线粒体内Ⅱ型内含子剪接缺陷和非发酵碳源培养基上的生长缺陷．为了增进对线粒体镁离子代谢调控基因的了解，利用酿酒酵母mTn-lacZ/LEU2转座子文库筛选MRS2的抑制基因，发现线粒体载体家族成员YMR166C基因的缺失可以挽救MRS2基因缺失突变体的生长缺陷、Ⅱ型内含子剪接缺陷，并可以调节线粒体镁离子浓度，首次发现YMR166C是线粒体镁代谢相关基因.]]> 2009/11/24 0:00:00 691true 2009/10/28 0:00:00 690true Parkin基因是帕金森病的致病基因之一，Parkin蛋白作为泛素-蛋白酶体通路(ubiquitin-proteasome pathway，UPP)的一种E3酶，介导了多种底物的泛素化过程，而后者与帕金森病的发病机制有着密切的联系．α-酮戊二酸载体蛋白(2-oxoglutarate carrier protein，OGCP) 是一种线粒体内膜蛋白．采用激光共聚焦技术和免疫共沉淀技术证实，在HEK293细胞中Parkin蛋白与OGCP共定位，且二者之间存在相互作用关系；通过体内、外泛素化实验发现Parkin蛋白能介导OGCP的泛素化．提示OGCP可能是Parkin蛋白的泛素化底物蛋白，且Parkin蛋白能促进OGCP的泛素化．]]> 2009/11/30 0:00:00 689true 2009/12/15 0:00:00 688true MetaGen，对Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG)中物种特异的各层次代谢系统进行建模，生成的代谢网络以酶图和通路图的方式表示．利用该工具，对人类代谢系统的bow-tie结构进行了初步研究，并以此为例展示了该工具广阔的应用前景． MetaGen利用KEGG web服务保证建模数据的可靠性，依靠本地关系数据库加速网络建模过程并提供更多的数据管理和利用方式， 并结合高级JAVA技术提高代码的可扩展性．MetaGen完全开源，可直接从http://bnct.sourceforge.net/下载．]]> 2009/9/30 0:00:00 687true 2009/11/24 0:00:00 686true 2009/10/22 0:00:00 685true 2009/9/27 0:00:00 684true 2009/11/6 0:00:00 683true TCID50为7.5，病毒传4代后其血凝素(HA)滴度稳定在1∶256，半数感染剂量EID50为8，鸡胚传20代，经RT-PCR鉴定未发现重组病毒基因突变，电镜观察重配病毒符合流感病毒的主要特征；蔗糖纯化的病毒经肌肉注射(灭活)及滴鼻(减毒活病毒)两种途径免疫BALB/c小鼠，结果显示：滴鼻免疫和肌肉注射都可以产生较高效价的血凝抑制(HI)抗体，肌肉注射组产生的HI抗体略高(P = 0.044)，但肌肉注射组检测不到高效价IgA抗体；滴鼻免疫组鼻冲洗液中可以检测到高效价的IgA抗体，同型病毒感染后，IL-1β、TNFα、IFN-α等前炎因子分泌较早，且高于肌肉注射组(P < 0.05)，可见，喷鼻减毒疫苗比灭活全病毒疫苗能更好地激发黏膜免疫反应．通过对小鼠各个器官病毒载量的检测发现，4天后鼻腔、气管、脑、肺、脾脏没有病毒存在，证明减毒活疫苗株在小鼠上是安全的．以上数据可以初步断定，重组病毒有作疫苗候选株的可能，而且喷鼻疫苗具有降低免疫剂量、同时激活体内体液免疫和细胞免疫的功能．]]> 2010/10/12 0:00:00 682true 2010/9/21 0:00:00 681true p311是克隆到的一个在分隔膜形成阶段特异表达的基因，可能在肺泡发育中起重要作用．为进一步探讨神经元蛋白3.1(P311)对肺发育过程的影响，构建了小鼠肺组织 cDNA文库，以融合Gal4 DNA结合结构域的重组P311蛋白为诱饵，利用酵母双杂交技术从文库中筛选P311结合蛋白．通过免疫共沉淀和双分子荧光互补等技术进一步验证， SPARC(secreted protein, acidic and rich in cysteine)被确定为P311 相互作用蛋白．进一步的研究发现，SPARC在肺组织中具有与P311相似的表达时序特征，双重免疫组织化学染色显示SPARC和P311在小鼠肺组织中共定位于肺泡上皮细胞和肌成纤维细胞中．提示P311可能通过与SPARC的相互作用影响肺泡发育．]]> 2010/9/14 0:00:00 680true IC50为(1.80±0.33) μmol/L．流式细胞术碘化丙锭(PI)单染显示PAB 作用24 h，可致MCF-7 细胞 G2/M 期比例增至93% 以上，annexin V-FITC 和PI 双染显示PAB 促进MCF-7 细胞凋亡．高内涵分析显示：PAB 作用16 h，MCF-7 细胞有丝分裂指数可达40% 左右，伴有cyclin B1 含量增加；PAB 促进微管解聚，干扰有丝分裂二极纺锤体形成；PAB 引起线粒体增生；PAB 导致“葡萄串样”细胞核形成，提示有丝分裂滑脱．结果表明，PAB 抑制MCF-7 细胞增殖、促进MCF-7 细胞凋亡，这些作用可能与其促进微管蛋白解聚、干扰二极纺锤体形成、阻滞有丝分裂、促进线粒体增生有关．]]> 2010/10/12 0:00:00 679true P < 0.01)，AB型活体重显著高于BB型(0.01 < P < 0.05)，AA型的后腿肌肉重极显著高于BB型(P < 0.01)，AA型的后腿脂肪重显著高于BB型(0.01 < P < 0.05)．同时，通过实时荧光定量PCR获得了UCP5基因在初生仔猪心、肝、脾、肺、肾、眼肌、腹脂和大脑等不同组织中基因表达的特性，结果表明，UCP5在猪的各种组织均有表达，在脑和肺中表达量最多．t检验发现，初生达兰猪眼肌中UCP5的表达量显著高于金华猪．]]> 2010/9/21 0:00:00 678true 2010/10/12 0:00:00 677true 2010/6/17 0:00:00 676true 2010/8/3 0:00:00 675true Xenopus tropicalis)是两栖类动物免疫球蛋白研究中常用的模式生物之一，其免疫球蛋白轻链的类型和基因结构已经研究清楚，3种轻链类型分别为：ρ、σ和typeⅢ．通过克隆测序，并对3种轻链重组cDNA克隆的VJ基因片段的连接方式进行了分析，发现在表达的3种轻链中，仅有少量的N和P核苷酸的插入．σ轻链基因的体细胞VJ重组主要依靠微同源重组．而在ρ和typeⅢ 轻链中这种方式不是主要的，ρ和typeⅢ轻链或是通过VJ基因片段的直接连接或是部分删除后连接．研究结果为研究免疫球蛋白轻链多样性产生的机制提供了重要的线索．]]> 2010/6/17 0:00:00 674true BDD-FⅧ基因的功效，将具有促进重链分泌作用的位于Pro1640～Ser1690的酸性区3(acidic region-3，AR-3)引入重链，检验对蛋白质内含子剪接的BDD-FⅧ蛋白分泌和活性的影响．用融合蛋白内含子的附加ar-3重链(HCAR3IntN)基因和轻链(IntCLC)基因共转染培养的HEK293细胞，分别用ELISA和Coatest法定量分析分泌至培养上清中剪接BDD-FⅧ蛋白量和生物活性，并用免疫印迹观察了细胞内的BDD-FⅧ剪接．结果显示，共转HCAR3IntN和IntCLC基因细胞，分泌至上清的剪接BDD-FⅧ蛋白量和活性分别为(173±26) μg/L和(1.31±0.15) U/ml，明显高于未添加ar-3的蛋白质内含子融合重链(HCIntN)与轻链(IntCLC)基因共转染细胞[(102±12) μg/L和(0.79±0.09) U/ml]，提示AR-3对蛋白质内含子剪接的BDD-FⅧ蛋白分泌和活性有明显改善作用．而且，分别转HCAR3IntN和IntCLC基因细胞混合培养后的上清中，亦检测到剪接的BDD-FⅧ蛋白和活性[(35±7) μg/L和(0.28±0.08) U/ml]，表明蛋白质内含子可进行不依赖细胞机制的蛋白质剪接．另外，转基因细胞总蛋白呈现明显的可与FⅧ多克隆抗体进行反应的剪接BDD-FⅧ蛋白条带，直观地反映细胞内BDD-FⅧ的剪接．为动物模体内运用蛋白质反式剪接技术的双腺相关病毒载体(AAV)转BDD-FⅧ基因实验提供了依据．]]> 2010/8/17 0:00:00 673true 2010/9/13 0:00:00 672true 2010/8/31 0:00:00 671true 2010/8/3 0:00:00 670true P < 0.01)，HIF-1α shRNA转染A549/CDDP细胞后HIF-1α、MRP1、LRP mRNA及蛋白质表达下降，逆转A549/CDDP细胞对顺铂耐性82%，纳米颗粒介导HIF-1α shRNA转染A549/CDDP细胞移植瘤裸鼠动物模型后，移植瘤组织中HIF-1α、MRP1及LRP蛋白表达下降，转染HIF-1α shRNA后抑制移植瘤的生长，且与顺铂有协同效应，纳米颗粒转染后裸鼠肝、肾及脑组织无坏死．这些结果说明，纳米颗粒介导HIF-1α shRNA的体内体外转染效率高于脂质体，RNA干扰技术封闭HIF-1α基因可较大程度逆转耐顺铂人肺腺癌细胞的耐药性及其抑制瘤的生长，其作用可能与HIF-1α shRNA降低HIF-1α、MRP1及LRP表达有关，HIF-1α基因可作为逆转肺癌耐药治疗的有效靶点，磁性纳米颗粒介导HIF-1α shRNA质粒转染具有一定的生物安全性．]]> 2010/7/14 0:00:00 669true 2010/5/20 0:00:00 668true 2010/6/10 0:00:00 667true ZmGT1．利用缺失谷胱甘肽转运子基因的突变型酵母菌(hgt1Δ)研究ZmGT1基因的生理功能发现，ZmGT1基因能够修复hgt1Δ突变型酵母菌在谷胱甘肽(GSH)作为唯一硫源的培养基中的生长，并且具有调控谷胱甘肽轭合物GS-N-ethylmaleimide (GS-NEM)吸收的功能．ZmGT1基因在玉米幼苗的各个不同器官均有表达，其中在叶片中的表达量更高．玉米ZmGT1基因能够被除草剂阿特拉津强烈地诱导，经过阿特拉津处理96 h后，玉米叶片中ZmGT1基因的表达量提高约4～5倍，该结果表明，谷胱甘肽转运蛋白在玉米解毒外源有害物质的过程中可能发挥着作用．]]> 2010/6/23 0:00:00 666true 2010/7/20 0:00:00 665true n=3，P < 0.01)．选取与Hsp60关系密切的Bax蛋白进行研究，Western blot结果显示PIG11高表达可引起胞浆Bax向线粒体转位．以上结果表明，PIG11蛋白能与HepG2细胞中的Hsp60结合，促进Hsp60-Bax的分离，引起Bax从胞液到线粒体转位，激活线粒体凋亡途径，这可能是其诱导HepG2细胞凋亡的主要机制之一．]]> 2010/8/17 0:00:00 664true 2011/4/29 0:00:00 663true 2011/7/13 0:00:00 662true 2011/3/23 0:00:00 661true P < 0.05)，高密度脂蛋白胆固醇浓度各组之间没有明显差异，彩色多普勒超声检测发现，AAV-apoAⅠ/SR-BⅠ与AAV-apoAⅠ治疗组的腹主动脉的内中膜厚度相对于AAV-GFP治疗组有了明显下降(P < 0.05)，血清hs-CRP 和SOD的水平有了明显上升(P < 0.01)，血清MDA的水平有了明显的下降(P < 0.01)．同时也检测了动脉硬化相关基因mRNA水平的表达．结果显示，rAAV-hapoAⅠ-IRES-hSR-BⅠ治疗后可能是通过抑制NF-κB的活性发挥抗炎作用减少炎症因子的释放，增加动脉硬化板块的稳定性以及降低血浆胆固醇含量的．总之，利用2型腺相关病毒载体介导的基因转移过度表达人载脂蛋白AⅠ和SR-BⅠ可能对饮食诱发大鼠高胆固醇血症和动脉硬化的产生有利影响．这些结果可能为动脉粥样硬化基因治疗提供了一种新的研究思路．]]> 2011/3/29 0:00:00 660true 2011/4/28 0:00:00 659true 2011/4/11 0:00:00 658true 2011/4/13 0:00:00 657true 2011/4/13 0:00:00 656true IL-28A克隆进昆虫细胞表达载体pIZT/V5-His，构建了重组载体pIZT/V5-His-hIL-28A．利用精子介导法将该重组载体导入家蚕卵，通过绿色荧光筛选并结合PCR、DNA杂交等分子鉴定，证实成功获得了转基因家蚕．Western blotting结果显示，转基因家蚕表达重组hIL-28A的分子质量为25 ku，ELISA检测结果显示，hIL-28A在G3代转基因蚕、后部丝腺、脂肪组织冻干粉中的含量分别为0.198、0.320和0.238 ng/g．表明通过非转座子载体介导可以将外源基因导入家蚕基因组并实现外源基因的表达．]]> 2011/3/17 0:00:00 655true P < 0.05)，同时，蜕膜细胞的凋亡率明显升高(P < 0.05)，而siRNA干扰之后催乳素的含量显著升高，凋亡率明显下降(P < 0.05)，但是，宫角注射MK基因过表达和siRNA干扰重组腺病毒之后，胚胎植入数量均显著减少(P < 0.01)．提示MK基因通过参与小鼠子宫内膜基质细胞的蜕膜化进程，调节蜕膜细胞增殖与凋亡之间的平衡从而影响胚胎的植入．]]> 2011/5/24 0:00:00 654true 2011/3/23 0:00:00 653true 2011/3/17 0:00:00 652true 2011/4/2 0:00:00 651true P < 0.05)．mRNA检测结果显示，咀嚼减少组小鼠4种与认知相关基因的表达量与咀嚼增加组相比都明显下调(P < 0.05)．上述结果提示，切牙咀嚼刺激的长期增加可以提高小鼠的自主运动能力，降低焦虑程度，提高空间认知能力，上调海马中认知相关基因的表达．切牙咀嚼刺激的长期减少，会降低小鼠的自主运动能力，下调认知相关的基因表达，增加大脑皮层中去甲肾上腺素的含量．]]> 2011/4/11 0:00:00 650true 2011/6/16 0:00:00 649true 2011/4/28 0:00:00 648true 2011/4/29 0:00:00 647true 2011/4/11 0:00:00 646true P < 0.05)；与FFP( Day 0)相比，FFP (Day 5)诱导内皮细胞HPMECs的TGF-β信号通路Smad2/3磷酸化显著增加(P < 0.05)；不管是FFP(Day 0)还是FFP (Day 5)体外均能诱导内皮细胞迁移，与FFP( Day 0)相比，FFP(Day 5)诱导细胞迁移能力显著降低(P < 0.05)；阻断TGF-βⅠ型受体ALK5的活性、下调Smad 3信号传导可恢复FFP(Day 5)诱导细胞迁移能力．上述结果表明，FFP能显著诱导内皮细胞迁移，4℃冷藏增加FFP 中TGF-β1水平并增加内皮细胞TGF-β1信号传导，进而降低FFP诱导内皮细胞迁移．提示，FFP复苏疗效的提高可能与增加内皮细胞迁移有关，冷藏导致内皮细胞迁移降低进而降低FFP复苏疗效．]]> 2011/4/11 0:00:00 645true P = 0.005 8)，结果表明利用菌蜕递送系统能较好地提高核酸疫苗的免疫应答水平．]]> 2011/3/23 0:00:00 644true 2011/4/11 0:00:00 643true 2011/3/29 0:00:00 642true 2011/3/23 0:00:00 641true -6 mol/L能显著促进成骨细胞的成熟分化，表现为提高ROB的ALP活性、促进钙盐沉积、增加钙化结节数量；提高bFGF、IGF-1、Osterix、Runx-2和BMP-2 mRNA表达水平；促进COL-Ⅰ的合成．由此可知终浓度为1×10-6 mol/L 8-异戊烯基柑橘素能显著促进ROB的分化成熟及生物矿化，证明8-异戊烯基柑橘素能促进成骨细胞的分化成熟及生物矿化，作为促进骨修复和抗骨质疏松的有效成分具有较大的药用价值．]]> 2011/3/17 0:00:00 640true 2011/3/8 0:00:00 639true P < 0.01)．正常孕妇血浆中ADAM19为(4.52 ± 0.10) μg/L，晚发型子痫前期为(4.32 ± 0.11) μg/L，早发型子痫前期(3.78 ± 0.10) μg/L．早发型子痫前期组与对照组比较有统计学差异(P < 0.001)，晚发型子痫前期组与对照组比较无统计学差异(P > 0.05)，早发型与晚发型子痫前期比较有统计学差异(P < 0.001)．结果表明，子痫前期胎盘组织中ADAM19过度表达可能与子痫前期的发生和发展有关，ADAM19有可能作为预测子痫前期发病的分子标志．]]> 2011/3/17 0:00:00 638true 2011/3/23 0:00:00 637true 2011/3/17 0:00:00 636true 2011/1/31 0:00:00 635true 2011/2/24 0:00:00 634true P < 0.01)，Osterix基因的表达量、碱性磷酸酶活性和钙化结节数等均显著高于对照组．L-NAME组各项指标均低于空白对照组，SEMF+L-NAME组则略高于空白对照组而低于SEMF组．以上结果表明SEMF促进成骨细胞成熟矿化过程中NO信号通路被激活，如该通路被抑制，则SEMF的促成骨作用被抵消．]]> 2011/3/8 0:00:00 633true 2011/1/28 0:00:00 632true 2011/2/24 0:00:00 631true Spirulina platensis)中发现的一种血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽．以原发性高血压大鼠(SHR)为模型，检测单次口服和一周间口服 VEP 的降压效果，并通过Real-time PCR和酶联免疫吸附法(ELISA)探索其对肾素-血管紧张素系统(RAS)主要成分在 SHR 大鼠肾脏和血清中的表达调控作用．结果表明：口服VEP的最低有效降压剂量为5 mg/kg，加大剂量后表现出剂量效应，最低加权收缩压(WSBP)出现在口服后6 h，最低加权舒张压(WDBP)出现在口服后4 h．在一周间口服试验中，10 mg/kg VEP处理组的WSBP在第5日显著低于负对照组．此外，口服VEP显著下调了SHR大鼠肾脏中肾素(renin)、ACE、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)类型1受体(AT1)的mRNA 表达，并上调AngⅡ类型 2受体(AT2)的mRNA表达，说明VEP的降压效果可能与对RAS系统的抑制作用相关，在高血压的预防和治疗中具有潜在的应用前景.]]> 2011/3/8 0:00:00 630true 2011/2/24 0:00:00 629true ex vivo)中，显示出良好的应用前景．]]> 2010/12/31 0:00:00 628true trans retinoic acid，ATRA)处理人肝癌Bel 7402和HepG2细胞24 h后PTEN表达的变化．免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与PTEN相互作用．激光共聚焦显微镜观察AFP与PTEN在细胞共定位．RNA干扰(RNAi)技术抑制AFP表达，再用ATRA处理24 h后检测细胞内PTEN表达的变化，并分析蛋白激酶B(AKT)的磷酸化．用pcDNA3.1质粒和人afp基因连接构建表达AFP的载体(称为pcDNA3.1-afp)，然后转染到不表达AFP的人肝癌HLE细胞．结果显示，人肝癌Bel 7402和HepG2细胞均有PTEN的表达，ATRA(160 μmol/L)处理24 h后能促进这些细胞的PTEN表达．Co-IP技术研究发现AFP能与PTEN结合．共聚焦显微镜观察显示AFP与PTEN共定位于细胞浆．干扰AFP表达后，PTEN表达明显提高．抑制AFP表达后，ATRA能显著促进Bel 7402细胞内PTEN的表达，并能抑制AKT的磷酸化．转染pcDNA3.1-afp载体后，HLE细胞内有AFP表达，并与PTEN结合，且发现pcDNA3.1-afp载体能增加AKT的磷酸化[p-AKT(Ser473)]，对抗ATRA抑制HLE细胞增殖．研究的结论是：肝癌细胞内表达的AFP能与PTEN结合并抑制PTEN对AKT的去磷酸化作用，肝癌细胞内高表达的AFP能激活AKT信息通路．胞浆内的AFP是肝癌细胞耐受ATRA的重要因子．]]> 2010/12/27 0:00:00 627true 2010/11/23 0:00:00 626true 2010/12/27 0:00:00 625true m)值的改变，并用JC-1荧光染料染色，激光共聚焦显微镜观察线粒体膜电位变化．结果显示，分离自臭灵丹的HTMF呈浓度、时间双重依赖性显著抑制CNE细胞的增殖，诱导细胞凋亡，引起线粒体膜电位下降及凋亡蛋白Caspase3和Caspase9的活化．提示：3, 5-二羟基-6, 7, 3′, 4′-四甲氧基黄酮对人鼻咽癌CNE细胞的生长有显著的抑制作用，并可通过降低线粒体膜电位激活Caspase9，进而活化Caspase3诱导CNE细胞凋亡．]]> 2010/12/27 0:00:00 624true 2010/11/18 0:00:00 623true 2)溶液分别进行缺氧干预6、12、24、48和72 h，不加CoCl2溶液培养的Müller细胞为正常对照．采用RT-PCR法、Western blot法和免疫细胞化学染色法检测GLAST和GS的表达，并检测谷氨酸摄取及细胞凋亡情况．结果显示，缺氧早期GLAST表达较正常对照组增强(P < 0.001)，CoCl2溶液干预12 h后达到最强(P < 0.05)，之后逐渐降低．CoCl2溶液干预72 h后GLAST表达与正常对照组相比无明显差异(P > 0.05)．而缺氧也使GS的表达较正常对照组增加 (P < 0.001)，CoCl2溶液干预48 h后GS表达最强(P < 0.001)，之后开始下降．缺氧促进Müller细胞对谷氨酸的摄取，CoCl2溶液干预48 h后L-[3, 4-3H]-谷氨酸的摄取量最大(P < 0.005)，之后开始下降．CoCl2溶液干预后，Müller细胞死亡数较正常对照组无明显差异(P > 0.05)．结果表明，在一定时间范围内缺氧能够增强Müller细胞GLAST及GS的表达，增加谷氨酸的摄取．但持续缺氧最终会引起Müller细胞功能失代偿，从而导致谷氨酸的代谢能力降低．]]> 2010/11/18 0:00:00 622true 2010/11/5 0:00:00 621true Acidianus tengchongensis)来源的Ⅱ型伴侣素ATcpnβ已获得晶体结构解析，其顶端结构域突触下端相应于Ⅰ型伴侣素GroEL的重要底物结合位点处的氨基酸多为极性氨基酸，将其突变为疏水性氨基酸时，突变体对变性底物的捕获能力显著增强．表面等离子共振研究表明，ATcpnβ对于化学变性底物的再折叠中间体的其捕获作用不依赖于Mg2+/ATP．前期对该伴侣素冷冻电镜观察和结构解析表明，ATP的存在并不能驱动ATcpnβ从开放构型向闭合构型转变，但是表面等离子共振研究表明，ATcpnβ对热变性过程中已经聚集的底物的捕获作用依赖于Mg2+/ATP，说明Mg2+/ATP可以介导ATcpnβ顶端结构域一定的构象变化，引起顶端结构域疏水残基的进一步暴露，从而能够与大分子聚集体紧密结合．两个方面的研究均表明，伴侣素蛋白与变性底物的结合仍然以疏水相互作用为主，并且伴侣素蛋白与变性底物的结合受Mg2+/ATP的结合调控，与伴侣素蛋白疏水面的暴露程度相关．]]> 2010/11/23 0:00:00 620true 2010/12/27 0:00:00 619true MCC)为0.91，各项统计结果表明：功能域组分方法可以很好地应用在蛋白质折叠识别中，LIFCA相对简单的分类规则可以很好地集中蛋白质的大部分功能特性，反映了结构与功能的对应关系．]]> 2010/11/10 0:00:00 618true CYCB1;1的表达受到了明显抑制，这表明在根尖分生区W7可能通过对活性钙调素的抑制作用影响了根尖分生区域的细胞增殖，而根尖分生区正常的细胞增殖需要一定量活性钙调素蛋白的存在．脱落酸(ABA)是植物逆境下的重要激素，在植物种子萌发及幼苗生长发育中发挥着重要作用，W7存在下的拟南芥幼苗对ABA的敏感性下降．借助反向遗传学手段获得了拟南芥中三个编码典型钙调素蛋白基因的三重缺失突变体cam234，蛋白质印迹结果表明三重缺失突变体中钙调素蛋白的含量明显降低．相同培养条件下与野生型相比，三重突变体幼苗根长变短，并且幼苗对ABA敏感性也表现下降趋势，暗示着这三个基因编码的钙调素蛋白可能参与了根分生区域细胞增殖过程及幼苗对脱落酸的敏感性反应，讨论了钙调素的细胞增殖功能及与幼苗对脱落酸的敏感性反应间的关系．]]> 2010/11/10 0:00:00 617true 2010/4/20 0:00:00 616true 2010/11/23 0:00:00 615true vp4，vp6和vp7的全长cDNA，对它们编码的蛋白质序列和可能的抗原表位肽进行了预测，选择了RV主要抗原蛋白VP7、VP6和VP4的4个抗原表位肽，通过人工合成DNA的方式将这些抗原表位肽基因串联融合成一个阅读框RME (rotavirus multiple epitopes, RME)并构建原核表达载体．大肠杆菌表达的RME在ELISA反应中可被RV多克隆抗体识别，纯化的RME蛋白注射免疫小鼠可诱导特异性免疫应答，产生高滴度的同源氨基酸序列特异抗体和人RV抗体，其中针对RME的IgG抗体滴度达到l∶40 000，针对单个抗原表位EV7、EV6和EV4的IgG抗体滴度达l∶10 000～l∶20 000，针对RV Wa株的IgG抗体滴度较低为l∶2 500，但能特异地中和该病毒对MAC145细胞的侵染．上述结果为新型RV基因工程疫苗的研发提供了论据和基础．]]> 2010/11/10 0:00:00 614true 1099、Ser2004的密码子前断裂为3段，分别与2种不同的内含肽即Ssp DnaE内含肽和Ssp DnaB内含肽编码序列融合，构建到真核表达载体pcDNA3.1(+)，得到3个分别融合内含肽的vWF片段基因真核表达载体，共转染培养的293细胞，通过瞬时表达，电泳观察培养上清中的vWF多聚体形态，分析vWF蛋白量和凝血Ⅷ因子(FⅧ)结合力；通过共转FⅧ基因，分析了培养上清中的FⅧ蛋白量及生物活性．结果显示，通过内含肽的蛋白质反式剪接作用，共转内含肽融合的三片段vWF基因细胞上清，表现与正常人血浆和转vWF基因阳性对照细胞相似的vWF多聚体模式和FⅧ结合力，而且可明显提高转FⅧ基因后表达的FⅧ蛋白的分泌量和活性，提示剪接vWF蛋白的FⅧ载体功能的恢复．结果表明，内含肽可作为一种有效的技术手段进行三重载体共转断裂的vWF基因，为进一步基于内含肽的三重AAV转断裂vWF基因应用于VWD基因治疗研究、克服AAV的容量限制提供了依据．]]> 2010/9/16 0:00:00 613true 2010/11/10 0:00:00 612true n=228)和瘦肉型猪(长白猪、大白猪、杜洛克及其杂种猪，n=92)的耳组织DNA，检测THRSP基因编码区的单核苷酸多态性(SNP)，分析其变异对mRNA折叠和蛋白质二级结构的影响以及在群体中的分布规律，研究其变异与猪产脂能力之间的关联性．结果发现，猪THRSP基因编码区的核苷酸序列与人和牛的同源性分别为86%和88%，存在2个SNPs位点(G123A和A308G)分别位于距CDS起点的123 bp和308 bp处，其中G123A为同义突变，而A308G导致THRSP蛋白质103位的赖氨酸变为精氨酸，引起了酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点由TKEE转变为TREE，并产生了2种类型的mRNA折叠和蛋白质二级结构，脂肪型猪群中123G和308A的频率分别为0.975 9和0.589 9，瘦肉型猪群的123G和308A频率分别为0.657 7和0.815 2,脂肪型猪123G308A和123G308G配子的总频率达到0.975 9，而瘦肉型猪的123A308A和123G308A配子的总频率为0.815 3.实验提示，THRSP基因编码区的G123A和A308G位点多态性与猪脂肪生成能力密切关联，对脂肪生成相关基因表达具有重要的调节作用．]]> 2010/10/12 0:00:00 611true P < 0.01)，细胞周期检测显示大量PANC1/cav-1细胞被抑制于G0/G1期，caveolin-1抑制PANC1的增殖，迁移和侵袭能力．在裸鼠的体内实验中，caveolin-1显著抑制PANC1细胞在裸鼠体内的生长，Ki-67染色和TUNEL染色表明在PANC1细胞中过表达caveolin-1，可以抑制肿瘤增殖并诱导肿瘤凋亡．上述结果表明，caveolin-1可能通过对胰腺癌细胞周期的影响(抑制于G0/G1期)，抑制胰腺癌PANC1细胞在体内外的增殖、迁移和侵袭，并导致肿瘤凋亡．]]> 2011/6/17 0:00:00 610true TM介导转染到包装细胞PA317中，经培养后释放逆转录病毒．将收集的逆转录病毒感染RAW264.7细胞，经嘌呤霉素筛选后获得稳定高表达和敲减adipophilin的细胞系．用50 mg/L的氧化低密度脂蛋白处理细胞24 h后，用油红O染色法和高效液相色谱法测定细胞内的脂质蓄积情况，用半定量RT-PCR和蛋白质印迹分别检测adipophilin和PPARγ的mRNA和蛋白质的表达，用蛋白质印迹对与动脉粥样硬化发病有关的ERK1/2及其磷酸化进行检测．酶切结果表明，pQCXIP-HA-Adipophilin和pSuper-retro-adipophilin siRNA重组逆转录病毒载体构建成功．在荷脂情况下，pQCXIP-HA-Adipophilin转染的细胞能明显增加细胞内的脂质蓄积，但使PPARγ的表达和ERK1/2的磷酸化下调，这些作用可被adipophilin siRNA逆转．结果表明，adipophilin与泡沫细胞的形成有关，adipophilin可能是通过ERK1/2-PPARγ途径促进细胞内的脂质蓄积．]]> 2011/7/6 0:00:00 609true 32P标记的探针可以与核蛋白STAT3结合，而突变的62～85 bp标记的探针不能与核蛋白STAT3结合．上述结果表明，STAT3对TNF-α基因表达的调节不依赖LPS的刺激，STAT3在TNF-α启动子的潜在结合位点是在80到85碱基片段之间．]]> 2011/8/24 0:00:00 608true 2011/11/14 0:00:00 607true 2011/10/24 0:00:00 606true 2011/8/24 0:00:00 605true 2011/5/13 0:00:00 604true 2011/6/17 0:00:00 603true 2011/9/27 0:00:00 602true 2O2)诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响并初步探讨二苯乙烯苷抗凋亡的可能机制，采用不同浓度H2O2和二苯乙烯苷处理内皮细胞24 h，以MTT法检测细胞生长活力、Hoechst33258染色观察细胞形态、流式细胞仪检测凋亡率等方法筛选造模内皮细胞凋亡的H2O2浓度和二苯乙烯苷最佳的抗内皮细胞凋亡作用浓度．RT-PCR、Western-blot分别检测Caspase-3、PARP mRNA及蛋白质的表达．结果发现，与空白对照组相比，300 μmol/L H2O2作用后，内皮细胞增殖明显受到抑制，Hoechst33258染色可见大量凋亡细胞，细胞凋亡率显著增加，流式细胞仪检测出明显的凋亡峰， Caspase-3和多聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶(PARP)的表达量显著增加．经二苯乙烯苷处理后，随着二苯乙烯苷浓度增加，细胞的增殖率随之增加，凋亡细胞数减少，凋亡率逐渐降低，与H2O2组比较，10 μmol/L的二苯乙烯苷能够显著提高细胞增殖率，降低细胞凋亡率，并显著减少Caspase-3和PARP表达．以上结果表明，二苯乙烯苷能够抑制由H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡，增加细胞生长活性，降低细胞凋亡率，其作用机制可能与下调Caspase-3和多聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶(PARP)的表达有关．]]> 2011/7/13 0:00:00 601true 642～1290解旋酶DNA结合活性、解链活性和ATP酶活性的影响．运用荧光及紫外吸收光谱法研究了LMX与解旋酶结合的结合常数、结合位点数、作用力类型、结合距离等参数．结果表明，LMX与解旋酶之间能自发进行反应，两种分子有一个结合位点，通过静电引力和疏水作用力形成稳定的BLM-LMX复合物，且解旋酶的内源荧光被LMX静态猝灭，主要原因是非辐射能量转移．在这一过程中，LMX能抑制解旋酶的解链活性和ATP酶活性，而促进解旋酶的DNA结合活性． LMX对BLM解旋酶生物学活性影响的机理可能是LMX使解旋酶通过别构机制影响其ATP酶活性，并使酶的构象维持在较低解链活性的状态，通过抑制ATP催化水解与解链过程的偶联和阻止解旋酶的易位，从而抑制其解链．LMX能够促进解旋酶的DNA结合活性，可能是因为其C-6和C-7上的取代功能基团可以增加酶活力，以及增强药物、酶和DNA的结合，从而形成药物-酶-DNA复合物．这些结果为研究以DNA解旋酶为药物靶标的分子机理和理解喹诺酮类药物的作用机理奠定相关理论基础．]]> 2011/6/17 0:00:00 600true 2011/6/17 0:00:00 599true 2011/6/17 0:00:00 598true Tobacco necrosis virus A Chinese isolate, TNV-AC)侵染性cDNA克隆为基础，通过基因替换、基因插入策略构建获得多种重组TNV-AC，比较了外源基因片段插入位置、插入形式及接种植物培养温度对TNV-AC诱导的基因沉默的影响．外源基因片段替换CP基因19～828 nt的重组TNV-AC丧失了在本生烟中的系统移动能力，也不能有效诱导相应基因发生明显的沉默，说明替换策略不适合于TNV-AC．向CP基因终止密码子UAG附近插入外源基因片段后，TNV-AC仍可进行复制，但最适的插入位点位于UAG之后，且容纳外源片段的长度约为120 nt．当外源片段以反向重复的形式插入UAG之后，诱导基因沉默的效率较高．接种植物的培养温度也会显著影响基因沉默的效率以及插入片段的稳定性，低温(18℃)条件下诱导NbPDS基因沉默的效率明显高于高温(24℃)条件，且沉默表型可持续110天以上．除了本生烟PDS基因，TNV-AC沉默载体还可诱导本生烟sulfur基因Su和镁离子螯合酶H亚基基因ChlH发生沉默，以上结果说明，TNV-AC具有开发为本生烟基因功能鉴定的新VIGS载体的潜力．]]> 2011/5/24 0:00:00 597true 2011/5/16 0:00:00 596true 2011/5/16 0:00:00 595true 12的核糖体展示scFv抗体基因库．在180个筛选克隆中，克隆RB24、RB71、 RB109 和RB156显示出较高的ELISA值，其基因序列分析结果显示，它们是全新的人源抗RVGp抗体．改构后的抗RVGp VH-Lc-VK抗体的稳定性明显改进，可特异识别RVGp并有效中和狂犬病毒，抑制狂犬病毒对靶细胞的感染． 以上结果表明，人源抗RVGp特异性抗体的获得，为狂犬病的有效预防、诊断和治疗提供了新的途径，而且将为其他人源抗体的制备提供理论依据和技术基础．]]> 2011/5/16 0:00:00 594true 2011/5/16 0:00:00 593true 2011/4/2 0:00:00 592true Runx-2、Opg和Igf基因表达水平，其中尤以正弦波和三角波作用最为显著．上述结果表明：50 Hz 1.8 mT方波促进成骨细胞增殖，正弦波抑制成骨细胞增殖．50 Hz 1.8 mT EMFs能促进体外培养成骨细胞分化成熟，其中尤以正弦波和三角波促进成骨细胞分化成熟作用最为显著．]]> 2011/6/22 0:00:00 591true Helicobacter pylori)利用宿主血红素作为铁源的关键蛋白．HugZ的His245残基侧链咪唑基与血红素中心铁配位结合，是酶活中心的重要组成部分．用定点突变的方法构建HugZ突变体H245A、H249A和H245A/H249A基因，并将突变体蛋白表达纯化．通过X射线晶体学途径解析了突变体H245A与血红素复合物的2.55Å分辨率晶体结构．结构解析表明，HugZ的His249残基侧链咪唑基团与血红素的铁原子结合，从而补偿了His245侧链缺失．这种结构特征在已知血红素氧合酶中未曾发现．Val238 ψ平面的可翻转和Gly239的柔性是His249能与血红素配位结合的关键原因，二者的共同作用改变了C端肽链的走向，使Val238与His249之间的柔性回折与α1螺旋的相互作用发生解离，并向远离血红素的方向伸展．HugZ蛋白与血红素结合的光谱实验证明HugZ柔性C端上的组氨酸残基有利于HugZ与血红素的结合．研究结果表明，含多个组氨酸残基柔性C端的存在有利于血红素氧合酶HugZ结合和分解血红素．]]> 2011/12/20 0:00:00 590true 2012/4/28 0:00:00 589true 2012/3/13 0:00:00 588true n=8):Ⅰ组(腹腔注射5 ml 2, 6-二异丙基苯酚100 mg/kg)、Ⅱ组(腹腔注射5 ml 2, 6-二异丙基苯酚100 mg/kg +施行电休克1个疗程)、Ⅲ组(腹腔注射5 ml 生理盐水)、Ⅳ组(腹腔注射5 ml 生理盐水+施行电休克1个疗程)．全部电休克处置结束24 h内开始Morris水迷宫检测，之后留取海马组织．高效液相色谱法检测神经递质谷氨酸(Glu)在海马组织中的含量；免疫组化SP法和蛋白质印迹法检测Tau-5(总Tau蛋白)、p-PHF1Ser396/404、p-AT8Ser199/202、p-12E8Ser262、GSK-3β1H8和PP-2A在海马组织神经元中的表达．电休克和2, 6-二异丙基苯酚均可造成大鼠学习记忆障碍，即延长逃避潜伏期并缩短空间探索时间，两者的影响呈相减效果．电休克可明显增加海马中神经递质谷氨酸(Glu)的浓度，2, 6-二异丙基苯酚可降低海马中神经递质Glu的浓度，且两者有相减效果．电休克和2, 6-二异丙基苯酚对海马总Tau蛋白和PP-2A蛋白的表达无明显影响．电休克可增加海马中磷酸化Tau蛋白和GSK-3β1H8蛋白的表达；2, 6-二异丙基苯酚可减少海马中磷酸化Tau蛋白和GSK-3β1H8蛋白的表达；两者的影响均呈相减效果．实验结果表明，电休克导致海马Glu浓度升高，通过上调GSK-3β1H8增加海马Tau蛋白的磷酸化程度导致学习记忆功能障碍，而2, 6-二异丙基苯酚则可通过降低海马Glu浓度下调GSK-3β1H8的表达，从而减缓Tau蛋白的磷酸化程度以改善ECT后的学习记忆．]]> 2012/3/19 0:00:00 587true 2012/5/31 0:00:00 586true 2011/12/31 0:00:00 585true P<0.05)，同时脊髓组织TLR4、HMGB1 mRNA和蛋白质的表达明显增加(均P<0.05)，TNF-α、IL-1β与IL-10的含量也明显升高(均P<0.05)；鞘内注射姜黄素明显降低脊髓TLR4、高迁移率族蛋白1(HMGB1)，TNF-α和IL-1β的表达，显著升高脊髓IL-10的表达，同时明显改善CCI大鼠疼痛行为(P<0.05)．姜黄素减轻神经病理性疼痛可能与下调TLR4途径促炎症因子表达有关，抑制TLR4途径有望成为治疗神经病理性疼痛的新策略．]]> 2012/2/17 0:00:00 584true 6大鼠成肌细胞H<>sub>2O2凋亡的影响．采用过氧化氢损伤L6大鼠成肌细胞的方法，建立L6大鼠成肌细胞H2O2凋亡模型．使用剂量为0.3，0.15，0.75 g/L的氧化苦参碱处理细胞．应用MTT法统计存活率和流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率，用DAPI荧光染色、HE染色以及Bax和Bcl-2抗体鉴定损伤程度，Western blot检测蛋白质差异．结果表明，H2O2损伤的成肌细胞存活率降低，凋亡率增加．各种剂量氧化苦参碱能提高成肌细胞的存活率，促使Bcl-2增高，Bax降低．对成肌细胞的保护程度随氧化苦参碱剂量增加而增强，在剂量为0.3 g/L时，效果显著，其次是0.15、0.75 g/L的氧化苦参碱．其生理生化机制是氧化苦参碱保护2O2通过NFκB信号通路造成的大鼠成肌细胞凋亡模型．结果显示，氧化苦参碱具有作为新的抗氧化药物的潜力．]]> 2012/3/23 0:00:00 583true INK4a及Sonic hedgehog(Hh-Gli)信号通路蛋白在宫颈癌及癌前病变(CIN)中的表达相关性及其意义．采用Western-blot方法检测HPV16阳性及HPV18阳性宫颈癌细胞系P16INK4a及Hh-Gli信号通路蛋白Smo、Ptch及Gli表达．免疫组化检测组织芯片P16INK4a、Shh、Smo、Ptch及Gli表达，包括20例正常宫颈、18例癌旁组织、54例CIN及28例宫颈鳞癌组织．分析P16INK4a与Hh-Gli信号通路蛋白间表达相关性及与临床病理因素的关系．结果显示P16INK4a、Smo、Ptch及Gli蛋白在HPV16及HPV18阳性宫颈癌细胞系中表达无显著差异(P>0.05)．P16INK4a、Shh、Smo、Ptch及Gli蛋白在宫颈癌中表达强度显著高于癌旁及正常组织(P<0.05)，在CINⅠ与正常组织间差异不显著(P>0.05)．P16INK4a、Shh、Smo及Gli蛋白，在CINⅠ、CINⅡ与CINⅢ之间均有显著性差异(P<0.05)．相关分析显示，CINⅡ-CINⅢ中P16INK4a与Shh和Smo蛋白表达正相关，浸润癌中P16INK4a与Shh、Smo和Gli蛋白正相关．结论认为，P16INK4a及Hh-Gli信号通路异常激活与宫颈癌发生及演进密切相关，且二者间具有相关性．Hh-Gli信号通路的激活可能是Shh配体增高调控Smo高表达而上调Gli蛋白所致．]]> 2012/4/28 0:00:00 582true NBS1单核苷酸多态性(SNPs)与原发性肝癌遗传易感性的关系，并对高分辨率单链构象多态性(SSCP)检测技术在SNPs分型中的适用性进行评估，本研究对来自中国汉族人群的327例原发性肝癌以及295例阴性对照中NBS1基因常见SNPs的稀有等位基因频率进行检测和分析．此外，对NBS1基因6个常见SNPs分别选择部分样本同时进行直接序列测定，以比较2种方法的检测效果．119例原发性肝癌以及95例肝硬化/慢性肝炎组织标本的SSCP分析结果表明，6个常见NBS1基因SNPs位点(102G>A, 320+208G/A, 553G>C, 1197T>C, 2016A>G和2071-30A>T)中，SNP 1197T>C的稀有等位基因频率为68.1%，显著高于肝硬化/慢性肝炎对照的57.9% (P = 0.0298)．对该SNP位点另外采用208份肝细胞癌和200份健康人群血液标本进一步分析, 肝细胞癌SNP 1197T>C的稀有等位基因频率为66.8%，显著高于健康人群对照的58.8% (P = 0.0170)．其他5个SNPs的稀有等位基因频率在原发性肝癌与肝硬化/慢性肝炎之间均无显著性差异．高分辨率SSCP分析法与直接序列测定法对所选样本的SNPs基因分型结果完全一致，而且直接测序法对PCR扩增产物质量的要求相对高分辨率SSCP分析更高．研究表明，中国汉族人群NBS1基因SNP 1197T>C可能与原发性肝癌的发生相关，高分辨率SSCP技术准确度与直接测序法相当，且操作更加简便易行，非常适用于大量样本多个已知SNPs的基因分型．]]> 2012/4/5 0:00:00 581true unc-10．我们的研究发现，在线虫中Rim的基因突变unc-10(md1117)会导致致密核心囊泡的分泌缺陷．在活体中，unc-10突变虫系的神经多肽分泌显著下降．此外，在主要分泌致密核心囊泡的ALA神经元内，钙光解释放促发的快相分泌也比野生型减少．运用全内反射荧光显微成像技术，我们观察在unc-10缺失的情况下ALA 神经元中致密核心囊泡的锚定过程，结果显示在细胞膜附近停留的囊泡数目减少，表明囊泡锚定受到阻碍．上述试验结果表明，UNC-10能够影响致密核心囊泡的分泌过程，其机制可能是影响了囊泡的锚定过程．]]> 2011/9/21 0:00:00 580true 2012/2/3 0:00:00 579true 2012/3/13 0:00:00 578true 2011/10/14 0:00:00 577true OsWAK基因，OsWAK50编码的蛋白质具有胞外域、跨膜域和激酶域，呈现典型的WAK样受体激酶特征．首先通过对OsWAK50-GFP融合蛋白的观察发现OsWAK50定位于细胞膜并且与细胞壁偶联．进而通过酵母双杂交系统筛选到了20个可能与OsWAK50胞内域相互作用的候选蛋白，并通过一对一酵母转化验证了OsSK4、OsSWIB和OsSWI3C全长均可与OsWAK50胞内域相互作用．进一步分析显示，OsSWIB能够直接与OsWAK50激酶域互作，而OsSK4和OsSWI3C与OsWAK50胞内域的互作是依赖于OsWAK50 C端的．研究还表明，OsSK4和OsSWIB亦能与OsWAK50同源基因OsWAK53a结合，而OsSWI3C则不能与OsWAK53a结合．双分子荧光互补实验证明，OsSK4与OsWAK50和OsWAK53a能够在植物体内发生互作．以上结果为阐明OsWAK50发挥功能的分子机制提供了重要线索．]]> 2011/12/5 0:00:00 576true 3，均存活期15.3天，第②组平均生存期16.0天，第③组平均生存期16.6天，第④⑤组自然存活期均大于30天，14天时病灶平均体积分别为55 mm3、40 mm3，28天时肿瘤抑制率分别为77.24%、83.28%．MRI扫描可清楚显示肿瘤的大小、形态和内部结构，与病理结果高度相关；MRI动态观察可证实携带CD基因的骨髓间充质干细胞及5-FC治疗系统治疗C6颅内胶质瘤有效；RT-PCR检测结果证实肿瘤组织内有胞嘧啶脱氨酶表达．]]> 2011/12/20 0:00:00 575true Ik均有抑制作用，但随着去极化电压的增加，发现1 mT和5 mT工频磁场的抑制率几乎不变，抑制率分别为(30 ± 4.2)%和(20 ± 2.2)%，而10 mT工频磁场的抑制率增加，最大抑制率为43.4%．另外，1 mT和5 mT工频磁场影响了延迟整流钾通道的激活特性，通道的半数激活电压变大，斜率因子不变．而10 mT工频磁场对通道的激活特性没有影响，半数激活电压和斜率因子均不改变．研究表明，工频磁场可能影响了细胞膜上离子通道蛋白质的结构和功能，并且不同强度工频磁场对通道的影响不同，存在强度窗口效应．]]> 2011/12/5 0:00:00 574true fabI的同源基因：fabI1和fabI2．由这2个fabI同源基因编码的蛋白质分别与大肠杆菌FabI有50%和51%的同源性，且都拥有与大肠杆菌FabI一样的催化中心Tyr-(Xaa)6-Lys序列．分别用携带这2个同源基因的质粒载体转化大肠杆菌fabI温度敏感突变菌株JP1111．转化子能在42℃生长，表明这2个基因均能遗传互补大肠杆菌fabI突变，并使此菌株恢复脂肪酸的合成．另外，体外酶学分析显示，由这2个同源基因编码的蛋白质都拥有烯脂酰ACP还原酶活性，均能参与细菌脂肪酸合成．上述结果证实，流产布氏杆菌同时拥有2个同种类型的烯脂酰ACP还原酶，是一种新的烯脂酰ACP多样性的表现．]]> 2011/12/20 0:00:00 573true Qtotal表示的预测精度分别为81.4%、80.4%，而仅使用NetTurnP的为78.2%、77.3%．结果证实同源结构信息结合先进的β转角预测器如NetTurnP有助于改进β转角识别．BTMapping程序及相关数据集可从http://www.bio530.weebly.com获得．]]> 2011/11/14 0:00:00 572true Cecropin B基因进行改造，并将4个经改造的Cecropin B基因依次串联起来，中间加上莱茵衣藻的自剪切连接肽序列LWMRFA，人工合成总长度为522 bp的串联Cecropin B基因．将串联Cecropin B基因克隆到含hsp70-RBCS2启动子和RBCS2终止子的pH105载体上，再与携带ble筛选基因的表达框架连接，构建重组表达载体pCB124．采用玻璃珠转化法将载体pCB124导入莱茵衣藻cc-849中，筛选得到能表达抗菌肽Cecropin B的转基因衣藻．经过6个月的保持培养后，进一步对转基因藻细胞提取液进行抗菌活性分析，发现转基因藻具有明显的抑制革兰氏阴性菌(大肠杆菌)和革兰氏阳性菌(枯草芽孢杆菌和溶壁微球菌)生长的特征．这一结果为具有抗菌活性的饵料藻的生产和应用提供了新的途径．]]> 2011/10/14 0:00:00 571true IC50为73.6 mg/L．DMY显著抑制明胶酶活性和MMP-2/-9蛋白表达，并抑制MMP-2/-9 的mRNA表达水平．此外，DMY不依赖细胞毒作用和以剂量依赖方式抑制MDA- MB-231细胞的侵袭．这些结果提示：DMY能显著抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭和增殖, 其侵袭抑制的机制可能与其下调MMP-2/-9蛋白表达水平相关．]]> 2011/11/29 0:00:00 570true 2011/7/29 0:00:00 569true 2012/2/17 0:00:00 568true 2011/6/30 0:00:00 567true 2011/12/20 0:00:00 566true 2011/11/14 0:00:00 565true 2011/7/26 0:00:00 564true IC50，增强阿霉素对HepG2/TT细胞的凋亡诱导作用．耐热肝癌细胞HepG2/TT 与非耐热肝癌细胞HepG2比较，其P-gp和Hsp70 的表达水平明显增高；10 μmol/L姜黄素处理24 h 后，HepG2/TT细胞P-gp和Hsp70的表达水平显著下降．HepG2/TT 细胞内阿霉素的积累低于HepG2细胞；10 μmol/L姜黄素处理 3 h后，HepG2/TT 细胞内阿霉素的积累明显增加．HepG2/TT细胞能抑制阿霉素激活 caspase-3；10 μmol/L姜黄素处理24 h后，阿霉素对 HepG2/TT细胞caspase-3的激活作用增强．上述结果表明，姜黄素能逆转耐热肝癌细胞HepG2/TT的阿霉素耐受性，其机制可能与其下调P-gp和Hsp70的表达，进而促进阿霉素激活caspase-3有关．]]> 2011/7/29 0:00:00 563true 2011/7/26 0:00:00 562true -/-小鼠随机分为三组：普食组、高脂组和AMD3100组．ELISA法测血清基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)水平，采用氧化酶法测定apoE-/-小鼠血清中三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量．HE染色检测apoE-/-小鼠主动脉根部横切面动脉粥样硬化病变．免疫组织化学检测小鼠胸主动脉CXCR4表达．RT-PCR和Western blot分别检测小鼠动脉组织TNF-α、NF-κB mRNA和蛋白质表达．AMD3100组小鼠主动脉根部横截面的动脉粥样硬化病变较高脂组严重，AMD3100组小鼠胸腹主动脉炎症因子TNF-α、NF-κB的mRNA水平和蛋白质表达增高，但血脂TG、TC、HDL-C和LDL-C含量与高脂组均无显著性差异．AMD3100组小鼠外周血SDF-1α水平和动脉壁CXCR4表达低于高脂组．结果表明：AMD3100通过上调炎性因子表达及下调SDF-1/CXCR4 轴促进apoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变．]]> 2011/9/30 0:00:00 561true P < 0.01)．同时蛋白质印迹检测到人过氧化氢酶hCAT在小鼠的肌肉组织中表达，且过氧化氢酶活性比野生型小鼠显著提高(P < 0.01)．]]> 2011/9/21 0:00:00 560true BDD-FⅧ基因的功效，本文将BDD-FⅧ的重链A2区的Met662和轻链A3区的Asp1828突变为Cys．双载体培养的COS-7细胞共转染突变重链和轻链基因，Western blot显示细胞内二硫键交联的重、轻链蛋白形成，ELISA和Coatest分析细胞培养上清的BDD-FⅧ重链分泌量和生物活性，分别为(109 ± 13) μg/L和(0.65 ± 0.12) U/ml，明显高于共转野生型重链和轻链基因细胞((71 ± 11) μg/L和(0.35 ± 0.05) U/ml)．结果表明，链间二硫键形成可提高双载体转BDD-FⅧ基因的功效，为进一步动物体内运用双AAV载体转BDD-FⅧ基因提供了实验依据．]]> 2011/11/23 0:00:00 559true 2011/9/30 0:00:00 558true 2+)；调控亚基可以结合终产物(缬氨酸、亮氨酸或异亮氨酸)作为负反馈信号调节全酶的活性．大肠杆菌中AHAS有3个同工酶，每种同工酶都由催化亚基和调控亚基组成．大肠杆菌ilvN基因编码了AHAS同工酶Ⅰ的调控亚基．ilvN基因克隆到pET28a表达载体中，在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中得到可溶性的大量表达．表达的蛋白质通过镍离子亲和层析和分子筛层析得到纯化．为了对调控亚基的调节机理有深入了解，对IlvN蛋白进行结晶并对蛋白质与其配体缬氨酸进行共结晶．IlvN蛋白晶体衍射能力为2.6 Å，IlvN与缬氨酸共结晶的晶体衍射能力为3.0 Å.]]> 2011/6/16 0:00:00 557true Solanum lycopersicum) ARF2基因，并分析其分子特性和亚细胞定位，为研究其功能提供基础．通过生物信息学方法分析SlARF2基因编码蛋白的理化性质和分子特性．采用RT-PCR技术从番茄果实cDNA中扩增SlARF2基因全长，并构建与黄色荧光蛋白(YFP)融合的pBA-ARF2-YFP表达载体，进而再通过农杆菌介导的遗传转化方法，将重组质粒转化到野生型番茄中，将得到的T1代转基因种子萌发，然后取根尖通过荧光显微镜观察了融合蛋白在活细胞内分布的特点．生物信息学分析结果表明，SlARF2是富含Ser、Leu、Gly和Pro以及具有ARF家族典型结构域的可溶性蛋白，其氨基酸序列与葡萄、木薯和拟南芥的同源性分别为70.08 %、66.94 %和60.87 %．经酶切和测序分析证实pBA-ARF2-YFP融合表达载体构建成功，此外，PCR分析表明融合蛋白在转基因植株中得到表达．经荧光显微镜观察，ARF2定位在细胞核中．表明转录因子SlARF2定位在细胞核中，对番茄果实发育和成熟起重要作用．]]> 2011/8/24 0:00:00 556true 2011/6/30 0:00:00 555true 2011/8/24 0:00:00 554true 2011/8/24 0:00:00 553true 2013/2/28 0:00:00 552true 2013/2/28 0:00:00 551true 2013/2/28 0:00:00 550true 2+金属亲和层析、阳离子交换层析和凝胶阻滞层析进行分离纯化．Tipα蛋白样品分别通过悬滴和microbatch的方法进行结晶搜索和优化．母体和硒代晶体分别衍射到2.2?和2.6?，均属于C2空间群，并且具有相似的晶胞参数．母体晶体的晶胞参数为a=127.01?，b=47.57?，c=96.5?，α=γ=90°，β=127.5°．]]> 2013/2/28 0:00:00 549true Ssp DnaB内含肽融合的BDD-FⅧ的重链和轻链基因双表达载体，48 h后，检测到血浆的重链分泌量和FⅧ活性分别为(298±67) μg/L和(1.15±0.29) U/mL，明显高于不含亮氨酸拉链的双载体转BDD-FⅧ基因对照小鼠((179±59) μg/L和(0.58±0.19) U/mL)．结果表明，亮氨酸拉链通过改善蛋白质反式剪接，提高基于蛋白质剪接的双载体转BDD-FⅧ基因小鼠血浆的凝血活性，为进一步双腺相关病毒(AAV)载体转BDD-FⅧ基因的甲型血友病基因治疗研究提供了依据．]]> 2013/2/28 0:00:00 548true dCAF-1-p55突变体．实验结果表明，dCAF-1-p55的缺失导致果蝇发育迟缓并且最终致死．进一步研究发现，在dCAF-1-p55突变细胞中，中期染色体较为松散，姐妹染色单体连接异常，后期染色体不能正常分离．这些缺陷都是与癌症发生密切相关的染色体不稳定性(chromosome instability，CIN)的典型特征．综上所述，我们的研究表明了dCAF-1-p55在果蝇发育过程及维持染色体稳定性方面的重要作用，同时提示该基因具有保护细胞免遭CIN和癌变的潜在功能．]]> 2013/3/25 0:00:00 547true 2013/3/25 0:00:00 546true I)从5.43上升到5.84，随后进行了蛋白质的表达、分离纯化、体内稳定性及糖代谢调节作用的研究．诱导表达后菌液的SDS-PAGE图经BandScan5.0分析后显示FGF21-2A的表达量相对于野生型FGF21提高了10.6%．家兔体内半衰期检测实验结果显示FGF21-2A的半衰期显著延长．GOD-POD法检测HepG2肝癌细胞葡萄糖吸收实验、糖尿病小鼠降血糖实验和肝糖原检测实验的结果证明，FGF21-2A的降糖效果得到了增强，并且持续时间相对于野生型FGF21显著延长．Real-time PCR结果发现，长期注射FGF21-2A显著提高了糖尿病小鼠肝脏内葡萄糖转运蛋白(GLUT)1和葡萄糖激酶(GK)mRNA的表达量，降低了葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)的mRNA表达量，表明FGF21-2A调节糖代谢的机制与野生型FGF21一致．综上所述，精氨酸修饰的FGF21其蛋白质稳定性提高，进而增加了对血糖的调控效果，有望成为新型糖尿病药物．]]> 2013/3/25 0:00:00 545true 2013/3/25 0:00:00 544true 2013/3/26 0:00:00 543true 2012/3/1 0:00:00 542true N- AMPPNP与处于二聚体化的酵母Hsp90-AMPPNP结构对比可见S1和ATP lid的位置有明显区别，结构分析表明，E18-K100和N40-D127之间形成的氢键相互作用，在一定程度上阻碍了S1和ATP lid的摆动，很可能阻止了二聚体的形成．]]> 2012/3/6 0:00:00 541true 2012/3/19 0:00:00 540true 2013/9/16 0:00:00 539true -/-小鼠随机均分为3组：溶剂对照组(生理盐水50 μl，腹腔注射)，IgG 对照组(50 μg，腹腔注射)，GP Ⅱb/Ⅲa 单抗组(50 μg，腹腔注射)．实验ApoE-/-小鼠均已高脂、高胆固醇饲料喂养，10周后处死动物．油红O染色观察主动脉窦As病变；活体荧光显微镜观察颈总动脉As病变处血小板黏附；Western blot 检测HMGB-1、TLR4与NF-κB蛋白的表达；免疫组化观察主动脉窦As病变部位MOMA-2 和VCAM-1的表达；ELISA法检测血浆中HMGB-1、IL-1β、TNF-α 与MCP-1的含量．研究结果表明：与对照组相比，GPⅡb/Ⅲa 单抗组ApoE-/-小鼠As病变和血小板黏附显著减少(P < 0.05)；且该组小鼠主动脉TLR4与NF-κB蛋白的表达明显降低；其血清中的HMGB-1、IL-1β、TNF-α 与MCP-1的水平也明显下降(P < 0.05)．此外，GP Ⅱb/Ⅲa 单抗治疗显著减少As病变处MOMA-2 和VCAM-1的表达(P < 0.05)．GP Ⅱb/Ⅲa 单抗减轻ApoE-/-小鼠As病变可能与抑制HMGB1/TLR4途径介导的炎症有关．]]> 2013/9/16 0:00:00 538true FBXO38的一个转录体，本研究将其命名为鸡FBXO38基因转录本1(gallus gallus FBXO38 transcript variant 1，gFBXO38t1)．Real-time reverse transcriptase-PCR分析显示，gFBXO38t1广泛表达于肉鸡多种组织，其中胰腺、回肠和腹部脂肪组织中表达水平较高．进一步分析发现，gFBXO38t1在高、低脂系1～12周龄肉鸡腹部脂肪组织中均有表达，并且在3和4周龄时，低脂肉鸡腹部脂肪组织中gFBXO38t1的表达水平显著高于高脂肉鸡(P < 0.05)，其余时间点两系间没有显著差异(P > 0.05)．在鸡前脂肪细胞(stromal- vascular cells，SV)诱导分化过程中，gFBXO38t1的表达量随着脂肪细胞分化而呈现下降趋势，此外，gFBXO38t1在前脂肪细胞中的表达量明显高于成熟脂肪细胞(fat cells，FC；P < 0.05)，暗示gFBXO38t1可能是鸡脂肪组织形成的负调控因子．报告基因分析显示，过表达gFBXO38t1抑制CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding protein α，C/EBPα)、脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase，LPL)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase，FASN)和脂肪酸结合蛋白4(fatty acid-binding protein 4，FABP4)基因的启动子活性(P < 0.05)，从另一个角度提示了gFBXO38t1对鸡脂肪组织形成具有抑制作用．同时过表达鸡KLF7和gFBXO38t1并不能显著增强过表达gFBXO38t1对鸡LPL、FASN和FABP4基因启动子活性的调控作用，暗示gFBXO38t1对这些基因的调控不完全依赖于鸡转录因子KLF7．本研究为进一步研究鸡脂肪细胞分化和FBXO38的生物学功能提供参考．]]> 2013/9/16 0:00:00 537true P < 0.05．移植组心肌胶原纤维沉积减少，光密度值比较P < 0.05．移植组VEGF、Flt-1、Flk-1表达较同期对照组增加，并张且与其受体达峰时间不同步．4周时移植组微血管密度明显高于对照组．上述结果表明，BMSSCs移植后可通过上调受体内VEGF、Flt-1、Flk-1的表达，促进血管新生，减少胶原纤维沉积，从而改善受体心脏的功能．]]> 2013/9/16 0:00:00 536true 2013/9/16 0:00:00 535true +)的关系尚未明确．在本文中发现：在AML病人骨髓CD34+细胞中，敲低EDAG表达导致NPM1蛋白稳定性降低并提高了对柔红霉素的敏感性；EDAG虽不与突变体NPMc+相互作用，但在蛋白出核抑制剂(leptomycin B, LMB)作用下，过表达EDAG提高NPMc+蛋白稳定性；表达突变NPMc+的AML病人与表达NPM1蛋白的病人相比，其骨髓CD34+细胞对柔红霉素具有更高的敏感性，且敲低EDAG能微弱提高其敏感性．上述结果表明，EDAG在AML病人药物治疗中发挥的可能作用以及NPMc+ “逃脱”，使EDAG无法保护其稳定性，这提示了在AML病人药物治疗过程中EDAG的潜在作用，同时也提示，携带NPMc+蛋白的AML患者具有较好预后，可能与NPMc+蛋白“逃脱”出EDAG对其稳定性的保护有关．]]> 2013/9/16 0:00:00 534true P < 0.05)．同时，我们得到了较为均一的冷冻电镜样品，为进一步研究30 nm染色质纤维的高级结构及理解体内染色质存在的形式及动态过程打下了较好的基础．]]> 2013/8/21 0:00:00 533true 2013/8/21 0:00:00 532true 2013/8/21 0:00:00 531true 3H]-ryanodine结合等实验，分别检测多种调控剂对RyR1的蛋白及复合体粒度分布、自由巯基量及对通道状态的影响，利用光漂白法检测各调控剂的电子传递性质．结果显示，激活剂和巯基氧化剂具有类似电子受体的性质并产生相似作用，即自由蛋白粒度增加，自由巯基量减少，具有激活通道作用；抑制剂和巯基还原剂则具有类似电子供体的性质，作用效果相反．]]> 2013/8/21 0:00:00 530true 2013/7/25 0:00:00 529true 2013/7/24 0:00:00 528true Q2=0.501，R2ncv=0.787，R2pre=0.780，证明模型自我吻合良好，同时有较强的内部及外部预测能力．而模型的等势线图分析表明，在R1处引入疏水性的取代基及在R2处引入亲水性的取代基或氢键供体基团对提高激动剂活性有利．这些结论有助于更好地理解N-取代螺环哌啶类似物作为DOR激动剂的机理，为新型的δ阿片受体激动剂的设计和优化提供一定的指导．]]> 2013/7/24 0:00:00 527true 2013/6/20 0:00:00 526true 2013/6/20 0:00:00 525true +/H+ 交换蛋白1(NHE1)选择性抑制剂卡立泊来德(cariporide)对糖基化终末产物( advanced glycation end products，AGEs)所致大鼠颈动脉球囊损伤后新内膜形成的作用，以球囊损伤大鼠颈总动脉，取标本HE染色后进行形态学观察并计算内膜、中膜面积及内膜/中膜面积比．为探讨相关机制，原代培养大鼠主动脉平滑肌细胞( vascular smooth muscle cell，VSMC)，[3H] thymidine 检测 VSMC增殖； RT-PCR及实时RT-PCR检测VSMC基质金属蛋白酶2( matrix metalloproteinases-2，MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrixmetalloproteinases-9，MMP-9)及环氧酶2(cyclooxygenase-2，COX-2) mRNA水平；Western blot检测核因子κB(NF-κB)的表达及抑制蛋白κBα(I-κBα)的降解．大鼠颈动脉球囊损伤后，cariporide(0.1，10 mg/kg)能显著抑制AGEs所致新内膜增生(P < 0.01)．细胞实验结果显示，cariporide 可以浓度依赖性地抑制AGEs 诱导VSMC中COX-2、MMP-2及MMP-9 mRNA 表达，同时显著抑制I-κBα降解及NF-κB表达．结果表明，cariporide 能显著抑制血管损伤后AGEs所致新内膜的形成，其机制与抑制NHE1活性从而抑制NF-κB活化，下调MMP-2、MMP-9及COX-2 mRNA有关．提示NHE1可能是AGEs致血管损伤信号通路中的重要组成部分．]]> 2013/6/20 0:00:00 524true +KDR+细胞的比例可以达到16%．进一步内皮诱导分化的结果显示，获得的EPCs/ECs的比例可以达到约32%，这些细胞具有在Matrigel上形成血管样结构的能力，可结合植物凝集素．实时定量PCR的结果显示，诱导分化所得的细胞表达众多内皮相关基因，并且免疫荧光的结果也表明部分细胞表达内皮细胞特异性表面标志CD31．]]> 2013/6/20 0:00:00 523true 2013/6/20 0:00:00 522true NpAS和DgAS的晶体结构为模板，对氯酚节杆菌(Arthrobacter chlorophenolicus)中发现的一种新型AS(AcAS)结构进行了模建．通过对AcAS与其他AS结构进行详细的比较，推断出AcAS的工作机理．随后，利用高斯网络模型(GNM)对其功能型运动进行了分析．根据GNM的结果，发现AcAS可分为两个运动方向相异的部分．最后，利用迭代高斯网络对AcAS的去折叠性质进行了研究．这些结果对随后的淀粉蔗糖酶的工业开发有一定帮助．]]> 2013/6/20 0:00:00 521true 2013/6/20 0:00:00 520true 2013/5/22 0:00:00 519true 1/2活性和上调caveolin-1表达有关．本文研究Caveolae及caveolin-1在CGRP抑制VSMC增殖中的作用，进一步研究caveolin-1表达增加是否有直接抑制ERK1/2信号激酶活性的作用．采用大鼠主动脉贴块法培养VSMC，取3～10代VSMC用于实验，10%小牛血清(FBS)用于刺激VSMC增殖，用β-环糊精(cyclodextrin)或菲律宾菌素(filipin)剥夺胆固醇破坏Caveolae结构；MTT法和流式细胞仪用于检测细胞增殖；蛋白质印迹和免疫共沉淀法分别用于检测目的蛋白的表达或蛋白质间相互作用．结果显示，CGRP呈时间和浓度依赖性显著抑制10% FBS诱导的VSMC增殖．细胞Caveolae结构的破坏能降低CGRP抑制VSMC增殖作用，同时也增加了ERK1/2的磷酸化；β-环糊精孵育细胞能降低 caveolin-1的表达．免疫共沉淀发现10% FBS和/或CGRP共同孵育细胞对非磷酸化ERK1/2与caveolin-1的结合无差别，但10% FBS 能降低磷酸化ERK1/2与caveolin-1的结合，CGRP预孵育细胞能增加这两者的相互作用．结果揭示，Caveolae及caveolin-1可以正调控CGRP抑制VSMC增殖作用，其机制可能与CGRP增加caveolin-1与p-ERK1/2在Caveolae的结合，并抑制p-ERK1/2核转位作用有关．]]> 2013/5/22 0:00:00 518true 2013/5/22 0:00:00 517true 2013/5/22 0:00:00 516true 2013/5/22 0:00:00 515true Synechocystis PCC 6803中的糖基转移酶基因sll1466．在不同培养基的光合自养条件下，Sll1466缺失突变体较野生型的细胞内部结构变化明显(超薄电镜观察)，突变体在缺碳培养基条件下羧酶体含量比野生型高，并且在0.5 mol/L NaCl条件下的肝醣含量也明显高于野生型．突变体在不同光密度生长条件下的吸收光谱与野生型差异明显．分子水平上，突变体较野生型显现出如下3个方面的差异：a．2个碳水化合物选择性OprB孔蛋白在类囊体膜上发生糖基化；b．核杆连接蛋白CpcG1(Slr2051)在类囊体膜的上清中发生磷酸化；c．与上述表型差异相关的基因的转录水平亦呈现相同的变化趋势．这些结果预示着Sll1466在调控蓝细菌6803生理、代谢及能量转化等方面有着重要作用．]]> 2013/4/23 0:00:00 514true 2013/4/23 0:00:00 513true Xa21介导的白叶枯病抗性反应中的表达丰度变化．结果表明，OsWRKY13、23和71在叶片中表达，且随叶片生长而逐步增加，至成熟期略有下降，但在叶片中检测不到OsWRKY45和OsWRKY53的表达信号．在Xa21介导的白叶枯病抗性反应中，OsWRKY45、53和71均受诱导表达，而OsWRKY13和 OsWRKY23蛋白质的表达没有可见的变化．进一步比较OsWRKY45、OsWRKY53和OsWRKY71在抗、感和对照(Mock)反应中的表达，发现它们在抗、感反应中均发生相似变化．上述结果说明，OsWRKY13和OsWRKY23可能在叶片正常生长过程中发挥作用，OsWRKY45和OsWRKY53可能在水稻-白叶枯病菌互作过程中发挥作用，而OsWRKY71在二种条件下均有功能．]]> 2013/4/23 0:00:00 512true P < 0.05)且发放持续时间延长(P < 0.05)，非单调型神经元在声刺激强度自最佳强度增高时潜伏期不变且发放持续时间缩短(P < 0.01)．注射GABA能阻断剂荷包牡丹碱(bicuculline, Bic)后，39.3%的神经元强度调谐类型不变，42.9%的神经元非单调性减弱，17.9%的神经元非单调性增强．表明GABA能抑制并非是形成非单调性的唯一因素，兴奋性输入本身的非单调性和高阈值非GABA能抑制的激活也可能在其中发挥作用．推测由兴奋性和抑制性输入所构成的局部神经功能回路及其整合决定了听皮质神经元的强度调谐特性．]]> 2013/4/23 0:00:00 511true 2013/4/23 0:00:00 510true 2013/3/26 0:00:00 509true 60Co γ射线单次照射，剂量率为100 cGy/min．照射后B组小鼠经尾静脉注射生理盐水，C组小鼠移植MSCs．于移植后第15天取小鼠空肠标本，通过免疫荧光方法检测MSCs在受损肠道的定植和分化情况．结果表明，治疗组小鼠的生存状况明显好于模型组小鼠，病理切片显示小肠黏膜得到修复，免疫荧光结果显示MSCs可定植于辐射损伤的肠道，并表达波形蛋白(vimentin)和α-SMA．MSCs移植入肠损伤的小鼠体内后可在受损肠道定植，并向间质细胞分化，参与辐射损伤的修复.]]> 2013/3/22 0:00:00 508true 642～1290)与双链DNA(dsDNA)的相互作用，分析其相关特征参数，了解BLM642～1290解旋酶与dsDNA的结合和解链特性．结果表明：BLM642～1290解旋酶与dsDNA的结合和解链与dsDNA 3′端的单链DNA(ssDNA)长度有关；解旋酶优先结合于dsDNA底物的ssDNA末端，且每分子解旋酶可结合9.6 nt的ssDNA；dsDNA 3′端ssDNA的长度为9.6 nt时，解旋酶的解链效率达到最大且不再随其长度而变化．另外，BLM642～1290解旋酶也能够结合和解链钝末端dsDNA，但其结合亲和力和解链效率低于有3′端ssDNA的dsDNA．推测BLM642～1290解旋酶在与dsDNA底物结合和解链时是单体形式，可能以尺蠖的形式解开dsDNA．这些结果可为进一步研究BLM解旋酶的功能特征提供理论基础．]]> 2013/3/22 0:00:00 507true 2013/2/26 2:47:13 506true 10倍)，为该基因的主要转录表达产物．随后分别采用MTT细胞生长分析法和裸鼠体内成瘤实验在体外和体内对ZNF403的功能进行分析，结果显示ZNF403的基因沉默可以同时在体内和体外抑制喉癌细胞Hep-2细胞的生长．为了探明其作用机制，本研究还采用细胞信息学、流式细胞周期分析术和高通量PCR点阵分析方法进一步分析，结果表明，ZNF403的基因沉默可显著抑制细胞DNA的复制并延缓细胞周期进入到有丝分裂期．同时发现ZNF403可调节一系列的细胞周期调节蛋白如MCM2、p21、ATM、MRE11A等．综上研究提示ZNF403为一新的细胞周期调节因子，其功能的缺失与肿瘤发生发展密切相关．]]> 2013/2/26 2:55:46 505true 2013/2/26 3:06:13 504true 2013/2/26 0:00:00 503true 2013/2/27 2:37:08 502true 2013/2/27 0:00:00 501true 2013/2/27 0:00:00 500true 2013/2/27 0:00:00 499true P < 0.05)．结果证实慢病毒能够直接使猪的胎儿成纤维细胞转变成iPS细胞，因此慢病毒将成为一种理想的材料和工具用于细胞的遗传修饰和细胞重构等方面的研究．]]> 2013/2/27 0:00:00 498true ZNF185编码序列，转染K562细胞，MTT检测细胞增殖，发现过表达ZNF185显著抑制K562细胞的增殖．甲基化特异PCR分析表明：ZNF185启动子在HL-60和K562细胞中高甲基化，用5-氮杂-2′-脱氧胞苷处理K562细胞，促进ZNF185的表达，显著抑制细胞增殖．研究结果表明，ZNF185启动子高甲基化导致其在K562细胞中的表达降低和细胞增殖抑制作用减弱．可能是慢性粒细胞白血病发生或发展的原因之一．]]> 2013/2/28 10:12:14 497true lac)诱导表达的情况下，表达量、展示率、抗原亲和力以及宿主菌存活率的差异．我们发现，Ag43β展示的抗体在抗原亲和力上优于INPNC展示的抗体．在存活率方面，T7启动子诱导表达的存活率很低：用INPNC作为载体蛋白时只有0.0033%，用Ag43β作为载体蛋白时只有0.02%存活率．lac启动子诱导表达的存活率：用INPNC作为载体蛋白时为2.04%，用Ag43β作为载体蛋白时为13.27%．araBAD启动子诱导表达的存活率很高：用INPNC作为载体蛋白时为37.80%，用Ag43β作为载体蛋白时高达90.23%．但是araBAD诱导表达量和展示率都很低，所以其表现出的宿主高存活率意义有限．综合看来，由lac启动子驱动的、以Ag43?茁为载体蛋白的抗体表面展示系统是最好的选择．]]> 2013/12/20 0:00:00 496true 2013/12/20 0:00:00 495true 2013/12/20 0:00:00 494true 2013/12/20 0:00:00 493true 2013/12/20 0:00:00 492true 12-HSL)和N-丁酰-L-高丝氨酸内酯(C4-HSL)的影响．最近的研究进展显示群体感应分子尤其是3-oxo-C12-HSL具有调节宿主免疫系统的能力．本实验展示了3-oxo-C12-HSL可以诱导鼠源巨噬细胞(RAW264.7)的凋亡和吞噬作用．把合成的3-oxo-C12-HSL加入RAW264.7细胞培养基中，发现细胞生活力以一种依赖于3-oxo-C12-HSL的浓度(6.25 to 100 μmol/L)和培养时间(2 to 24 h)的方式逐渐丢失．同样，我们观察到3-oxo-C12-HSL的细胞毒活性，用3-oxo-C12-HSL处理的细胞出现细胞形态上的改变，这一改变表明3-oxo-C12-HSL处理的细胞加速凋亡，这一点同时也被其他多个标准(caspases3、8和9，线粒体膜电位，磷脂酰丝氨酸的表达)所证实．中性红吞饮实验证明，3-oxo-C12-HSL会显著地减小RAW264.7细胞的吞噬能力(P < 0.05)．同时，高浓度的3-oxo-C12-HSL会降低RAW264.7细胞对铜绿假单胞菌的吞噬作用(P < 0.001)．这些数据表明3-oxo-C12-HSL能特异性地促进细胞凋亡的诱导和RAW264.7细胞吞噬能力的减小．这可能和3-oxo-C12-HSL诱导的细胞毒性有关．最终我们的实验数据证明，群体感应信号分子3-oxo-C12-HSL在铜绿假单胞菌感染的致病机理中扮演着重要的角色．]]> 2013/11/22 0:00:00 491true 33-35免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型，观察29天．通过疾病评分发现雌雄小鼠在发病率、起病时间上均无明显差别，但雄鼠的发病症状明显比雌鼠严重．在其病理切片HE染色中观察到雄性小鼠中枢浸润的炎性细胞多于雌性小鼠，并且在LFB染色中同样观察到雄鼠脱髓鞘区域明显增大．对其发病高峰期中枢浸润细胞的染色分析时，可以发现雄性小鼠中浸润的CD4 T细胞及其亚群TH-1和TH-17细胞均有明显增加．这些都表明MOG33-35免疫C57BL/6小鼠建立的EAE模型存在着性别差异的影响，这一发现为今后建立多发性硬化症的动物模型中动物性别的选择提供了一定的参考依据．]]> 2013/11/22 0:00:00 490true FMR1)编码所得．FMR1在神经肌肉和睾丸组织中广泛表达．脆性X相关蛋白1(FXR1P)则是由FMR1的同源基因脆性X相关基因1(FXR1)编码所得，并且与蛋白质和RNAs之间存在着相互作用．许多疾病都涉及到FXR1表达的改变．为了了解FXR1P与CMAS(胞嘧啶单核苷酸-N-乙酰神经氨酸合成酶)相互作用所产生的的生物学效应，我们构建了FXR1的过表达载体，并观察其在PC12细胞(大鼠鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)和VSMC(血管平滑肌细胞)中的表达以及继而对于细胞形态和CMAS活性相关的许多细胞指标的效应．我们证实，FXR1基因的过表达可以提高PC12细胞中CMAS的活性，并对于该类细胞的生长提供一定程度的保护作用．PC12细胞是一种较为常见的用于研究神经系统疾病的细胞系．结论：我们推测FXR1P是一个组织特异调节因子，可以改变PC12细胞而非VSMC细胞中神经节苷酯(GM1)的浓度．]]> 2013/11/22 0:00:00 489true P < 0.01)，而在病毒感染36 h和48 h，格尔德霉素并没有显著抑制流感病毒在MDCK细胞上的增殖(P > 0.05)．促炎性细胞因子分析结果显示，格尔德霉素在流感病毒感染A549细胞12 h和24 h均显著降低了促炎性细胞因子IFN-α、TNF-α和IL-6的分泌(P < 0.05)．上述实验结果显示，格尔德霉素具有抑制流感病毒H5N1增殖及其所介导的炎性反应的双重效应，为格尔德霉素成为应对流感病毒流行的备选药物提供基础科学依据．]]> 2013/11/22 0:00:00 488true PR 基因的上游启动子区进行分析，发现存在与胁迫响应相关的调控元件，其中脱落酸反应元件(ABRE)、TC-rich repeats和HSE的出现频率较高．这些蛋白质表达数据进一步佐证了PR蛋白在逆境胁迫反应中发挥着重要且不尽相同的作用．]]> 2013/11/22 0:00:00 487true Escherichia coli)脂肪酸合成酶体系中，fabA基因编码有双功能的3-羟基脂酰ACP脱水异构酶，其异构产物能被fabB基因编码的3-酮基脂酰ACP合成酶Ⅰ延伸，合成不饱和脂肪酸，该FabA-FabB途径被认为是缺氧条件下不饱和脂肪酸合成的经典途径．生物信息学分析发现，苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)的SmFabA与EcFabA相似性达到60.6%，具有相同的保守活性位点和两个保守的α螺旋结构；SmFabB与EcFabB相似性达到61.1%，具有相同的Cys-His-His活性中心．用携带SmfabA和SmfabB的质粒载体遗传互补大肠杆菌温度敏感突变株CY57和CY242，在添加三氯森(TCL)抑制烯脂酰ACP还原酶活性的条件下，转化子能在42℃恢复生长，且放射性薄层层析能检测到转化子中不饱和脂肪酸棕榈油酸(Δ9C16:1)和十八碳烯酸(Δ11C18:1)的合成．体外重建脂肪酸合成反应表明，SmFabA能催化羟脂酰ACP的脱水反应且能够使反-2-癸烯酰ACP异构化，SmFabB能催化不同链长的脂酰ACP和丙二酸单酰ACP的聚合反应．另外，未得到SmFabA和SmFabB的突变株，表明SmFabA和SmFabB可能是苜蓿中华根瘤菌脂肪酸合成酶系中必不可少的关键蛋白．上述结果证实了苜蓿中华根瘤菌fabA和fabB两个基因在不饱和脂肪酸合成中的功能．]]> 2013/11/22 0:00:00 486true 2013/11/22 0:00:00 485true 2 -ATP为底物合成酰基-AMP，第二步用CoA取代AMP，产生酰基-CoA酯，催化过程中酶的构象产生明显的变化．因为4CL在木质素的合成中所起的作用，这个酶是通过蛋白质工程方法改进林产品质量的重要靶标．我们通过X射线衍射技术，解析了毛白杨对香豆酸∶CoA连接酶1(Pt4CL1)与其中间产物对香豆酰-AMP的复合物晶体结构，与同家族成员结构比对，确定所获得的蛋白质结构为Pt4CL1催化第二步反应，即酰基-CoA酯合成的构象．结构分析表明：His-234残基在Pt4CL1的酶催化机理中起着多重作用，即通过侧链与AMP磷酸基团形成氢键，降低磷酸基团的负电荷，催化CoA的亲核取代反应；侧链可以采取两种不同的构象以调节CoA进入Pt4CL1的催化中心；His-234的侧链还可能夺取CoA巯基的质子，从而增强CoA的亲核反应活性．突变体酶活数据结果也显示His-234对Pt4CL1的活性非常重要，是Pt4CL1催化中心的活性残基．]]> 2013/11/22 0:00:00 484true 487SPKK490”位置存在潜在的磷酸化位点．证明了将487位点模拟磷酸化后将导致CC1-FHA二聚体的解聚．进一步，在487位点进行点突变将影响KIF1A的活性以及线虫中KIF1A介导的突触囊泡在轴突上的运输．因此，高度保守的“487SPKK490”可能对CC1-FHA片段二聚化和调节KIF1A活性起着关键性作用．]]> 2014/9/22 0:00:00 483true v3)广泛分布于各类细胞，其显著的电生理学特点是低电位激活和快速的电压依赖性失活．失活在通道的生理功能调节中起十分重要的作用，但具体参与通道失活的分子基础目前并不完全清楚．为明确Cav3.1通道中调控电压依赖性失活的结构域，用Cav1.2通道(无电压依赖性失活)结构域Ⅰ和Ⅱ中的S1～S4、S5～S6区及Ⅰ和Ⅱ间的联系区替换Cav3.1中的相应区域，构建嵌合通道，并在卵母细胞中表达，用电压钳技术分析通道的电生理学特性．结果表明，替换Ⅰ中的S1～S4或S5～S6区可使Cav3.1的失活特性显著改变，但这种改变主要是由激活-失活偶联所致．Ⅱ的替换使通道的失活曲线参数发生显著改变，表明结构域Ⅱ，包括S1～S4和S5～S6均参与Cav3.1失活过程的调控．Ⅰ、Ⅱ间的联系区及Ⅰ中的S5～S6主要调控Cav3.1的失活速率，Ⅰ和Ⅱ中的S1～S4对通道失活速率无影响．综上所述，结构域Ⅱ是调控Cav3.1电压依赖性失活的关键因素，结构域Ⅰ不参与该通道失活过程的调控．Ⅰ、Ⅱ间的联系区及Ⅰ中的S5～S6主要调控Cav3.1通道的失活速率，Ⅰ、Ⅱ中的S1～S4对通道失活速率无影响．]]> 2014/9/22 0:00:00 482true BsfabF、中华苜蓿根瘤菌SmfabF、霍乱弧菌VcfabF、铜绿假单胞菌PafabF1和PafabF2 5个同源基因进行功能鉴定，体外酶学分析表明，5个FabF同源蛋白均具有长链3-酮基脂酰ACP合成酶活性，异体互补大肠杆菌CL28的脂肪酸组分分析显示，SmfabF、VcfabF、PafabF1和PafabF2具有3-酮脂酰ACP合成酶Ⅱ(FabF)活性，遗传互补大肠杆菌温度敏感突变株CY242和CY244的研究显示，仅有PafabF2编码的蛋白拥有3-酮脂酰ACP合成酶Ⅰ(FabB)活性，能互补大肠杆菌fabB的突变．这表明不是所有的FabF同源蛋白均具有3-酮脂酰ACP合成酶Ⅰ和Ⅱ的双重活性．]]> 2014/9/22 0:00:00 481true max)、最大生长速率(μmax)和终止生物量(Bf)随温度的变化趋势基本一致，说明温度的高低可通过影响细胞硝酸还原酶活力大小间接影响藻类的生长．旋链角毛藻单位体积的NRAmax和最大生长速率均大于米氏凯伦藻，说明旋链角毛藻能够更好地吸收利用硝酸盐．]]> 2014/9/22 0:00:00 480true 2014/9/22 0:00:00 479true 2014/8/19 0:00:00 478true 2014/8/20 0:00:00 477true Escherichia coli)是Ⅱ型脂肪酸合成系统的模式生物，3-羟基脂酰ACP脱水异构酶(FabA)是不饱和脂肪酸合成中的关键酶．生物信息学分析表明，乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)的基因组中没有标注为3-羟基脂酰ACP脱水异构酶的基因，但有两个标注为3-羟基脂酰ACP脱水酶基因LlfabZ1和LlfabZ2，其编码的蛋白质与EcFabZ的相似性分别为41%和45.1%，且都具有3-羟基脂酰ACP脱水酶两个保守的α螺旋结构．用携带LlfabZ1和LlfabZ2的质粒载体遗传互补大肠杆菌fabA温度敏感突变株CY57，在42℃下不能恢复生长，但无细胞抽提物的结果显示LlFabZ1能够使反-2-癸烯酰ACP异构成顺-3-癸烯酰ACP，而LlFabZ2则不能．互补大肠杆菌fabZ突变株HW7显示，在诱导的条件下，含有LlfabZ2的转化子能够恢复生长，而LlfabZ1则不能．体外重建脂肪酸合成反应及蛋白质活性测定表明，LlFabZ1具有3-羟基脂酰ACP脱水异构酶功能，而LlFabZ2只具有3-羟基脂酰ACP脱水酶功能．另外，未得到LlfabZ1和LlfabZ2的突变株，表明LlFabZ1和LlFabZ2可能是乳酸乳球菌脂肪酸合成酶系中的必不可少的关键蛋白．上述结果证实了乳酸乳球菌fabZ1和fabZ2两个基因在脂肪酸合成中的功能．]]> 2014/8/19 0:00:00 476true cab-1突变会降低肠道DCV内容物的分泌，而在神经系统中，CAB-1的缺失也会导致DCV的标识物堆积在突触前，而突触囊泡(synaptic vesicle，SV)不受影响．]]> 2014/8/19 0:00:00 475true 2014/8/20 0:00:00 474true 2014/8/20 0:00:00 473true 2O2)会使Nmi的亚细胞定位回到细胞核内，表明Nmi的亚细胞定位受到细胞氧化环境的影响．]]> 2014/7/19 0:00:00 472true 2014/7/19 0:00:00 471true P < 0.05)；siRNA沉默PPARδ的表达后，可阻抑GW501516对HUVEC细胞PAI-1表达的促进作用；TGFβ-Smad3信号通路抑制剂SB-431542与SIS3均可降低HUVEC细胞pSmad3蛋白的表达，而细胞PAI-1表达也随之降低．结果提示，GW501516可促进HUVEC细胞PAI-1的表达，其机制可能与TGFβ-Smad3信号通路有关．]]> 2014/7/19 0:00:00 470true WRKY42基因的转录分析发现，该基因在水稻苗期和花药中转录，其蛋白质可在各时期的叶片中检测到．在Xa21介导的抗白叶枯病过程中，接菌后期可检测到明显的诱导表达条带，比较其在抗、感和对照反应中的表达丰度发现，在抗、感反应中的表达相似但均明显大于对照反应，推测WRKY42蛋白质在水稻-白叶枯病菌互作反应中发挥作用．我们克隆并在细菌中表达了WRKY42蛋白质，采用微量热泳动(microscale thermophoresis)技术，调查了WRKY42与病程相关基因PR1a和PR1b启动子区顺式元件W-box的互作，发现它们之间可发生特异结合，其解离常数分别为73.3 μmol/L和58.3 μmol/L．上述数据提供了WRKY42调控下游基因的直接证据，支持WRKY42在水稻抗病过程中发挥作用．文章提出了WRKY转录因子在水稻与白叶枯病菌互作过程中的作用模式．]]> 2014/7/19 0:00:00 469true 5．定量分析结果显示：回文序列扩增最快；二重复序列比相同碱基组成的四重复序列有更宽的适于扩增的温度范围；G和C含量多的DNA较G和C含量少的序列更易扩增，而且G和C含量越多越适于在较高的温度下扩增；重复单位含两相同嘧啶的链多数比其互补链更易扩增；产物浓度与时间基本呈线性关系．限制性酶切产物结果显示，扩增产物与模板具有相同的重复单位，是重复序列的简单延伸．最后，根据实验结果和相关文献，提出了包括链内滑动扩增和发卡DNA介导扩增两阶段的重复序列单链扩增模型，以对重复序列非特异扩增和相关疾病发生机制的研究提供参考．]]> 2014/7/19 0:00:00 468true P < 0.01)的高频适配子，其中5个高频适配子(S1、S25、S26、S27、S35)对哈维氏弧菌有较高的亲和力，相应的亲和常数Kd值分别为(32.6±7.1)、(45.3±10.1)、(24.7±5.8)、(34.8±5.6)、(12.9±4.0) nmol/L．本文还对高频适配子的产生机制及其应用价值进行了探讨．本文首次筛选出了对哈维氏弧菌具有较高亲和特异性的适配子，为后续利用适配子进行哈维氏弧菌的检测和鉴定奠定了基础．]]> 2014/7/19 0:00:00 467true 2014/6/19 0:00:00 466true 2014/6/19 0:00:00 465true P < 0.05)．miR-30b转基因小鼠心重/体重比和左心室/体重比无明显变化，心肌组织结构未见异常．目前，关于miR-30b在心肌梗死中的功能及相关机制未见报道．本文通过冠状动脉左前降支结扎法建立心肌缺血再灌注(ischemia- reperfusion，I/R)模型，以假手术组作为对照组．生化检测结果及TTC-Evans blue双染结果显示，I/R损伤后，与野生型小鼠相比，转基因小鼠LDH、CK-MB和cTnⅠ浓度显著减小(P < 0.05)，并且心肌梗死面积明显减少(P < 0.05)．超声心动图检测结果显示，转基因小鼠心功能显著改善．由此得出结论：miR-30b对缺血再灌注损伤的心肌具有保护作用，该研究成果可能为预防和治疗心肌梗死提供新策略．]]> 2014/6/19 0:00:00 464true IC50值分别为0.254、0.564和0.656 mmol/L，抑制常数ki分别为0.154、1.38和2.98 mmol/L．加入药物后的Lineweaver-Burk曲线表明这三种药物对PON的抑制均为竞争性抑制．根据加入药物后的动力学曲线，其IC50值、抑制常数和米氏常数的变化均表明这三种药物的抑制能力大小顺序：吲哚美辛>阿司匹林>乙酰氨基酚．CPOCMA 可以作为PON底物体外评价药物对PON的抑制能力和抑制机理．UV法不适合评价紫外吸收峰与UV法的检测波长重叠的药物，而新建立的化学发光法对这类药物的筛选有独特优势．]]> 2014/6/19 0:00:00 463true 2014/6/19 0:00:00 462true 2014/6/19 0:00:00 461true 2014/6/19 0:00:00 460true Su(H)和E(spl)的低表达突变体果蝇，通过体外注射病原体分析了生存率、血细胞的噬菌功能和抗菌肽的表达量以及突变体的血细胞数量．结果表明，革兰氏阴性细菌和真菌感染后果蝇E(spl)突变体的生存率、噬菌能力及抗菌肽的表达量明显降低，而且幼虫期血细胞出现异常增殖；Su(H)突变体只对真菌表现出敏感性，抗菌肽的表达量降低，但是对真菌的噬菌能力正常．此结果表明，Notch途径不仅影响个体的生长发育，而且在果蝇天然免疫中也起重要的调节作用．]]> 2014/5/22 0:00:00 459true 2014/5/22 0:00:00 458true 2014/5/22 0:00:00 457true 2014/5/22 0:00:00 456true 2S) 对甲醛神经毒性和氧化应激具有拮抗作用．Paraoxonase-1 (PON-1) 是机体重要的内源性抗氧化剂．本研究的目的是探讨PON-1是否可介导H2S的抗甲醛神经毒性作用．采用甲醛损伤PC12细胞为甲醛神经毒性的细胞模型．硫氢化钠 (NaHS，一种H2S的供体) 不仅可以上调PC12细胞PON-1的活力，还可恢复甲醛对PC12细胞PON-1表达与活力的抑制作用．2-hydroxyquinoline (2-HQ) 是一种选择性PON-1抑制剂，它可显著降低H2S对甲醛细胞毒性、凋亡和活性氧(reactive oxygen species, ROS)累积的抑制作用．而且，2-HQ可阻止H2S逆转甲醛激活PC12细胞caspase-3和下调PC12细胞bcl-2表达．结果提示H2S依赖PON-1去保护PC12细胞对抗甲醛的神经毒性．我们的这一发现表明PON-1有希望成为防治甲醛神经损伤的新靶点．]]> 2014/5/22 0:00:00 455true 2014/5/22 0:00:00 454true 2014/5/22 0:00:00 453true 2014/4/23 0:00:00 452true 2014/4/22 0:00:00 451true 2014/4/22 0:00:00 450true 2014/4/22 0:00:00 449true 2014/4/22 0:00:00 448true 2014/2/21 0:00:00 447true 2014/2/21 0:00:00 446true 2014/2/21 0:00:00 445true 2014/2/21 0:00:00 444true Saccharomyces cerevisiae)蛋白激酶Sch9与哺乳动物蛋白激酶S6K1同源．S6K1是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的底物，且与很多人类疾病相关，包括肥胖症、糖尿病和癌症．Sch9和S6K1都对不同营养条件和环境胁迫条件下的细胞生长调控很重要．Sch9激活环内的磷酸化位点570位苏氨酸残基也被称为PDK1位点，而737位苏氨酸位点也被称为PDK2位点，这两个位点的磷酸化对Sch9的活性非常重要．蛋白激酶Pkh1/2磷酸化Sch9的PDK1位点，而雷帕霉素靶蛋白复合体1(TORC1)磷酸化PDK2位点．为了深入了解Sch9在细胞中的功能，阐明不同环境条件下及时序衰老过程中Sch9的PDK1和PDK2位点磷酸化的调控就显得尤为重要．利用特异性识别570位苏氨酸残基磷酸化的Sch9蛋白和特异性识别737位苏氨酸残基磷酸化的Sch9蛋白的两种抗体，对不同环境条件下和时序衰老过程中Sch9的两个位点的磷酸化调控进行了研究．研究结果揭示了Sch9的两个磷酸化位点在营养感受、胁迫应答、热量限制和时序衰老过程中的调控方式．揭示Sch9的PDK1位点磷酸化的调控与热量限制延长出芽酵母时序寿命密切相关．]]> 2014/2/21 0:00:00 443true 2和(102.73±13.81)μg/cm2，HA-GMS纳米乳明显增加了MD-CPT的透皮效率，本研究结果为透皮给药治疗瘢痕疾病提供了基础．]]> 2014/2/21 0:00:00 442true 2014/12/19 0:00:00 441true P < 0.01)，同时也低于非谐波内S神经元的BA(109.7±7.9) dB SPL(P < 0.01)．以上实验结果表明，在下丘水平，神经元就已对多普勒频移补偿后回声定位信号的处理有了分工，集中在谐波内的S神经元通过提高对某一补偿值下回声信号反应的恢复率实现，对回声信息的精确编码，避免其他杂波干扰信息．同时，谐波内S神经元的发放模式和强度-潜伏期函数特点也满足其在复杂环境中精确声学成像的需求．]]> 2014/12/19 0:00:00 440true 2014/12/19 0:00:00 439true 1/2是静脉注射的3.6倍，肌肉注射的1.6倍，体内药物滞留时间显著增加；血药浓度峰谷值差异小，曲线平缓，说明经皮给药能保证血药浓度呈现可控的持续性．最终通过活体成像系统和组织切片荧光显微镜，直观地反映出经皮给药后药物在大鼠体内的分布情况和各组织器官药物含量，确定载药纳米乳主要采取胞间渗透的扩散方式，在局部给药的区域滞留时间较长，有利于对浅表性的病灶区持续给药，延长药效，而剩余的MD-CPT和解离的HANs都进入了血液循环，最终通过新陈代谢被排出体外．为无创型HANs经皮给药系统应用于浅表性肿瘤治疗提供了理论基础．]]> 2014/12/19 0:00:00 438true 2014/11/21 0:00:00 437true 2014/11/21 0:00:00 436true IGFBP2基因3′非编码区(3′UTR) 1196C>A单核苷酸多态性(SNP)与鸡的腹脂重和腹脂率显著相关．生物信息学分析显示，该SNP恰好位于gga-miR-456-3p的一个潜在靶基因结合位点处，提示IGFBP2基因可能是gga-miR-456-3p的一个靶基因，且该SNP位点可能影响gga-miR-456-3p对IGFBP2基因表达的调控作用．为鉴定SNP 1196C>A是否为功能性SNP，本研究分别构建了包含该SNP位点C或A等位基因的双荧光素酶报告基因载体，比较分析这两个等位基因在鸡胚成纤维细胞系(DF1)和鸡前脂肪细胞中对报告基因活性和表达的影响；利用miRNA mimics和inhibitor分析gga-miR-456-3p对不同等位基因报告基因活性以及内源性IGFBP2表达的影响．结果发现，在DF1细胞和鸡前脂肪细胞中，A等位基因的报告基因活性和表达均显著高于C等位基因(P < 0.05)；gga-miR-456-3p仅影响C等位基因的报告基因活性和表达，而对A等位基因的报告基因活性没有明显影响；gga-miR-456-3p调控细胞内源性IGFBP2基因的mRNA和蛋白质表达．本研究证实IGFBP2基因是gga-miR-456-3p的靶基因，其3′UTR区SNP 1196C>A是一个功能性SNP，它影响gga-miR-456-3p对鸡IGFBP2基因的表达调控作用．本研究结果对于鸡的分子辅助选择育种及IGFBP2基因在脂肪沉积中调控机制的阐明具有重要意义．]]> 2014/11/21 0:00:00 435true desA基因在不饱和脂肪酸合成、共生结瘤固氮以及应对逆境胁迫中的功能，为高效利用苜蓿中华根瘤菌提供理论依据，本文通过异体遗传互补和脂肪酸组成薄层层析，分析SmdesA编码蛋白是否具有脱饱和酶的活性并参与不饱和脂肪酸的合成，构建SmdesA的缺失突变株和互补菌株，比较各菌株在不同逆境胁迫条件下的生长速率以及回接宿主植物后与紫花苜蓿共生结瘤的能力．结果表明SmdesA不能互补大肠杆菌CY57中EcfabA的突变，但具有将饱和脂肪酸脱饱和形成不饱和的棕榈油酸和十八碳烯酸的能力．另外，SmdesA缺失突变对苜蓿中华根瘤菌的脂肪酸组成影响不大，但会显著影响低温和高盐条件下菌株的生长速率以及与紫花苜蓿共生结瘤的能力．我们推测，SmdesA参与的脱饱和途径可能是苜蓿中华根瘤菌不饱和脂肪酸合成的补偿途径，其编码的蛋白DesA不是不饱和脂肪酸合成的关键酶，但在应对逆境胁迫和共生结瘤中具有重要的生物学功能．]]> 2015/8/18 0:00:00 434true 2015/8/18 0:00:00 433true 2015/8/18 0:00:00 432true 2015/7/20 0:00:00 431true ENV)的短时锁相值、瞬时相位差极性图、相位差均值矢量以及时间细节结构相关频率跟随响应(temporal-fine-structure-related frequency-following response，FFRTFS)的幅度谱信噪比．实验结果表明，在完成基于音高的任务时，受过音乐训练的受试者准确率更高、反应时间更短．外界噪声不影响两组人群在基频(fundamental frequency，F0)的神经元锁相能力，但是显著降低了谐波处的神经元锁相能力．受过音乐训练的受试者的神经元在基频处的锁相能力和谐波处抗噪能力均增强，且其FFRTFS幅度谱信噪比与基于音高的行为学准确率呈正相关．因此，受过音乐训练的受试者其音高选择性注意感知能力的提高取决于认知神经能力的增强，经过音乐训练后，F0处FFRENV的锁相能力、谐波处FFRTFS的抗噪和持续锁相能力以及谐波处FFRTFS幅度谱信噪比均明显增强．音乐训练对听觉选择性注意具有显著的可塑性．]]> 2015/7/20 0:00:00 430true 2015/7/20 0:00:00 429true 2015/6/24 0:00:00 428true n技术检测和分析了乳腺癌MCF-7和高转移乳腺癌LM-MCF-7细胞中溶血磷脂酰胆碱（lysophosphatidylcholines，LysoPCs）和磷脂酰胆碱（phosphatidylcholines，PCs）的成分和含量。我们发现了10种LysoPC的含量在LM-MCF-7细胞中显著高于MCF-7细胞，有6种PC可水解产生AA，它们在LM-MCF-7细胞中的含量显著低于MCF-7细胞，提示这些溶血磷脂含量的升高和磷脂含量的降低可能与乳腺癌转移相关。在LM-MCF-7细胞中，COX-2抑制剂吲哚美辛（indomethacin，Indo）和LOX抑制剂（nordihydroguaiaretic acid，NDGA）共同作用可明显下调cPLA2的活性，应用HPLC-ESI-MSn技术比较cPLA2活性下调前后LM-MCF-7细胞中LysoPC和PC含量的变化，发现其中4种PC可被cPLA2水解产生AA。我们还发现，细胞内LysoPC与PC的比值可以反映cPLA2的活性。通过以上研究我们进一步证实了由cPLA2活性调节的AA释放及代谢对乳腺癌转移具有重要作用。]]> 2015/6/24 0:00:00 427true 2015/6/24 0:00:00 426true 6个噬菌体处出现空缺，而6株突变菌在滴加2.4×109个噬菌体后仍能生长，表明6株突变菌具有抗噬菌体特性；6株突变菌中，σ-54依赖的翻译调节器突变菌成膜能力(A595=1.1±0.2)较野生型副甲菌(A595=0.5±0.1)显著性增强，且差异显著(P < 0.05)，光学显微镜下菌体聚集成粗大的不规则团块；同源重组敲除野生型副甲菌σ-54依赖的翻译调节器，突变菌出现噬菌体抗性，将表达σ-54依赖的翻译调节器的载体转化该突变菌，突变菌又恢复了噬菌体敏感性．结果表明，σ-54依赖的翻译调节器是抗噬菌体和生物膜形成相关的基因．]]> 2015/6/24 0:00:00 425true 2015/5/22 0:00:00 424true 2015/5/22 0:00:00 423true 2015/5/22 0:00:00 422true -6)，且男性呼吸丙酮浓度随年龄的升高而降低(R=-0.154)．男性呼吸丙酮浓度与BMI呈负相关(R=-0.2)，且BMI<25的患者呼吸丙酮平均体积分数(1.75×10-6)高于BMI > 25的患者(1.25×10-6)．女性呼吸丙酮浓度与患病年限呈正相关(R=0.17)，而男性呈负相关(R=-0.14)．男性和女性空腹呼吸丙酮浓度均高于餐后2 h的呼吸丙酮浓度．多元线性回归分析结果表明，影响呼吸丙酮浓度的因素为：性别(β= 0.374)、气体样本采集状态(β= -0.289)、A1C(β= 0.083)、BG(β= 0.002)、BMI(β= -0.046)及年龄(β= -0.009)．]]> 2015/5/22 0:00:00 421true 2015/4/24 0:00:00 420true 2015/4/24 0:00:00 419true 2015/4/24 0:00:00 418true 2015/4/24 0:00:00 417true Acinetobacter baumannii)在医院里越来越受到人们的关注，尤其是在重症监护病房(ICUs)．它以强大的多重耐药性(multiresistance)而闻名．核苷二磷酸激酶(nucleoside diphosphate kinase，NDK)是一种进化上非常保守的酶，它能催化核苷之间磷酸基团的转移．我们解析了鲍曼不动杆菌NDK野生型和C端氨基酸残基Arg141-Thr142-Arg143(RTR)截短突变体的结构．通过和黄色黏菌(Myxococcus xanthus)NDK的三维结构进行比较，推断鲍曼不动杆菌NDK的催化机制和黄色黏菌类似．通过激酶活性实验和圆二色谱实验，发现鲍曼不动杆菌NDK E28A突变体二级结构发生了改变，从而导致蛋白催化活性降低，说明Glu28是鲍曼不动杆菌NDK结构中非常关键的氨基酸残基．鲍曼不动杆菌NDK C端RTR截短突变体显示出催化活性极大的降低，这可能与C端RTR残基介导的二体间相互作用有关．虽然RTR截短突变体中的Lys33伸向了和野生型中不同的方向，和Val15产生相互作用弥补了一部分因为RTR截短丢失的相互作用，维持了RTR截短突变体和野生型类似的结构．但是，Lys33产生的相互作用依然太弱，不足以维持蛋白在催化的动态过程中整体结构的高效转换．我们解析的鲍曼不动杆菌NDK晶体高分辨率结构将有助于科学家设计针对鲍曼不动杆菌的药物．]]> 2015/3/24 0:00:00 416true nptⅡ编码新霉素磷酸转移酶，是转基因实验中最常用的筛选标记基因之一．本研究中，表达了重组新霉素磷酸转移酶(NPTⅡ)蛋白质，制备了单克隆抗体，建立了用免疫印迹检测转基因水稻中NPTⅡ蛋白质的方法，调查了NPTⅡ蛋白质的表达特征，包括遗传特征、表达时空特征、表达丰度和亚细胞定位等．结果表明，该方法可检测到单粒稻米的0.25%(约0.025 mg)样品中的NPTⅡ蛋白质，NPTⅡ的表达符合显性遗传规律，根据NPTⅡ的表达可对转基因T1代种子进行阴阳性及纯合株系的鉴定，对T1幼苗中NPTⅡ丰度的分析可为纯合单株的鉴定提供参考信息．定量分析表明苗期叶片中NPTⅡ蛋白质的含量约为鲜重的0.08‰．在CaMV-35S启动子驱动下NPTⅡ蛋白质在水稻苗期、成株期的叶片和根部组织中表达量较高，而在分蘖期、孕穗期较低，NPTⅡ在不同时期的根、茎、叶、穗子、花及种子等组织中均有表达，只是在分蘖节、茎节、穗轴和花药等组织中表达量相对较低．此外，NPTⅡ蛋白质的表达主要定位在细胞质中．综上所述，本研究建立了具有应用价值的检测NPTⅡ蛋白质的免疫印记方法并系统揭示了其在水稻中的表达特征．]]> 2015/3/24 0:00:00 415true Uchl1基因及Arih2基因进行了甲基化水平以及表达水平的验证．结果表明，模型组小鼠黑质脑组织Uchl1启动子区域甲基化水平较对照组增高，mRNA及蛋白质表达水平降低，Arih2启动子区域甲基化水平较对照组降低，mRNA及蛋白质表达水平增高．实验结果进一步证实，DNA甲基化修饰异常在帕金森病发病机制中有重要作用，环境因素(如MPTP)可以通过改变DNA甲基化修饰参与帕金森病的发生发展．]]> 2015/3/24 0:00:00 414true 2015/2/6 0:00:00 413true IC50明显减小(P < 0.05)，单独使用CPT-11或NCTD作用24、48和72 h时的IC50分别是联合使用时的2.83、3.15、2.19倍以及2.66、3.11、2.45倍，并且两药联合用药具有协同作用效应；两药合用24 h时先给CPT-11方案抑制作用优于先给NCTD方案，且优于同时给药方案(P < 0.05)；CPT-11 60 μmol/L作用24 h引起BGC-823细胞S和G2-M期阻滞(P < 0.01)，NCTD 60 μmol/L作用24 h引起细胞G2-M期阻滞(P < 0.05)，并诱导细胞凋亡(P < 0.05)，联合用药(60∶60) μmol/L作用24 h，主要引起细胞G2-M期阻滞(P < 0.01)，与先给NCTD 6h方案及同时给药相比，先给CPT-11 6h方案主要引起细胞S期阻滞增加(P < 0.05)以及细胞凋亡增加；CPT-11 30、60 μmol/L作用12 h后Pdcd4上调表达，p53下调表达(P < 0.05)，NCTD 30、60 μmol/L作用12 h后Pdcd4下调表达，p53上调表达(P < 0.05)，联合用药(30∶30，60∶60) μmol/L作用24 h后Pdcd4及p53蛋白表达均上调(P < 0.05)．上述结果表明：CPT-11联合NCTD对人胃癌BGC-823细胞有协同抑制作用，其机制主要是诱导细胞G2-M期阻滞，并与抑癌基因蛋白Pdcd4及p53上调表达有关；两种药物联用时序贯次序对联合作用有影响，先给CPT-11方案要优于先给NCTD方案及同时给药方案，其机制主要是引起S期阻滞增加以及细胞凋亡增加；抑癌基因蛋白Pdcd4与p53之间可能存在负调控关系．]]> 2015/2/6 0:00:00 412true 2015/2/6 0:00:00 411true 3)对鼻咽癌干细胞SP18迁移与侵袭的影响，本研究通过建立稳定表达LMP1及CTAR3突变型LMP1(LMP1△252-351)的SP18细胞系(即SP18-LMP1和SP18-LMP1△252-351)，观察LMP1-CTAR3缺失突变后对SP18细胞增殖、迁移与侵袭的影响．采用基因芯片分析SP18-LMP1和SP18-LMP1△252-351间的差异表达基因，并验证基因的表达，用生物信息学分析差异表达基因间的相互关系．结果显示：a．SP-LMP1△252-351细胞生长速度较SP-LMP1细胞明显变缓，克隆形成和迁移与侵袭能力降低(n=3，P < 0.05)；b．鉴定出LMP1羧基端CTAR3影响SP18细胞迁移与侵袭的18个基因(其中表达上调基因13个，下调基因5个)，经荧光定量PCR验证与基因芯片检测结果基本一致．c．13个差异基因间相互联系，网络节点联系最多的基因是FN1、MMP14、THBS1、ITGA2、IL1B和IL6基因．结果提示，LMP1羧基端CTAR3可能通过调节FN1、MMP14、THBS1、ITGA2、IL1B和IL6基因的表达，发挥其促鼻咽癌干细胞SP18细胞迁移与侵袭的功能．]]> 2015/1/19 0:00:00 410true 80%)偏向于上游区域及“上游-内含子”区域，进一步支持了内含子参与基因转录调控的假设，并据此推测内含子与上游序列之间具有转录协同作用，模体在基因转录起始位点(TSS)附近较为集中，模体对的两个模体之间距离较近，60%左右距离在200 bp以内，特别地，65%的模体对特征距离在100 bp以内，短距离间隔有利于转录因子间的协同作用．这些结果将有助于对人基因转录调控机制及内含子功能的深入认识．]]> 2015/1/19 0:00:00 409true 2015/12/18 0:00:00 408true 2015/12/18 0:00:00 407true 2015/12/18 0:00:00 406true 2015/12/18 0:00:00 405true 2015/10/20 0:00:00 404true M. smegmatis)为研究对象，利用串联亲和纯化技术和质谱相结合的方法对可能与MutM相互作用的蛋白因子进行发现和鉴定，并于体外用Far-western和GST pull-down方法对鉴定出的蛋白DEAD-box rna helicase、RpsC、UvrA与MutM的相互作用进行了验证．实验结果表明，利用串联亲和纯化方法来发现MutM相互作用的蛋白是切实可行的．本研究为进一步深入研究MutM在其参与的损伤修复中的具体机制提供了切入点．]]> 2015/10/20 0:00:00 403true 2015/10/20 0:00:00 402true Fv/Fm)，提高了细胞内叶绿素a和胡萝卜素含量．快速叶绿素荧光动力学研究显示微重力降低了叶绿素荧光强度，但快速叶绿素荧光动力学曲线的形状(O-J-I-P)没有改变．在微重力处理下裸藻的最大光化学效率(φPo)、用于电子传递的量子产额(φEo)和光合作用性能指数(PIABS and PICS)都明显降低，但单位反应中心吸收的光能(ABS/RC)和单位反应中心耗散的能量(DIo/RC)都明显升高．77K低温荧光光谱实现微重力改变了能量在PSⅠ和PSⅡ之间的分配并出现了红移现象．这些结果表明真实微重力降低光合作用的活性有可能通过两个途径，即抑制裸藻抑制光合电子传递中PSⅡ的受体端和改变PSⅠ的结构从而引起流向PSⅠ的能量传递减少．]]> 2016/9/18 0:00:00 401true 2016/9/18 0:00:00 400true P21, CD44 and BMI-1 upon treatments. MTT test demonstrated that VPA significantly (P < 0.05) increased toxicity of DDP, which was confirmed by DNA laddering, flow cytometry analysis and significant (P < 0.05) overexpression of P21. Moreover, real time RT-PCR results indicated significant (P < 0.05) down regulation of CD44 and BMI-1 after VPA administration. Present attempt provided evidence, for the first time, that VPA not only improved responsiveness of esophageal stem-like cancer cells to DDP, also negatively regulated cancer stem cells markers in these cells.]]> 2016/9/18 0:00:00 399true 2016/8/5 0:00:00 398true PstⅠ可以切割质粒pBR322的Ⅳ型DNA分子，说明在这种变性的DNA分子中仍存在少数完整的限制酶识别位点．与碱变性DNA分子的闭合环状结构相反，AFM成像的结果显示PstⅠ处理后的DNA Ⅳ分子均为开放结构，同时这种分子包含明显的DNA结节．与DNA Ⅳ分子相比，这种DNA分子的表观长度缩短了大约11%．有意思的是，大肠杆菌拓扑异构酶Ⅳ(一种Ⅱ型拓扑异构酶)也可以在pBR322 DNA Ⅳ分子中引入分子内结节，而这种结节DNA分子仍然保持闭合状态．AFM的结果表明上述两种结节的DNA分子在表观长度及结节结构的尺寸上均比较相似．这些发现证实，在碱变性的超螺旋DNA分子中仍然保留着一些长度较短的、含有特异性碱基配对的DNA双链区，而在这些区域内的DNA双链断裂可以导致DNA结节．]]> 2016/8/5 0:00:00 397true 2016/8/5 0:00:00 396true 2016/8/5 0:00:00 395true 2016/8/5 0:00:00 394true 2016/8/5 0:00:00 393true 2016/7/19 0:00:00 392true χ2-pos，融合伪氨基酸序列进化信息PsePSSM 以及无方向的k间隔氨基酸对组分Undirected-CKSAAP表征序列，构建5个正负样本均衡的支持向量机分类器，经加权投票，独立测试准确率、Matthew相关系数及ROC曲线下面积，分别达到了89.62%、0.79、0.96，明显优于文献报道结果．χ2-pos、PsePSSM与Undirected-CKSAAP三种特征的融合在蛋白质糖基化、磷酸化等位点预测中有广泛应用前景．]]> 2016/7/18 0:00:00 391true 1-42、TNF-α、INF-γ含量．结果发现，竹叶黄酮可显著促进海马神经细胞的增殖，并且抑制异氟醚所致的海马神经细胞凋亡．与异氟醚单独处理组相比较，各浓度竹叶黄酮可显著降低大鼠逃避潜伏期并增加大鼠过台次数，ELISA结果显示竹叶黄酮可显著抑制海马组织中Aβ1-42、TNF-α及INF-γ的表达．表明竹叶黄酮可增强大鼠抗炎能力，抑制海马组织中Aβ1-42的产生，从而抑制异氟醚所致的老年大鼠神经损伤及认知功能障碍．]]> 2016/7/19 0:00:00 390true Peg3基因的差异甲基化区域(differential methylated region，DMR)，并且分析了Peg3、Cdkn1c、Gtl2在克隆绵羊和自然分娩绵羊不同组织中的甲基化水平．研究发现，在克隆绵羊和自然分娩绵羊中Peg3呈现为超甲基化水平，在克隆绵羊的肾脏和肺脏中DNA甲基化水平为95.45%、81.18%，相对于正常分娩的绵羊组织中的98.18%、87.27%无显著性差异，而Cdkn1c在两组实验动物中的肾脏和肺脏中表现为非甲基化水平，分别为0%、0.53%、0.53%和0.53%，Gtl2则是低甲基化水平，并且克隆绵羊与正常分娩绵羊之间的DNA甲基化水平无显著性差异(r2 = 0.77)．这些结果表明，Peg3、Cdkn1c、Gtl2三个印记基因在克隆绵羊和自然分娩绵羊组织中呈现类似甲基化水平，无显著性差异．]]> 2016/7/18 0:00:00 389true 2016/6/22 0:00:00 388true 2016/6/22 0:00:00 387true 2016/6/21 0:00:00 386true 2016/6/22 0:00:00 385true Rad9、Rad1和Hus1在细胞周期监控点调控和DNA损伤修复中发挥重要作用．这三个蛋白可以形成环形异源三聚体，即9-1-1蛋白复合体．9-1-1复合体被认为是Rad9、Rad1和Hus1行使功能的主要形式．到目前为止，没有一个好的抗Rad1的抗体，严重阻碍了对Rad1和9-1-1复合体的研究．在本研究中，我们成功地制备了一株小鼠抗Rad1蛋白的单克隆抗体．这个抗体能够有效地检测小鼠和人的内源Rad1蛋白，可以用于酶联免疫吸附、蛋白质免疫印迹、免疫共沉淀和免疫荧光等实验．利用该抗体，我们发现在DNA损伤剂羟基脲(HU)的诱导下，小鼠Rad1蛋白在Rad9+/+小鼠胚胎干细胞中表达明显增加，而在Rad9-/-的小鼠胚胎干细胞中没有观察到该现象，这表明Rad9对Rad1的蛋白表达有调控作用．此外，内源的Rad1蛋白主要分布在细胞质中，在HU处理后并没有迁移进入细胞核的现象，这与先前广泛被人们所接受的在DNA损伤压力下Rad1和Hus1能够迁移进入细胞核并与Rad9形成9-1-1蛋白复合体的说法相矛盾．综合看来，Rad1和9-1-1蛋白复合体的分子作用机制比预期的要复杂，我们成功制备的Rad1单克隆抗体将成为研究Rad1以及9-1-1蛋白复合体的强有力的工具．]]> 2016/5/20 0:00:00 384true 2016/5/20 0:00:00 383true 2016/5/20 0:00:00 382true Xanthomonas campestris (Xcc) 8004基因组中XC_0119 (XccfabV) 注释为反-2-烯脂酰CoA还原酶基因．但其编码产物与铜绿假单胞菌的烯脂酰ACP还原酶FabV具有较高的同源性，并含有相同的催化活性中心Tyr-(Xaa)8-Lys序列．用携带XccfabV的质粒载体互补大肠杆菌fabI温度敏感突变株JP1111，转化子能在42℃生长，表明XccfabV能遗传互补大肠杆菌fabI突变．体外重建脂肪酸合成反应表明，XccFabV能催化不同链长的烯脂酰ACP还原为脂酰ACP，且催化活性不受三氯森抑制．遗传学研究表明，XccfabV是必需基因，不能获得XccfabV基因敲除突变株．将携带大肠杆菌fabI的外源质粒导入野生菌后，可敲除染色体上的fabV基因，获得的替换突变株生长特性和脂肪酸组成未发生显著变化，但替换突变株对三氯森敏感．上述结果证实，野油菜黄单胞菌fabV是必需基因，编码烯脂酰ACP还原酶，参与脂肪酸从头合成反应，且FabV是Xcc对三氯森耐受的根本原因．]]> 2016/5/20 0:00:00 381true 2016/5/20 0:00:00 380true 2016/3/21 0:00:00 379true +心系细胞和EMT关键信号分子Snail1、Smad、Slug、Twist在发育后期胚鼠心外膜和心外膜下间充质发生共聚焦．同时还发现，Tbx18在胚鼠不同发育阶段的表达模式和Tbx18+心系细胞内上述EMT关键信号分子的表达模式相似．Tbx18和EMT关键信号分子在发育心脏存在相似的时空表达模式，因此，它们之间可能存在相互调控作用．运用Tbx18突变技术揭示了Tbx18突变型胚鼠心脏EMT关键信号分子表达水平均较野生型显著下调，直接证实了上述4个EMT信号分子是Tbx18的可能靶点．理解Tbx18参与心脏发育的下游靶点有助于改善成年心脏损伤后的再生修复．]]> 2016/3/21 0:00:00 378true 2016/3/21 0:00:00 377true 2016/3/21 0:00:00 376true prg-1基因突变不仅影响piRNA的表达，还影响部分miRNA的表达，同时还发现ncRNA-like型小RNA，对ncRNA-like序列比较，认为ncRNA-like与piRNA或miRNA序列极为相似；对ncRNA-like与miRNA或piRNA的基因座比较，发现ncRNA-like与miRNA或piRNA基因座完全相同．推测这些ncRNA-like型小RNA可能与miRNA或piRNA有着相同的RNA前体来源．]]> 2016/3/21 0:00:00 375true 2016/3/21 0:00:00 374true 2016/2/19 0:00:00 373true P < 0.05)，流式细胞术检测表明细胞凋亡增加，RT-PCR及蛋白质印迹(Western blot)检测发现p62显著下调而beclin-1显著上调(P < 0.05)，提示缺氧复氧诱导心肌细胞凋亡和自噬异常．脂质体转染miR-21 mimic后，细胞凋亡显著增加(P < 0.05)，p62显著上调而beclin-1显著下调(P < 0.05)，而转染miR-21抑制剂引起相反结果，提示miR-21在心肌缺氧复氧损伤中具有促进细胞凋亡、抑制细胞自噬的作用．生物信息学预测显示，Rab11a的3′-UTR含有miR-21的结合位点，双荧光素酶基因报告系统及Rab11a过表达实验表明Rab11a是miR-21的靶基因之一．心肌过表达Rab11a能减少缺氧复氧后miR-21介导的细胞凋亡及自噬．由此表明，在大鼠心肌缺氧复氧损伤中，miR-21可能通过负调控Rab11a促进心肌细胞凋亡，抑制心肌细胞自噬．本研究可能为预防和治疗心肌缺血再灌注损伤提供新策略．]]> 2016/2/19 0:00:00 372true 2016/2/19 0:00:00 371true 2016/2/19 0:00:00 370true 2016/1/19 0:00:00 369true 2016/1/19 0:00:00 368true 2016/1/19 0:00:00 367true 2016/1/19 0:00:00 366true t检验结果表明，MCN组与SCN组相比，6 种凝集素，STL、WGA、BPL、DBA、PTL-Ⅰ及MAL-Ⅰ，识别的糖链结构二者之间存在明显差异(P < 0.05)，其中凝集素BPL、DBA、WGA、STL识别的糖链结构在MCN囊液中呈高表达(R > 2.0)，例如DBA特异识别的Tn抗原表达的增多，可能与肿瘤上皮细胞分泌的黏蛋白增多密切相关．而凝集素PTL-Ⅰ、MAL-Ⅰ特异识别Galβ-1、4GlcNAc结构以及GalNAcα-1、3Gal结构在MCN囊液中表达降低(R < 0.5)．通过凝集素印记法检测了STL和BPL分别于MCN、SCN囊液中蛋白的结合情况，结果表明STL和BPL与囊液中的糖蛋白结合明显强于SCN组．本文通过比较MCN和SCN糖蛋白糖谱表达差异，寻找胰腺囊性肿瘤诊断和肿瘤良恶性评估的新方法，同时为探索胰腺囊性肿瘤发生发展机制和治疗的潜在靶点奠定基础．]]> 2016/12/22 0:00:00 365true 3+)和落叶松单宁(LT)为原料，采用液相合成法合成了5种廉价的稀土-落叶松单宁(Re3+-LT)配合物，并通过红外光谱、X射线光电子能谱、紫外光谱以及配位数测定确定了配合物的结构．采用牛津杯法、琼脂稀释法测定配合物对黑曲霉、红曲霉、白腐菌、毛霉4种真菌的抑制作用．在抑菌方面，5种配合物对上述4种真菌均具有较强的抑制作用，其抑菌活性大小顺序为Ce3+-LT > Gd3+-LT > La3+-LT > Nd3+-LT > Yb3+-LT，其中Ce3+-LT对4种真菌的最小抑菌浓度分别为：1.6、1.6、0.8和1.6 g·L-1；Yb3+-LT对4种真菌的最小抑菌浓度分别为：3.2、1.6、3.2和3.2 g·L-1．在杀菌方面，Yb3+-LT的杀菌活性最强，其对4种真菌的最小杀菌浓度分别为：6.4、3.2、3.2和6.4 g·L-1．此外，尽管Nd3+-LT和Gd3+-LT具有较强的抑菌活性，但对黑曲霉和毛霉的杀菌作用较弱．]]> 2016/12/22 0:00:00 364true 2016/11/21 0:00:00 363true ChCel5A活性架构中色氨酸与底物的结合动力学过程，通过色氨酸荧光猝灭的定量分析，确定了色氨酸特异性结合时的底物浓度范围，并且测定了ChCel5A活性架构中单个氨基酸突变导致的底物结合常数的变化，与催化动力学参数比较发现，荧光光谱法可准确表征纤维素酶与底物的结合力及其单个残基突变引起动力学参数的变化．此外，由于pNP中含有强的吸电子基团，因而以pNPC等为配体时会高估与色氨酸的结合常数约20～100倍．荧光光谱法可以测定纤维素酶结合糖分子底物的动力学参数，该方法具有灵敏和快速的特点，这为蛋白质与底物之间相互作用的定量分析提供了新的视角．]]> 2016/11/22 0:00:00 362true 2016/10/24 0:00:00 361true BsfabH1和BsfabH2、金黄色葡萄球菌SafabH、天蓝色链霉菌ScofabH、革兰氏阴性细菌茄科雷尔氏菌RsfabH、大肠杆菌EcfabH，以及产支链脂肪酸的水稻黄单胞菌XoofabH，共7种fabH同源基因进行生物学特性分析．异体遗传互补茄科雷尔氏菌fabH突变株RsmH，表明这7个基因编码蛋白都具有3-酮脂酰ACP合成酶Ⅲ活性．脂肪酸组成分析显示，4个革兰氏阳性菌fabH和XoofabH互补株类似，均能产生支链脂肪酸，而EcfabH和RsfabH互补株不产生支链脂肪酸，说明XooFabH不同于EcFabH，参与支链脂肪酸合成．体外酶学分析表明，XooFabH与4种革兰氏阳性菌FabH类似，对支链脂酰-CoA有较高的选择，但EcFabH和RsFabH对支链前体活性低．与革兰氏阳性细菌FabH不同，XooFabH对中短链长(C4～C10)脂酰-CoA也具有较高的活性．综合以上结果，不同细菌来源FabH的生物学特性差异明显，FabH能利用支链前体是细菌合成支链脂肪酸的关键因素．]]> 2016/10/24 0:00:00 360true 2017/9/21 0:00:00 359true Ex(500nm)/Em(535nm)荧光信号的变化，判断建模是否成功；利用建好的筛选模型在高通量药物筛选平台对小分子化合物库进行初筛和复筛；再利用空斑分析检测筛选出的活性化合物是否对临床分离的EV71毒株具有抑制作用．mYFP在293A细胞中表达良好，3C的表达使荧光信号下降80%，Rupintrivir的存在则几乎不影响荧光表达，说明以3C为靶位的筛选模型构建成功．经过高通量初筛和复筛从26 000多种小分子化合物中获得26种能够显著回复mYFP表达的活性化合物；空斑分析显示其中2种化合物具有较为明显的抑制EV71复制的活性．因此，我们所构建的3C-mYFP共表达系统是一种简便有效的、可用于高通量筛选抗EV71 3Cpro药物的筛选模型．]]> 2017/9/21 0:00:00 358true 2017/9/21 0:00:00 357true 2017/7/17 0:00:00 356true 2017/7/17 0:00:00 355true 2017/7/19 0:00:00 354true 2017/7/18 0:00:00 353true Cre-miR914表达下调且其靶基因有可能是RPL18，但对它们的作用却不清楚．本研究中利用生物信息学结合降解组测序确定了Cre-miR914的靶基因是RPL18，接着利用定量PCR验证Cre-miR914及其靶基因的表达情况，发现Cre-miR914表达在高温处理后明显下调，而RPL18表达明显上调，同时通过构建Cre-miR914过表达株和靶基因RPL18过表达株，结合高温胁迫处理和抗性表型研究，发现Cre-miR914过表达明显降低衣藻对抗高温胁迫能力，而靶基因RPL18过表达提高了衣藻对抗高温胁迫能力．本研究发现了一个microRNA参与调控藻类高温适应过程的分子机制，即衣藻通过调控Cre-miR914及其靶基因RPL18表达参与了的高温胁迫适应过程．]]> 2017/6/20 0:00:00 352true P值小于0.05)．差异基因的功能多与细胞增殖、凋亡调控、蛋白质磷酸化和泛素化修饰调控过程相关，并且富集在多种信号通路中，例如TNF和TGF-β信号通路．在这些筛选出的基因中，CEACAM6表达水平下调2.17倍；序列分析及实验验证表明，CEACAM6的3′UTR区存在miR-26b的互补序列，是miR-26b的直接靶标．本研究证明了miR-26b能够靶向结合抑制CEACAM6的表达，从而抑制前列腺癌细胞在体外和体内的细胞增殖和侵袭活性，miR-26b是前列腺癌中的抑癌microRNA．]]> 2017/6/20 0:00:00 351true 2017/5/22 0:00:00 350true 2017/5/22 0:00:00 349true χ2统计残差及拟合得到的核函数的参数，来确定该时刻囊泡的数目及各囊泡的中心位置．我们在合成图像上比较加入了自校正算法和未加自校正算法的识别正确率，结果表明，加入了自检算法以后识别正确率得到了明显提高．同时，提出了一个优化的囊泡追踪流程，并应用到小鼠β细胞的囊泡荧光图像分析中．统计分析显示，加入葡萄糖刺激后，小鼠β细胞囊泡轨迹数目会增加，平均锚定时间会减少，这是由于胰岛细胞需要借助囊泡的转运和分泌来调控血糖平衡．因此我们进一步在亚细胞水平定量分析了活细胞中囊泡的活动．]]> 2017/5/22 0:00:00 348true P < 0.001)，且重组病毒能有效诱导肝癌类干细胞通过caspase 途径发生凋亡．因此，重组病毒Ad.wnt-E1A(Δ24 bp)-TSLC1 有可能成为靶向肝癌干细胞的治疗药物，具有一定的临床应用前景．]]> 2017/4/24 0:00:00 347true Fut8、MGAT3及OGT通过荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹和凝集素免疫印迹进行了验证，为研究miR-10b在乳腺癌中的作用提供更多糖组学方面的理论基础．]]> 2017/4/24 0:00:00 346true 2017/4/24 0:00:00 345true PPARγ、C/EBPα、FABP4和 FATP1的表达水平均显著下调．使用特异性siRNA转染细胞显著下调PI3K基因表达水平和蛋白质含量，同样明显抑制了C2C12细胞的生脂转分化．此外，在转分化过程中抑制PI3K/Akt的活性和表达还激活了Caspase-3并导致细胞凋亡．综合上述结果可以确认PI3K/Akt的正常表达和激活是肌细胞生脂转分化必不可少的．]]> 2017/3/22 0:00:00 344true 121-138间相互作用的热力学及动力学过程进行了系统表征．结果表明：在无盐和低盐溶液(100 mmol/L NaCl)中，Mad2两种构象与Cdc20121-138的平衡解离常数(KD)均在10-6 mol/L，但C-Mad2与Cdc20121-138结合的KD值约为O-Mad2的1/5；在高盐(300 mmol/L NaCl)溶液中，Mad2两种构象与TAMRA-Cdc20121-138结合的KD值无明显差别．动力学实验结果显示，在同一种缓冲液中Mad2两种构象与Cdc20121-138相互作用的解离速率常数kd没有显著差别，而C-Mad2与Cdc20121-138的结合速率常数ka却比O-Mad2高一个数量级，这表明C-Mad2与Cdc20121-138不仅结合力更强，且结合速率要快很多．Mad2与Cdc20121-138突变体间的相互作用以及离子强度对二者相互作用的影响结果提示，Mad2和Cdc20间的相互作用不是通过静电相互作用，而可能是通过疏水相互作用来实现的．本研究为揭示多态性蛋白Mad2的构象转变机理及其在有丝分裂过程中的作用机制提供了重要的实验基础．]]> 2017/3/22 0:00:00 343true 2017/3/22 0:00:00 342true 12121，晶胞参数为a = 35.80 ?, b = 50.63 ?, c = 88.52 ?, α = β = γ = 90.00°，每个晶体学不对称单位含有1个蛋白质分子，马修斯系数为2.03 ?3/u，溶剂含量为39.56%．]]> 2017/3/22 0:00:00 341true 2017/2/22 0:00:00 340true 2+振荡传导信号来研究从随机行为到确定行为的过渡过程．本文以肝细胞中Ca2+振荡对肝糖磷酸化酶激活随机效应为例，讨论了利用随机微分方程来解决分子数量比较小的生化系统的仿真与建模问题，利用细胞内Ca2+有关的Li-Rinzel随机模型，研究了在磷酸化酶降解肝糖的磷酸化-去磷酸化作用循环过程中，三磷酸肌醇受体通道(IP3R)释放Ca2+的调控作用．结果表明，肝糖磷酸化酶的激活率随受体通道IP3R的总数增大而减弱，而且三磷酸肌醇浓度比较小时出现相干共振．]]> 2017/2/22 0:00:00 339true 2017/1/17 0:00:00 338true -8～10-6 s之间，细胞内膜的电压将高于细胞外膜的电压．窗口效应为解释生物细胞的脉冲电学效应提供了一种参考思路．]]> 2017/1/17 0:00:00 337true Mycobaterium tuberculosis)是结核病的病原菌，每年导致数百万人死亡．对于分枝杆菌基本生物学特性的研究有助于新的药物及治疗手段的研发．耻垢分枝杆菌(M. smegmatis)是分枝杆菌属中的一种非致病菌，与结核分枝杆菌亲缘关系较近，是实验室常用的研究分枝杆菌的模式菌种．分枝杆菌主要编码三种染色质蛋白，类组蛋白HU、Lsr2和宿主整合因子IHF．为研究IHF在染色体包装中的作用，我们在大肠杆菌中表达、纯化了耻垢分枝杆菌IHF蛋白(MsIHF)，并对其影响DNA拓扑结构的性质进行了系统分析．体外研究的结果表明，MsIHF以同二聚体的形式存在，其对负超螺旋DNA具有一定的结合偏好性，同时，该蛋白可以有效地固定DNA负超螺旋．进一步的研究表明，MsIHF可以调控拓扑异构酶的活性．MsIHF的结合明显地抑制拓扑异构酶Ⅰ的松弛活性，而与此相反，该蛋白可以轻微地促进旋转酶引入DNA负超螺旋的能力．以上结果提示，MsIHF可能通过调控拓扑异构酶的活性影响染色体DNA的结构，进而调控其包装．]]> 2017/12/19 0:00:00 336true χ2-pos，融合伪氨基酸序列进化信息PsePSSM表征序列，构建正负样本均衡的支持向量机分类器，S, T, Y独立测试Matthew相关系数、ROC曲线下面积分及准确率分别达到了(0.59、0.87、79.74%)，(0.55、0.85、77.68%)和(0.50、0.81、75.22%)，明显优于文献报道结果． χ2-pos、PsePSSM两种特征的融合在蛋白质磷酸化位点预测中有广泛应用前景．]]> 2017/12/19 0:00:00 335true Pyrococcus furiosus的分子伴侣蛋白与P450 BM3突变体在大肠杆菌进行共表达，以研究分子伴侣蛋白是否能够提高靛蓝的生物转化量．实验结果表明，极端嗜热古菌的分子伴侣蛋白prefoldin能够显著提高靛蓝的产量．同时，实验结果发现prefoldin能够明显提高大肠杆菌细胞内的NADPH/NADP+比率．鉴于NADPH是参与靛蓝生物转化过程的重要因素，靛蓝生物转化量的显著增加可能与该比率的提高有关．]]> 2017/12/19 0:00:00 334true Id1) 在含血清培养条件下，可以促进mESCs自我更新，但其家族成员，如Id2和Id3，在mESCs中的作用尚不清楚．本课题在mESCs里分别上调Id2和Id3基因的表达，发现它们在含血清的培养条件下均具有促进mESCs自我更新的能力，但Id2促进自我更新的能力大于Id3．通过转录组测序技术发现Id2上调c-Myc和n-Myc基因的表达水平．最后功能性验证实验证实，只有同时干扰c-Myc和n-Myc基因的表达才能够极大地削弱Id2维持mESCs未分化状态的作用，表明Id2主要通过诱导Myc家族成员的表达来促进mESCs的自我更新．本研究结果将扩大人们对干细胞多能性调控网络的认识，利于干细胞未来的基础研究和安全应用．]]> 2017/11/20 0:00:00 333true 2017/11/20 0:00:00 332true 2017/11/20 0:00:00 331true t检验、置信区间等统计学方法建立乳腺癌发生特征基因筛选方法,获得与乳腺癌发生具有显著性差异的特征基因336个，通过机器学习方法建模，得到的分类准确率能达到98%以上，与之前乳腺癌相关的研究相比，准确率更高．同时采用KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes) 通路分析得到与基因显著相关（P<0.05）的通路有8个，GO(Gene Ontology) 基因功能富集分析显示与基因显著相关（P<0.05）的功能有18个，最后对映射在8个通路中的一部分基因进行简要功能分析，说明了其在调控水平上的密切关系，表明识别的特征基因在乳腺癌的发生过程中有重要的作用，这对了解乳腺癌发病机理以及乳腺癌的早期诊断非常重要．]]> 2017/11/20 0:00:00 330true 2018/6/21 0:00:00 329true -/-)小鼠中诱导肥胖模型．研究发现，在常规饲料(normal chow, NC)喂养组和高脂饲料(high-fat diet, HFD)喂养组，与WT小鼠相比，GPR84-/-小鼠在体重、摄食量、葡萄糖耐量、胰岛素敏感性、空腹血糖值、血清中胰岛素含量、组织器官重量、脂质合成与脂肪酸氧化、白色脂肪形成方面无显著性差异；在血脂水平，GPR84-/-小鼠与WT小鼠相比，甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇无显著性差异；但是在高脂饲料喂养组，GPR84-/-小鼠总胆固醇浓度显著性降低．同时，我们发现，在HFD组，与WT小鼠相比，GPR84-/-小鼠肝脏中B类Ⅰ型清道夫受体表达显著上调．综上所述，中链脂肪酸受体GPR84在高脂诱导的肥胖模型中不影响小鼠糖脂代谢，但可能在由高胆固醇引起的高胆固醇血症发挥一定的功能．]]> 2018/6/21 0:00:00 328true 2S作为第3种被发现的新型气体信号分子，其生理学作用逐渐受到研究者的重视．在哺乳动物体内，H2S与血红素蛋白的结合有两种方式，一种是H2S直接键合血红素中心Fe形成Fe-H2S复合物；另一种则是H2S修饰血红素卟啉环，形成硫代血红素结构．我们选用肌红蛋白(myoglobin，Mb)作为研究对象，通过点突变技术改变了血红素活性中心结构，结合紫外-可见光谱学以及X-射线晶体学，研究了H2S与不同突变型Mb反应后的光谱和结构变化．结果显示：血红素中心近、远端腔微环境的变化，如腔体极性、氢键数目、氢键位置等因素直接影响蛋白质与H2S的结合，以及硫代血红素(sulfheme)的形成．这些结果为研究血红素蛋白参与内源性H2S代谢机理提供了重要的实验数据．]]> 2018/4/18 0:00:00 327true n = 83)和double-on(DO，n = 34)两种反应模式．无论是在蝙蝠的正向还是负向补偿过程中，SO和DO神经元对回声反应恢复到50%时的双声刺激间隔(inter-pulse interval，IPI)值，均会随补偿条件的改变而发生变化．当双声刺激由无补偿转变为最佳补偿条件时，两类神经元的50% IPI显著缩短(P < 0.001)，但SO神经元50% IPI缩短率超过70%的神经元数目较DO神经元多，且偏好正向补偿的IC神经元中，SO神经元的平均DSC范围也要显著宽于DO神经元(P < 0.05)．该研究结果提示，IC中SO神经元可能较DO神经元更能充分利用蝙蝠DSC行为，来提高对回声反应的恢复能力，以最大程度地获取猎物信息并准确判断与猎物的相对速度．]]> 2018/4/8 0:00:00 326true N-FS36复合物晶体结构的X射线衍射实验数据．高分辨率X射线晶体结构表明，FS36在ATP结合位点上与Hsp90N相互作用，并且FS36可能替代核苷酸与Hsp90N结合．FS36和Hsp90N的复合物晶体结构和相互作用为后期设计和优化新型抗肿瘤药物奠定基础．]]> 2018/4/18 0:00:00 325true P < 0.05)；与Het-1A细胞相比，Eca-109、EC-1、KYSE30细胞中MIR31HG的表达均显著下调(P < 0.05)，提示MIR31HG可能介导食管癌的发生发展．转染pcDNA3.1- MIR31HG可显著上调食管癌细胞中MIR31HG的mRNA表达(P < 0.01)，且MIR31HG过表达可显著抑制食管癌细胞增殖活性(P < 0.05)，减少S期细胞数(P < 0.05)，增加G1期细胞数(P < 0.05)，提示MIR31HG可能通过阻碍细胞周期G1期～S期进程抑制食管癌细胞增殖活性．此外，MIR31HG过表达显著增加Caspase3活性，增加Caspase3和p53的mRNA和蛋白质表达水平，同时抑制Bcl-2 mRNA和蛋白质表达水平．这表明，MIR31HG可通过抑制食管癌细胞的增殖活性阻碍食管癌的发生发展，这可能为食管癌的诊断和治疗提供新策略．]]> 2018/6/27 0:00:00 324true 2018/5/21 0:00:00 323true Sox9呈现产雄温度(male-producing temperature，MPT)性腺特异性高表达，而在产雌温度(female-producing temperature，FPT)性腺中表达水平极低．免疫组化进一步证实了SOX9蛋白的MPT特异性表达趋势，其定位于Sertoli前体细胞核中．温度置换实验显示，与MPT性腺相比，MPT→FPT性腺中(16期置换)的Sox9表达量从17期起就显著降低，表明Sox9能快速响应温度变化．同时MPT性腺经过雌激素处理后，Sox9表达量亦快速下调．功能缺失研究显示，经过Sox9-RNAi处理后，90.9%(20/22)的MPT性腺结构明显雌性化，皮质区高度发育，髓质区退化，揭示Sox9的敲低能导致雄性向雌性性逆转．上述研究表明，Sox9是红耳龟早期睾丸分化的关键调控因子，参与TSD的雄性分化通路．]]> 2018/4/18 0:00:00 322true 2018/5/18 0:00:00 321true 2018/4/10 0:00:00 320true 2018/3/27 0:00:00 319true 2018/4/19 0:00:00 318true 7、异香豆素类衍生物10和Clavepictine 类似物11．结合方式研究表明，3个候选抑制剂类药性良好，均具有较好的PTP1B抑制活性，其中化合物10和11的PTP1B抑制活性未见报道．对化合物10进行体外抑制活性检测，其IC50为(74.58±1.23) μmol/L，可作为潜在Ⅱ型糖尿病治疗药物．]]> 2018/4/19 0:00:00 317true 2018/3/21 0:00:00 316true 2018/3/21 0:00:00 315true 2018/3/21 0:00:00 314true 2018/1/16 0:00:00 313true 2018/1/16 0:00:00 312true 2018/1/16 0:00:00 311true -3%，包封率为61.9%，制备的BMP-2-PLLAms/FGF-2-nHA/PLGA复合支架孔径为100～200 μm，孔隙率为75.8 %，抗压强度为6.8 MPa，8周降解率为19.9%．7天时，FGF-2和BMP-2的累计释放率分别为77.1%和44.2%；14天时， FGF-2和BMP-2的累计释放率分别为84.9%和61.5%．大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的成骨诱导实验证明复合支架中释放的BMP-2和FGF-2能够持续有效地刺激BMSCs的增殖和分化，具有良好的生物活性．BMP-2-PLLAms/FGF-2-nHA/PLGA复合支架有效实现了FGF-2和BMP-2的次第释放，且能够显著地促进BMSCs的成骨分化．]]> 2018/1/16 0:00:00 310true LoxP-cd4cre酶系统在胸腺CD4+CD8+双阳性T细胞(DP)中敲除hdac3基因．hdac3基因敲除小鼠不影响T细胞在胸腺中的发育，但导致外周T细胞显著降低，而且，hdac3基因敲除的外周T细胞主要以活化/效应/记忆表型为主．机制分析表明，hdac3基因敲除的外周T细胞凋亡增加并伴随细胞增殖加速，同时，Fas 和Fas配体阳性细胞比率以及Fas配体的表达显著增加．体外TCR活化不影响正常外周T细胞的凋亡，但导致hdac3基因敲除的外周T细胞凋亡显著增加．实验结果表明，HDAC3通过抑制活化诱导的细胞凋亡维持外周T细胞自稳．]]> 2018/1/16 0:00:00 309true OsPDR被鉴定出其在水稻(Oryza sativa ssp. japonica cv. Nipponbare)茎中的表达量显著上调．本研究中，从水稻(Oryza sativa cv. Nipponbare)中分离了OsPDR基因，并对其金属离子转移活性进行了分析．金属耐受性实验结果表明，过表达OsPDR能提高酵母对Co的耐受性，但对Zn、Ni和Cd的耐受性不强，并且经电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定Co含量后，与空载体转化酵母相比，过表达OsPDR的酵母中Co的积累更高．利用共聚焦显微镜观察发现，EGFP-OsPDR融合蛋白定位于液泡膜上．这些数据表明OsPDR可能在Co稳态中起着重要作用．OsPDR在植物中的作用，还需要进一步的研究．]]> 2018/11/1 0:00:00 308true A750和细胞计数结果显示细胞生长趋于停滞；尼罗红染色定量实验鉴定到油脂含量的显著升高；考马斯亮蓝染色实验检测到总蛋白质含量降低．以20个莱茵衣藻蛋白质为候选，利用蛋白质印迹技术(Western blot, WB)检测了其在不同处理和不同时间点的表达特征变化，通过计算总蛋白质和候选蛋白质含量的皮尔森相关系数(Pearson’s correlation coefficient，PCC)筛选了莱茵衣藻缺氮胁迫的内参蛋白质，发现Histone H3、RBCL(ribulose-1, 5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit)和BCR1(biotin carboxylase，ACCase complex 1)在对照和缺氮胁迫条件下均与总蛋白质含量变化呈现极显著或显著正相关，所以被选作内参蛋白质．进而通过比较候选蛋白质的平均相对倍率变化(average relative fold change，ARF)，鉴定了莱茵衣藻缺氮胁迫的标志物蛋白质，发现ATPs-β(ATP synthase CF1 beta subunit)、GAP2(glyceraldehyde 3-phosphate dehydratase 2)和RMT1(rubisco large subunit N-methyltransferase 1)蛋白质的ARF值分别为180.59、52.90和12.48，明显高出其他蛋白质，由此把它们选做缺氮胁迫的标志物蛋白质．接下来，对缺氮胁迫早期(0、2、4、8、12、18、24和48 h)的样品进行蛋白质印迹法分析，发现可检测的ATPs-β、GAP2和RMT1的缺氮诱导条带出现的时间分别是8、18和12 h．综上可以认为，在所有候选蛋白质中，ATPs-β是出现最早且变化幅度最大的缺氮处理标志物蛋白质．本研究鉴定的内参和标志物蛋白质对了解缺氮应答及油脂合成机理会有所帮助，所积累的蛋白质表达信息可供研究同行参考．]]> 2018/12/21 0:00:00 307true 3+-儿茶素配合物(Yb3+-C)的合成、抑菌活性及抑菌机理展开了系统研究．结果表明，合成配合物Yb3+-C的最适摩尔比为1∶4．Yb3+-C的最小抑菌浓度(MIC)均显著低于Yb3+和C，对大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)及沙门氏菌(Salmonella)均有较强的抑菌作用，而对金黄色葡萄球菌抑制作用更强，其MIC值低至0.0963 mmol/L．进一步研究表明，Yb3+-C仅需要2 h就能杀灭细菌，可有效缩短杀菌时间．此外，扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)观察结果以及Yb3+在细胞膜和细胞内的吸收和分布表明，Yb3+-C对细胞具有更强的亲和力与穿透力，使Yb3+更容易在细胞质中累积至有效浓度，从而造成细胞结构的破坏，并引起细胞凋亡．]]> 2018/11/19 0:00:00 306true 2018/10/22 0:00:00 305true Ralstonia solanacearum)是一种危害严重的土传植物致病菌，其宿主范围广泛，在世界各地严重影响重要经济作物的生产．研究茄科雷尔氏菌的生理特性，探索其致病机理，有利于研发防治青枯病的技术与方法．脂肪酸是细菌细胞重要的组成物质，但是茄科雷尔氏菌脂肪酸合成的机制尚不清晰．本文以茄科雷尔氏菌GMI1000为材料，鉴定了该菌的脂酰CoA脱饱和酶和环丙烷脂肪酸合成酶，并分析了这两种酶在不饱和脂肪酸和环丙烷脂肪酸合成中的作用．结果显示，茄科雷尔氏菌RSc2450编码脂酰CoA脱饱和酶，参与其不饱和脂肪酸合成，但是该菌还存在其他不饱和脂肪酸合成途径．同时发现在茄科雷尔氏菌编码两个可能的环丙烷脂肪酸合成酶蛋白质中，仅有Cfa1(RSc0776)参与了该菌环丙烷脂肪酸的　合成，并在低pH和高渗透压的耐受中起作用．该研究结果为深入研究茄科雷尔氏菌脂肪酸合成代谢特点及致病机理奠定了基础．]]> 2018/10/22 0:00:00 304true 2019/12/20 16:05:25 303true 2019/12/20 16:04:25 302true 2019/11/5 15:25:15 301true 2019/11/5 15:45:00 300true 2019/11/5 15:55:52 299true 2019/9/25 0:00:00 298true PLK1、CCNB1、CCNA2和CDC20的表达量上调，流式结果又表明Centlein的敲除促进了细胞周期进程. 同时发现Centlein与PLK1之间存在细胞内相互作用，于是我们提出了Centlein通过与PLK1的作用参与细胞周期进程.]]> 2019/9/25 0:00:00 297true Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc）为材料，从中分离鉴定了一种新的2-吡喃酮合酶（Pc2PS）. Pc2PS与已知的几种2PSs的氨基酸序列相似性为54%~56%. 通过体外酶促反应鉴定功能发现，Pc2PS可以催化1分子乙酰-CoA与2分子丙二酰-CoA，缩合生成4-羟基-6-甲基-2-吡喃酮；也可以只利用3分子丙二酰-CoA，以相同的效率缩合生成2-吡喃酮. 由此可以看出，乙酰-CoA存在与否并不影响该酶的催化效率. 随后，我们测定了Pc2PS以丙二酰-CoA为单一底物时的酶动力学参数. 虽然之前报道的2PSs也可以只利用丙二酰-CoA生成2-吡喃酮，但与Pc2PS不同的是，乙酰-CoA的缺失会大大降低催化效率. 另外，对Pc2PS基因的组织表达特异性检测结果表明，该基因主要在虎杖根中表达，在叶中的表达量很低. 本研究丰富了2PS的种类，并为2-吡喃酮的生物合成提供了基因资源.]]> 2019/9/25 0:00:00 296true A)、生物被膜厚度、生物被膜干重和活菌数量与未处理组相比均显著下降，活性氧水平显著上升，其中硫化铁纳米酶效果优于四氧化三铁纳米酶；在生物被膜形成后，加入铁基纳米酶处理0.5 h、2 h和12 h，生物被膜结晶紫染色A值、生物被膜厚度、生物被膜干重和活菌数量与未处理组相比均显著下降，活性氧水平显著上升，硫化铁纳米酶效果同样优于四氧化三铁纳米酶. 以上结果表明，铁基纳米酶通过调控鼠伤寒沙门菌胞内活性氧水平，不仅可以预防该菌的生物被膜形成，而且可以破坏已形成的生物被膜，本研究将有助于预防和治疗鼠伤寒沙门菌生物被膜引起的相关疾病.]]> 2019/7/1 11:05:29 295true 2019/7/1 11:09:07 294true 2019/7/1 11:13:30 293true AC3缺失后小鼠的主要嗅觉表皮组织（main olfactory epidermal，MOE）随年龄增长逐渐变薄，MOE内基因表达谱发生改变. DNA甲基化在动物发育、基因表达调控中具有重要作用. 为了探讨AC3缺失后小鼠MOE内基因启动子甲基化水平的改变以及对基因表达的影响，本文采用DNA甲基化免疫共沉淀芯片（methylated DNA immunoprecipitation chip,MeDIP-chip）筛选AC3缺失小鼠MOE内启动子区甲基化差异表达基因，利用甲基化特异PCR（methylation-specific PCR，MSP）、实时荧光定量PCR(qRT-PCR）进一步检测部分甲基化差异基因的DNA甲基化水平改变和表达差异. 结果表明，AC3缺失小鼠中有1 978个基因启动子的甲基化水平发生了改变，占总探针数的9%，其中727个基因启动子甲基化水平升高，1 251个甲基化水平降低. 功能分析表明，这些启动子甲基化发生改变的基因主要涉及的功能分别与嗅觉受体、神经发育、cAMP信号通路、ATP结合、钙离子调控、乙酰化修饰、转录因子等相关. MSP检测表明，嗅觉受体基因Olfr1153、Olfr231、Olfr378、Olfr651、Olfr691启动子区的甲基化水平升高，Cngb1、Pde4a和Olfr1394基因启动子区的甲基化水平降低. qRT-PCR结果显示，基因Cngb1、Hcn4、Olfm1、Olfr1394、Olfr1153、Olfr231、Olfr378、Olfr691的表达水平显著下降，而Pde4a和Olfr651基因的表达水平显著升高. 总之，AC3缺失后MOE内嗅觉受体基因、神经发育相关基因、cAMP信号通路等相关基因启动子甲基化水平发生显著改变，影响核苷酸切除修复、DNA复制、错配修复等信号通路的传导，从而综合调控小鼠MOE内的基因表达数量和水平.]]> 2019/5/22 0:00:00 292true 2019/5/22 0:00:00 291true 3D数据集上的独立测试结果显示，供体、受体位点预测准确率分别达到93.39%、90.46%，明显高于参比方法. 基于卡方统计差表的位置特征能有效表征DNA序列，在分子序列信号位点识别中具有应用前景.]]> 2019/5/22 0:00:00 290true P<0.001）的量，还能抑制BV-2细胞内iNOS、TNF-α、IL-6和NLRP3 mRNA的升高（均P<0.001）；通过对炎症信号通路关键分子的检测发现，SCFAs mix可以抑制LPS诱导的BV-2细胞内TLR4、MyD88、TRAF6和NF-κB蛋白的表达升高. 综上可见：适宜浓度的混合SCFAs可通过调控TLR4/MyD88/TRAF6/NF-κB炎症通路抑制LPS诱导的小胶质细胞的炎症反应，而起到抗炎的保护作用.]]> 2019/5/22 10:23:39 289true P<0.05）；2-DG降低了MCF-7和MCF-7-M细胞的ATP水平，并且降低MCF-7-M细胞ATP的效果更明显（P<0.01）；MCF-7-M细胞的糖摄取能力和乳酸分泌量显著高于MCF-7细胞（P<0.01），经API-2处理后，MCF-7和MCF-7-M细胞葡萄糖消耗和乳酸分泌量均显著减少（P<0.01）；MCF-7-M细胞GLUT-1、HK2和PKM2的表达显著高于MCF-7细胞（P<0.01）；LY294002和API-2均可抑制MCF-7-M细胞GLUT-1的表达（P<0.05）；用3-BrPA处理后，MCF-7-M和MCF-7细胞对5-FU的药物敏感性显著增强（P<0.01). 综上，得出结论： 胞质M-CSF通过诱导GLUT-1、HK2和PKM2的表达，活化MCF-7细胞糖酵解途径；PI3K/AKT信号通路参与胞质M-CSF活化MCF-7细胞的糖酵解途径.]]> 2019/4/19 0:00:00 288true 2019/4/19 14:56:36 287true V）、积累性渗透损伤值(AOD)及毒性损伤值(J). 在此基础上，藉由信息熵理论首次提出了综合损伤评估参数s，并通过猪卵母细胞微流控加载后孤雌激活实验的结果验证评估效果. 结果表明，对于不同的加载方案，传统的损伤评估参数结果之间出现分歧，无法得到统一的结论. 通过分析囊胚率同综合损伤评估参数s值的关系，发现二者呈负相关关系，且相关系数很高，说明综合损伤评估参数s能够较好地对细胞损伤进行评估，为细胞损伤评估开辟了新思路.]]> 2019/3/25 14:58:29 286true 2019/3/25 15:02:46 285true 2019/2/20 0:00:00 284true 2019/2/20 11:40:55 283true 2019/1/18 0:00:00 282true 2020/4/20 0:00:00 281true 2020/4/23 0:00:00 280true IC50值分别为47.4 μmol/L和54.68 μmol/L，而对AKR1C1和AKR1C2的抑制力相对较弱，IC50值分别为77.37 μmol/L和82.24 μmol/L. 以上结果表明，4-OHA能被肝脏中特异性表达的AKR1C4快速代谢，从代谢角度揭示了4-OHA口服用药效果不理想的原因. 因此，本研究阐明了4-OHA肠胃外或经皮给药的优势并奠定了理论基础，也为今后利用纳米药物载体和开展该药物衍生物的深入研究提供了新思路.]]> 2020/4/23 0:00:00 279true 2020/4/17 0:00:00 278true 2020/4/13 0:00:00 277true 2020/4/13 0:00:00 276true 2020/3/4 10:43:06 275true PpfabG1、PpfabG3、PpfabG5能恢复大肠杆菌fabG温度敏感突变株CL104在42℃时生长，其中PpfabG1互补株生长较弱. 而在体外活性检测中，PpFabG1、PpFabG3和PpFabG5在脂肪酸合成起始反应和延伸反应中都具有催化活性，但PpFabG1活性较弱，PpFabG6仅在起始反应中具有催化活性. PpfabG5是恶臭假单胞菌生长的必需基因，不能被敲除，而其他几个PpfabG基因敲除后不影响菌体的生长，突变株的脂肪酸组成与野生菌也无差异. 但PpfabG1、PpfabG2敲除后菌体的运动性下降，PpfabG3、PpfabG6突变影响了生物被膜的合成量，而PpfabG4、PpfabG6敲除突变株对H2O2的耐受性增强，表明这些基因具有不同的生理功能，可能在菌体的不同逆境中发挥作用.]]> 2020/3/4 10:51:36 274true 2020/3/4 11:00:49 273true 2020/12/21 10:14:48 272true 2020/12/21 0:00:00 271true 2020/12/21 0:00:00 270true 2020/12/21 0:00:00 269true 2020/10/26 0:00:00 268true 2020/10/26 0:00:00 267true TM 2500高通量测序，构建无精子症患者睾丸组织转录组文库，并用生物信息学方法进行分析. 结果发现，样品比对基因组数据库的平均比对率为94.38%，共检测2 242个属于预测新的蛋白质编码基因的转录本. 得到差异表达基因统计结果为：NOA vs. OA1基因上调8 045，下调1 150；OA1 vs. OA2基因上调1 538，下调420；OA2 vs. OA3基因上调1 275，下调1 690；OA3 vs. OA4基因上调1 834，下调1 853. 比较5例无精子症睾丸组织的差异基因KEGG，主要富集在RNA降解通路、基底细胞瘤通路、癌通路、黑色素生成通路和调节干细胞多能性等信号通路. PRM1、PRM2、TNP1、UBXN6、CXCL16、NUPR2、CCDC136和CRISP2等基因的表达呈递增趋势，并具有时序特异性. 此外，5例无精子症睾丸组织的表达基因有不同程度的基因融合. 综上，基因融合可能和无精子症相关，并且不同程度无精子症患者睾丸组织的差异表达基因数量、功能、分类和代谢通路不同. 本研究筛选出精子发生、精子运动等差异表达基因，丰富了无精子症患者睾丸组织转录组信息，为开展无精子症患者睾丸组织相关基因及分子调控机制的研究奠定基础.]]> 2020/9/22 0:00:00 266true 2020/9/18 0:00:00 265true P<0.000，风险比=2.551，95%置信区间=1.751-3.717). 低风险组HCC患者1-5年生存率比高风险组高20%-30%. 通过与临床数据分析发现，组合的生物学标志物较其他临床指标相比具有更好的预后效果，也可以作为独立的预后因子. 最后，预测了4种miRNA的靶基因，包括AGO2、FOXO1、ROCK2、RAP1B、CYLD等，并在细胞增殖、迁移、凋亡、免疫应答等生物学过程中富集.]]> 2020/8/11 0:00:00 264true period（per）、timeless（tim）、clock（clk）、cycle（cyc）、cryptochrome（cry））、神经递质多巴胺（dopamine，DA）和5-羟色胺（5-hydroxy-tryptamine，5-HT）关键合成酶（多巴脱羧酶、酪氨酸羟化酶、色氨酸羟化酶）的编码基因ddc、pale和trh表达水平及DA和5-HT含量的影响. 结果显示：短时间暴露下，雄蝇夜晚的运动量增加、单位时间运动次数增加、睡眠时间和次数减少、生物钟基因tim、clk、cyc、cry及神经递质合成相关编码基因ddc、pale和trh的表达水平均显著上升；长时间处理后对雄蝇运动和睡眠的影响较小. 本研究认为利用模拟微重力效应研究微重力对果蝇运动及睡眠的影响是可行的，相关研究结果对航天医学研究具有借鉴意义.]]> 2020/7/17 0:00:00 263true 4/cm2的接种密度为最适宜Vero细胞的接种密度. 本研究最终完成了Vero细胞最佳培养体系条件筛选，并证实该条件满足Vero细胞连续稳定传代.]]> 2020/7/17 0:00:00 262true 2020/6/10 0:00:00 261true 2021/3/18 0:00:00 260true 2021/3/18 0:00:00 259true 2021/3/4 0:00:00 258true 2021/3/4 0:00:00 257true 2021/3/4 0:00:00 256true 2=28.9%,AUC=0.82). 年龄对模型效果影响较大(R2=22.9%,AUC=0.77),结合BMI及68个SNPs时AUC达到最大(约0.89). 本研究表明MPB在欧洲和东亚人群中存在较强的遗传异质性,选取SNPs子集能达到与全集相近的预测准确性,预测模型有助于东亚人群MPB遗传机制的理解及疾病的早期诊断和预防.]]> 2021/1/19 0:00:00 255true 2021/1/19 0:00:00 254true S. thermophilus）中stDltD膜外结构域2.94 ?分辨率的晶体三维结构. 结构比对分析表明，stDltD是dlt操纵子终端的酰基转移酶，属于SGNH-like家族，stDltD的活性中心，包括4个blocks和催化三联体，都保守存在于多种革兰氏阳性病原菌中. 此外，结构叠合分析表明，stDltD催化中心形成的正电荷窝沟正好可以结合一个脂磷壁酸骨架的单体即甘油磷酸分子. 在前人的研究基础上，我们提出了一个由Dlt/A/B/C/D操纵子介导跨膜D-丙酰化修饰的工作模型. 本研究对进一步阐明DltD的生物学功能以及Dlt/A/B/C/D操纵子酰基跨膜修饰的分子机制具有重要意义.]]> 2021/9/23 0:00:00 253true 2021/9/23 0:00:00 252true 2021/9/23 0:00:00 251true t=60 s）分别用0、0.09、0.38、0.76、7.33、14.78 mT的ELF-EMFs作用于海马神经元，实时记录海马神经元活性氧（reactive oxygen species，ROS）和Ca2+荧光响应曲线，建立ELF-EMFs与ROS和Ca2+的自相关函数. 结果表明： a. 在ROS暴发时间和Ca2+暴发时间，ROS和Ca2+荧光响应具有阶跃性，这是判断实时响应的重要标志；b. ROS和Ca2+对ELF-EMFs响应时间具有延时性，并且不一致；c. ROS和Ca2+对ELF-EMFs实时响应具有剂量性；d. 海马神经元ROS对ELF-EMFs响应具有复杂性；e. 海马神经元Ca2+对电磁场响应主要是渐进稳定. 当ELF-EMFs与ROS和Ca2+实时响应的相关函数大于0.3可以判定具有相关性. 由此得出，一种ELF-EMFs暴露下细胞ROS和胞内Ca2+的实时响应方法对电磁生物效应评价是可行的.]]> 2021/9/23 0:00:00 250true 2021/9/23 0:00:00 249true HER2基因组DNA标准物质的互通性，评价HER2基因组DNA标准物质与临床样本的互通性，为临床实验室检测提供具有互通性的可溯源标准物质. 将研制的5个水平标准物质随机穿插于29例临床样本间，使用ddPCR方法与qPCR方法同时进行检测. 参考美国临床实验室标准化协会（CLSI）指南文件EP30和中华人民共和国卫生行业标准基质效应与互通性评估指南WS/T356-2011的推荐，采用Deming回归法评价标准物质的互通性. 结果显示，5种标准物质与临床样本之间具有良好的互通性，可以用于临床实验室对HER2基因拷贝数变异检测方法的方法验证和质量控制.]]> 2021/9/23 0:00:00 248true 2021/8/24 0:00:00 247true R2大于0.999. 在（37±0.015）℃的恒温环境下监测细胞，发现人肺腺癌细胞系（human lung adenocarcinoma cell，H1975）在代谢过程中温度波动的极差（0.173℃）大于肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）的极差（0.127℃）. 癌细胞H1975的平均温度（37.001℃）高于正常细胞HSC的平均温度（36.989℃）. 该芯片为细胞代谢监测、药物筛选等方面提供了新的研究平台.]]> 2021/8/24 0:00:00 246true P＜0.01；P＜0.05）. 同时，氧化应激神经元自噬相关基因LC3、ATG5与Beclin-1的转录水平均上调（P＜0.05；P＜0.05；P＜0.01）. 相关性分析结果显示，GALR2与LC3、ATG5及Beclin-1的转录水平正相关（P＜0.05；P＜0.05；P＜0.01）. GALR2特异性抑制剂M871的处理降低氧化应激海马神经元的活力（P＜0.01）、抑制氧化应激引起的自噬小体数量增多（P＜0.01）、自噬相关基因LC3、 Beclin-1及ATG5转录水平的上调（均P＜0.01）以及LC3-Ⅱ/β-actin比值与P62蛋白质水平的升高（均P＜0.05），表明伴随GALR2表达水平的抑制，被氧化应激上调的海马神经元自噬效应被抑制，从而削弱对氧化损伤的抵抗，降低了神经元的活力. 与此同时，M871的处理也降低了被氧化应激上调的JNK蛋白表达量（P＜0.01）及磷酸化水平（P＜0.05），表明JNK是GALR2调控海马神经元氧化应激的下游靶酶. 而JNK特异性抑制剂SP600125的处理则下调了被氧化应激上调的自噬标记蛋白LC3-Ⅱ/β-actin比值（P＜0.01），表明氧化应激状态下，抑制的JNK阻碍了神经元中上调的GALR2对自噬信号通路的激活. 综上可见：氧化应激状态下，海马神经元中上调的GALR2可通过调节JNK信号途径激活细胞自噬途径，从而降低神经元的氧化应激损伤，保护神经元.]]> 2021/7/28 0:00:00 245true 2021/7/28 0:00:00 244true 2021/7/28 0:00:00 243true Tm值差异、去除假阳性扩增及提高敏感性等四大难点. 尽管大多数MSP引物设计软件对上述难题都提出了各自解决办法，但在引物设计影响因素考虑、设计与评估并行处理及特异性扩增预测等方面仍然存在较大缺陷. 为此，本研究通过对MethPrimer、MSPPrimer、MethBlast、BiSearch等现有MSP引物设计软件原理的深入探究，以及对Bowtie、SAMtools和BEDTools等工具的有效综合整合，基于图形库Matplotlib和第三方Python功能库BioPython与Primer3-py实现了具有系列优点的甲基化特异性PCR引物设计与评估可视化工具MethyScan. 它具有引物设计、基因组索引、引物评估等三大完整功能模块，不仅可快速进行MSP引物设计，实现巢式（Nested）引物适配，还可基于4种基因组碱基转换模板分析引物结合信息，图形化展示非特异性扩增与目的片段差异，从而综合评估引物特异性-非特异性扩增. 同时，对食管癌、结直肠癌等多种恶性肿瘤中6个潜在生物标志物TFPI-2、NDRG4、CDKN2A、CD44、CASP8和SDHD的甲基化引物设计对比结果表明，MethyScan不仅可获得更多CpG位点的检测引物，而且所获得MSP引物位置与其他软件结果相同或相近，且引物间Tm值差值更小. 总之，作为首个图形化展示特异性-非特异性扩增差异MSP引物设计工具，MethyScan可有效提高甲基化引物设计准确性，为临床DNA甲基化检测项目开展、检测试验实施及诊断试剂盒研发提供有力支撑. MethyScan工具下载地址：https://github.com/bioinfo-ibms-pumc/MethyScan.]]> 2021/6/24 0:00:00 242true Xcc）引起几乎所有十字花科植物的黑腐病，在全球范围内造成广泛的经济损失. 为研究Xcc中3-羟脂酰ACP脱水酶，本研究利用大肠杆菌3-羟脂酰ACP脱水酶FabZ序列同源比对时，发现其与XC_2876（XcfabZ）编码蛋白具有同源性，序列一致性达到46.1%，同时还具有保守的α螺旋结构和活性位点. 将XcfabZ异体遗传互补大肠杆菌fabZ （EcfabZ）条件突变株HW7，结果显示添加IPTG能恢复突变株的生长，初步表明XcFabZ具有3-羟脂酰ACP脱水酶活性. 而体外活性分析显示，XcFabZ能在脂肪酸合成的起始反应和延伸反应中发挥3-羟脂酰ACP脱水酶活性作用. 本研究不能直接获得XcfabZ基因敲除突变株，但将携带EcfabZ或XcfabZ的表达质粒导入后，获得基因替换突变株，证明XcfabZ是必需基因. EcfabZ替换突变株的脂肪酸组成与野生菌有差异，对逆境条件（高盐、低pH、H2O2和SDS）的耐受性显著下降，运动性也显著降低，但XcfabZ替换突变株恢复到野生菌水平，表明XcFabZ与EcFabZ虽然都具有3-羟脂酰ACP脱水酶活性，但在细胞中生理功能可能有一些差别.]]> 2021/6/24 0:00:00 241true 2+］i变化百分数（［Ca2+］i amplitude）、［Ca2+］i荧光比率（ratio）、达峰速率（departure velocity）、达峰时程（time to peak，TTP）、达峰50%时程（time to peak 50%，TTP50%）、达基线50%时程（time to baseline50%，TTB50%）、达基线速率（return velocity）以及ratio改变幅度（ratio amplitude）等钙瞬变指标和肌节最大收缩及舒张速率（±dl/dtmax）、肌节长度（sarcomere length，SL）、肌节收缩幅度（peak twitch amplitude，PTA）、肌节缩短分数（SL shortening%）等心肌细胞收缩指标，蛋白质印迹（Western blotting）方法检测PI3K-Akt-PKG-1/p-PLN-SERCA2a信号通路及细胞凋亡相关蛋白. 与S组相比，MI组PI3K-Akt-PKG-1/p-PLN-SERCA2a信号通路被显著抑制，心肌细胞凋亡显著增加，LVEDP显著升高，LVSP和±dp/dtmax显著降低，［Ca2+］i amplitude、ratio amplitude、departure velocity和return velocity均显著下降，TTB50%、TTP和TTP50%均显著增加，心肌细胞SL shortening%、PTA、±dl/dtmax均显著减少；与MI组相比，ME组PI3K-Akt-PKG-1/p-PLN-SERCA2a信号通路显著被激活，细胞凋亡显著被抑制，LVEDP显著降低，LVSP和±dp/dtmax显著升高，ratio amplitude、［Ca2+］i amplitude、ratio velocity和departure velocity均显著提高，TB50%、TTP和TTP50%均显著缩短，心肌细胞SL Shortening%、PTA、±dl/dtmax均显著提高. 上述结果表明，有氧运动改善MI大鼠梗死周边区心肌细胞的钙瞬变和收缩功能异常，并激活PI3K-Akt-PKG-1/p-PLN-SERCA2a信号，抑制心肌细胞凋亡，改善心梗心功能，且心梗心功能的改善与PI3K-Akt-PKG-1/p-PLN-SERCA2a信号通路激活和心肌细胞凋亡抑制关系密切.]]> 2021/6/24 0:00:00 240true rd/rd、cl/cl小鼠为视觉功能减弱组，研究视觉功能减弱是否对听觉巴甫洛夫条件化恐惧反应有影响. 在恐惧条件化、恐惧消退和消除记忆再现阶段记录了僵直行为. 研究结果表明，视觉功能的减弱更有利于小鼠听觉恐惧条件化的建立. 文中讨论了出现此结果的可能神经机制.]]> 2021/6/24 0:00:00 239true 2021/5/31 0:00:00 238true 2021/5/31 0:00:00 237true sigQ-afsQ1-4，其中sigQ编码ECF-σ因子（σQ），afsQ1/Q2编码一对TCS，afsQ3/Q4分别编码脂蛋白和跨膜蛋白. 研究证实，TCS AfsQ1/Q2为抗生素生物合成的激活因子，sigQ的转录受到AfsQ1/Q2的直接调控，但σQ的功能正好相反，参与抗生素合成的负调控，即σQ对AfsQ1/Q2的功能存在拮抗作用. 在前期工作基础上，本研究通过基因缺失突变体构建、转录分析等对sigQ/afsQ1-4基因簇内的基因功能及其相互作用关系进行了系统研究，并对σQ参与AfsQ1/Q2功能的拮抗机制进行了深入研究. 结果显示，sigQ的缺失可显著下调膜蛋白基因afsQ4的表达，而在sigQ缺失突变体（?sigQ）中导入afsQ4可以很好回补突变体表型，由此表明afsQ4是σQ 的下游调控靶点，σQ的调控功能可能一定程度上是通过AfsQ4来实现. 进一步体外磷酸化实验分析发现，组氨酸蛋白激酶AfsQ2的磷酸化水平在afsQ4的基因缺失突变体显著降低，表明σQ 可以借助膜蛋白AfsQ4拮抗AfsQ1/Q2的功能，最终协同调控抗生素的生物合成.]]> 2021/5/12 0:00:00 236true 2021/5/12 0:00:00 235true 2021/4/26 0:00:00 234true 2021/4/26 0:00:00 233true Ash2l会转录成两种不同长度的转录本并形成两种蛋白质亚型：ASH2L-1和ASH2L-2. 目前有关该基因在小鼠胚胎发育中的作用机制及不同亚型的功能还不清楚. 本文利用CRISPR/Cas9技术特异敲除Ash2l-1并研究该亚型的生理学功能. 研究结果发现，当Ash2l-1缺失时，小鼠胚胎在E9.5~E10.5时发生致死. 特别是Ash2l-1-/- E9.5胚胎的卵黄囊血管和早期造血发育存在明显缺陷. 转录组测序结果显示，Ash2l-1的缺失影响红细胞发育和成熟、血管发生和形成相关基因的表达. H3K4me3的CUT&RUN结果显示，在一些表达下调关键基因的启动子区，H3K4me3修饰水平出现下降. 以上结果表明，Ash2l-1在小鼠卵黄囊的早期造血和血管形成过程中是必不可少的，它可能是通过调控关键基因启动子区的H3K4me3修饰水平而控制这些基因的表达，从而在相关过程中行使功能.]]> 2021/4/8 0:00:00 232true 2021/4/8 0:00:00 231true Moraxella bovoculi）的AcrVA2是目前发现的可抑制V-A型CRISPR-Cas系统效应蛋白Cas12a发挥切割活性的Acr蛋白之一，其作用机理尚不清楚. 本文解析了自由状态的AcrVA2和MbCas12a620-636-AcrVA2复合物的晶体结构，发现AcrVA2蛋白采用了一种新的α-β折叠结构，且只与自由状态的Cas12a结合. 此外，AcrVA2与MbCas12a620-636的结合主要依靠氢键和盐桥的相互作用力，并通过疏水界面得到进一步稳定. 这些结果提示，AcrVA2是通过与自由状态的MbCas12a结合来发挥抑制活性的，这对进一步理解Acr蛋白抑制V-A型CRISPR-Cas系统的多样化机制有重要意义.]]> 2021/4/2 0:00:00 230true Lactobacillus acidophilus）是益生菌，前期研究发现Lactobacillus acidophilus GIM1.208所产生的β-葡萄糖苷酶（BGL）具有较高活性，为探明其结构与特性，本研究采用PCR体外扩增技术获得Lactobacillus acidophilus GIM1.208 BGL的目的基因，并在大肠杆菌中成功表达，经镍亲和层析等蛋白质纯化技术获得纯度达90%以上的蛋白质样品，进而通过圆二色光谱法（CD）和同源建模法对BGL的二级结构和三级结构进行测定分析并研究其酶学性质. 结果表明，Lactobacillus acidophilus BGL的分子质量为52 ku，纯化后浓度为1.88 g/L，二级结构包括15.9% α螺旋、44.1% β折叠、18.1% β转角、27.2%无规则卷曲，其三维结构显示，该蛋白质有8个β折叠和8个α螺旋，整体呈圆锥形. Lactobacillus acidophilus BGL具有良好的葡萄糖耐受性与NaCl耐受性，最适反应温度为47℃，最适反应pH为5.6，在20℃~50℃范围内和pH2.2~6.0间有较高的稳定性，且乙酸乙酯、甲醇对酶活性抑制作用明显，Fe3+、Fe2+对酶有显著激活作用. 上述研究结果为Lactobacillus acidophilus BGL后续功能发掘和应用研究提供了重要参考依据.]]> 2021/4/2 0:00:00 229true 2021/12/23 13:40:56 228true Lon/Swe转基因小鼠3月龄时表现出记忆缺陷，而在6月龄时记忆正常，其工作记忆与甲醛水平变化相反. 与对照组相比，3月龄小鼠记忆受损伴随着甲醛水平的增高和过度磷酸化tau的增加. 腹腔注射甲醛清除剂白藜芦醇可通过降低甲醛水平和tau蛋白的过度磷酸化，挽回小鼠的记忆损伤. 6月龄AβPPLon/Swe小鼠甲醛水平和工作记忆与对照组相似，伴随甲醛降解酶ALDH2和ADH3表达增加. 结果显示，在AβPPLon/Swe转基因小鼠中，大脑甲醛水平与记忆变化进程显著相关，且记忆的恢复与甲醛水平下降相关. 该研究为揭示阿尔茨海默病机制研究提供了新视角.]]> 2021/11/23 0:00:00 227true 2021/11/23 0:00:00 226true 2021/11/26 0:00:00 225true M. jannaschii酪氨酰tRNA合成酶（Mj. TyrRS）能识别特定的非天然氨基酸并催化形成氨酰tRNA，其不同的突变体能够识别不同结构的非天然氨基酸，并且已经有了许多报道和数据的积累，因此我们使用TyrRS作为一个例子来进行此筛选流程的概念验证. 基于已知的多个Mj. TyrRS的晶体结构及分子建模的结果，我们发现D158G/P是影响残基158~163位α螺旋蛋白骨架变化的关键突变. 我们的模拟结果表明，在含有687个突变体的测试数据中，与随机突变相比，分子建模和打分函数计算排序可以将目标突变体的富集率提高2倍，而使用已知突变体和对应的非天然氨基酸数据训练的机器学习模型进行校准后，筛选富集率可提高11倍. 这种分子建模和机器学习相结合的计算和筛选流程非常有助于Mj.TyrRS的底物特异性设计，可以大大减少湿实验的时间和成本. 此外，这种新方法在蛋白质计算设计领域具有广泛的应用前景.]]> 2021/11/26 0:00:00 224true 2021/11/26 0:00:00 223true 目的 探讨左归丸含药血清对化疗损伤性颗粒细胞和膜细胞的影响及作用机制。方法 制备左归丸含药血清，培养大鼠卵巢颗粒细胞和膜细胞，使用磷酰胺氮芥造模分组后给药。CCK-8法测定颗粒细胞和膜细胞存活率，实时荧光定量PCR法（RT-PCR）及蛋白质免疫印迹法（Western blot）分别检测卵巢自噬启动因子Beclin-1、微管结合蛋白轻链3（LC3B）、自噬受体蛋白p62、凋亡蛋白Bax、Caspase3在转录水平和翻译水平上的表达。结果 10%左归丸含药血清对于细胞存活的挽救率最高。Beclin-1、LC3B、Bax、Caspase3在磷酰胺氮芥作用的颗粒细胞和膜细胞中，相对于空白对照组有高表达（P<0.05），10%左归丸含药血清可下调上述蛋白质在模型组中的表达（P<0.05）；然而受体蛋白p62较空白对照组升高（P<0.05），10%左归丸含药血清可上调模型组p62的表达（P<0.05）。此外，在颗粒细胞实验组中，激活或抑制自噬途径后，自噬相关蛋白的表达在发生相应改变的同时，凋亡相关蛋白的表达也会发生相应改变。结论 磷酰胺氮芥可通过促进凋亡、激活自噬/溶酶体降解途径的机制损伤颗粒细胞和膜细胞。10%左归丸含药血清能缓解由此带来的损伤，同时影响了颗粒细胞和膜细胞自噬和凋亡过程。在磷酰胺氮芥损伤颗粒细胞的过程和10%左归丸含药血清缓解其损伤过程中均存在自噬与凋亡串流（cross-talk）。]]> 2022/9/21 0:00:00 222true 目的 铁皮石斛是一种名贵的中草药，药用历史悠久，其药用活性成分主要包括多糖、类黄酮和生物碱。这些成分的种类和含量通常受到诸多环境因素的影响。组织培养中植物激素的广泛使用促进了许多兰科植物的大量快繁，然而植物激素对活性成分积累的影响及其作用机制尚待进一步深入研究。方法 本文利用铁皮石斛组织培养常用的两种植物激素NAA和（/或）6-BA处理铁皮石斛幼苗，测定活性化合物含量并对相应材料进行转录组测序分析。结果 激素处理影响多糖、生物碱和类黄酮等活性化合物的积累水平，同时引起较多的差异基因表达。统计分析表明，6-BA较NAA处理引起更多的转录本改变，β葡糖苷酶编码基因BGLU表达与多糖积累密切相关。进一步功能研究表明，包括激素种类、处理浓度、处理时间和处理材料生长时期等因素均能明显影响BGLU表达及相应多糖积累水平，从而在分子层面部分回答了一个长期困扰人们的关键问题，即为什么药材经组织培养后活性成分相对不稳定。结论 本研究明确提出了BGLU在激素处理后多糖的积累过程中有重要调控作用。]]> 2022/9/21 0:00:00 221true 目的 p53是人体内重要的肿瘤抑制因子，但在人类肿瘤中因高频突变而失去抑癌功能。突变型p53（mutant p53，mutp53）可促进肿瘤的发生、发展和转移。由于在肿瘤细胞中通常有较高表达，mutp53已成为区别于正常细胞的一个特异性抗肿瘤靶点。本研究旨在探索穿心莲内酯的抗肿瘤作用机制，为寻找靶向mutp53的抗肿瘤化合物提供理论依据。方法 构建可以快速筛选具有恢复mutp53下游转录因子的荧光素酶系统，观察穿心莲内酯对H1299-p53 R273H-PUMA-luciferase和H1299-p53R175H-PUMA-luciferase细胞中PUMA基因的表达情况；采用免疫荧光实验，检测穿心莲内酯对HT29（R273H）和SK-BR-3（R175H）细胞中mutp53的表达影响；采用免疫印迹实验进一步观察穿心莲内酯恢复了mutp53肿瘤细胞中p53下游靶蛋白PUMA、p21、Noxa的表达；随后采用MTT和流式细胞分析，检测穿心莲内酯对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响；此外，还通过siRNA敲低Hsp70表达后，研究穿心莲内酯对mutp53下游基因的重激活作用。结果 穿心莲内酯可以增加H1299-p53 R273H-PUMA-luciferase和H1299-p53R175H-PUMA-luciferase细胞中PUMA基因的表达；穿心莲内酯可以降低HT29（R273H）和SK-BR-3（R175H）细胞中mutp53的比例，同时增加野生型p53的比例；穿心莲内酯恢复了mutp53肿瘤细胞中p53下游靶蛋白PUMA、p21、Noxa的表达，进而抑制肿瘤细胞增殖和诱导凋亡；穿心莲内酯可以增加分子伴侣Hsp70的表达，通过siRNA敲低Hsp70后，穿心莲内酯对mutp53下游基因的重激活作用明显受到抑制。结论 穿心莲内酯可能通过影响Hsp70的表达从而激活突变p53下游靶基因而发挥抗肿瘤作用。]]> 2022/9/21 0:00:00 220true 目的 毛干是案件现场常见的生物物证，目前缺少有效的个体识别方法而未能在案件调查和法庭诉讼中发挥作用。毛干蛋白质组中的单氨基酸多态性（SAP）蕴含着个体遗传差异信息，可应用于个体识别。方法 为研究毛干物证SAP个体差异，本文使用离子液体对12份2 cm长的毛干样本（6人，每人2根）经过前处理后，进行LC-MS/MS质谱检测，分析毛干中的蛋白质组成。然后利用自建的东亚人群SAP蛋白质序列数据库，对质谱数据进行搜库分析，依据自建的SAP与SNP对应注释表信息，推导出SAP对应的nsSNP分型，并且与外显子测序nsSNP结果比较，进而验证SAP检测的准确性。最后，利用验证准确的SAP分型进行随机匹配概率的计算。结果 12份样品共计获得321个SAP，每个样本平均为（131±17）个。6人的随机匹配概率数值范围为1.4×10-4~1.0×10-9。结论 本文建立了东亚人群毛干蛋白中SAP检测方法，并验证了个体识别应用的能力，为法庭科学中毛干个体识别提供了有力的工具和新的思路。]]> 2022/9/21 0:00:00 219true 目的 二氧化硅纳米管由于具有生物相容性好、光学性质优异等特殊性能在不同领域展现出良好的应用前景，其尺寸和形貌可显著影响材料性质。为制备尺寸较大的纳米管并拓展其在不同领域的应用，本研究选择尺寸较大的多肽组装体为模板，进行二氧化硅的仿生矿化。方法 以Bola型多肽Ac-KI3VK-CONH2自组装形成的尺寸较大（直径约40 nm）的纳米管为模板，通过仿生矿化的方法制备二氧化硅纳米材料。首先考察了多肽纳米管的稳定性，发现在稀释、加入有机溶剂和改变溶液pH值时，纳米管的形貌均被破坏，展示出较差的稳定性。在此基础上，以该多肽纳米管为模板，选择反应速率较快的正硅酸甲酯（TMOS）为前驱体仿生矿化二氧化硅纳米材料，探索了不同矿化条件对二氧化硅纳米管尺寸和形貌的影响。结果 以反应速率较快的TMOS为硅源、体积百分比浓度为1.11%~3.33%、溶液为中性或者弱碱性时能够矿化形成形貌和尺寸较大且分布均匀的二氧化硅纳米管。结论 通过选择合适的多肽组装体模板和反应速率快的TMOS为硅源，成功制备出了尺寸较大的二氧化硅纳米管，这为拓展其在不同领域的应用奠定了基础，具有重要意义。]]> 2022/9/21 0:00:00 218true 目的 基于化学结构特点研究植物苦绳（Dregea sinensis）中多氧孕烷糖苷的生物活性，以及化合物分子与靶蛋白分子间的作用机理。方法 本研究采用分子对接和表面等离子体共振方法，对191个多氧化孕烷糖苷类成分（>800 u）进行了免疫活性及其与免疫蛋白的动力学评价。结果 通过分子对接方法筛选出7个配体分子（6、18、23、30、78、79和80）和3个免疫相关蛋白（IL-2Rα、TLR4和TNF-α）。研究表明，化合物30和78在SPR实验中与靶蛋白IL-2Rα和TLR4具有显著的结合趋势，与IL-2Rα的结合常数KD分别为2.41×10-6和2.14×10-6 mol/L，与TLR4则分别为1.96×10-5和5.60×10-6 mol/L。分子动力学研究进一步表征SPR阳性分子6、18、30、78和80与靶蛋白之间的相互作用基团。结论 研究揭示多氧化孕烷糖苷类成分可以通过形成氢键和Pi-Pi相互作用与靶蛋白结合。研究内容对快速评价多氧化孕烷糖苷类成分的活性具有重要意义，为揭示低丰度药效物质的潜在作用机制进行了有益探索。]]> 2022/9/21 0:00:00 217true 目的 趋化性和趋电性是细胞定向迁移的主要方式，并在生物有机体的生理和病理过程中发挥重要作用，但二者存在差异。本文对盘基网柄菌gbpC和gbpD基因在细胞趋电性和趋化性中的作用进行对比研究，以寻找两种迁移方式之间的新差异。方法 将gbpC基因突变株gefT-和gbpD基因突变株gefU-分别置于场强为12 V/cm的直流电场中，分析细胞在电场中的运动方向及运动速度，探讨细胞的趋电性变化；利用电穿孔技术将标记F-actin的Lifeact-GFP质粒转化进入细胞，用荧光显微镜观察活细胞运动时F-actin的分布；用蛋白质印迹技术定量分析细胞的肌球蛋白调节轻链（RLC）在受直流电场刺激后的磷酸化变化情况。结果 gefT-突变株细胞极化消失，但保持与野生型类似的趋电性；gefU-突变株细胞发生超极化，但趋电性显著降低。在直流电场中，突变株细胞和野生型细胞的F-actin主要分布在伪足部位。在电场作用下，细胞株的肌球蛋白RLC磷酸化变化情况存在差异，即野生型细胞以时间依赖的方式发生磷酸化，gefT-突变株细胞先急剧下降，然后再上升，gefU-突变株细胞却以时间依赖方式脱磷酸化。结论 本研究表明gbpC和gbpD基因在盘基网柄菌趋化性和趋电性中的作用不同，暗示了电信号与化学信号确实通过不同的机理指导细胞的定向迁移。]]> 2022/8/19 0:00:00 216true 目的 本研究旨在阐明青蒿素对II型糖尿病（T2DM）小鼠认知功能障碍的改善作用及其机制。方法 C57BL/6J小鼠单次腹腔注射STZ（100 mg/kg）后联合高脂饲料喂养建立T2DM模型。T2DM小鼠随后腹腔注射青蒿素（40 mg/kg/d）或等体积溶剂。干预4周后，新物体识别、Y迷宫和Morris水迷宫实验检测小鼠的学习和记忆能力。蛋白质印迹法（Western blot）检测海马PI3K、Akt、磷酸化Akt、SYN和PSD-95蛋白的表达。透射电镜观察海马CA1区突触密度和突触超微结构改变。结果 与模型组相比，青蒿素干预组T2DM小鼠的认知功能显著改善，海马中PI3K和磷酸化Akt水平升高，SYN和PSD-95蛋白表达增加，CA1区神经元丢失减少。此外，青蒿素干预组小鼠CA1区的突触密度、PSD-95和突触界面曲率增加，突触间隙宽度减小。结论 青蒿素可能通过激活海马PI3K/Akt途径增强突触可塑性，从而减轻T2DM小鼠认知功能障碍；青蒿素有望成为治疗糖尿病性认知功能障碍的新型药物。]]> 2022/8/19 0:00:00 215true 目的 全球视力受损或失明人数已超2亿，长期以来各类人工视觉系统被广泛研究。人工视觉系统的研发主要有两种技术路径，第一种是各类植入式人工视觉装置，第二种是各类非植入式、可穿戴装置。本文展示了一种非植入式、基于可穿戴头部触觉激发装置的系统原型，能够帮助盲人和视觉障碍者完成行走等复杂任务。方法 该系统采集受试者周边环境图像信息并无线传输到后台，操作人员分析处理图像信息后，将指令以触觉编码形式无线传输到头套等可穿戴装置，由驱动电路激发多点位头部触觉，从而为受试者提供准确的行动指令。系统并辅助以语音信息，让其了解更多道路状况和环境信息。结果 用原型系统对5名（2男3女）在读大学生健康志愿者和1名年轻盲症患者（男）进行实验。结果表明，原型系统充分利用了头部对前后左右的天然区分能力和对触觉的快速反应，具备直行、左右调整、转弯等明确指令功能。受试者对指令的响应时间约0.5 s，直线行走约7 m距离的偏差量标准差平均值相比未佩戴装置的情况下降低到（16±10）cm。结论 该系统可隐蔽、准确地提供环境图像信息，有效帮助视觉障碍人士完成行走、避让障碍物、上台阶、进入咖啡厅等公共场所、桌上取物等日常活动，达到了预期目标。今后对原型系统作进一步完善，特别是小型化、智能芯片化，把触觉装置制成颈环、腰带、手环、脚环等，将能够广泛应用于盲人出行辅助、夜间野外旅行、深海潜水等多种工作场景。]]> 2022/8/19 0:00:00 214true 目的 探究哺乳期乳铁蛋白（lactoferrin，LF）的缺失及不同来源LF补充后对幼鼠肠道发育的影响。方法 以LF基因敲除型雌鼠作为哺乳母鼠造成幼鼠哺乳期无LF的摄入，且从幼鼠出生第3~21天每日人工饲喂100 mg/kg 牛血清白蛋白（BSA）、牛源乳铁蛋白（bovine Lactoferrin，bLF）及重组人源乳铁蛋白（recombinant human Lactoferrin，rhLF），于幼鼠21日龄取样，测定各组小鼠小肠发育指标。结果 在本实验周期下，哺乳期rhLF的补充显著性增加小鼠回肠绒毛长度/隐窝深度值（P<0.05），且上调回肠Occludin和ZO-1基因的表达（P<0.05），增加小鼠十二指肠、空肠和回肠麦芽糖酶酶活/乳糖酶酶活比值（P<0.05），表明哺乳期rhLF的补充能够增强小鼠肠道消化吸收能力和肠屏障功能；哺乳期bLF的补充显著增加小鼠十二指肠及回肠麦芽糖酶活性/乳糖酶活性比值（P<0.05）。结论 对于哺乳期无LF摄入的乳鼠来说，哺乳期间LF的补充能够增强乳鼠肠道对营养物质的消化吸收能力、促进肠道的发育成熟、增强肠道屏障功能，并且，本实验中rhLF表现出比bLF更加有效的作用。]]> 2022/8/19 0:00:00 213true 目的 QuickTargSeq全集成法医DNA现场快速检测系统是国内首台自主研制的现场快检仪，可应用于InDel族群推断检测，2 h左右完成“样本进-结果出”的快速自动化InDel分型。本文对InDel族群推断微流控芯片检测体系的性能进行评估，以期为实践应用提供参考。方法 使用InDel族群推断微流控芯片检测体系，对体系的灵敏度、干扰物耐受性、成功率、分型准确率、精确性、准确性、峰平衡性及检材适应性进行验证评估，同时对测试样本的族群来源进行推断。结果 138份样本的全集成检测成功率为95.65%，分型准确率为98.85%；DNA模板量≥5 ng时，可获得完整InDel分型，口腔拭子样本最佳采集次数为口腔内壁左右两侧各刮擦8次，血卡样本最佳检测方式为6片（Φ=2 mm）；所有基因座的平均杂合子峰高比值为0.86；10次运行的等位基因分型标准物（allelic ladder）片段大小标准差均在0.3 bp以内，测试样本等位基因和相应的等位基因分型标准物之间的片段准确性均在0.5 bp以内。结论 该体系可实现对口腔拭子、血卡、唾液卡及烟蒂样本的准确分型，能够准确推断样本的族群来源。]]> 2022/8/19 0:00:00 212true 目的 间歇性θ节律刺激（iTBS）作为一种新型的经颅磁刺激模式，已经广泛应用于探索大脑认知功能和神经调控等方面，但其电生理调控机制尚不清晰，探索iTBS对大脑认知功能的影响及其电生理机制，对脑疾病的治疗和磁刺激的临床应用具有重要意义。方法 本文利用iTBS制备磁刺激大鼠模型，采集记录大鼠在执行工作记忆（WM）任务过程中腹侧海马（vHPC）和内侧前额叶皮层（mPFC）的局部场电位（LFPs）信号，应用格兰杰因果网络分析方法，研究了iTBS对大鼠WM过程中vHPC与mPFC跨脑区神经网络协同和信息交互的影响。结果 iTBS增强了大鼠的学习记忆能力，使其完成工作记忆任务所需时长减少（2.67±1.63）d（P<0.05），iTBS显著改善了大鼠的行为学表现；同时iTBS增强了大鼠在WM期间vHPC与mPFC脑区的自因果网络连接，增加了网络连接强度、连接密度和全局效率（P<0.05）；并且iTBS增强了vHPC与mPFC脑区的跨脑区网络连接，增加了vHPC-mPFC跨脑区的节点度和因果流向（P<0.05）。结论 iTBS磁刺激对大鼠工作记忆行为学及相关脑区神经网络均有显著的积极作用，iTBS可以促进大鼠认知能力，提高大脑神经网络的信息交互和传递效率，iTBS的神经调控机制可能是通过增强大脑vHPC与mPFC之间的网络连接和信息交互来提高工作记忆能力。]]> 2022/8/19 0:00:00 211true 目的 PAMM（peroxiredoxin-like 2 activated in M-CSF stimulated monocytes）是近年来发现的一种在脂肪组织中高表达的分泌因子，但其生物学功能尚不完全清楚。为了给PAMM功能研究提供新线索，本文探讨了PAMM在白色脂肪生成中的可能作用及PAMM调节的下游基因。方法 利用成脂分化液或“成脂分化液+IL-1α”建立人脂肪干细胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）的成脂分化和成脂抑制模型。用siRNA干扰和过表达质粒转染的方法抑制或上调PAMM表达水平。采用基因芯片、mRNA测序及定量RT-PCR检测基因的mRNA表达水平，采用蛋白质印迹法评价蛋白质表达水平，用油红O染色检测脂滴沉积。结果 随着ADSCs向白色脂肪分化，PAMM表达水平明显上升，而随着成脂抑制，PAMM表达明显下降。在ADSCs中沉默或过表达PAMM后，再进行成脂分化。结果发现，上调或下调PAMM对脂滴形成及成脂相关基因的表达均无明显影响。类似地，在高度分化的脂肪细胞中敲低PAMM表达，对细胞形态及脂滴含量亦无明显影响。本文进一步利用siRNA干扰、mRNA测序及qRT-PCR，筛选和验证了一批受PAMM调节的下游基因及功能性基因集，包括SULF1、A2M基因及调节P53稳定性的基因集等。结论 PAMM可作为白色成脂分化的标志基因，但其自身对白色脂肪细胞生成无明显影响，本研究筛选出来的PAMM下游基因及基因集，可为进一步研究PAMM的功能提供新线索。]]> 2022/7/20 0:00:00 210true 目的 人分泌型磷脂酶A2-IIA（secretory phospholipase A2 group IIA，sPLA2-IIA）在调节细胞脂质代谢和信号传导中具有重要作用，参与了多种急、慢性炎症反应。研究其动力学和变构与功能的关系具有重要意义。方法 利用弹性网络模型（elastic network model，ENM）、微扰响应扫描（perturbation-response scanning，PRS）和蛋白质结构网络（protein structure network，PSN）方法对来自人sPLA2-IIA的31个分子的结构动力学和变构效应进行分析，并探索其动力学共性和特异性与功能的关系。结果 结果表明，对酶的催化和结构稳定起关键作用的催化残基和参与二硫键形成的半胱氨酸残基具有低运动性，这是对酶共有功能的要求；而涉及与钙离子或膜结合的5个结构区域具有高运动性，它们体现了酶成员的特异性。另外，高运动性区域在PRS分析中显示出对外界微扰响应的高敏感性，表明其在变构调节中起重要作用，而低敏感性残基则在维持结构稳定方面发挥了重要作用。残基运动相关性分析发现，人sPLA2分子催化位点周围的强相关运动有利于酶催化功能的发挥。结论 本研究有助于深入理解人sPLA2-IIA成员分子的动力学及功能性变构机制，可为药物设计和准确设计具有精细调节活性的蛋白质提供指导。]]> 2022/7/20 0:00:00 209true 目的 变构效应在蛋白质生物学功能执行过程中发挥着重要的调控作用，如何基于蛋白质空间结构，有效识别变构信号的传播路径和关键的残基位点是蛋白质结构-功能关系研究领域的热点科学问题。方法 本研究利用基于弹性网络模型（elastic network model，ENM）的力分布计算方法，通过分析蛋白质对外力的响应过程，来识别体系的变构路径以及变构过程中的关键残基。在该方法中，对蛋白质的关键变构位点施加外力，通过对体系形变以及内力分布情况的分析，有效识别与外力承载区域形变相耦合的关键残基，从而得到力信号在蛋白质结构内的传播路径。结果 利用该方法研究了人类磷酸甘油酸激酶（human phosphoglycerate kinase，hPGK）和蛋白质酪氨酸磷酸酶（protein tyrosine phosphatase，PTP）PDZ2结构域的变构调控路径和关键残基。对于hPGK，识别出从底物结合位点到铰链区的两条变构信号传导路径。对于PTP PDZ2，也成功识别出从配体结合位点传递到蛋白质远端的两条长程变构调控路径。计算结果与实验和分子动力学（molecular dynamics，MD）模拟得到的结果一致。结论 本研究为蛋白质体系关键残基识别及变构路径研究提供了有效的分析方法。]]> 2022/7/20 0:00:00 208true 目的 基于位点特异性打分矩阵（position-specific scoring matrices，PSSM）的预测模型已经取得了良好的效果，基于PSSM的各种优化方法也在不断发展，但准确率相对较低，为了进一步提高预测准确率，本文基于卷积神经网络（convolutional neural networks，CNN）算法做了进一步研究。方法 采用PSSM将启动子序列处理成数值矩阵，通过CNN算法进行分类。大肠杆菌K-12（Escherichia coli K-12，E.coli K-12，下文简称大肠杆菌）的Sigma38、Sigma54和Sigma70 3种启动子序列被作为正集，编码（Coding）区和非编码（Non-coding）区的序列为负集。结果 在预测大肠杆菌启动子的二分类中，准确率达到99%，启动子预测的成功率接近100%；在对Sigma38、Sigma54、Sigma70 3种启动子的三分类中，预测准确率为98%，并且针对每一种序列的预测准确率均可以达到98%以上。最后，本文以Sigma38、Sigma54、Sigma70 3种启动子分别和Coding区或者Non-coding区序列做四分类，预测得到的准确性为0.98，对3种Sigma启动子均衡样本的十交叉检验预测精度均可以达到0.95以上，海明距离为0.016，Kappa系数为0.97。结论 相较于支持向量机（support vector machine，SVM）等其他分类算法，CNN分类算法更具优势，并且基于CNN的分类优势，编码方式亦可以得到简化。]]> 2022/7/20 0:00:00 207true 目的 男性型脱发（male pattern baldness，MPB），又称为雄激素性脱发（AGA），是一种常见的男性脱发类型，大约80%的表型差异可以用遗传因素解释。目前的MPB遗传推断研究主要基于欧洲人群，东亚人群相关研究较少。本研究在中国人群中对欧洲人群MPB关联位点进行验证分析，并建立遗传推断模型。方法 本研究调查了486个与欧洲人群MPB相关单核苷酸多态性（SNP）位点在312名中国汉族男性中的关联性，分别使用逐步回归和Lasso回归方法对关联出的位点进行筛选。使用逻辑回归算法构建预测模型，通过十折交叉验证的方法评估。之后进一步比较了逻辑回归、k近邻分类器、随机森林、支持向量机4种常用分类器模型对MPB的预测准确性。结果 有174个SNP位点与中国汉族男性的MPB显著相关（P＜0.05）。通过不同的筛选方法，分别得到了22个SNP和25个SNP的位点集合。基于上述位点集合建立了22-SNP和 25-SNP两种逻辑回归预测模型。以AUC（ROC曲线下方的面积大小，area under curve）来衡量，两种模型对MPB预测的准确性分别为0.85和0.84；经十折交叉验证后预测准确性分别下降至0.81和0.77。当加入年龄作为预测因子后，两种模型的AUC均达到最大值0.89。从运行结果来看，逻辑回归预测模型较本研究中的其他分类器模型具有明显优势。结论 总体而言，虽然预测模型的准确性尚未达到临床期望水平，但SNP在MPB的遗传预测方面仍具备很大的潜力，可以为MPB的早期诊断、临床干预和法庭科学应用提供参考。]]> 2022/7/20 0:00:00 206true 目的 蜜蜂天生具有丰富的嗅觉辨识能力，觅食、交配、导航以及社交活动均依赖其嗅觉系统，是研究嗅觉感知和学习记忆的行为及神经机制的理想模型。蜜蜂既能够将某个复合气味作为一个整体也可以将复合气味的各组成成分进行辨别和区分，但是在特征依赖的联合记忆中依据何种原则进行加工并存储到长期记忆还不清楚。方法 本文利用特征阳性（feature positive：AB+，B-）和特征阴性（feature negative：AB-，B+）的奖赏性嗅觉条件化，训练蜜蜂对复合气味和成分气味的辨别，并检测蜜蜂对复合气味（AB）、成分气味（B）以及特征气味（A）的中长时记忆（3 h）和长时记忆（24 h）。结果 在特征阳性的奖赏性嗅觉条件化中，蜜蜂对训练过的气味可以形成稳定的中长时和长时记忆，并且对复合气味中的特征气味的记忆与复合气味的记忆呈现高度相似。但在特征阴性的奖赏性嗅觉条件化中，蜜蜂虽能够在3 h和24 h对训练过的两种气味具有显著的伸喙反应差异，且对特征阴性的气味无显著反应，但对复合气味的反应随时间的推移而增加。结论 实验结果表明，蜜蜂选择性地将与奖赏信息联合出现的气味巩固到长时记忆中，但并未依据特征成分加工储存到长时记忆中。奖赏信息预示着食物源，与生存息息相关，表明对环境信息进行选择性的记忆巩固加工并储存可能是低等动物高效地编码生存相关信息的重要策略。]]> 2022/7/20 0:00:00 205true 目的 T细胞受体-共受体复合物（TCR-CD3）在适应性免疫应答中起着重要作用，其亚基间的相互作用一直是研究热点。由于传统实验的局限性，对于跨膜蛋白TCR-CD3复合物的研究不能深入到微观层面。方法 利用分子动力学模拟方法（包括粗粒化模拟、拉伸动力学、全原子模拟）分析TCR-CD3复合物的自组装机制。结果 通过粗粒化模拟（CGMD）发现，TCR-CD3复合物在组装过程中存在着αβ依次结合δε"、γε、ζζ"的组装顺序，并阐述了αR253突变会降低αK258与δε"的相互作用。结论 本文论证了仅存在TCR-CD3复合物的跨膜区不足以介导TCR-CD3复合物亚基间的特异性相互作用。拉伸动力学（SMD）和全原子模拟（AAMD）的结果说明，ζζ"与TCR-CD3其余部分之间的胞外区相互作用强于跨膜区，同时ζζ"的缺失对αβδε"γε的稳定性影响最小，而δε"的缺失对αβγεζζ"的稳定性影响最大。]]> 2022/6/21 0:00:00 204true 目的 磁休克治疗（MST）是一种新兴的神经调节干预技术，在重度抑郁症（MDD）治疗中得到广泛应用，然而其抗抑郁机制尚不清楚。探索MST对不同疗效MDD患者脑功能网络的调控作用，对MST治疗的抗抑郁作用机制研究具有重要意义。方法 本文对18例MDD患者MST作用前后的静息态脑电进行记录，基于皮尔逊相关方法构建脑功能网络；应用复杂网络理论对比分析脑功能网络拓扑结构的改变；根据HDRS-17评分变化率进一步区分治疗有效组和无效组，对网络特征进行二次比较。结果 MST后，MDD患者的脑功能网络平均节点度、平均聚类系数和平均全局效率值均比治疗前显著升高，平均路径长度值显著降低，小世界属性显著增大；相比于治疗无效组，治疗有效组的脑功能网络特征参数变化量更大。结论 MST显著改变了MDD患者脑功能网络拓扑结构，对患者的脑功能网络具有一定的调制作用，这些结果为MST治疗的抗抑郁机制研究提供了实验支持和理论依据。]]> 2022/6/21 0:00:00 203true 目的 族群地域、体貌特征等表型是基因型与环境共同作用的结果。大量基因组学研究表明，汉族人群具有混合特征，内部存在明显的南北遗传差异。本研究旨在探索研究表观基因组在中国南北方汉族人群之间是否存在差异，并筛选差异遗传位点。方法 使用GLINT软件对483份汉族样本的全基因组甲基化芯片数据进行EWAS分析，使用Lasso回归方法筛选位点。使用多元逻辑回归算法构建南北方汉族人群预测模型，通过十折交叉验证的方法评估。结果 筛选出一组南北方汉族之间差异显著的CpG位点，准确性为99.03%，Kappa系数为0.979 6。结论 本研究表明南北方汉族人群之间存在表观遗传差异，本研究为进一步开展不同地域汉族人群之间的表观遗传差异研究奠定了基础。]]> 2022/6/21 0:00:00 202true 目的 在法医学领域，现有的SNP检测主要依赖进口，检测工作量大、耗时长且成本较高。微滴数字PCR（droplet digital PCR，ddPCR）作为新一代的PCR技术，可以快速检测低浓度样本DNA，且有较强的抗干扰能力。本研究旨在国产ddPCR平台建立SNP分型检测体系并对其性能进行评估，以探讨ddPCR技术在法医学检验领域的应用价值。方法 在ddPCR平台建立高原适应性EPAS1单倍型（rs115321619、rs73926263、rs73926264、rs73926265和rs55981512）检测体系，测试各位点引物探针特异性，对体系的准确性、稳定性、灵敏度、检材适应性进行评估，并比较了ddPCR和SNaPshot微测序检测体系的抗抑制性，最后对样本地区来源进行测试。结果 ddPCR在2.5 h内即可快速获取检测结果，体系准确性和稳定性好，检测灵敏度为0.312 5 ng，且抗抑制性能力突出。70份测试样本检测结果与背景信息一致。结论 基于ddPCR的SNP检测体系具有准确可靠、简便快速、抗抑制能力强等优势，在法医学快速检验领域有较强的应用潜力，适合法医现场检验需求。]]> 2022/6/21 0:00:00 201true 目的 TRIM28是一种异染色质相关蛋白，通过和SETDB1、HP1相互作用参与H3K9me3修饰的建立，本文旨在更深入地研究TRIM28的相关功能。方法 本文利用CRISPR/Cas9技术、染色质免疫共沉淀技术、免疫印迹技术和实时荧光定量PCR技术，建立HEK293F Trim28基因敲除细胞系，分析一系列实验数据结果。结果 Trim28主要抑制内源表达水平较低的基因转录，进一步分析发现Trim28调控锌指蛋白家族基因和原钙黏蛋白β家族基因的转录。在Trim28敲除细胞系中，锌指蛋白家族基因H3K27ac修饰、H3K4me1修饰和H3K4me3修饰都显著上升，H3K9me3修饰下降。原钙黏蛋白β家族基因的H3K4me3修饰显著上升，H3K9me3修饰下降。结论 这些结果提示TRIM28通过改变染色质的开放程度调控锌指蛋白和原钙黏蛋白β家族基因的转录，为更深入研究TRIM28的功能提供了新的思路。]]> 2022/6/21 0:00:00 200true 目的 阿片受体是一种G蛋白偶联受体（GPCR），主要通过变构转导胞外区内源性配体结合信号，使其与胞内区效应蛋白偶联来介导镇痛反应。δ阿片受体（DOP）除了与疼痛控制有关外，还与情绪控制有关，是一个很有吸引力的治疗靶点。本文旨在分析DOP的结构动力学和变构效应。方法 首先利用各向异性网络模型（anisotropic network model，ANM）对DOP进行建模，通过慢运动模式和快运动模式残基涨落探索DOP的结构动力学与功能的关系。然后，结合微扰响应扫描（perturbation-response scanning， PRS）对DOP中与变构通信相关的关键残基进行识别。结果 慢运动模式可以很好地识别DOP的结构以及功能性钠离子结合位点，快运动模式可以识别出对蛋白质结构稳定起重要作用的关键残基。残基运动相关性分析发现胞外/胞内的跨膜螺旋与环状区域之间存在正相关性，这些区域相互作用促进DOP与配体的结合。PRS分析中敏感性高和效应性高的关键残基在DOP的变构通信中发挥重要作用。结论 这项工作有助于加强对δ阿片受体变构通讯机制的理解，并为药物设计提供有价值的信息。]]> 2022/6/21 0:00:00 199true 目的 肾细胞癌是一种源发于肾小管上皮系统的恶性肿瘤。在已有肾癌相关miRNA标志物的研究中，大都忽略了不同亚型肾癌之间样本数据量差距对筛选结果的影响，这会导致miRNA生物标志物对不同亚型肾癌患者的诊断能力存在较大差异，进而发生漏诊误诊。因此本课题考虑了两种亚型肾癌共同标志物进行研究。方法 对透明肾细胞癌（KIRC）和乳头状肾细胞癌（KIRP）的表达谱数据分别进行统计学和两种机器学习方法筛选并对结果取交集获得两型肾癌共同miRNA标志物。接着，用ROC方法验证了这些标志物的诊断能力。用机器学习方法对外部数据集KICH进行了验证，进一步证明这些标志物的诊断能力以及避免过拟合。还用已有实验文献验证了这些标志物的合理性。用生物信息学方法对miRNA标志物分子机制进行研究。结果 获得了6个两型肾癌共同miRNA标志物（miR-21、mir-210、mir-185、mir-188、mir-362、 mir-199a-2），其中有4个已有实验报道和肾癌密切相关，而mir-188和mir-199a-2尚未见文献报道其与肾癌相关，可能是新的肾癌相关miRNA标志物。之后对6个两型肾癌共同miRNA标志物进行了生物信息学分析，其结果表明新发现的两型肾癌共同标志物mir-188和mir-199a-2参与调控了肾癌相关的MAPK信号通路和TGF-β信号通路。对miRNA及其在通路中的靶基因进行了差异表达的验证，进一步证明了miRNA作为标志物的可靠性及其对靶基因的调控作用。本文还发现，标志物mir-185的下游靶基因中同属于UGT1A基因家族的9个靶基因可能参与肾癌的机制，而在肾癌相关研究领域中尚未见到此种机制研究的文献。结论 本研究发现了两型肾癌可能的新的共同miRNA标志物，揭示了肾癌相关领域中尚未见到的肾癌发生机制。]]> 2022/4/22 0:00:00 198true 目的 探讨热休克因子1（HSF1）减轻脓毒症凝血功能障碍，保护小鼠急性肺损伤的机制。方法 本研究采用盲肠结扎穿孔术（cecal ligation and puncture，CLP）制备脓毒症小鼠模型，检测凝血相关指标和观察小鼠肺部病理变化，通过酶联免疫吸附实验（ELISA）、qRT-PCR和蛋白质印迹法（Western blot）等方法检测蛋白质C表达水平，通过质粒转染抑制或增强HSF1表达从而观察蛋白质C表达水平的变化，并利用生物信息学、凝胶电泳迁移实验（EMSA）和双荧光素酶报告基因实验探讨HSF1调节蛋白质C转录的机制。结果 在CLP脓毒症小鼠模型中，HSF-/-组小鼠的凝血活性与HSF1+/+组相比明显增强，肺损伤明显加重。ELISA、qRT-PCR和Western blot检测发现，HSF-/-脓毒症小鼠血浆和肺组织中的蛋白质C表达水平显著低于野生型小鼠。体外bEnd.3血管内皮细胞的实验结果显示，HSF1抑制脂多糖（LPS）诱导的蛋白质C表达，HSF1过表达则增强蛋白质C表达。生物信息学数据分析提示，蛋白质C启动子区含有HSF1结合元件（HSE），通过EMSA和双荧光素酶报告基因实验显示HSF1与蛋白质C启动子区域的HSE结合，从而上调蛋白质C转录。结论 本研究揭示了HSF1参与小鼠脓毒症急性肺损伤的发生，并通过上调蛋白质C转录，减轻脓毒症凝血功能障碍，从而对小鼠肺组织起到保护作用。]]> 2022/4/22 0:00:00 197true 目的 研究谷胱甘肽转移酶omega1（GSTO1）如何调控骨髓来源的树突状细胞（BMDCs）的功能。方法 利用流式细胞仪和共聚焦显微镜检测GSTO1缺陷及GSTO1抑制剂处理的BMDCs表面MHCII分子的表达。将BMDCs与来自OTII小鼠的CD4 T细胞在OVA存在下共培养，并检测IFN-γ的产生。利用流式细胞仪检测GSTO1抑制剂处理的BMDCs中MHCII分子的循环和内化。实时定量PCR检测GSTO1抑制剂处理的BMDCs中MHCII分子的转录水平。Western blot检测GSTO1抑制剂处理的BMDCs中MHCII分子的总蛋白质水平。免疫共沉淀技术检测GSTO1抑制剂处理后MHCII分子的泛素化水平。结果 GSTO1缺陷或GSTO1抑制剂不影响BMDCs的增殖和凋亡，但会降低细胞膜上抗原递呈分子MHCII分子的表达。GSTO1缺陷或GSTO1抑制剂处理的BMDCs活化CD4 T细胞的能力受损。在GSTO1抑制剂处理的BMDCs中，MHCII分子的循环和内化过程正常。GSTO1抑制剂不影响MHCII分子的转录，但会降低其总蛋白质水平。另外，在GSTO1抑制剂处理的BMDCs中，MHCII的泛素化水平增加，蛋白酶体抑制剂MG132能够恢复GSTO1抑制剂处理后BMDCs的细胞膜MHCII表达水平。结论 这些数据表明，BMDCs中的GSTO1通过抑制MHCII分子的泛素化，促进MHCII的表达，从而提高CD4 T细胞的激活能力。]]> 2022/4/22 0:00:00 196true 目的 眼睛注视、头朝向和生物运动方向等社会性线索，对人类的生存和社会交互极为重要。由于社会性线索和外周线索都具有反射性注意定向这一特点，社会性注意往往也被认为属于外源性注意。但是，外源性注意并不能完全解释所有的社会性注意现象。因此，两者是否具有相同的加工机制，尚存在争论。方法 本研究使用空间线索范式，系统考察了线索有效性（目标出现在被提示位置的概率）分别对注视线索触发的社会性注意和外周线索触发的外源性注意的影响。结果 实验结果发现，随着线索有效性的增加，注视线索和外周线索的线索效应都增强。当线索有效性为0.5或0.8时，两种注意类型的注意效应没有显著性差异。但当线索有效性为0.2时，即线索具有反向预测性时，注视线索与外周线索的线索效应表现出显著差异。注视线索的注意效应仅表现出削弱，但外周线索引发的外源性注意则反而表现出抑制效应，表明社会性注意和经典外源性注意在加工机制上存在不同。结论 本研究提供了新的证据表明两种注意过程在和主动注意的交互作用方面存在明显不同，支持两种注意过程至少在一些加工阶段存在相对独立的加工机制的假设，同时也提供了一种从主动注意调节的角度区分两种注意定向过程的新方法。]]> 2022/3/21 0:00:00 195true 目的 评估基于状态一致性（identity-by-state，IBS）算法预测个体间亲缘关系的准确性。方法 采用Illumina GSA芯片对253份样本进行全基因组检测，基于高密度单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）数据计算两两个体间IBS共享统计量预测亲缘关系。通过不同条件参数筛选SNP，评估位点数对算法预测准确性的影响。结果 1~4级亲缘关系预测准确率高达99%，预测误差在1级以内且无假阳性。SNP数量减少对预测准确率无显著影响，即使在较低密度的SNP标记中，该算法也能获得较高的准确率。结论 IBS算法是法医系谱推断的有效方法，且对于微量降解的法医现场检材具有很好的应用价值。]]> 2022/3/21 0:00:00 194true 目的 通过多波长光声层析成像技术对气管结构进行重建成像。方法 基于阵列换能器的光声成像技术对7名志愿者的气管进行了多波长光声层析成像实验，研究光声层析成像技术对气管不同呼吸相、不同层面的高分辨率（高达150 μm）图像特征，并对该技术的成像优劣性进行评价。结果 光声层析成像技术能对人体气管进行清晰成像，能够真实反映气管及气管周围组织的结构特征。结论 光声层析成像技术可作为一种无创便捷、无电离辐射的成像方式，对气管解剖和功能状态进行实时评估。]]> 2022/3/21 0:00:00 193true 目的 肺癌的发病率和致死率高居世界恶性肿瘤首位。尽管肺癌的诊断与治疗治疗已取得进展，但其发病率和致死率仍呈逐年上升的趋势，因此急需寻找有效的干预靶标和治疗手段。方法 本文验证了通过自噬抑制剂干预铁蛋白自噬、增加肺癌细胞对化疗药物敏感性的多药联用策略。通过免疫印迹分析及免疫荧光测定了细胞中铁蛋白的自噬性降解（铁蛋白自噬），通过分析细胞数量及细胞周期测定了细胞增殖，通过分析细胞耗氧速率评估了细胞线粒体氧化磷酸化水平。结果 铁螯合剂去铁胺可诱导肿瘤细胞发生铁蛋白自噬；氯喹等自噬抑制剂可有效抑制去铁胺诱导的铁蛋白降解，显著抑制肿瘤细胞线粒体氧化磷酸化，并引发细胞周期阻滞、抑制细胞增殖；去铁胺、氯喹与一线化疗药物顺铂或依托泊苷的联合给药可显著增强化疗药物对肺癌细胞的毒性。结论 通过自噬抑制剂和铁螯合剂干预细胞铁代谢有望成为提升肺癌化疗治疗效果的潜在新策略。]]> 2022/2/21 0:00:00 192true 目的 肺癌是世界上最常见的癌症之一，在众多肺癌患者中，肺腺癌（lung adenocarcinoma，LUAD）的死亡率最高。基因表达谱的变化与肿瘤的发生和发展过程有关，通过识别与LUAD患者相关的诊断和预后基因标志物，可以为肺腺癌的预防和治疗提供理论依据。方法 本研究以肿瘤基因组图谱（The Cancer Gene Atlas，TCGA）数据库为基础，采用加权基因共表达网络分析（weighted gene co-expression network analysis，WGCNA）、差异基因分析、cox回归分析、蛋白质互作网络（protein-protein interaction，PPI）分析等方法筛选与LUAD形成过程高度相关的hub基因。将TCGA和基因型组织表达（GTEx genotype tissue expression，GTEx）数据库中的RNA数据合并划分为训练集和内部验证集，利用基于支持向量机的递归特征消除算法（support vector machine recursive feature elimination feature，SVM-RFE）构建诊断模型并进行验证。GSE32863和GSE31210数据集分别用于验证诊断模型的准确性和基因标志物的预后价值。结果 SVM-RFE算法得到的5个基因标志物（anln、cenpa、plk1、tpx2、cdca3）模型在LUAD患者分类中具有显著的诊断能力。功能富集分析表明，这5个基因与肿瘤发生发展的生物学过程密切相关。此外，这5个基因高表达的LUAD患者的预后表现不良，死亡率显著高于低表达的患者。结论 我们的研究为LUAD的诊断和预后提供了具有5个基因特征的模型，这对于开发用于精确治疗的新靶点具有重要意义。]]> 2022/2/21 0:00:00 191true 目的 为了在细胞培养过程中便捷地分析细胞的数目和形态。方法 本文将深度学习应用到细胞识别中，实现了一种可以通过普通光学显微镜拍照，并直接在培养皿中进行细胞识别计数的方法。结果 通过构建U-Net网络结构，并对贴壁细胞和悬浮细胞图像进行标记训练，来实现贴壁细胞和悬浮细胞的分割计数。同时，用该算法绘制细胞生长曲线以及计算抑制剂的抑制率，以验证该算法的实用性。结论 应用深度学习分割光学显微镜下的细胞图像是一种可行的方法。]]> 2022/2/21 0:00:00 190true 目的 研究miR-216b在破骨细胞分化中的功能和靶基因，探讨其对破骨细胞胆固醇外流的影响。方法 建立RANKL刺激诱导RAW 264.7破骨细胞前体细胞分化的细胞模型。进行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色测定以评估破骨细胞分化。通过生物信息学分析和双荧光素酶报告基因预测和分析miR-216b与其靶基因ABCG1 3'非翻译区（3'UTR）的结合以及自由能。转染miR-216b模拟物或抑制剂以验证miR-216b 在破骨细胞分化中的作用。液体闪烁计数用于测量来自RAW264.7巨噬细胞衍生的破骨细胞［3H］标记的胆固醇流出。通过高效液相色谱（HPLC）检测RAW 264.7巨噬细胞中的脂质积累。实时定量PCR（RT-qPCR）和蛋白质印迹分析用于评估破骨细胞中ABCG1的转录和转录后水平。结果 当细胞用miR-216b模拟物转染时，破骨细胞的数量、破骨细胞的平均直径和融合指数显著增加，如抗酒石酸酸性磷酸酶阳性染色和显微镜测定所揭示。MiR-216b抑制剂显示出完全相反的结果，这为我们的发现提供了额外的证据。生物信息学分析和双荧光素酶报告基因检测表明，miR-216b靶向ABCG1的3'UTR。进一步研究表明，miR-216b抑制破骨细胞中 ABCG1的mRNA和蛋白质水平。此外，我们还发现ABCG1 siRNA对ABCG1的沉默增加了破骨细胞的数量、破骨细胞的平均直径和融合指数。MiR-216b通过抑制ABCG1表达减少破骨细胞的胆固醇流出。结论 总的来说，这些研究表明miR-216b下调ABCG1表达并抑制破骨细胞胆固醇流出，从而扰乱胆固醇稳态并促进破骨细胞生成。]]> 2022/2/21 0:00:00 189true 目的 探讨两种吲哚美辛制剂在口腔溃疡愈合中的作用。方法 大鼠右颊用铁钉烫烧造模，分为吲哚美辛凝胶给药组（YN）、复方苯佐卡因凝胶阳性对照组（NP）、吲哚美辛喷雾给药组（YP）、口腔炎喷雾阳性对照组（PP）、正常对照组（N）和阴性对照组（M）。采用HE染色、组织学标准定量评价溃疡面再上皮化及肉芽组织形成情况，比色法检测溃疡组织一氧化氮（nitric oxide，NO）、一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）活性水平，免疫组化检测大鼠溃疡组织表皮生长因子（EGF）及其受体（EGFR）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达情况。结果 YP、YN、NP、PP组溃疡面积较M组均减小，组织学定量评价显示YP、YN、NP、PP组得分均高于M组（P<0.05）；给药后，YP组NO和NOS水平显著低于M组（P<0.05）；EGF在YP、YN、NP、PP组的表达均高于M组和N组（P<0.05）；EGFR在YP、YN、NP、PP组的表达与N组相比明显升高（P<0.05）；VEGF在YP、YN、NP、PP组的表达均低于M组（P<0.05）。结论 两种吲哚美辛制剂均能起到减轻大鼠口腔溃疡炎症反应、促进愈合作用。]]> 2022/2/21 0:00:00 188true 目的 拯救携带OX40L的重组溶瘤流感病毒株，全面鉴定并评价其靶向杀伤肝癌细胞的效果。方法 将编码OX40L的基因片段嵌合在A/PuertoRico/8/34（PR8）的NS片段特定位置，利用反向遗传学技术（reverse genetics，RG），与PR8流感病毒的剩余7个骨架质粒pHW191-PB2、pHW192-PB1、pHW193-PA、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW196-NA、pHW197-M共转染COSⅠ/MDCK细胞，成功拯救获得重组溶瘤流感病毒，命名为rFlu-OX40L。经血凝、TCID50方法测定病毒滴度；重组病毒纯化后电镜观察病毒形态特征及大小分布；检测MDCK细胞病毒生长曲线；MTS法检测重组病毒对肝癌细胞活力的影响；流式细胞术检测重组病毒诱导肝癌细胞死亡方式；利用肝癌荷瘤小鼠模型评价重组病毒rFlu-OX40L在动物体内的抗肿瘤效果。结果 重组溶瘤流感病毒rFlu-OX40L可在鸡胚中稳定传代，HA效价达27~8，病毒滴度可达 7~8 LgTCID50/ml；重组病毒rFlu-OX40L与流感病毒PR8生长曲线相一致，72 h达高峰；MTS结果显示，3 MOI重组病毒可显著降低肝癌细胞活力，且对正常肝细胞无明显影响，呈时间和剂量依赖性；流式细胞结果显示，重组病毒可显著诱导肝癌细胞凋亡，呈时间和剂量依赖性；利用肝癌荷瘤小鼠模型，瘤内注射重组溶瘤流感病毒rFlu-OX40L较PR8、PBS对照组，小鼠脾细胞中CD3+、CD4+、CD8+、CD45+、CD69+ T细胞数量呈现显著升高趋势。结论 携带OX40L的重组溶瘤流感病毒rFlu-OX40L在体内外均可选择性杀伤肝癌细胞，有望为肝癌的临床治疗提供新的免疫治疗策略。]]> 2022/12/20 0:00:00 187true 目的 肝星状细胞（HSCs）是肝纤维化（HF）过程中细胞外基质（ECM）的主要来源，在HF的发生发展中起着重要作用。二氢杨梅素（DMY）具有保肝作用，但机制不清。本研究观察了DMY对枸橼酸铁铵（FAC）诱导HSC-T6细胞活化的影响，并探讨了可能的机制。方法 采用MTT法检测细胞活力，ELISA法检测培养上清中ECM主要成分的含量，普鲁士蓝染色观察HSC-T6细胞铁沉积，比色法测定HSC-T6细胞总铁含量，钙黄绿素法检测细胞内游离铁水平，透射电镜观察HSC-T6细胞超微结构。蛋白质免疫印迹法检测铁蛋白重链1（FTH1）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、核受体辅活化子4（NCOA4）、微管相关蛋白1轻链3（LC3）和p62/SQSTM1的表达。结果 与FAC组比较，DMY+FAC组细胞培养液中ECM主要成分、细胞内总铁和游离铁水平、细胞中α-SMA、NCOA4和LC3-Ⅱ表达以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均显著降低，而FTH1和p62蛋白表达显著上调。雷帕霉素部分阻断DMY抑制FAC诱导的HSCs活化的作用。结论 DMY可抑制铁超载诱导的HSCs活化，其机制可能与抑制铁自噬有关。]]> 2022/12/20 0:00:00 186true 目的 人体组织的稳定同位素组成与其生长期间的个体饮食情况、所处环境及代谢状况有关。人头发一经长出便不再与身体进行物质交换，化学性质稳定，易于采集，是研究人体组织稳定同位素组成的良好对象。构成人体的氧、氢元素主要来自于所摄入的水和食物，其中氧、氢稳定同位素组成会通过角蛋白的形式被记录于头发当中。不同地区居民头发中氧、氢稳定同位素组成差异可被用于推断人的饮食情况、生活地域和活动轨迹信息，在法庭科学等研究领域具有重要意义。方法 本研究利用元素分析仪-稳定同位素比质谱仪（EA-IRMS）对国内不同地区常住居民头发样本进行氧、氢稳定同位素比值检测和分析。结果 部分城市间居民头发δ18O和δ2H存在显著性差异，整体δ18O和δ2H存在显著正相关性。对所得稳定同位素数据进行判别分析推断头发的地域来源，其交互验证整体判别准确率为63.9%，结合碳、氮稳定同位素数据后，其判别准确率大幅提升，交互验证的整体判别准确率达到76.0%。随着判别分析中使用的稳定同位素种类的增加，判别函数模型的判别能力明显增强。结论 利用4种元素稳定同位素数据建立的多层感知器神经网络模型的整体判别准确率为82.8%，径向基函数神经网络模型整体判别准确率为78.8%，3种溯源推断数学模型中，多层感知器神经网络模型的判别准确率最高。]]> 2022/12/20 0:00:00 185true 目的 近年来，用于脑功能调控的神经调控技术蓬勃发展，很多方法已在临床上被推广应用，主要包括电极深部脑刺激、经颅磁刺激、光遗传技术、超声深脑刺激等。但是这些调控技术存在刺激靶点改变灵活性差、空间分辨率不足、需要注射病毒转染等问题。与这些技术相比，太赫兹波调控则能以较高的时空分辨率、无需引入外源基因的方式对神经活动进行干预。激光神经刺激是一种具有较明确靶向性的刺激方法，可以通过调整不同激光参数（激光波长、脉冲能量等）控制引起神经兴奋或者抑制。但是由于该研究方向的实验手段和实验平台的缺乏，相关研究开展较少。方法 针对这个问题，从听觉神经入手，在分子、细胞和在体不同层面为相关领域的研究搭建了不同的测试平台。结果 实验结果表明，这些系统在时间和空间上具有良好的耦合性和靶向性，测得的信号受噪音干扰小。结论 这些系统可以有效测试神经系统对太赫兹刺激的响应并精确控制刺激时间和位置。]]> 2022/12/20 0:00:00 184true 目的 本研究致力于设计一种新的miRNA表达框架（MEC），其以hTERT和hTR的特异性序列为靶点。该框架能够有效改善传统RNAi方法中miRNA易降解和细胞毒性问题，为miRNA的合成提供一种简便的方法。方法 采用重叠PCR方法构建hTERT和hTR特异的miRNA表达框架。采用TRAP银染色和TRAP实时荧光定量PCR检测端粒酶活性。实时荧光定量PCR法测定端粒长度，MTT法测定细胞活力。annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡，PI单染色法检测细胞周期，流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 成功构建了靶向hTERT/ hTR特异性miRNA表达框架。不同MEC对端粒酶活性的抑制程度不同。端粒酶的沉默可引起视网膜母细胞瘤（RB）细胞G0/G1期生长阻滞，导致细胞凋亡。结论 miRNA介导的端粒酶沉默是一种有效抑制RB细胞生长的策略，开发一个强大的系统来充分探索miRNA的作用是必要的。本文构建的MEC显示了强大的RNAi效应，可成为筛选用于RB基因治疗的RNAi靶向序列的有效工具。]]> 2022/12/20 0:00:00 183true 目的 研究膀胱癌FFPE组织切片的N-连接糖链，发现膀胱癌FFPE肿瘤组织的异常N-连接糖链修饰情况。方法 发展基于FFPE组织切片原位提取N-连接糖链的实验流程。通过PNGase F酶切FFPE组织解释放N-连接糖链。对N-连接糖链自由端进行全甲基化修饰。通过MALDI-TOF/TOF-MS检测N-连接糖链的相对含量。进行数据库匹配，确定N-连接糖链的可能糖型。ROC分析用于预测显著差异N-连接糖链作为预测膀胱癌生物标志物的准确度。结果 MALDI-TOF/TOF-MS检测泛甲基化修饰N-连接糖链的数据显示，在16例膀胱癌患者的肿瘤和癌旁组织的3次重复实验中，肿瘤组织中蛋白质高甘露糖型N2H6、N2H7、N2H8、N2H9和复杂型N5H6F1糖链修饰水平显著上升，同时高甘露糖型N2H5、杂合型N3H5以及复杂型N3H4、N4H4、N5H6F1S2糖链修饰水平显著下降。ROC分析显示，双天线型N-连接糖链N3H4（AUC=0.90）和N4H4（AUC=0.91）在单独或者共同区分膀胱癌患者肿瘤组织和癌旁组织中都具有很好的可靠性，可能成为膀胱癌的潜在生物标志物。结论 膀胱癌FFPE肿瘤组织中存在蛋白质异常N-糖基化修饰，N-连接糖链N3H4和N4H4或可成为膀胱癌的潜在生物标志物。]]> 2022/10/21 0:00:00 182true 目的 分子成像技术具有“早期检测”的特点，由于分子水平上的畸变早于解剖水平上的变化。本研究采用细胞内光声分子成像（PMI）方法，对靶向到癌细胞上的叶酸-金纳米棒（FA-AuNRs）精确定位成像。方法 本文合成了FA-AuNRs，并对其性质包括形貌、吸收光谱和生物相容性进行了研究。修饰叶酸赋予FA-AuNRs特异性靶向到叶酸受体高表达癌细胞的能力。然后，通过PMI实验研究FA-AuNRs对癌细胞的靶向特异性。结果 FA-AuNRs呈棒状，在~800 nm处有一近红外吸收峰。在癌细胞的细胞质中观察到强光声信号，而在正常细胞中只有弱光声信号，表明FA-AuNRs通过叶酸受体介导的内吞作用被癌细胞选择性摄取。这项研究证明了PMI能够实现对靶向到癌细胞上的FA-AuNRs精确定位成像。结论 借助特异性靶向作用，可以通过PMI获得癌细胞表面分子信息。该方法有望实现在细胞和分子水平上对生物过程进行可视化、表征和量化。]]> 2022/10/21 0:00:00 181true 目的 探讨纳米二氧化硅（silicon dioxide nanoparticles，SiO2NPs）对小鼠睾丸支持细胞（TM4）的毒性作用及其分子机制。方法 将TM4细胞暴露于不同浓度的SiO2NPs（0、1、10、100 mg/L）培养液24 h，处理结束后，采用光学显微镜和CCK-8法检测小鼠睾丸支持细胞的形态和活性。利用荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧（ROS）水平，MDA和SOD试剂盒检测细胞内的丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性。利用Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒分析TM4细胞的凋亡水平，免疫印迹法检测Fas、FasL、Caspase-8、Caspase-3、Bax和Bcl-2等细胞凋亡信号分子的蛋白质表达水平。结果 研究发现，SiO2NPs呈剂量依赖性地抑制TM4细胞增殖，降低细胞存活率和数量，并影响细胞的形态结构。此外，SiO2NPs诱导TM4细胞产生过量ROS，引起脂质过氧化产物MDA含量以及抗氧化酶SOD活性增加导致氧化应激。进一步研究显示，SiO2NPs显著增加TM4细胞凋亡水平，并激活Fas/FasL死亡受体介导的细胞凋亡信号通路。有意思的是，抗氧化剂NAC可以通过降低氧化应激水平有效缓解SiO2NPs引起的TM4细胞损伤和细胞凋亡。结论 综上，SiO2NPs通过诱导氧化应激激活Fas/FasL信号通路促进TM4细胞凋亡。]]> 2022/10/21 0:00:00 180true 目的 制备胎盘脱细胞基质并评价其生物相容性，探讨其作为组织修复材料的可行性。方法 利用分娩废弃物胎盘组织，进行病毒灭活、脱细胞处理、冷冻干燥得到胎盘脱细胞海绵状基质材料，HE染色观察脱细胞效果及扫描电镜观察材料微观结构。同时，选取健康雄性SD大鼠39只，体质量120～150 g，随机分为实验1组、实验2组及对照组。对构建的基质材料进行大鼠皮下植入实验，实验1组植入基质材料，实验2组植入基质材料及脐带间充质干细胞，对照组为假手术组。于手术后第3、5、7天进行动物血常规检测，分析淋巴细胞、粒细胞等炎性细胞数量；于手术后第1、2、4、8、9周取材料植入处及周围组织样本进行HE染色分析。结果 构建的胎盘脱细胞基质肉眼观呈乳白色海绵状，HE染色未见细胞残留，电镜观察材料内部空隙比较明显，材料交联度较好，总孔隙率为（77.54±2.53）%。皮下植入之后，切口处愈合良好，血常规结果未见明显的炎性细胞增多；术后7 d植入材料切片HE染色即可见血管形成，且脐带间充质干细胞的加入能够加快材料与机体的融合，促进细胞的深入生长及血管化。结论 胎盘脱细胞海绵基质材料具有良好的生物相容性，可作为组织工程材料的理想来源。]]> 2022/10/21 0:00:00 179true 目的 虽然大豆遗传转化取得了较大进展，但其转化效率仍然偏低。因此，有必要建立一个更加简单和高效的大豆转化系统。本研究的目的是以大豆成熟种子萌发产生的叶片（MSDL）为靶外植体，高频诱导和转化大豆体细胞胚（somatic embryos，SEs）。方法 萌发7 d的大豆幼苗上摘取叶片，并将其切成1.2 cm×1.2 cm的外植体。将叶片外植体置于胚胎诱导培养基（EIM）上诱导体细胞胚发生。将叶片外植体浸入携带pCAMBIA1301植物表达载体的农杆菌EHA105菌液进行遗传转化。结果 MSDL（包括初生叶和次生叶）均能被诱导产生SEs。大多数SE发生在叶片切口处。所试的不同基因型均能诱导SEs。SEs的最高诱导率为95.0%。β葡糖醛酸糖苷酶（GUS）染色结果表明，平均转化效率达到75.4%。DNA印迹（Southern blot）结果表明，目的基因稳定整合在大豆基因组中，拷贝数为1~3个。结论 本研究建立了以大豆MSDL为靶组织的体细胞胚高频诱导和遗传转化。该系统有望在大豆基因组编辑技术的开发上得到应用。]]> 2023/8/14 11:14:27 178true 目的 鼻咽癌是一种来源于鼻咽上皮的恶性肿瘤，其临床特征之一是易发生淋巴转移，但是目前鼻咽癌转移的分子机制尚未阐明。circPVT1是由PVT1基因2号外显子反向拼接形成的环状RNA（circRNA），在多种肿瘤中表达上调，本文探讨了circPVT1在鼻咽癌侵袭迁移中的作用和分子机制。方法 通过RT-qPCR检测circPVT1及其下游miRNA和FSCN1在鼻咽癌细胞的表达情况，Transwell和划痕愈合实验检测circPVT1对鼻咽癌细胞侵袭迁移的影响，RNA pull-down实验检测circPVT1结合的miRNA，双荧光素酶报告实验检测miR-24-3p和let-7a-5p靶向抑制FSCN1 mRNA表达。结果 在鼻咽癌细胞中过表达circPVT1可以促进鼻咽癌细胞侵袭迁移，而敲低circPVT1则可以抑制鼻咽癌细胞的侵袭迁移。进一步研究发现，circPVT1可以通过竞争性吸附miR-24-3p和let-7a-5p，上调FSCN1的表达，从而促进鼻咽癌细胞的侵袭迁移。结论 circPVT1通过miR-24-3p/let-7a-5p/FSCN1轴促进鼻咽癌细胞侵袭迁移，证实circPVT1是鼻咽癌发生发展过程中一个重要驱动因子。]]> 2023/8/14 11:14:38 177true 目的 阐明纳米二氧化锆暴露对人永生化角质形成细胞HaCaT组蛋白H3常见修饰位点的影响，探讨组蛋白H3修饰变化的潜在机制，为纳米材料的进一步安全应用提供理论基础。方法 在利用扫描电子显微镜、激光粒度仪、X射线衍射仪等技术对纳米二氧化锆进行详细表征的基础上，通过蛋白质免疫印迹及流式细胞术等方法评价纳米二氧化锆暴露对细胞生存率、细胞内蓄积量以及组蛋白H3修饰等的影响。结果 在分散介质中纳米二氧化锆明显团聚，比表面积减少，二次粒径增大，其短时间内（1 h）即诱导了组蛋白H3第10位丝氨酸的磷酸化、第9及14位赖氨酸的乙酰化、第4及27位赖氨酸的三甲基化修饰水平的升高。进一步分析发现，纳米二氧化锆的细胞内蓄积量及其引起的DNA损伤水平，与纳米二氧化锆诱导的组蛋白H3修饰水平均呈线性相关。结论 纳米二氧化锆暴露后诱导了HaCaT细胞组蛋白H3常见修饰位点的变化，其细胞内的蓄积是诱导组蛋白H3修饰变化的关键因素之一，且组蛋白H3修饰的调控机制可能涉及DNA损伤修复途径。]]> 2023/8/14 11:14:50 176true 目的 磷脂酰肌醇3激酶γ（PI3Kγ）在免疫系统的调节中发挥重要作用，使其成为一个炎症治疗的潜在药物靶点。目前选择性PI3Kγ抑制剂用于治疗炎症的研究较为匮乏，PI3Kγ抑制剂的炎症治疗效果有待进一步揭示。因此，本课题选择目前已进入临床研究的PI3Kγ抑制剂依加利塞（Eganelisib）进行抗炎作用及PI3Kγ选择性机制研究。方法 首先通过脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞，构建炎症细胞模型检测依加利塞的抗炎作用及机制。随后，通过联用分子共同特征药效团、受体-配体复合物药效团、分子动力学的计算模拟方法，在分子水平揭示依加利塞的PI3Kγ选择性作用抑制机制。结果 依加利塞可以通过抑制炎症细胞中的PI3K信号通路来抑制细胞炎症因子的释放；药效团模型揭示氢键及疏水是依加利塞产生PI3Kγ选择性抑制的关键药效团特征；分子动力学模拟发现了抑制剂与PI3Kγ蛋白选择性结合的关键氨基酸，包括Val882、Met804、Trp812、Ile963。结论 本研究初步验证了依加利塞的抗炎作用，并在分子水平揭示了抑制剂与PI3Kγ选择性结合机制，为抗炎PI3Kγ抑制剂的开发提供一定的指导作用。]]> 2023/8/14 0:00:00 175true 目的 磁耦合谐振式无线电能传输（magnetically-coupled resonant wireless power transfer，MCR-WPT）具有传输距离较大、传输效率高、穿透性好等优点，为人们生活带来便利的同时其引起的生物电磁效应安全问题备受人们关注。本文通过研究MCR-WPT电磁环境对小鼠海马齿状回（DG）区神经元K+通道特性的影响，为无线电能传输（WPT）技术的发展及其合理开发应用提供实验依据。方法 每天对小鼠不间断辐射5 h，持续30 d，对比分析对照组和磁场暴露5 d、15 d、30 d组小鼠的学习记忆能力、海马DG区神经元的瞬时外向K+通道电流（IA）和延迟整流K+通道电流（IK）的变化。结果 磁场暴露组瞬时外向K+通道的激活过程受到抑制、延迟整流K+通道的激活特性向去极化方向移动，减少K+的外流，增强了神经兴奋性，但磁场暴露组小鼠行为上无显著性变化。结论 长期处于MCR-WPT电磁环境会改变K+通道的电流-电压（I-V）特性和动力学特性，抑制IA和IK，改变神经元动作电位的发放频率，但这些变化并没有引起小鼠学习记忆能力的下降以及认知功能障碍。]]> 2023/8/14 11:15:40 174true 目的 壳聚糖（chitosan，CS）是一种天然的广谱抗菌活性物质。现有研究表明，壳聚糖与细菌细胞膜的相互作用是其发挥抗菌功能的关键。受限于传统实验技术的表征能力，壳聚糖与细菌细胞膜相互作用的具体机制仍有待研究。本文旨在研究壳聚糖与细菌细胞膜相互作用的分子机制。方法 本研究利用全原子分子动力学模拟技术主要探究了完全脱乙酰化的不同聚合度壳聚糖（八聚糖、十二聚糖和十六聚糖）与革兰氏阴性菌外膜（outer membrane，OM）和革兰氏阳性菌质膜（cytoplasmic membrane，CM）相互作用的动态过程。结果 壳聚糖主要依靠其氨基、碳6位羟基和碳3位羟基与OM和CM的头部极性区发生快速结合。随后壳聚糖末端糖基单元倾向于插入OM内部，深度约1 nm，并与脂质分子脂肪酸链上的羰基形成稳定的氢键相互作用。与之相比，壳聚糖分子难以稳定地插入CM内部。壳聚糖结合对膜结构性质产生影响，主要表现在降低OM和CM的单分子脂质面积，显著减少OM和CM极性区的Ca2+和Na+数目，破坏阳离子介导的脂质间相互作用。结论 本研究证明，壳聚糖带正电的氨基基团是介导其与膜相互作用的关键，并破环脂质间的相互作用，降低细菌膜结构稳定性。这些结果为从原子水平上理解壳聚糖的抗菌机制提供了新的见解。]]> 2023/8/14 0:00:00 173true 目的 抑郁的发生机制不清及药物的临床疗效不佳，导致其成为世界难题。已有研究发现甲醛的气态暴露或液态腹腔注射都可直接诱发小鼠抑郁样行为，而内源甲醛是否参与抑郁的发生尚不清楚。本研究探索脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）是否通过刺激内源甲醛产生而诱发小鼠抑郁的分子机制；并观察非侵入物理疗法——630 nm红光照射是否能激活甲醛脱氢酶而降解甲醛，从而改善小鼠抑郁样行为。方法 雄性成年C57BL/6J小鼠随机分组：a. 对照组，腹腔注射磷酸缓冲液（phosphate buffer solution，PBS）；b. 抑郁模型组，按浓度梯度腹腔注射LPS；c. 红光干预组，按浓度梯度腹腔注射LPS后并定时进行630 nm全身红光照射。采用旷场实验（open field test，OFT）、糖水偏爱（suorose preference test，SPT）、悬尾实验（tail suspension test，TST）、强迫游泳（forced swimming test，FST）等方法，评估小鼠的抑郁样行为；用甲醛荧光（Na-FA，特异甲醛荧光探针）定量法及整脑甲醛荧光成像法，检测小鼠脑组织甲醛浓度及分布；用酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒检测IL-1β、TNF-α、IL-6、氨基脲敏感胺氧化酶（SSAO）浓度。结果 LPS急性注射1 h后小鼠全脑，特别是中脑中，甲醛急剧蓄积；并伴随IL-1β、TNF-α、IL-6含量上升；24 h即出现抑郁样行为，包括：旷场总运动距离、中心区运动时间（距离）显著减少；悬尾实验、强迫游泳实验总不动时间显著增加。而630 nm红光治疗显著改善LPS诱发的小鼠抑郁样行为，并伴随中脑炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6水平下降。结论 中脑甲醛蓄积是抑郁发生的触发因素，诱发了炎症因子大量释放，而非侵入物理疗法——红光照射消除蓄积的甲醛，是一种有前景的无创治疗抑郁新策略。]]> 2023/7/19 12:03:26 172true 目的 探讨肥胖对大鼠生精小管结构及自噬和凋亡相关蛋白质的影响，并探讨运动对睾丸自噬和凋亡的影响及其调控机制。方法 将50只6周龄雄性SD大鼠随机分为标准饲养组（SD组，n=20）和高脂饲养组（HFD组，n=30）。HFD组喂养8周建立肥胖大鼠模型，并随机筛选出20只肥胖大鼠进行运动干预。SD组和HFD组分别随机分为标准对照组（CC组）、标准运动组（CE组）、肥胖对照组（OC组）、肥胖运动组（OE组），每组10只。其中CE组和OE组进行8周中等强度跑台运动干预，60 min/d，5 d/周，其他两组维持原饲养条件。在最后一次运动结束48 h后，将大鼠腹腔麻醉，称重，取大鼠左右两侧睾丸、称量睾丸重量并计算睾丸指数。制作睾丸石蜡切片，利用HE染色法观察睾丸组织结构。采用蛋白质印迹法（Western blot）检测睾丸组织中p62、LC3II、LC3I、BCL-2、Bax和AMPK蛋白表达量并计算LC3II/LC3I比值，采用免疫荧光检测睾丸中LC3和BCL-2蛋白表达位置。结果 与CC组相比，OC组大鼠睾丸指数降低，生精小管直径显著降低（P<0.01），精子细胞减少，睾丸组织中有脂滴沉积现象，睾丸组织中p62和Bax蛋白表达显著升高（P<0.01），AMPK、LC3II/LC3I比值和BCL-2蛋白表达显著降低（P<0.01），精子细胞上LC3蛋白数量明显减少。运动干预后，与OC组相比，OE组大鼠睾丸指数升高，生精小管直径（P<0.01）和精原细胞数量（P<0.05）显著升高，生精小管结构改善，睾丸组织中p62和Bax蛋白表达显著降低（P<0.01），AMPK、LC3II/LC3I比值和BCL-2蛋白表达显著升高（P<0.01），大鼠精母细胞和精子细胞中BCL-2蛋白表达数量明显增加。所有大鼠睾丸组织中AMPK与p62、LC3II/LC3I、Bax蛋白表达为强相关。结论 高脂饮食诱导的肥胖会抑制大鼠睾丸组织中自噬过程、促进凋亡发生；8周中等强度运动可能通过AMPK激活睾丸组织中的自噬并抑制凋亡，矫正肥胖带来的精子发生过程的异常。]]> 2023/7/19 12:03:28 171true 目的 观察玉竹提取物（POD）对多囊卵巢综合症（PCOS）模型大鼠卵巢功能及炎症的影响。方法 本研究选择3周龄雌性SD大鼠，采用来曲唑进行灌胃21 d复制PCOS模型，造模成功后，采用不同浓度POD对PCOS模型大鼠进行灌胃处理。记录大鼠每日饮水及摄食量、体重变化情况及动情周期，检测血液相关指标、测定血清睾酮水平，检测大鼠糖耐量，采用苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢组织形态学变化，通过蛋白质免疫印迹法（WB）、实时荧光定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）及免疫组织化学法（IHC）检测卵巢组织内抗苗勒激素（AMH）、炎性细胞因子白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达。结果 与对照组相比，PCOS模型大鼠动情周期紊乱、卵巢呈多囊样改变，血清睾酮水平显著上升、卵巢AMH表达上调、糖耐量异常（P＜0.01），IL-1β和TNF-α表达增加（P＜0.01）；不同浓度POD处理PCOS模型大鼠后，大鼠动情周期逐渐恢复正常、卵巢中黄体数量增加、囊性卵泡数量减少、血清睾酮水平下调、糖耐量异常缓解（P＜0.01），卵巢组织炎性细胞因子IL-1β、TNF-α表达下调。结论 POD可以改善PCOS模型大鼠卵巢功能并且抑制炎症反应，对模型大鼠的PCOS有一定的治疗效果。]]> 2023/7/19 12:03:30 170true 目的 耐辐射奇球菌是一种对紫外线、电离、干燥和化学试剂具有较强抗性的极端微生物。然而，该菌在紫外辐照后恢复早期的分子响应还不完全清楚。本文的目的是揭示耐辐射奇球菌在这一阶段的转录组响应。方法 本研究采用 RNA-seq技术，测定了正常和紫外辐照培养条件下耐辐射奇球菌的转录组。为确定关键的差异表达基因及其调控关系，进行了功能富集分析。选取部分关键差异表达基因，进行实时定量PCR实验验证。利用以往研究中的转录组数据，寻找紫外辐照、电离辐射和干燥胁迫条件下公共的差异表达基因。构建了蛋白质-蛋白质相互作用网络；对蛋白质互作网络中的枢纽基因和主要模块进行了鉴定；对这些枢纽基因和模块进行了功能富集分析。结果 紫外辐照后的恢复早期，上调基因数量是下调基因数量的2倍以上，且多数与应激反应和DNA修复有关。恢复早期的修复途径主要有单链退火（SSA）途径（涉及基因：ddrA-D）、非同源端连接（NHEJ）途径（涉及基因：ligB、pprA）和核苷酸切除修复（NER）途径（涉及基因：uvrA-C），前两种途径为同源重组（HR）做准备，而NER途径去除紫外线照射带来的嘧啶二聚体。通过比较紫外辐照、电离辐射和干燥胁迫下的转录组数据，发现公共的差异表达基因主要涉及奇球菌属特异性基因和DNA/RNA代谢相关基因。从差异表达基因的蛋白质互作网络中发现了几个重要的枢纽基因和相互作用模块，其功能集中在双链断裂修复、DNA拓扑改变和复制。结论 在紫外辐照后的早期恢复阶段，耐辐射奇球菌的多种基因发生了转录组水平的分子响应，并启动了多个修复途径来应对这种胁迫，其中一些修复途径在其他应激条件下同样存在。]]> 2023/7/19 12:03:32 169true 目的 三维电阻抗成像（3D-EIT）结合二维电阻抗成像（2D-EIT）研究胃容积及胃食道液体状态变化的电学特性响应，旨在探究EIT技术应用于胃食道反流病监测的可能性。方法 8名受试者被要求在实验前4 h禁食，保证实验开始时胃部处于排空状态，实验开始后受试者被要求分两次喝下400 ml经口补水液，在摄入200 ml状态下和摄入400 ml状态下分别应用3D-EIT检测腹腔3D空间的电导率分布。为了定量说明不同状态下电学特性的变化，使用配对样本t检验分析3D-EIT重建3D图像的空间平均电导率（）。采用数值仿真工具，建立两种尺寸胃容积模型验证，实验结果中胃容积变化是引起受试者腹腔3D空间内电导率变化的原因，并研究胃腔被不同比例补水液填充状态下电学特性的变化趋势，应用2D-EIT数值仿真进行电导率分布图像重建。结果 8名受试者腹腔3D-EIT实验中空间平均电导率的配对样本t检验结果表明，空间平均电导率从C200 ml状态下的200 ml=0.226增加到C400 ml状态下的400 ml=0.387（n=8，P<0.05）。因此，受试者腹腔胃部区域空间平均电导率随胃容积增加而显著增加。2D-EIT数值仿真结果表明，随着胃腔填充补水液比例的增加测量电压差（ΔV）逐渐减少，ΔV对胃腔填充补水液体积敏感。与小型胃容积模型相比，大型胃容积模型在胃腔填充补水液比例相同情况下平均电压差（）更小，对胃容积模型的尺寸敏感。在小型胃容积例中，随着胃腔填充补水液比例增加而增加，从填充25%的 A=-0.29增加到填充100%的D=-0.41；在大胃容积例中，随着胃腔填充补水液比例增加而增加，从填充25%的E=-1.85增加到填充100%的H=-2.12。结论 3D-EIT电阻抗成像技术能够通过图像直观的反映不同尺寸胃容积的电学特性差异，2D-EIT根据在不同胃容积尺寸模型中ΔV、和显示出相同的趋势得出结论，3D-EIT结合2D-EIT技术令人满意的监测了胃食道在不同胃容积中的液体状态变化。]]> 2023/7/19 12:03:35 168true 目的 柯萨奇病毒B组5型（CVB5）是手足口病的重要病原体之一，可导致发热、皮疹或疱疹等临床症状，重症者出现神经系统疾病，甚至死亡。天然免疫应答是机体抗病毒入侵的第一道防线，其中核因子κB（NF-κB）是宿主天然免疫反应中的重要蛋白质，然而关于CVB5感染后调控NF-κB介导信号通路的研究尚鲜有报道。方法 本研究通过检测启动子活性、促炎因子水平以及通路中关键蛋白表达等，阐明CVB5对NF-κB信号通路的调控作用机制。结果 CVB5感染可抑制促炎因子表达和p65的磷酸化。CVB5非结构蛋白（NSP）可抑制促炎因子表达以及重要蛋白p65和IκBα的磷酸化。经STRING11.1数据库预测表明，CVB5 3CD蛋白与宿主多聚胞嘧啶结合蛋白1（PCBP1）具有相互作用，且PCBP1可促进IκBα和p65的磷酸化，抑制病毒复制。结论 CVB5 NSP可负调控NF-κB信号通路，且与3CD相互作用的PCBP1蛋白可通过调控NF-κB通路抑制CVB5复制。本研究探索病毒与宿主天然免疫应答的调控作用，从而为研制抗CVB5感染的药物提供作用靶点。]]> 2023/6/20 16:50:12 167true 目的 海洋肉食性软体动物芋螺的毒液是生物活性多肽的一个宝贵来源。这些活性多肽大多是富含二硫键的神经毒素，通常称为芋螺毒素。在本研究中，发现了一个全新的O2超家族芋螺毒素Tx7.29，通过对其进行功能研究，期望发现新的镇痛药候选物。方法 从织锦芋螺毒管cDNA文库中克隆得到Tx7.29的cDNA序列。通过化学合成，制得了Tx7.29的成熟肽，并通过质谱鉴定了其分子质量。通过膜片钳实验和动物实验确定Tx7.29的生物学功能。结果 Tx7.29的cDNA序列编码了一个包含68个氨基酸残基的芋螺毒素前体，由19个残基的信号肽、28个残基的前片段和22个残基的成熟肽组成。圆二色谱分析表明，β转角和反平行片层是Tx7.29二级结构中的主要组分。通过膜片钳实验发现，Tx7.29可以显著抑制大鼠背根神经节细胞的钙通道电流，但对钠电流和钾电流没有明显作用。在小鼠热板疼痛试验中，从0.5到4小时，Tx7.29以剂量依赖性的方式，增加了试验小鼠的热板潜伏时间。Tx7.29对ND7/23细胞无明显细胞毒性。结论 Tx7.29有望成为一种镇痛药物先导化合物，同时它的发现也扩大了O2-芋螺毒素的作用范围。]]> 2023/6/20 16:50:14 166true 目的 近年来，眶骨骨折发生率逐年增加，其治疗关键旨在修复缺损的眶骨，聚（γ-谷氨酸）/2-羟乙基甲基丙烯酸酯/聚（乙二醇）（γ-PGA/HEMA/PEG）聚合物晶胶是一种具有互连多孔结构的新型支架材料，研究旨在检验其在眼眶骨折缺损修复中的骨修复效果。方法 采用低温凝胶技术制备了γ-PGA/HEMA/PEG聚合物晶胶。制备了兔的眼眶骨缺损模型，根据植入支架材料的不同分为3组，空白对照组、聚合物晶胶组（Gel组）、矿化聚合物晶胶组（M-gel组）。植入后8周和16周标本取材进行大体观察，通过影像学和组织学检查观察其血管生成和成骨效果。结果 影像学检查结果表明，支架材料能有效促进眶骨缺损的修复，缺损区被骨组织完全替代。组织学结果表明，支架材料可以增加Runt相关转录因子2（Runx-2）、碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）和血小板内皮细胞黏附分子1（CD31）的表达，这表明支架材料植入后血管生成和成骨能力增强。结论 矿化聚合物晶胶是一种良好的眼眶骨折缺损修复的支架材料。]]> 2023/6/20 16:50:17 165true 目的 多层生物介质的生物传感器被广泛应用于各大领域，其检测特性对于传感器优劣的评估尤为重要。本文目的在于量化表征多层生物介质的电学特征。方法 基于生物电阻抗谱技术来探究多层生物介质的电化学阻抗谱特性，并结合保角映射的方法来量化表征多层生物介质，阐明其对阻抗的影响规律，继而为生物传感器的研制与开发提供理论基础。有效提取各生物介质层修饰后电阻抗参数（Z*），从而量化表征多层生物介质层的电阻抗谱特性。结果 对多层模型进行了理论计算并构建了相关试验测试系统，研究结果表明，随着生物介质层的逐步修饰，检测区域电阻抗参数（Z*）在f=0.1~ 50 MHz下持续上升，理论计算结果趋势与试验结果趋势较好吻合，论证了此理论计算方法的正确性。结论 本文证实了可根据生物电阻抗谱和保角映射方法量化表征多层生物介质的电阻抗谱特性，对生物传感器的研制与开发有一定的实用价值。]]> 2023/6/20 16:50:25 164true 目的 采用电阻抗成像（electrical impedance tomography，EIT）方法研究神经肌肉电刺激（neuromuscular electrical stimulation，NMES）下小腿肌肉的电学特性，旨在将EIT作为一种长期监测方法，从而可视化NMES训练对人类小腿肌肉的训练效果。方法 16名实验对象被随机分配到对照组（control group，CG，n=8）和最佳电压强度的NMES训练组（optimal voltage intensity training group，OG，n=8）。对照组保持正常生活方式并不进行NMES和其他的肌肉训练；NMES训练组中使用商业NMES设备对实验对象右小腿进行23 min的NMES训练，每周3次，为期5周。应用EIT测量在每周一训练开始前的电导率分布。并且采用生物电阻抗分析（bioelectrical impedance analysis，BIA）方法测量右腿细胞外含水量与身体总含水量的比率（ECW/TBW）βrl，及身体总含水量（TBW）τ。为了量化NMES在肌肉训练过程中的作用，使用配对样本t检验分析EIT重建图像的空间平均电导率<σ>和BIA测量的βrl、τ。结果 对照组实验对象，右小腿肌肉电学特性及右腿细胞外液体积及身体总含水量与第1周无明显变化。然而，NMES训练组实验对象，右小腿肌肉M1肌肉隔室空间平均电导率<σ>M1及右腿细胞外液体积βrl与第1周相比有相同的增长趋势。结论 连续5周的EIT测量结果显示，NMES训练引起被刺激肌肉隔室空间平均电导率<σ>M1的增加，且第2周<σw2>M1增加最为明显，之后第3、4、5周相较于上一周均有增加但幅度明显小于第2周，这意味着肌肉纤维体积在第2周已发生明显增加，发生肌浆肥大现象，之后受试者逐渐适应NMES训练，肌肉生理响应变慢但仍在持续增长。因此，EIT能够作为一种长期监测方法有效评估NMES训练增加人类小腿肌肉纤维体积的效果。]]> 2023/6/20 16:50:28 163true 目的 当动物重复某种行为以逃避危险或获取奖励而无法成功时，会产生放弃。放弃是一种常见且基本的行为，在小鼠等模式动物中已经被广泛研究，但是其部分神经机制仍未被阐明。幼年斑马鱼适合进行全脑光学成像，是神经科学领域的重要模式生物。已经有研究者通过持续电击等消极刺激诱发斑马鱼放弃行为，然而奖励刺激能否引起斑马鱼放弃尚无报道。本文对奖励刺激引起的斑马鱼放弃行为进行了探究。方法 通过给予斑马鱼虚拟的食物视觉刺激，检验斑马鱼对虚拟食物的捕食情况，比较斑马鱼捕食频率和单次捕食时长随时间的变化。结果 虚拟的食物视觉刺激可以引起斑马鱼的捕食行为，接受25 min虚拟刺激后，8日龄以上斑马鱼的捕食频率和单次捕食时长均出现显著下降。结论 此研究丰富了斑马鱼放弃行为的研究范式，实验结果表明，缺失真实奖励的虚拟食物刺激可以诱导斑马鱼放弃捕食行为，这将进一步加深对动物放弃行为的理解，推动对其神经机制的研究。]]> 2023/6/20 16:50:41 162true 目的 金属表面对蛋白质分子具有吸附作用，然而在纳米尺度内，蛋白质分子构象受到狭缝的间距作用尚未明确。本文通过在分子动力学模拟中建立不同间距的金原子层，研究纳米级金属狭缝中蛋白质分子构象变化。方法 使用GOIP-CHARMM力场在Au （111） 金原子界面间对Aβ1-42蛋白单体进行分子动力学仿真，研究无狭缝的水溶液环境下和由5.0、5.5以及8.5 nm狭缝结构与Aβ蛋白相互作用及蛋白质构象变化。结果 当金狭缝结构间距从5.0 nm增加到8.5 nm，Aβ蛋白分子与两侧金层相互作用可由单表面吸附、双表面吸附过渡到无吸附。结论 Aβ蛋白分子在金狭缝结构中与表面发生相互作用，随狭缝间距和蛋白质分子距界面距离的变化，蛋白质分子的状态可能表现为单表面吸附、双表面吸附和无吸附3种状态。]]> 2023/6/20 0:00:00 161true 目的 深部脑刺激（deep brain stimulation，DBS）利用持续的电脉冲高频刺激（high-frequency stimulation，HFS）调控神经元的活动，可望用于治疗更多脑疾病。为了深入了解HFS的作用机制，促进DBS的发展，本文研究轴突HFS在引起轴突阻滞期间神经元胞体的改变。方法 在麻醉大鼠海马CA1区的锥体神经元轴突上施加脉冲频率为100 Hz的1 min逆向高频刺激（antidromic high-frequency stimulation，A-HFS）。为了研究胞体的响应，利用线性垂直排列的多通道微电极阵列，记录刺激位点上游CA1区锥体神经元胞体附近各结构分层上的诱发电位，包括A-HFS脉冲诱发的逆向群峰电位（antidromic population spike，APS）以及A-HFS期间施加的顺向测试脉冲诱发的顺向群峰电位（orthodromic population spike，OPS），并计算诱发电位的电流源密度（current-source density，CSD），用于分析A-HFS期间锥体神经元胞体附近动作电位的生成和传导。结果 锥体神经元轴突上的A-HFS会减小胞体对于逆向和顺向兴奋的传导速度。并且，这种胞体变化的发生和恢复都比A-HFS诱导的轴突阻滞要缓慢。结论 轴突上的持续高频刺激可以引起胞体产生变化，这种变化可能是胞体附近细胞膜电位改变所致。此发现有助于深入揭示脑神经系统电刺激的作用机制。]]> 2023/3/22 0:00:00 160true 目的 探讨组蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）对外周CD4+ T细胞分化及功能的调控作用。方法 采用CD4cre酶介导Hdac3杂合基因缺失小鼠（Hdac3fl/flCD4cre+/-）及其野生型正常对照小鼠（Hdac3fl/fl，WT），流式细胞术检测HDAC3缺失对外周CD4+和CD8+ T细胞比例和数量的影响；在体外佛波酯（PMA）和离子霉素（Ionomycin）刺激条件下，流式细胞术检测HDAC3缺失对CD4+ T细胞中IFN-γ、IL-4和IL-17A的表达以及Tfh细胞产生的影响；采用ELISA检测HDAC3缺失对小鼠血清IFN-γ、IL-4和IL-17表达的影响；分选Hdac3fl/flCD4cre+/-和WT小鼠外周初始CD4+ T细胞，分别在Th1和Th2分化条件下培养，细胞内染色检测HDAC3缺失对Th1、Th2以及Th17相关细胞因子及其特异转录因子表达的影响；采用Microarray检测HDAC3缺失对CD4+ T细胞分化亚群相关基因表达的影响；采用链脲佐菌素（STZ）处理小鼠构建I型糖尿病（TIDM）疾病模型，检测HDAC3缺失对T1DM发病的影响。结果 与WT小鼠相比，Hdac3fl/flCD4cre+/-小鼠外周CD4+和CD8+ T细胞的比例和数量显著降低。Hdac3fl/flCD4cre+/-小鼠CD4+ T细胞及血清中IFN-γ的表达显著降低，而IL-4和IL-17A的表达显著增加，Tfh细胞比例也显著增加；HDAC3缺失抑制体外培养CD4+ T细胞向Th1分化但促进其向Th2分化；Microarray检测发现HDAC3缺失导致Th1型细胞谱系基因表达降低，而Th2、Th17以及Tfh细胞谱系基因表达增加；在STZ诱导条件下，HDAC3缺失抑制小鼠T1DM的发生和CD4+ T细胞向Th1分化。结论 HDAC3促进外周CD4+ T细胞向Th1细胞分化并加重T1DM的发生。]]> 2023/3/22 0:00:00 159true 目的 重复经颅磁刺激（rTMS）作为一种无创的神经调控技术，对帕金森病（PD）患者的疗效目前尚未完全明确。本文结合临床量表评估、脑电溯源以及脑功能网络以探讨高频rTMS对强直迟缓亚型帕金森病（AR-PD）患者的作用效应。方法 共纳入18例AR-PD患者，利用标准低分辨率电磁断层成像（sLORETA）对脑电信号进行溯源分析，进而通过复杂网络理论构建脑功能网络，从脑区之间协同工作的角度对比分析网络拓扑特征。结果 磁刺激后前额叶、初级运动皮层出现显著性差异（P<0.05）；与运动感觉产生、运动规划和运动执行相关脑区的网络连通性显著增强（P<0.05）且脑功能网络的拓扑特征平均聚类系数的变化与帕金森病统一评定量表评分的变化存在显著相关性（P<0.05）。结论 推测rTMS改善了AR-PD患者在运动感觉产生到运动执行过程中的信息传递能力，本研究可为rTMS对AR-PD患者运动症状的改善作用与感觉运动网络重新整合的关系提供一定的理论依据。]]> 2023/3/22 0:00:00 158true 目的 运动训练已被证明能够改善许多慢性肌肉功能疾病，被用于治疗衰老型肌萎缩。本文采用电阻抗成像（electrical impedance tomography，EIT）研究人类小腿肌肉对运动训练生理响应的电学特性，旨在使用EIT方法可视化运动训练对人类小腿响应肌肉隔室内肌肉纤维体积增加的效果。方法 实验对象被要求在连续5个实验日进行左、右腿单侧提踵训练，应用EIT检测每日运动训练前和运动训练后小腿肌肉的电导率分布。为了定量分析运动训练对响应肌肉隔室的作用，使用配对样本t检验分析EIT重建图像的空间平均电导率<σ>。结果 运动训练后，由小腿腓肠肌组成的M1肌肉隔室空间平均电导率<σ>M1显著增加。此外，连续5个实验日的EIT测量结果显示，运动训练前的空间平均电导率<σpre>M1呈上升趋势。所有实验对象在实验日1早晨进行实验前的腿部瘦体重与<σ>M1呈线性关系，即<σ>M1随腿部瘦体重增加而增加；运动训练前和训练后腿部M1肌肉隔室空间平均电导率及空间平均电导率差比的增长趋势与细胞外液体积差比率相同。结论 由于电导率对细胞外水分量变化敏感，而细胞外液体积变化与肌浆肥大相关。在连续5 d的EIT测量中，空间平均电导率<σpre>M1呈上升趋势，这意味着肌肉纤维体积的增加，发生肌浆肥大现象。因此，EIT能够有效地评估运动训练增加人类小腿肌肉纤维体积的效果。]]> 2023/3/22 0:00:00 157true 目的 羊毛是高档纺织原料，羊毛的物理性质直接关系到羊毛品质。本研究旨在挖掘影响羊毛性状的基因，探索影响羊毛性状的复杂分子机制。方法 本研究选取萨福克羊和小尾寒羊各3只作为试验样本，取背部皮肤组织，采用转录组学（RNA-seq）和蛋白质组学测序分析造成羊毛性状差异的基因、蛋白质及相关信号通路。结果 转录组测序表明：测序完成后，共得到230 406 674个原始数据和222 049 370个干净数据，其中Q20碱基百分比为99.9%以上，Q30碱基百分比为98%以上。以差异倍数FC≥1.4或FC≤0.714且P<0.05作为标准，由此筛选出1 213个差异表达基因（DEGs），其中萨福克羊与小尾寒羊相比，上调基因有644个，下调基因有569个。GO富集发现中间丝、钙离子结合、角蛋白丝显著富集，表明其可能与羊毛性状相关。KEGG富集发现，影响羊毛性状的信号通路可能是ECM-受体相互作用。蛋白质组测序表明：以差异倍数FC≥1.4或FC≤0.714且P<0.05作为标准，由此筛选出99个差异表达蛋白（DEPs），其中萨福克羊与小尾寒羊相比，上调蛋白有47个，下调蛋白有52个。GO富集发现中间丝等显著富集，表明其可能与羊毛性状相关。KEGG富集发现，影响羊毛性状的信号通路可能是过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）信号通路和ECM-受体相互作用。转录组与蛋白质组联合分析发现：转录组和蛋白质组均检测到的显著差异基因共有15个，其中13个为正相关，2个为负相关。中间丝显著富集，其中涉及的KRT35、KRT13、KAP13-1-like基因可能是影响羊毛性状的关键候选基因，PPAR信号通路显著富集，可能是影响羊毛性状的关键候选通路，FABP4基因可能是影响羊毛性状的关键候选基因。结论 KRT35可能影响羊毛直径和弯曲；KRT13可能影响羊毛分化；KAP13-1-like可能影响羊毛硬度和韧性；FABP4可能影响羊毛直径。这些结果将扩展对影响绵羊羊毛性状的复杂分子机制的理解，并为后续的研究提供基础。]]> 2023/3/22 0:00:00 156true 目的 构建细胞通信网络有助于揭示细胞间协同工作机制、生物学过程和疾病发病机理。目前基于配体-受体相互作用构建细胞通信网络的方法大多只考虑配体和受体的表达信息，忽略了受体对其调控基因的信号传递影响，导致构建的细胞通信网络可靠性较低。鉴于此，本文提出IRRG算法，旨在构建更为准确的细胞通信网络，并挖掘具有生物学意义的细胞通信模式。方法 本文提出了一种整合受体调控基因表达信息构建细胞通信网络的方法（命名为IRRG）。该方法通过随机游走方式计算受体对下游基因的影响得分，进而与配体-受体共表达量结合构建细胞通信网络。结果 使用IRRG构建了小鼠滤泡间表皮（IFE）细胞通信网络并分析了配体-受体对的生物学意义，验证了IRRG计算受体影响得分的稳定性和细胞通信网络构建的可靠性。此外，使用IRRG构建了透明细胞肾细胞癌（ccRCC）的细胞通信网络，挖掘并分析其肿瘤微环境细胞通信模式。结论 IRRG可以构建富有生物学意义并且可靠的细胞通信网络，帮助人们从细胞通信的角度更深入地了解多种生物过程。IRRG算法代码可从GitHub获取：https://github.com/NWPU-903PR/IRRG。]]> 2023/3/22 0:00:00 155true 目的 抗癌药物联合疗法是一种很有前途的治疗策略。针对特定癌症类型，选择高度协同的药物组合，对提高癌症疗效至关重要。然而，确定具有协同作用的药物组合是一项复杂而困难的工作。本研究旨在完全以数据驱动、计算建模的方式优化抗癌药物组合高通量虚拟筛选，为“旧药重新定位新组合”提供理论参考。方法 借鉴矩阵填充思想，构建了基于核范数正则化的计算模型NNRM，用于预测抗癌药物组合的协同得分和协同状态。针对固定细胞系构造对称的协同得分观测矩阵；采用分折技巧将观测矩阵稀疏化；借助“交替方向乘子法”和“软阈值估计”求解模型。结果 将NNRM应用于O"Neil团队发布的数据集，预测的协同得分与观测值之间的均方根误差为14.78，预测的协同状态准确率为0.94，优于随机森林（RF）和支持向量机（SVM），完全可以与深度学习模型相媲美。此外，NNRM预测的部分缺失值结果与已有研究或临床实践相吻合。结论 NNRM可实现大规模、批量预测抗癌药物组合的协同作用，极大地降低了已有模型对数据的要求和计算成本，缩短了高通量虚拟筛选的测试时间，可以作为抗癌药物组合高通量虚拟筛选的可选择工具。]]> 2023/3/22 0:00:00 154true 目的 本文通过开展白癜风患者病变表皮与正常表皮的比较蛋白质组学研究，发现和鉴定白癜风患者病变表皮与正常表皮之间的差异表达蛋白，以探讨白癜风患者表皮发生病变的分子机制。方法 首先，建立和优化了表皮样品中蛋白质的最佳酶切条件。其次，采用基于串联质谱标签（TMT）标记的定量蛋白质组学技术策略开展了稳定期白癜风患者病变表皮与正常表皮的比较蛋白质组学研究，并筛选了差异表达蛋白。最后通过生物信息学分析工具及数据库（GO、KEGG、STRING、GSEA）对差异蛋白进行功能富集分析。结果 优化所得到的最佳酶解条件是由Lys-C（酶∶底物，1∶100）和胰酶（酶∶底物，1∶50）组合而成的顺序酶切。比较蛋白质组学研究共鉴定4 496个蛋白质，其中181个蛋白质为白癜风患者病变表皮中的差异表达蛋白。生物信息学分析表明差异表达蛋白主要与代谢、免疫、氧化还原和细胞黏附相关。其中119个上调蛋白主要参与角质化、转录、氧化应激及蛋白酶解等过程。62个下调蛋白主要参与细胞内物质运输、谷胱甘肽代谢和肌动蛋白细丝封端等过程。结论 比较蛋白质组学研究揭示了白癜风患者病变表皮与正常表皮之间主要存在角质化、免疫、脂质代谢和氧化还原等方面的功能差异，发现了PRDX1、PRDX2、EEF2、ITGB1、SPTBN2、ANXA1及PFKL等蛋白质为潜在的白癜风患者病变表皮功能失调的关键蛋白质。]]> 2023/2/22 0:00:00 153true 目的 本研究旨在观察不同持续时间的模拟失重对大鼠抑郁样行为和海马超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）的影响，以探究其影响及可能的作用机制。方法 采用后肢悬挂（HLS）尾吊法模拟大鼠失重状态。将大鼠分为对照组和不同模拟失重时间尾吊组（尾吊时长分别为1、2、3、4周）。采用旷场实验（OFT）、新物体识别实验（NORT）、强迫游泳实验（FST）观察大鼠抑郁样行为，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定海马SOD和CAT活性。结果 OFT结果显示，与对照组相比，HLS不同时间大鼠的僵滞时间增加（P<0.05，P<0.01）。在NORT中，与对照组相比，HLS不同时间大鼠对新物体的探索潜伏期增加，探索次数和时间减少（P<0.05，P<0.01）。在FST中，与对照组相比，HLS不同时间大鼠在FST中的不动时间增加，攀爬次数减少（P<0.05，P<0.01）。与对照组相比，HLS不同时间组大鼠海马组织中SOD和CAT水平均下降（P<0.05，P<0.01）。结论 短时间或长时间的失重都会导致大鼠产生类抑郁样行为。]]> 2023/2/22 0:00:00 152true 目的 为了探究CRISPR-Cas系统的靶标特点。方法 运用了包括BALST在内的多种生物信息学分析技术和方法对洋山港宏病毒组数据进行了分析。结果 洋山港宏病毒组数据集中共有25 391条双链DNA病毒序列，其中238条序列上的265个开放读码框（ORF）与134条规律间隔短回文重复（CRISPR）间隔序列产生了315个匹配。经注释后获得了128个ORF和135个匹配的功能信息，占比前5位的依次为终止酶（terminase）、衣壳蛋白（capsid protein）、门蛋白（portal protein）、肽酶（peptidase）和DNA甲基化转移酶（DNA methyltransferase）。匹配多在病毒特定功能基因的保守域或关键结构域中。这表明，CRISPR-Cas系统发挥免疫功能时表现出针对病毒特定基因、功能和结构域的靶标特异性。此外，属于Class 1门类下的Type_I型系统的CRISPR-Cas间隔序列匹配数量远高于其他类型系统，占总数的89.0%。结论 本文的研究结果揭示了CRISPR-Cas系统的靶标偏好，增进了对其的认识，为更好地理解病毒-宿主免疫互作机制提供了新的证据和线索。]]> 2023/2/22 0:00:00 151true Objective DUF538 (domain of unknown function 538) domain containing proteins are known as putative hypothetical proteins in plants. Until yet, there is no much information regarding their structure and function.Methods In the present research work, the homologous structures and binding potentials were identified between plant/mammalian lipocalins and plant DUF538 protein by using bioinformatics and experimental tools including molecular dynamics simulation, molecular docking and recombinant technology-based techniques.Results Molecular docking analysis of their interactions with lipidic ligands including cholesterol and palmitic acid revealed the similar and comparable binding potentials between DUF538 and lipocalin proteins. Both the test proteins were found to have more affinity to cholesterol molecule in compare to palmitic acid. By using recombinant technology-based experiments, the heterologously expressed and purified fused product of DUF538 protein exhibited about 61% cholesterol binding ability.Conclusion As a conclusion, plants DUF538 protein family was predicted to be the structural and may be the functional homologues of plants/animals lipocalin superfamily.]]> 2023/2/22 0:00:00 150true 目的 治疗艾滋病最大的障碍在于无法根除人类免疫缺陷病毒（HIV）潜伏于人体细胞所形成的病毒存储库。构建描述病毒存储库建立分子机制的动力学模型需考虑生物体内的噪声环境和多重影响因素，本文通过一种全新的动力学结构分解方法将随机微分方程的确定性部分与随机性噪声分开，从而在仅需分析常微分方程不动点的情况下即可判断不同药物靶点的作用效果。方法 使用连续的随机微分方程构建了HIV转录过程的动力学模型，简化了描述系统所需方程的维度，增大了模型的可探索空间，在此基础上，通过计算得到的势能函数和概率分布函数直观表示病毒潜伏与激活的不同表达状态以及它们之间的关系。结果 定量分析了不同动力学参数对系统稳态和势函数的影响程度，分别得到了系统处于双稳态和单稳态时的参数范围，并将不同因素对动力系统分岔的影响程度与生物学实验结果对比，验证了本工作的理论基础。结论 本文突破了以往离散、随机的方法，可以通过常微分方程定量分析HIV转录调控的动力学机制，有利于推广到处理高维情况，进一步研究艾滋病在生物体内的发生发展，从而指导设计实验寻找临床上的治疗方案。]]> 2023/2/22 0:00:00 149true 目的 重复经颅磁刺激（rTMS）技术已广泛应用在临床中，实现对神经、精神类疾病的治疗，特别在抑郁症、强迫症中取得较好的临床治疗效果。近年来越来越多的研究将其应用于帕金森病（PD）的辅助、康复治疗，以期缓解患者的运动症状改善运动功能。目前临床中多以PD统一量表、运动任务评估rTMS对运动症状的辅助治疗效果，缺乏对高频rTMS刺激调控作用机制的探究。方法 本研究采用10 Hz rTMS刺激肢体症状始发侧对侧初级运动皮层（M1），对比分析刺激前后各脑区神经元活动及其连接性的变化，研究高频rTMS刺激初级运动皮层对PD患者大脑神经元活动的调节作用。结果 运动皮层beta振荡增加、gamma振荡降低（P<0.05），额、顶叶脑区间连接性减弱（P<0.05）。结论 10 Hz rTMS主要改变了PD患者beta、gamma振荡，其中运动皮层beta、gamma神经振荡的变化可能与磁刺激对运动功能的改善作用有关，而前额叶gamma振荡的变化可能是磁刺激抑制神经元异常放电活动调节患者运动控制功能。]]> 2023/1/16 15:04:20 148true 目的 β分泌酶1（BACE1）是阿尔茨海默病患者脑中淀粉样蛋白（Aβ）产生的关键酶。肌养蛋白聚糖 （dystroglycan，DG）帮助星形胶质细胞的终足锚定在脑血管上，形成一道支持血脑屏障的胶质界限。一项无靶标蛋白质组学研究指出BACE1可能会下调DG的表达水平。本文旨在研究BACE1能否调控DG的蛋白质水平及其可能的调控机制。方法 利用瞬时转染法在HEK-293T细胞系和原代培养的小鼠星形胶质细胞中表达目的蛋白。通过蛋白质免疫印迹分析目标蛋白质的相对水平。利用基因荧光定量和免疫共沉淀技术探索BACE1调控DG的潜在机制。结果 在HEK-293T和原代小鼠星形胶质细胞中引入BACE1会使DG β亚基（β-DG）的蛋白质水平显著降低。在HEK-293T细胞中，β-DG蛋白水平的下降依赖于BACE1的酶活性。结论 在HEK-293T细胞和小鼠星形胶质细胞中，BACE1使β-DG的蛋白质水平下降。]]> 2023/1/16 15:04:23 147true 目的 本研究旨在探讨细胞外基质刚度变化对神经干细胞（neural stem cells，NSCs）分化的影响及其作用机制。方法 本研究基于成功构建脊髓损伤大鼠模型，并制备不同刚度（0.7 kPa、40 kPa）的聚丙烯酰胺凝胶基底，将大鼠原代NSCs于不同刚度基底上培养。压电型机械敏感离子通道组件1（piezo type mechanosensitive ion channel component 1，Piezo1）shRNA质粒转染NSCs细胞。免疫荧光染色检测神经元标志物双皮质醇（doublecortion，DCX）和星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）阳性细胞百分比。免疫组织化学及蛋白质免疫印迹（Western blot）法检测损伤组织及NSCs细胞中Piezo1蛋白的表达水平。结果 与0.7 kPa基质刚度组相比，40 kPa基质刚度组中DCX阳性细胞数增加，而GFAP阳性细胞数减少，Piezo1蛋白表达量上升。脊髓损伤大鼠损伤组织Piezo1蛋白表达显著高于空白对照（sham）组。40 kPa基质刚度条件下沉默Piezo1后，DCX阳性细胞数减少，而GFAP阳性细胞数增加，差异具有统计学意义（P<0.05）。机制研究发现，沉默Piezo1导致IV型胶原及纤连蛋白表达下降。重组纤连蛋白逆转了Piezo1 shRNA对NSCs分化的影响，即DCX阳性细胞数增加，而GFAP阳性细胞数减少。结论 综上可见，硬基底刚度通过促进Piezo1蛋白表达，上调IV型胶原及纤连蛋白表达，从而调控NSCs细胞分化。本研究为基于生物材料治疗脊髓损伤提供了新的视角。]]> 2023/1/16 15:04:34 146true 目的 研究紫丁香苷的抗乳腺癌作用及分子机制，为紫丁香苷的临床应用提供理论依据。方法 MTT检测紫丁香苷对乳腺癌细胞增殖的抑制作用；台盼蓝、TUNEL和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞的凋亡状况，Western bolt检测Caspase-3的活化情况，判断细胞凋亡是否发生；检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）的表达，结合JC-1染色探讨紫丁香苷对线粒体凋亡途径的影响；运用PI3K激动剂Recilisib做对比，qRT-PCR和Western bolt检测紫丁香苷调控PI3K/Akt/mTOR通路诱导癌细胞凋亡的作用。结果 紫丁香苷对乳腺癌细胞的增殖具有时间和剂量依赖的抑制作用，能诱导癌细胞发生凋亡。进一步研究发现，紫丁香苷处理后，细胞内Caspase-3被激活，Bcl-2表达下降，线粒体膜电位明显丧失，PI3K、Akt和mTOR的mRNA与蛋白质水平表达无明显变化，但蛋白质磷酸化水平明显下降；Recilisib处理后部分抵消了紫丁香苷对乳腺癌细胞凋亡的作用。结论 紫丁香苷对乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7具有良好的抑制作用，其通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路的活化来抑制细胞增殖并诱导细胞发生线粒体途径的凋亡。紫丁香苷是具有开发潜力的抗乳腺癌药物。]]> 2023/12/22 11:25:40 145true 目的 阐明金属纳米材料（MNPs）对组蛋白H3第10位丝氨酸磷酸化（p-H3S10）修饰变化的影响，探讨典型MNPs暴露后细胞全基因表达的变化，为MNPs早期毒性筛选提供理论基础。方法 通过蛋白质免疫印迹及流式细胞术等方法评价了10种MNPs对p-H3S10修饰变化的影响。此外，利用转录组测序技术在转录水平上探讨了1种典型MNPs——纳米氧化铜对细胞全基因表达的影响。结果 除纳米氧化镍外，其余用于测试的9种MNPs均在不同程度上诱导了p-H3S10。进一步分析发现，MNPs诱导的p-H3S10与MNPs的细胞内蓄积高度相关，且细胞内金属离子的持续释放可能是MNPs诱导 p-H3S10的关键因素之一。另外，转录组测序的结果表明，纳米氧化铜的暴露导致了275个基因的显著差异表达（P<0.05），其中185个基因上调，90个基因下调。基因本体分析表明，在分子功能类别中，排名靠前的术语包括与多种转录因子活性、序列特异性DNA结合及丝裂原活化蛋白激酶活性相关的术语。京都基因和基因组百科全书分析表明，纳米氧化铜暴露后丝裂原活化蛋白激酶的信号级联显著上调。结论 MNPs的细胞内蓄积与其早期诱导的p-H3S10表达高度相关，并且细胞内MNPs持续释放的金属离子可能会在MNPs进入细胞后的很长一段时间内持续诱导p-H3S10的高表达。综上，p-H3S10具有作为评估MNPs毒性的生物标志物的潜力。]]> 2023/12/22 11:26:09 144true 目的 研究构建基于共祖（identity-by-descent，IBD）片段算法预测远亲缘关系分析流程并评估预测准确性。方法 采用高密度单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）芯片对253份家系样本进行检测，研究基于IBD片段算法的分析流程进行两两个体间亲缘关系预测，评估预测准确性。随机减少SNP位点，评估位点数对算法预测准确性的影响。结果 IBD片段算法预测1~7级亲缘关系平均置信区间准确率为94.72%，预测可信度为99.77%，6级及以上亲缘关系预测时出现假阴性。随着SNP数量减少，预测准确性会出现一定程度的下降。结论 IBD片段算法可用于7级以内亲缘关系的预测，该算法在群体遗传学、法医遗传学等领域有重要应用价值。]]> 2023/12/22 11:27:00 143true 目的 探究角质细胞中的温热信息是如何被传导至下游背根神经节（DRG）中的TRPA1离子通道。方法 采用单细胞钙离子成像技术，利用TRPA1过表达系统以及野生型和TRPA1基因敲除小鼠，联合TRPA1激动剂（BITC）和抑制剂（HC-030031）检测H2O2在DRG神经元温热感知中的作用及其与TRPA1的相关性。在不同温热条件下培养皮肤角质细胞，并提取角质细胞RNA；采用RNA-seq分析比较不同温度培养的角质细胞基因表达异同，筛选皮肤角质细胞传导温热信息的候选因子。结果 过表达TRPA1以及DRG神经元中的TRPA1均可在H2O2存在情况下被温热激活，而温热范围内不同温度可影响皮肤角质细胞中与H2O2产生有关的趋化因子配体2（CCL2）和核心蛋白聚糖（DCN）基因的表达。结论 H2O2相关因子可能参与TRPA1介导的温热传导过程。]]> 2023/12/22 11:27:02 142true 目的 对于中心视力受损的人群，新型人工视觉系统可以将简化后的图像投射到视网膜上黄斑区以外的区域，从而帮助他们利用周边视觉感知信息。本文探究周边视野的感知特征，为植入式光学人工视觉系统的图形编码设计提供依据。方法 设计了探索周边视野感知特征的实验环境，向被试施加符号、数字、汉字的图案刺激，并控制刺激的大小、颜色组合、偏离角度、运动情况。用图形化的方法分析感知能力与各变量的关系。结果 周边视野的感知能力随偏离角度增大而下降，其趋势分为两个阶段，且受颜色组合、大小的影响明显。结论 研究结果提供了感知识别率较高的变量组合，为人工视觉系统的光学投影、眼内光学植入装置、特殊通信彩色符号编码开发等“人机结合”新技术提供重要的实验依据。]]> 2023/12/22 11:27:14 141true 目的 诸多研究证实高糖饮食会对视觉功能造成损伤，但是目前关于高糖饮食对视觉功能影响的研究主要聚焦于视觉通路前端，集中在眼球系统和视神经节部分，对于视觉通路的后端如中枢皮层还未有过相关报道。为了更全面地了解高糖饮食对视觉功能的影响，本文补充高糖饮食对视觉中枢皮层影响的研究。方法 本研究利用GO/NO-GO方位辨别任务的行为学范式、在体多通道电生理技术探究了高糖饮食对青年小鼠初级视觉皮层的影响。结果 行为学结果表明，经历了2个月高糖喂养的青年小鼠，方位辨别能力下降。通过电生理技术分析初级视觉皮层（V1）单个神经元的反应特性，发现高糖饮食小鼠初级视觉皮层单个神经元的方位调谐能力下降，神经元的反应变异性增加、信噪比明显降低。神经元噪音相关性分析结果表明，高糖饮食组小鼠初级视觉皮层的噪音相关性表现出明显的上调。进一步分析群体水平上信噪比和反应变异性的变化，结果表明群体水平上信噪比明显下降而反应变异性明显上升。结论 高糖饮食通过影响初级视觉皮层单个神经元的感受野特征以及群体神经元的信息处理能力，损伤了青年小鼠的方位辨别能力。]]> 2023/12/22 11:27:17 140true 目的 单原子纳米酶（single-atom nanozyme，SAN）因其高原子利用率及丰富的类酶活性被广泛研究。但是目前大多数SAN活性位点负载量较低，限制了其进一步应用和发展。本研究旨在制备一种高原子负载量的SAN，并对其类酶活性进行系统研究，希望为高负载SAN的制备提供思路，并为SAN在更广泛领域的应用提供理论支持。方法 本研究通过原位锚定策略将金属盐前驱体锚定在氨基化石墨烯量子点框架中，在惰性气体保护下进行高温热解稳定Cu原子和载体之间的化学键，制备出负载量高达7.66%（质量百分比）的高负载Cu单原子纳米酶（high-loading Cu SAN）。此外，以3,3",5,5"-四甲基联苯胺（TMB）和氮蓝四唑（NBT）为显色剂，评估了high-loading Cu SAN的类过氧化物酶（POD）、类氧化物酶（OXD）及类超氧化物歧化酶（SOD）活性，并与传统金属有机框架锚定法制备的低负载Cu单原子纳米酶（low-loading Cu SAN）作比较。以过氧化氢（H2O2）为催化底物，对比研究了高/低负载Cu SAN的类过氧化氢酶（CAT）活性。结果 研究表明，本文制备的高负载Cu SAN的类POD和SOD活性分别是低负载Cu SAN的3.4倍和8.88倍，且表现出类酶催化选择性。结论 本研究为高负载SAN的制备和活性研究提供了思路，为SAN在检测传感、疾病治疗以及环境保护等方面的应用奠定了基础。]]> 2023/11/22 0:00:00 139true 目的 oxLDL可上调Plin2的表达，进而促进泡沫细胞的形成，LOX1是oxLDL的受体。本文探讨Plin2与LOX1在动脉粥样硬化发生发展过程中的关系。方法 从GEO数据库中下载GSE43292，分析Plin2、LOX1的表达及Plin2、LOX1与NF-κB信号通路的相关性。采用oxLDL处理的RAW264.7细胞作为动脉粥样硬化的细胞模型进行研究，蛋白质免疫印迹法检测细胞中Plin2、LOX1和p-p65的表达，荧光中性脂质染料BODIPY 493/503染色法检测细胞内脂滴。结果 通过分析GSE43292数据发现，Plin2、LOX1在颈动脉粥样硬化斑块中的表达显著高于颈动脉邻近组织。oxLDL处理RAW264.7细胞24 h后，Plin2与LOX1的表达、细胞内脂滴明显增加。过表达Plin2的细胞中LOX1表达升高；当用oxLDL孵育过表达Plin2的细胞后，LOX1的水平升高更为显著；但在没有oxLDL处理的情况下，敲减Plin2对细胞内LOX1的表达没有影响。基因集富集分析（gene set enrichment analysis，GSEA）结果显示，在动脉粥样硬化中，Plin2和LOX1的表达与NF-κB的活化呈正相关。此外，尽管采用oxLDL处理细胞，NF-κB抑制剂JSH-23预处理仍可显著降低Plin2与LOX1的表达、细胞内的脂质积聚，过表达Plin2后，JSH-23亦能显著抑制oxLDL孵育的细胞中Plin2和LOX1的表达。结论 Plin2可通过上调LOX1的表达促进细胞内脂质积聚，参与动脉粥样硬化，这一过程至少部分是通过激活NF-κB通路实现的。]]> 2023/11/22 14:29:45 138true 目的 探究趋化因子CCL11与受体CCR3、糖胺聚糖（glycosaminoglycans，GAGs）相互作用过程及机制，为深入阐明CCL11-GAGs-CCR3相互作用关系提供理论参考。方法 利用基因工程技术，构建筛选了CCR3-EGFP单分子表达水平的CHO稳转细胞系，利用全内反射荧光成像（total internal reflection fluorescence，TIRF）与等温滴定量热（isothermal titration calorimetry，ITC）技术研究了不同体外溶液条件下GAGs与CCL11的相互作用，并利用趋化实验及活细胞单分子成像实验考察了GAGs-CCL11对CCR3-EGFP稳转细胞趋化行为的调控及CCR3-EGFP在细胞膜上聚集状态的影响。结果 随着硫酸软骨素链长度的增加，其与CCL11结合放热增多，表明其相互作用力增强，其促进CCL11聚集作用增强。单分子荧光成像技术结合趋化试验研究发现，不同种类及不同比例的GAGs均会影响CCL11与CCR3的相互作用，GAGs的加入，抑制了CCL11对CCR3-EGFP稳转细胞的趋化效应及促CCR3-EGFP聚集的能力，且随着硫酸软骨素分子质量的增加，抑制作用显著增强。结论 GAGs的存在可以显著调控CCL11的聚集状态，进而影响其与受体CCR3的相互作用，本研究为进一步阐明CCL11-GAGs-CCR3相互作用关系提供了一定的实验基础。]]> 2023/11/22 0:00:00 137true 目的 老龄化是日益严重的社会性问题。老年人的认知功能，如注意等，出现了明显的衰退。探究老化过程中视觉注意调控网络的改变有助于理解老年人认知功能衰退的神经机制，并为寻找潜在的干预方式提供理论基础。方法 本研究采用经典的双目标注意任务：被试仅需全程注视屏幕中心的黑十字。黑十字左右两侧13.5°视角度会呈现两个相同的视觉圆点，800~1 200 ms后其中随机一个目标会发生改变或者不变。通过采集该视觉注意任务期间的脑电活动信号，比较青年人与老年人在视觉目标改变和不变两种条件下的大脑活动。结果 实验发现在青年人中，额叶、顶叶和颞叶等脑区的电极记录到的神经电活动特征对视觉目标是否改变存在显著性差别，而老年人的脑活动对该视觉目标改变无显著性变化。此外，还发现该脑网络的变化在青年人和老年人中均存在性别差异。结论 注意任务下老年人脑网络难以对外界视觉信息输入做出及时响应，老化过程伴随视觉注意调控网络（额叶、顶叶和颞叶等）功能的衰退，该脑网络的变化存在性别差异。本研究为老化引起视觉注意调控网络损伤提供了新的证据。]]> 2023/11/22 14:31:03 136true 目的 蝙蝠耳蜗外听毛细胞产生的耳蜗微音器电位（cochlear microphonic，CM）信号包含有耳蜗基底膜运动的相关信息。本研究旨在通过分析调频（frequency modulation，FM）蝙蝠CM信号与其接收声波频率之间的关系，以探究蝙蝠耳蜗神经对回声定位的影响机制。方法 通过在腹侧耳蜗核放置一组金属电极，记录并分析FM蝙蝠（Eptesicus和Pipistrellus）CM信号对猝发声（tone burst）的刺激响应。结果 两种不同种类的FM蝙蝠（Eptesicus和Pipistrellus）在高声压刺激时，CM信号均值频率响应曲线均表现出在较窄的特定频率段发声明显凹陷。对于Eptesicus，其CM信号均值频率响应曲线在一次谐波和二次谐波的截止频率（terminal frequency，TF）两侧均有明显波谷，这些波谷凹陷从15 kHz起以 15 kHz的频率间隔重复出现；对于Pipistrellus，CM信号均值频率响应曲线仅在一次谐波两侧有明显波谷。结论 CM信号表现出的抑制作用与FM蝙蝠一次谐波和二次谐波TF之间的关系，反映出耳蜗神经对特定频率会产生抑制作用，这种抑制作用有助于蝙蝠提取调制到TF附近的目标定位信息。]]> 2023/11/22 14:31:12 135true 目的 东亚疆域辽阔，民族众多，有着广泛多样的语言。中国34个省级行政区可划分为7个地理分区，人群主要分属世界七大语系。已有研究主要集中在东亚人群的起源、迁徙、融合等遗传历史。本文基于5 147份世界人群个体的高密度单核苷酸多态性（SNP）数据，从地域及语言两个角度研究东亚人群尤其是中国人群与世界其他人群的遗传关系，研究中国人群的遗传关系和遗传结构。方法 收集了5 147份世界人群个体的高密度SNP数据，并对其进行质控、合并。通过频率差异分析方法对最终获得的32 789个SNP进行统计学检验，并进一步使用主成分分析、系统发育树、祖先成分分析和D检验统计等方法，对东亚人群与世界其他人群的遗传关系，以及中国人群的遗传关系和遗传结构进行研究。结果 研究发现东亚人群与非洲、美洲和欧洲人群存在显著差异。中国人群可分为7个亚群，不同人群间的遗传聚类与其地理分布、语系语族和族源历史有很强的相关性。结论 本文研究了中国人群与世界人群的遗传关系和差异，并系统研究了中国人群的遗传亚结构。这将丰富东亚人群的群体遗传学、法医遗传学等研究基础，为个体化医疗等工作提供数据支撑。]]> 2023/11/22 0:00:00 134true 目的 通过全基因组测序（whole genome sequencing，WGS）获得高密度单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）分型数据，评估分型准确性，研究建立WGS数据用于法医SNP系谱推断的方法。方法 通过华大MGISEQ-200RS测序平台对样本进行深度为30×的WGS，从测序数据中提取Wegene GSA芯片中的645 199个常染色体SNP位点，质控过滤后运用IBS/IBD算法计算预测亲缘关系，并对样本的族群来源进行分析。结果 从测序数据中提取的SNP分型与Wegene GSA芯片分型的一致率大于99.62%。测序获得的SNP数据使用IBS算法可预测1~4级亲缘关系，4级亲缘预测置信区间准确性达100%，使用IBD算法可预测1~7级亲缘关系，7级亲缘预测为有亲缘关系的准确性达100%，通过高深度WGS数据获取的SNP系谱推断能力与芯片预测结果无显著差异。同时，WGS数据用于族群推断与调查结果一致。结论 WGS技术可应用于法医SNP系谱推断，为案件侦破提供线索。]]> 2023/11/22 14:32:10 133true 目的 基于生物阻抗谱（bioelectrical impedance spectroscopy，BIS）技术，提出一种免标记的生物细胞活性实时检测方法。该方法依据不同浓度、生理、病理状态下细胞组织的电学特性差异来判断细胞是否具有活性，以协助医师在临床手术中快速精准定位患者烫伤组织并实现有效切除。方法 使用具有活性的斑马鱼胚胎干细胞来模拟人体烫伤组织，采用生物阻抗谱技术来鉴别细胞组织的生理状态。结果 在不同状态下，细胞的阻抗幅值变化有显著的差异，可以从中发现同等浓度下活性细胞的阻抗幅值比死亡细胞平均高出17.25%，活性细胞发生弛豫频率的时间也比死亡细胞早25%。结论 实验数据表明，生物阻抗谱法能有效区分胚胎干细胞的两类生理状态；从聚类区域中可以看出，BIS检测法具有明显的细胞活性及浓度区分能力，理论上能够快速地协助医师完成对患者烫伤组织检测。]]> 2023/11/22 14:32:29 132true 目的 探讨8周有氧运动对丙戊酸钠（sodium valproate，VPA）诱导的雌雄孤独症小鼠核心行为的改善作用。方法 将实验动物随机分为对照组（CTL）、丙戊酸诱导孤独症组（VPA）和VPA+有氧运动组（VEX），每组10只。孕鼠在E12.5时腹腔单次注射VPA，其子代可作为孤独症模型。子鼠出生28 d后开始有氧运动训练。运动结束后次日通过行为学检测方法考察小鼠进行社交能力、重复刻板行为、认知和学习记忆能力、探索行为、情绪等。结果 CTL组小鼠与社会伙伴互动时间长，对新社会伙伴有明显社交倾向（P<0.01）；VPA组雌雄小鼠对新旧社会伙伴均无明显差异；有氧运动可显著改善孤独症小鼠这一缺陷。与CTL组相比，VPA组小鼠认知指数、目标象限停留时间、穿台次数、中心区域活动距离、开放臂停留时间和白箱活动的距离、时间均显著性降低（P<0.01），而寻找平台潜伏期，埋珠颗数和自梳理时间均显著性增加（P<0.01）；与VPA组相比，VEX组小鼠在有氧运动干预后认知指数、目标象限停留时间、穿台次数、中心区活动距离、开放臂停留时间均显著性增高（P<0.05），埋珠颗数和自梳理时间显著性降低（P<0.01，P<0.05）。结论 孤独症小鼠存在社交和认知能力障碍、重复刻板行为、活动量下降和焦虑情绪现象。8周有氧运动可改善孤独症小鼠社交和认知能力，缓解刻板重复行为，提高活动量，积极调节焦虑情绪。推测有氧运动在孤独症的运动康复中具有重要作用，可能为临床研究提供理论基础。]]> 2024/6/27 18:45:12 131true 目的 为了探讨黏蛋白1（MUC1）对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）细胞增殖与凋亡的影响及其调控机制。方法 收集泉州市第一医院2020年10月~2021年7月60例NPC及配对癌旁正常组织。采用实时定量PCR（real-time quantitative PCR）检测MUC1在NPC患者中的表达。将对照siRNA或靶向MUC1的siRNA（si-MUC1）转染5-8F和HNE1细胞。分别用CCK-8和集落形成实验分析5-8F和HNE1细胞的增殖，流式细胞术分析5-8F和HNE1凋亡情况；qPCR和ELISA检测TNF-α和IL-6水平；Western blot检测MUC1、NF-кB及凋亡相关蛋白的表达。结果 MUC1在NPC组织中表达上调；MUC1高表达的NPC患者易发生EBV感染、NPC增长和转移；MUC1的缺失抑制了NPC细胞的增殖和凋亡等恶性生物学行为，下调p-IкB、p-P65和Bcl-2的表达，上调Bax的表达。结论 MUC1下调可通过失活NF-κB信号通路抑制NPC恶性生物学行为。]]> 2024/9/19 20:43:11 130true 目的 物质吸收入血主要基于肠-淋巴途径和门静脉途径，门静脉途径具有肝脏的生物转化作用，而肠-淋巴途径并不具备生物转化作用，其转运的物质直接进入到血液循环影响机体。本文拟探究饮酒后肠-淋巴途径所转运的物质变化及其危害性。方法 将雄性Wistar大鼠分为高、中、低剂量饮酒组和饮水组，采用灌胃的方式，分别灌胃56、28、5.6度白酒和水，10 ml·kg-1·d-1，共进行10 d，之后收集肠系膜淋巴液进行液相色谱-质谱法（liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS）非靶向代谢组学分析与生物信息学分析。结果 高剂量饮酒组肠系膜淋巴液中代谢物变化最大，通过对差异代谢物进行代谢组-京都基因和基因组数据库（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）富集分析发现：高剂量饮酒组与对照组差异代谢物主要富集于癌症中的中心碳代谢、胆汁分泌、亚油酸代谢、不饱和脂肪酸的合成等通路；差异代谢物主要关联疾病有精神分裂症、阿尔茨海默病、肺癌等。中剂量与对照组的差异代谢物主要富集于苯丙氨酸代谢，缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成，亚油酸代谢，胆固醇代谢等通路；差异代谢物主要关联疾病有精神分裂症、阿尔茨海默病、肺癌、帕金森病等。随着饮酒剂量的增加，淋巴液中与疾病相关的代谢物胆固醇（Cholesterol）、L-亮氨酸（L-Leucine）、富马酸（Fumaric acid）、甘露醇（Mannitol）含量增加，与精神分裂症相关的代谢物数目也有增多趋势，表明经肠-淋巴途径吸收的一些代谢物对酒精具有剂量依赖性。结论 饮酒后肠系膜淋巴液中大量代谢物发生了变化，尤其是高剂量饮酒组；饮酒可能与炎症反应、神经系统疾病、精神性疾病、癌症的发生密切相关。]]> 2024/9/19 20:43:15 129true 目的 血红蛋白是高等动物体内运输氧气的载体蛋白，本工作拟探究磁场对血红蛋白氧合的影响，并比较人和牦牛血红蛋白在磁场下氧合的差异。方法 构建人和牦牛血红蛋白的重组表达纯化系统；分别将人和牦牛脱氧血红蛋白置于地磁场或外加磁场下，通过收集紫外可见光谱数据，计算氧合血红蛋白、脱氧血红蛋白和高铁血红蛋白3种组分的浓度和比例，分析磁场对血红蛋白氧合速率的影响；使用超导量子干涉磁测量系统SQUID对人氧合血红蛋白和人脱氧血红蛋白进行磁性测量，探讨磁场影响血红蛋白氧合速率的可能机制。结果 利用大肠杆菌原核表达系统成功表达并纯化得到了人和牦牛的血红蛋白样品。发现牦牛血红蛋白比人血红蛋白的氧合速率更快，外加0.3 T静磁场显著提高了血红蛋白的氧合速率，且牦牛血红蛋白比人血红蛋白对磁场更为敏感。结论 本研究成功表达和纯化了人和牦牛血红蛋白，发现磁场促进了血红蛋白的氧合过程。磁场对血红蛋白氧合速率的影响可能与血红蛋白本身的磁学性质有关。这些发现为未来使用外加磁场作为辅助手段改善低氧症状提供了理论支撑，有望在临床中发挥作用。]]> 2024/9/19 20:43:20 128true 目的 间断theta脉冲磁刺激（iTBS）已被证实可以通过夹带大脑不同频段神经振荡调控工作记忆功能，但其对神经振荡及其同步性的调节尚不清晰。本研究旨在探讨iTBS对大鼠局部脑区及跨脑区神经振荡及其同步性的影响，探究iTBS调控工作记忆的作用机制。方法 24只大鼠根据年龄及是否接受iTBS分为4组，应用时频分布、相位同步性以及相位-幅值耦合分析方法，对比分析各组大鼠在进行空间工作记忆（SWM）行为学任务的过程中前额叶和海马脑区theta及gamma频段局部场电位信号神经振荡的变化规律。结果 随着年龄增长，老年大鼠学会SWM任务规则所用时间明显增加 （P=0.005 6）；iTBS可以缩短成年大鼠（P=0.001 1）和老年大鼠（P=0.009 0）学会SWM任务规则所用时间。相比成年大鼠，老年大鼠前额叶和海马脑区theta和gamma频段神经振荡的时频能量（theta：P<0.000 1；gamma：P<0.000 1）、跨脑区相位-幅值耦合作用（PFC-HPC：P=0.000 2；HPC-PFC：P=0.027 7）均出现一定程度的下降；iTBS可以提高成年大鼠（theta：P<0.000 1；gamma：P<0.000 1）和老年大鼠（theta：P=0.014 4；gamma：P=0.000 6）神经振荡的时频能量以及老年大鼠跨脑区相位-幅值耦合作用（PFC-HPC：P=0.018 0；HPC-PFC：P=0.022 1）。此外，两脑区各频段信号的时频能量及相位-幅值耦合与大鼠行为学正确率均具有正相关关系。结论 iTBS可以增强老年大鼠的SWM能力以及认知功能，这与老年大鼠SWM任务期间跨脑区theta频段和gamma频段神经振荡的时频能量以及跨脑区相位幅值耦合增强有关。对于成年大鼠，iTBS通过提升成年大鼠SWM任务期间两脑区theta频段和gamma频段神经振荡的时频能量增强其SWM能力与认知功能。]]> 2024/9/19 20:43:23 127true 目的 闭角型青光眼（ACG）是主要的致盲性眼病之一，研究前房角对闭角型青光眼的诊断具有重要价值。目前，前房角的检查方法包括裂隙灯前房角镜检查、水前房角镜检查、超声生物显微镜（UBM）和眼前节光学相干层析成像（AS-OCT）等。裂隙灯前房角镜检查和水前房角镜检查便于观察前房角结构，但存在侵入性操作和眼部感染的风险；UBM能精确测量前房角的细微结构，但操作复杂且不适用于经历过外伤或接受过眼科手术的患者；而AS-OCT虽能提供详细的前房角图像，但设备成本较高。本研究旨在探索一种能够低成本实现全场前房角测量的非侵入、无损伤的光学反射层析成像技术（ORT），实现对猪眼三维结构成像和前房角的全场测量。方法 搭建了由CMOS相机、远心系统、电机和白光光源组成的光学反射层析成像系统，其空间分辨率为~8.5 μm。采集范围内的反射投影信息，经滤波反射层析算法处理得到三维结构图像，并测量出全场前房角度数。结果 本研究使用ORT技术成功采集了猪眼的反射投影数据，重建出其三维结构图像，并测量了前房角度数。重建的三维图像清晰展示了巩膜和虹膜等重要结构，并与实物图的结构一一对应。将ORT与光学相干层析成像系统对猪眼前房角度数的测量结果进行对比，显示两种方法的平均差值为0.51°，均方误差为0.317。结论 ORT是一种非侵入、无损伤、成本低和成像分辨率高的技术，能够实现猪眼的三维结构成像和全场前房角测量。该技术为闭角型青光眼的诊断提供了新的视角，对眼科疾病的筛查、诊断和监测具有重要的临床价值。]]> 2024/9/19 20:43:28 126true 目的 为模拟肌腱组织的显微结构和力学性能，促进肌腱组织的再生修复，制备负载不同质量分数纳米氧化锌且同时具备取向结构的左旋聚乳酸（PLLA）纤维膜，对其进行理化表征和生物性能评价，探讨其对肌腱细胞增殖分化的影响。方法 利用静电纺丝技术制备PLLA纤维支架及含不同质量分数纳米ZnO的PLLA/ZnO纤维支架。通过扫描电镜、力学拉伸、能谱仪（EDS）图谱表征支架的理化性能，并将支架与小鼠肌腱细胞共培养检测其生物相容性及对细胞增殖、分化的调控作用。结果 纤维支架均呈取向性排列，锌元素在纤维中均匀分布，PLLA/0.1% ZnO纤维支架拉伸强度和杨氏模量均显著高于PLLA组。PLLA/0.1%ZnO纤维支架表面细胞数量显著高于PLLA组，且活性更好；小鼠肌腱细胞沿纤维排列方向呈定向性黏附和生长。结论 取向PLLA/0.1%ZnO纤维支架具有优良的理化性能，并可显著促进肌腱细胞定向生长和增殖分化，未来有望用于肌腱组织的再生修复。]]> 2024/8/15 12:35:05 125true 目的 β淀粉样蛋白前体蛋白裂解酶1 （β-site APP cleaving enzyme 1， BACE1） 是阿尔茨海默病 （Alzheimer’s disease， AD）中淀粉样斑块形成的限速酶，其表达水平与活性在AD发生发展中起到关键作用。BACE1的相互作用蛋白可以通过直接结合、间接结合、参与各种细胞信号转导通路等方式，直接或间接在BACE1的转录、翻译、修饰、胞内运输等各个环节对BACE1进行调节，从而参与AD的发生与疾病的进程。本研究拟筛选并验证BACE1的相互作用蛋白，为进一步深入阐明淀粉样斑块形成的机制提供新的依据。方法 采用免疫共沉淀 （co-immunoprecipitation，Co-IP）与质谱联合应用的技术富集并鉴定AD模型小鼠海马组织中BACE1的相互作用蛋白，通过生物信息学分析筛选与BACE1有潜在相互作用的蛋白质，采用Co-IP实验及免疫荧光共聚焦技术进行初步验证，并探究BACE1相互作用蛋白在AD细胞模型中蛋白质表达水平变化。结果 本研究在AD组中共鉴定到与BACE1相互作用的差异表达蛋白614个。基因本体（GO）富集分析显示，AD组BACE1相互作用蛋白主要参与细胞内信号转导、靶向高尔基体囊泡的转运、浦肯野细胞层发育等生物学过程；京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析显示，AD中BACE1相互作用蛋白主要参与了PI3K-Akt信号通路、mTOR信号通路等神经退行性疾病相关通路。通过构建BACE1相互作用蛋白网络，筛选了12个可信度较高的相互作用蛋白，其中NSF、NUMB、HSP90aa1、SNAP91为首次发现的BACE1相互作用蛋白。经进一步验证，发现NSF与BACE1存在相互作用，并且在AD细胞模型中NSF表达水平上调。结论 BACE1相互作用蛋白参与多种AD相关生物途径及信号通路，NSF为新鉴定到的BACE1相互作用蛋白，与BACE1存在相互作用。NSF在AD细胞模型中表达水平上调，预测NSF与BACE1蛋白间相互作用参与调节AD疾病的进程，为疾病的机制研究提供新的靶点和方向。]]> 2024/8/15 0:00:00 124true 目的 结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）引物酶DnaG（MtuDnaG）在其基因组DNA复制中起着至关重要的作用，因而被认为是抗结核药物研发的新靶点。然而MtuDnaG起始引物合成的机制尚不清楚，这阻碍了MtuDnaG抑制剂的筛选。本研究将鉴定MtuDnaG结合模板的特异性识别位点，探讨MtuDnaG与ssDNA模板之间的相互作用。方法 本 研究以MtuDnaG的双结构域蛋白MtuP49（包含了锌指结合结构域和RNA聚合酶结构域）为研究对象，利用生物化学和生物物理学方法，研究MtuDnaG与含不同三联体的ssDNA模板之间的相互作用，鉴定MtuDnaG的特异性识别位点。结果 5"-GCG/C-3"三联体可能是MtuDnaG结合模板ssDNA的特异性识别位点。此外，在结核分枝杆菌基因组的复制起始点附近也存在可以与MtuP49特异结合的5"-GCG/C-3"位点，其3"端侧翼序列显著影响ssDNA与MtuP49的亲和力。突变实验表明，位于锌指结合结构域中的Arg31对MtuP49结合ssDNA的活性具有重要贡献。基于预测的MtuP49结构，推测在MtuP49结合模板ssDNA过程中，锌指结合结构域会发生分子内重排。结论 本研究首次鉴定了MtuDnaG结合模板ssDNA的特异性识别位点，揭示了影响MtuDnaG与模板ssDNA相互作用的主要因素。本文的研究结果不但有助于阐明MtuDnaG起始引物合成的机制，也为靶向DnaG的新型抗结核药物开发提供了新的信息。]]> 2024/8/15 12:35:17 123true 目的 过劳死已成为一个日益严重的问题，然而由于对其机制理解不足，其识别标准并不清楚。本文旨在建立大鼠过劳死模型，并用于探索急性身心疲劳对心脏功能的损伤以及相关机制。方法 本研究采用健康雄性Sprague-Dawley （SD）大鼠作为实验动物，随机分为对照组和实验组，对照组大鼠给予正常饲养和休息；实验组大鼠进行了7天的负重游泳和睡眠剥夺。过劳建模过程中死亡的为猝死组（D），存活的为存活组（S）。期间监测大鼠生理功能指标的变化，包括心电图和呼吸。存活组大鼠于第7天时断颈处死。取各组大鼠的心尖组织，进行蛋白质消化、iTRAQ标记和定量数据分析以确定差异表达蛋白（DEP）。此外，还进行GC-MS分析以鉴定差异代谢物。对疲劳组和过劳死组共同的差异代谢物和蛋白质进行整合分析，构建相关代谢通路网络。结果 线粒体氧化磷酸化、支链氨基酸分解、溶酶体自噬等模块功能增强，这些变化为过劳状态下的心脏提供了更多的ATP。此外，过氧化物酶体代谢和高铁血红素转移到血红素结合蛋白途径被发现上调，突显了氧化应激和血红蛋白代谢在过劳死模型中的潜在影响。蛋白质组学结果还提示，在急性过劳死的不同时期，可能发生了代谢的重编程。结论 代谢重编程可能为心脏提供足够的能量，缓解过度劳累和疲劳对心脏细胞的氧化应激和损伤。这些发现揭示了心脏对过劳死的反应机制，为进一步研究过劳死奠定了基础。]]> 2024/8/15 12:35:43 122true 目的 以透明质酸钠（sodium hyaluronate，HA）为研究对象，利用酚酸对其修饰改性以期获得抗氧化活性更好甚至新活性的分子结构。方法 采用自由基介导的接枝方法制备5种不同的酚酸-透明质酸钠接枝物，选出接枝度最高的接枝物进行合成条件优化。通过红外光谱（infrared spectroscopy，IR）、紫外光谱（ultraviolet spectrum，UV）、核磁共振氢谱（1H NMR spectroscopy，1H NMR）、场发射扫描电镜（field emission scanning electron microscopy，FESEM）、热重分析法（thermogravimetry analysis，TGA）对接枝物进行表征，通过测定接枝物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH·）、2,2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS+·）及超氧阴离子自由基（O2-·）清除能力反应出接枝物的体外抗氧化能力。结果 在相同条件下，5种酚酸-透明质酸钠接枝物种中接枝度最高的是阿魏酸-透明质酸钠接枝物（ferulic acid-sodium hyaluronate FA-HA），对FA-HA合成条件行进优化，得到最高的接枝度为（16.59±0.31）mg/g。通过IR、UV、1H NMR、FESEM、TGA验证了接枝物的形成，推测可能形成了酯键。分子质量检测结果表明，通过本方法得到的接枝物的分子质量有小幅下降但分子分布均一性提高，平均分子质量为31.5 ku。FESEM结果显示，接枝物呈现紧密相连的片状结构，表面相对光滑。热重分析（TGA）结果表明，接枝物的热稳定性降低。体外抗氧化实验结果表明，在0.25~10.0 g/L浓度范围内，FA-HA对DPPH·、ABTS+·和O2-·的最大清除率分别为（83.76±4.86）%、（76.95±5.06）%和（83.08±2.51）%，高于原HA及FA。结论 自由基接枝法成功将FA与HA接枝在一起，且接枝后的FA-HA具有更好的体外抗氧化活性，为酚酸-HA接枝物的深入研究和开发应用提供了理论依据。]]> 2024/8/15 12:35:47 121true 目的 近年来，失重环境对航天员神经系统造成的负面影响受到广泛关注。重复经颅磁刺激（repetitive transcranial magnetic stimulation，rTMS）技术对神经、精神类疾病的治疗效果有着显著积极影响。复合频率（不同频率刺激模式组成）的rTMS对由失重环境引起的神经系统功能障碍的改善作用仍有待深入研究。探索复合频率刺激（combined frequency stimulation，CFS）对失重环境造成的多种神经系统疾病的治疗效果以及电生理机制，对于脑科学及磁刺激的临床应用具有重要意义。方法 本研究采用40只C57BL/6小鼠，所有小鼠随机分为5组：假刺激组组、后肢去负荷（HU）组、10 Hz组、20 Hz组和CFS（10 Hz+20 Hz，CFS）组。对除sham组以外的小鼠建立维持14 d的模拟失重效应并同期进行14 d的rTMS。通过蔗糖偏好实验和水迷宫实验验证CFS对负性情绪和空间认知能力的改善效果。最后，通过膜片钳技术记录海马齿状回（dentate gyrus，DG）颗粒神经元的动作电位、静息膜电位以及离子通道的动力学特性。结果 行为学结果表明，CFS （10 Hz+20 Hz）显著改善了模拟失重小鼠的认知障碍和负性情绪；电生理实验结果显示，HU操作后小鼠海马DG区颗粒神经元的兴奋性降低，而CFS显著提高了神经元的兴奋性并改善了电压门控Na+、K+通道的动力学特性。结论 复合频率的rTMS（10 Hz+20 Hz）能够有效地改善模拟失重小鼠的认知障碍和负面情绪，这种改善可能与CFS对神经元兴奋性以及Na+、K+通道动力学特性的影响有关。因此，本文有望为CFS改善失重环境下所产生的空间认知和负性情绪障碍提供理论依据。]]> 2024/7/19 14:48:04 120true 目的 本文旨在确定NF2表达阴性脑膜瘤中潜在的miRNA-mRNA轴，研究它们的靶向关系，并确定它们的生物学功能。方法 从基因表达数据库（GEO）下载包含与NF2阴性脑膜瘤相关数据的GSE17792数据集。使用R软件中的limma包确定差异表达的miRNA（DeMiRNAs）。应用miRWalk 2.0数据库获取DeMiRNAs的靶基因。利用相互作用基因检索工具（STRING）数据库构建蛋白质相互作用（PPI）网络，并通过Cytoscape软件确定核心基因。对筛选出的miRNA进一步验证其表达和生物学作用。结果 在NF2阴性脑膜瘤肿瘤样本与蛛网膜组织对照组比较中发现了86个差异miRNA，其中包括52个上调的miRNAs和34个下调的miRNAs。在这些差异miRNA中鉴定出与274个靶基因相关的14个miRNAs，并基于这些数据构建miRNA-靶基因网络。通过cytoHubba分析显示，在PPI网络中有两个miRNAs（hsa-miR-650和hsa-miR-623）位于前20个关键核心基因之中。进一步的定量逆转录PCR（qRT-PCR）实验证实，相对于正常脑组织，hsa-miR-650在NF2阴性脑膜瘤中的表达显著增高。下调hsa-miR-650抑制了NF2阴性脑膜瘤细胞的增殖并诱导细胞凋亡。最后，确定RAC1是hsa-miR-650的靶基因。结论 Hsa-miR-650作为肿瘤促进剂，可能作为治疗NF2阴性脑膜瘤患者的治疗靶点。]]> 2024/7/19 14:48:06 119true 目的 外泌体是一种由不同类型细胞分泌到胞外的囊泡结构，其粒径范围在30~150 nm，广泛存在于血液、尿液、乳汁等多种生物流体。由于外泌体内部含核酸、脂质、蛋白质等多种生物活性分子，因此被认为是潜在的生物标记物和药物载体。乳汁来源的外泌体获取成本低、生物相容性高且免疫原性低，已被广泛应用于药物递送等领域以治疗相关疾病。目前对于乳汁外泌体磷酸化的研究尚未报道。本文旨在对不同来源乳汁外泌体进行磷酸化蛋白质组学分析，以期寻找其中具有特殊功能的通路与蛋白质，为探索寻找更加丰富多样的疾病治疗手段提供思路。方法 利用多肽和磷酸化多肽富集技术，分离牛乳、猪乳、羊乳来源外泌体与乳清中样品进行全蛋白质组学与磷酸化蛋白质组学分析，并结合多种生物信息学工具，分析不同来源乳汁外泌体蛋白质信号通路相关信息。结果 从上述3种不同物种乳汁外泌体中鉴定到4 191种蛋白质，1 640 种磷酸化修饰蛋白质以及4 064个磷酸化修饰肽段，其中不同物种外泌体蛋白质及其磷酸化修饰的种类均明显高于乳清，且不同物种样品中蛋白质种类差异较大，表明外泌体中蛋白质种类与其来源细胞种类和状态密切相关。结果显示，牛乳来源外泌体蛋白质在吞噬作用（由Fcγ受体介导）通路的富集，羊乳外泌体蛋白质显著富集于神经与免疫相关通路，猪乳外泌体所含蛋白质参与多个生命活动的正/负调控。结论 本研究将为不同来源外泌体在疾病靶向治疗和载药方面的应用提供理论依据。]]> 2024/7/19 14:48:16 118true 目的 Ku70蛋白主要通过其DNA结合特性参与双链DNA断裂（DSB）的非同源端连接（NHEJ）修复，有报道称其具有RNA结合功能，本文探索Ku70是否具有RNA解旋酶活性并影响miRNA加工成熟。方法 利用RNA免疫共沉淀（RIP）测序结合生物信息学分析Ku蛋白结合的RNA；蛋白质印迹法（Western blot，WB）结合定量反转录PCR（qRT-PCR）检测Ku蛋白与miRNAs的表达关系；生物膜干涉技术（BLI）实验分析Ku蛋白与RNA的结合能力；电泳迁移率变动分析（EMSA）实验确定Ku70及Ku80的RNA解旋酶活性；形态学检测结合WB分析Ku70调节miR-124引起的神经细胞功能变化；免疫荧光结合形态学分析寨卡病毒（ZIKV）感染后Ku70及miR-124的变化与神经元分化关联。结果 研究发现，Ku70蛋白具有RNA解旋酶活性，并通过其RNA解旋酶活性影响miRNA加工成熟。Ku70缺失引起许多miRNAs上调，其中包括神经细胞特异的miR-124。在人神经前体细胞（hNPCs）和人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）中敲低Ku70可促进 miR-124的成熟，从而导致上述细胞向神经元分化。本文进一步发现，ZIKV感染影响了Ku70及miR-124的表达，导致细胞形态的分化。结论 本研究揭示了Ku70的一种新功能，即Ku70有可能参与miRNA的成熟调控和神经细胞的分化，并且可能是ZIKV病毒致小头症的原因之一。]]> 2024/7/30 17:10:41 117true 目的 目前对意识障碍（DOC）患者的分级评估仍是相关领域的重点和难点。因效性网络可以通过时间序列间的因果关系直观地反映信息传递方向，帮助人们更好地理解患者大脑不同区域之间的信息交互作用。本文结合脑电图和因效性网络探讨听觉刺激下无反应觉醒综合征（VS）患者与最低意识状态（MCS）患者的脑功能连通性差异。方法 共纳入23例DOC患者，采集并分析唤名刺激下的脑电信号，通过多元格兰杰因果方法构建脑功能网络，利用脑网络节点度、聚类系数、全局效率以及因果流向性等参量从脑区之间协同工作的角度对比研究听觉刺激下不同意识水平患者的网络特征。结果 唤名刺激下MCS患者的脑功能连通性强于VS患者，且呈现出因果流向差异，MCS与VS患者四个脑区的信息传递方向均不相同。结论 唤名听觉刺激下MCS患者的信息传递能力强于VS患者；与VS患者相比MCS患者为因果源的电极通道数增多，对其他脑区的信息输出增多。本研究可为DOC患者意识水平的分级评估提供一定的理论依据。]]> 2024/7/30 17:10:42 116true 目的 索拉非尼是唯一被批准用于治疗晚期肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）的一线药物。然而索拉非尼的耐药性使得治疗效果并不理想。尽管索拉非尼耐药性的机制尚不清楚，但在HCC中的耐药性可能通过Akt信号通路的激活而发生。二氢丹参酮（dihydrotanshinone，DHT）是中药丹参的亲脂性成分，具有多种抗肿瘤活性并可抑制Akt活化。DHT联合索拉非尼治疗HCC的作用机制尚未明确。本文旨在研究DHT是否可增强索拉非尼对HCC的抗癌活性。方法 采用细胞计数试剂盒8（cell counting kit-8，CCK-8）和流式细胞仪检测索拉非尼和DHT对HCC细胞Huh7和HepG2细胞活力、细胞凋亡和药物敏感性的影响。通过蛋白质印迹分析Akt、P-Akt、Caspase3、GSK-3β、P-GSK3-β、核糖体蛋白S6激酶（S6K）、P-S6K、细胞周期蛋白D1、Bcl-xl、Bcl-2和Bax的表达水平。使用单因素方差分析（analysis of variance，ANOVA）和Dunnett检验对所有数据进行统计学比较。采用SPSS 20.0统计软件进行统计分析。结果 DHT通过减少Akt的激活来抑制HCC细胞的增殖和促进细胞凋亡。DHT抑制Akt下游因子的表达和激活，包括GSK-3β和S6K，这些因子调节细胞凋亡反应，并被索拉非尼激活和上调。索拉非尼和DHT均下调细胞周期蛋白D1的表达，DHT上调Bax的表达并下调Bcl-2和Bcl-xl的表达。索拉非尼对Bcl-2家族蛋白质表达的影响不大。结论 DHT可能通过抑制Akt信号通路的激活来增强索拉非尼的HCC细胞增殖抑制作用和凋亡诱导作用。]]> 2024/7/30 17:10:43 115true 目的 肺癌在生物学特性、基因组变异、增殖速度及化疗响应方面的时间异质性，构成了对有效治疗的显著阻碍。肺癌时间异质性的复杂性，结合其空间异质性，为研究带来了极大挑战。本文将为肺癌研究开辟新的方向，有助于更深入地理解肺癌的时间异质性，从而提升对肺癌的治疗成功率。方法 应用拉曼光谱显微技术作为监测肺癌细胞生物分子组成实时变化的有力工具，揭示了疾病的时间异质性。通过拉曼光谱与多元统计分析的结合，对苯并(a)芘处理后人类肺上皮细胞的生物分子变化进行了细致观察。结果 随时间推移，核酸、脂质、蛋白质及类胡萝卜素含量呈现下降趋势，而葡萄糖浓度上升。这些变化模式暗示，苯并(a)芘可导致遗传物质结构损伤、促进脂质过氧化、干扰蛋白质代谢、降低类胡萝卜素生成，并改变葡萄糖代谢路径。运用拉曼光谱技术，以实时、无侵入性、非破坏性的方式监控肺癌细胞内的生物分子动态，进而阐明其关键分子特性。结论 本项研究深化了对肺癌演进的认识，并为发展个性化治疗策略提供支持，助力提升患者的临床治疗效果。]]> 2024/7/30 17:10:44 114true 目的 随着环境问题和臭氧层空洞化的加剧，皮肤肿瘤的患病率也大幅增加，但是皮肤肿瘤前期隐蔽性高、症状不明显，导致大部分病例都是在中晚期发现的。因此，本文基于生物阻抗谱（bioimpedance spectroscopy，BIS）技术，提出一种皮肤肿瘤早期筛查的快速无创电阻抗检测方法。方法 首先，建立四层皮肤模型，采用数值分析方法研究角质层对BIS测量的阻碍作用。其次，使用去除角质层的皮肤模型研究混有不同半径和浸润深度的皮肤肿瘤组织电学特性。最后，使用凝胶处理后的猪皮组织实验验证肿瘤浸润深度（h）的影响。结果 角质层仿真结果表明，去除角质层的皮肤对激励信号的响应更明显。皮肤肿瘤模型仿真表明，当肿瘤半径（Rtumor）及h>1.5 mm时能够区分肿瘤组织与正常组织。同时根据实验结果中正常组织与肿瘤组织虚部弛豫阻抗（Zimag-relax）定义了组织病变度（εworse，为肿瘤组织虚部阻抗相对于正常组织虚部阻抗变化的百分比），并绘制了肿瘤组织浸润深度（Depth）与Zimag-relax的拟合曲线。当εworse=0.492 0时，BIS即可识别微浸润肿瘤组织，且拟合曲线修正决定系数为0.946 8，拟合效果良好。结论 基于BIS技术的方法具有实时、便捷、无创的优点，有望应用于皮肤肿瘤的检测。]]> 2024/5/21 20:01:10 113true 目的 本研究旨在探索并阐明芍药甘草汤（Shakuyakukanzoto，SKT）通过调节巨噬细胞的能量代谢和极化来改善小鼠溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）的可能作用机制。方法 通过给予3%葡聚糖硫酸钠盐（dextran sulfate sodium salt，DSS）构建小鼠UC模型并通过灌胃SKT进行治疗。首先，对两个数据集GSE21157和GSE210415进行单细胞测序分析和代谢通路富集。其次，对UC小鼠腹腔巨噬细胞的提取和代谢组学验证。然后，根据标准逆方差加权两样本的单变量孟德尔随机化分析差异代谢物富集的通路和UC风险相关性。接着，分析在GSE128682和GSE102746数据集转录水平差异。最后，使用定量反转录PCR（qRT-PCR）、蛋白质印迹法（Western blot）和流式细胞术验证结果。结果 苏木精-伊红（HE）染色结果显示，SKT可以显著缓解DSS引起的结肠损伤。单细胞测序分析在肠壁中发现了巨噬细胞、NK细胞、T细胞等10多种不同类型的细胞。在疾病组中，通过比较这两组数据发现，有49条主要涉及能量代谢的巨噬细胞代谢途径的活性显著上调。能量代谢组学中，治疗组与模型组，模型组与空白组分别鉴定了10种和18种显著上调和下调的差异表达代谢物，这些差异表达的代谢物主要与糖酵解和氧化磷酸化有关。根据标准逆方差加权两样本的单变量孟德尔随机化分析，预测糖酵解和氧化磷酸化相关基因泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白1（recombinant NADH dehydrogenase ubiquinone Fe-S protein 1，NDUFS1）（OR：0.56，95% CI：0.48~0.98，P=0.000 068）与UC风险降低相关。通过对两组数据集转录水平差异分析，与正常组相比，UC中NDUFS1的转录水平降低。qRT-PCR、Western blot和流式细胞术验证结果显示，SKT可以促进NDUFS1蛋白的表达，抑制巨噬细胞向M1型极化。此外，敲低/过表达NDUFS1可以影响SKT对巨噬细胞M1型极化的影响。结论 SKT通过调节NDUFS1蛋白水平，抑制巨噬细胞向M1型极化，从而缓解小鼠UC。这些发现不仅揭示了SKT对UC的治疗机制，也为临床应用提供了新的理论基础。]]> 2024/5/21 20:01:14 112true 目的 探讨经皮穴位电刺激（transcutaneous electrical acupoint stimulation，TEAS）对血管性痴呆（vascular dementia，VD）大鼠认知功能的影响及其机制。方法 采用改良的双血管闭塞（2-VO）法建立VD大鼠模型。造模后分别采用TEAS和电针（EA）刺激大鼠百会穴和足三里穴，连续刺激14 d。治疗后，采用新物体识别实验、Morris水迷宫实验、Y迷宫实验评估大鼠空间记忆和学习能力。苏木精-伊红染色观察海马神经元形态；透射电镜观察海马线粒体超微结构；采用酶联免疫吸附测定试剂盒检测大鼠血清中SOD、CAT、GSH-Px、MDA和ROS水平。采用蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠海马组织中PGC-1α、TFAM、HO-1、NQO1蛋白及细胞质中Keap1蛋白及细胞核中Nrf2、NRF1蛋白的表达。结果 治疗14 d后，与模型组比较，VD组大鼠逃避潜伏期缩短，辨别指数、穿越原平台区域次数、原平台所在象限停留时间、交替百分比增加；TEAS可改善VD大鼠海马神经元及线粒体结构，病理染色结果显示神经元排列更规则、分布更均匀，核膜、核仁更清晰，线粒体肿胀减轻，线粒体基质密度增加，线粒体嵴更明显。血清中SOD、GSH-Px和CAT水平显著升高，MDA和ROS浓度降低。TEAS还上调了海马区PGC-1α、TFAM、NQO1、HO-1蛋白和核内NRF2、NRF1蛋白的表达水平，但下调了胞浆中Keap1蛋白的表达。结论 TEAS可改善VD大鼠的认知功能，改善海马神经元和线粒体结构，且效果优于电针，其机制可能是激活PGC-1α介导的线粒体生物发生和抗氧化应激，这也为VD的治疗提供了潜在的治疗技术和实验依据。]]> 2024/5/21 20:01:24 111true 目的 为了探究miR-375是否通过影响基质金属蛋白酶13（MMP13）的表达来调控骨肉瘤（osteosarcoma，OS）恶性特征。方法 用Lipofectamine 3000试剂盒将质粒、miRNA转染至骨肉瘤细胞和HEK293细胞中。实时定量聚合酶链反应（real-time quantitative PCR，RT-qPCR）检测OS患者和OS细胞中miR-375和MMP13的表达。蛋白质印迹法（Western blot）分析OS患者和OS细胞中MMP13蛋白的表达。双荧光素酶法分析miR-375与MMP13的靶向关系。伤口愈合和transwell实验分别分析OS细胞的迁移和侵袭。结果 OS组织中miR-375的表达低于正常组织。MMP13在OS组织中表达上调。在OS患者中，MMP13的表达与miR-375呈负相关。与转染miRNA对照的OS细胞相比，转染miR-375模拟物OS细胞的迁移和侵袭明显被抑制。MMP13能部分逆转miR-375对OS细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论 在OS细胞中，过表达miR-375通过调控MMP13的表达抑制细胞的迁移和侵袭。]]> 2024/5/21 20:01:36 110true 目的 心肌缺血/再灌注（MI/R）损伤是导致急性心肌梗死患者不良心血管结局的重要原因。然而，目前对MI/R损伤的分子机制仍不明确。本文旨在确定微小RNA-878（miR-878）对MI/R损伤的影响及其分子机制。方法 在H9c2细胞中建立缺氧/复氧（H/R）模型。采用CCK-8法检测细胞活力。采用生化试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）含量。流式细胞术分析细胞凋亡水平。采用免疫荧光法及激光共聚焦显微镜分析线粒体形态。采用免疫荧光法检测线粒体活性氧（mtROS）水平。使用双荧光素酶报告基因实验研究miR-878与Pim1的结合位点。RNA免疫沉淀（RIP）实验验证miR-878与Pim1的结合关系。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测基因的表达水平。结果 与对照组相比，miR-878在H/R处理的H9c2细胞中表达显著升高（（1.00±0.25） vs （9.70±2.63），P<0.01）。在H/R诱导的细胞中，转染miR-878抑制剂能够显著增加细胞活力（（46.67±3.00） vs （74.62±4.08），P<0.000 1），并降低LDH释放量（（358.58±41.71） vs （179.09±15.59），P<0.000 1）及细胞凋亡率（（43.41±0.72） vs （27.42±4.48），P<0.01）。同时，下调miR-878表达能够显著抑制DRP1介导的线粒体过度分裂及mtROS产生（（6.60±0.57） vs （4.32±0.91），P<0.000 1）。机制研究显示，miR-878能够靶向结合Pim1 mRNA的3"-UTR区域并抑制Pim1的表达水平。挽救实验证明，下调Pim1表达能够显著逆转miR-878抑制剂抗H9c2细胞损伤的作用（均P<0.01），并出现线粒体过度分裂及mtROS产生增加（均P<0.05）。结论 在H/R条件下，miR-878通过靶向抑制Pim1表达而促进DRP1介导的线粒体过度分裂，最终导致心肌细胞损伤。]]> 2024/4/19 9:41:52 109true 目的 研究B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1（BMI1）基因对宫颈癌及子宫内膜癌增殖浸润及紫杉醇耐受的影响及其机制。方法 首先利用Cbioportal、TCGA和CPTAC数据库分析BMI1基因在宫颈癌和子宫内膜癌中的突变及表达情况。接着对人宫颈癌组织样本和人子宫内膜癌组织样本中BMI1的蛋白质表达水平进行免疫组化分析。采用蛋白质印迹法（Western blot)检测BMI1敲低后宫颈癌及子宫内膜癌细胞中BMI1下游调控因子的蛋白质水平变化。此外，通过细胞功能实验研究了BMI1在宫颈癌HeLa及子宫内膜癌HEC-1-A细胞中的功能。最后，通过实验评估siBMI1联合紫杉醇治疗的协同抗生长作用。结果 数据库分析结果显示，BMI1在1.5%的子宫颈癌患者及1.9%的子宫内膜癌的患者中存在不同程度的扩增、错义及剪接突变。此外，高mRNA水平的BMI1与宫颈癌的病理类型相关，且高蛋白质水平的BMI1与子宫内膜癌的病理类型和肿瘤分级及较低的生存率相关。进一步的免疫组化分析发现，与正常组织相比，宫颈癌和子宫内膜癌组织中BMI1蛋白水平表达升高，且与肿瘤的病理分化及浸润深度相关。药物敏感性实验显示，BMI1过表达导致HeLa及HEC-1-A细胞对多种抗癌药物的敏感性下降，其中包括紫杉醇。为了进一步分析BMI1与紫杉醇耐受的关系，通过Western blot检测BMI1敲除后HeLa及HEC-1-A细胞中BMI1下游因子的蛋白质水平变化。结果显示，抗凋亡相关蛋白Bcl-2随着BMI1的敲低而表达水平下降，而促凋亡相关蛋白BAX则显著升高。此外，细胞功能实验结果显示，体外过表达BMI1可促进HeLa及HEC-1-A细胞的增殖和迁移，且BMI1低表达的HeLa及HEC-1-A细胞对紫杉醇更敏感。结论 BMI1在宫颈癌和子宫内膜癌患者的肿瘤组织中过表达，BMI1的下调通过调控凋亡通路使CC和EC细胞对紫杉醇更加敏感。]]> 2024/4/19 0:00:00 108true 目的 阿尔茨海默病 （Alzheimer’s disease， AD） 是多种危险因素引起的中枢神经系统退行性疾病， 其中神经细胞凋亡是其主要病理基础之一。高脂血症是AD发生的高危因素，可导致脑组织内氧化低密度脂蛋白（oxidized lowdensity lipoprotein，ox-LDL）水平增高。前蛋白转化酶枯草溶菌素9（proprotein convertase subtilisin kexin type 9，PCSK9）是一个与血脂代谢密切相关的蛋白酶，但有研究显示其与AD发生可能相关。本研究旨在探索PCSK9在介导ox-LDL促神经细胞凋亡中的作用及其机制，进一步阐述高脂血症导致AD等神经退行性疾病的发生机制。方法 首先用不同浓度ox-LDL（0、25、50、75、100 mg/L）处理PC12细胞24 h，油红O染色检测PC12细胞脂质蓄积，Hoechst33258染色和流式细胞术检测PC12细胞凋亡，ELISA检测PC12分泌的β淀粉样肽（amyloid β-peptide，Aβ）含量，蛋白质印迹（Western blot）法检测SREBP2、PCSK9和LRP1的表达。然后用75 mg/L ox-LDL处理PC12细胞不同时间（0、6、12、24、48 h），Western blot实验检测SREBP2、PCSK9和LRP1的表达情况。最后，100 nmol/L PCSK9 siRNA转染PC12细胞48 h后，用75 mg/L ox-LDL处理PC12细胞24 h，Hoechst33258染色和流式细胞术检测PC12细胞的凋亡率，Western blot检测PCSK9、LRP1、PI3K、AKT、P-PI3K、P-AKT、NF-κB、Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3的表达，ELISA检测PC12细胞的Aβ分泌量。结果 ox-LDL可以增加PC12细胞脂质蓄积，促进PC12细胞凋亡和Aβ分泌，同时增加PC12细胞中SREBP2和PCSK9的表达，减少LRP1的表达。敲低PCSK9的表达可以通过PI3K/AKT通路和NF-κB-Bcl-2/Bax-Caspase-9/3通路减弱ox-LDL诱导的PC12细胞凋亡，同时增加PC12细胞中Aβ的分泌。结论 ox-LDL通过诱导PC12细胞中PCSK9表达增加，降低LRP1的表达，进而影响下游的不同信号途径，从而在ox-LDL诱导PC12细胞凋亡中发挥双向调节作用。]]> 2024/4/19 9:42:36 107true 目的 观察盐酸青藤碱对膝关节黏连强直的家兔成纤维细胞增殖和相关基因表达的影响，并进一步尝试探讨其对抗膝关节黏连强直的作用机制。方法 以体外培养法培养成纤维细胞，并设对照组、盐酸青藤碱低中高浓度实验组。CCK-8法检测成纤维细胞增殖的情况；实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative PCR，RT-qPCR）法检测经过盐酸青藤碱处理后，成纤维细胞相关基因mRNA表达的改变，用ELISA法检测药物的作用对血清中炎症因子等水平的影响，蛋白质印迹法（Western blot）检测相关蛋白质的表达。结果 盐酸青藤碱能降低成纤维细胞存活率，且随浓度升高存活率逐渐降低。盐酸青藤碱中各个组的效果均十分明显（P<0.05）。在相关基因的mRNA表达层面，与对照组比较，盐酸青藤碱各组炎症因子均显著下调（P<0.05），凋亡蛋白的表达量显著上升、Bcl-2的mRNA表达量下降（P<0.05），而PI3K/mTOR/AKT3信号通路分子的mRNA表达量均下降（P<0.05）。在蛋白质表达层面，与对照组相比较，中、高剂量盐酸青藤碱组血清中炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β、TGF-β的水平均明显下调（P<0.05），凋亡蛋白cleaved-PARP、cleaved caspase-3/7及Bax的表达量均上调，并且与给药剂量成正相关，而抗凋亡蛋白Bcl-2、PI3K/AKT3/mTOR信号通路的表达量则与给药剂量成负相关。盐酸青藤碱对家兔膝关节成纤维细胞的存活表现为显著的抑制作用，作用机制或与下调炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β的表达，并促进凋亡蛋白cleaved-PARP、cleaved caspase-3/7及Bax的表达，抑制Bcl-2的表达，抑制其下游PI3K/AKT3/mTOR信号通路的基因表达有关。结论 盐酸青藤碱可抑制黏连性膝关节强直家兔膝关节成纤维细胞的炎症反应和加速成纤维细胞的凋亡，或可通过该机制为改善和治疗黏连性膝关节强直提供新的方法。]]> 2024/4/19 9:42:39 106true 目的 转甲状腺素蛋白 （transthyretin， TTR） 对阿尔茨海默病 （Alzheimer’s disease， AD） 具有神经保护作用， 这种保护作用表现在TTR能抑制β淀粉样蛋白（amyloid beta protein，Aβ）的病理性聚集。本工作将从分子层面上探究TTR与Aβ的作用机制，揭示TTR对AD的神经保护作用。方法 蛋白质-蛋白质对接用于探究不同结构形式的TTR与Aβ的作用模式，并运用分子动力学模拟方法来探究二者相互作用的动态过程。结果 TTR四聚体及单体均能与Aβ单体作用，TTR四聚体的甲状腺素结合通道是Aβ单体的主要结合部位。此外，TTR四聚体的EF螺旋、EF loop同样能够结合Aβ单体。当TTR四聚体解离后，TTR单体的内部片层疏水部位暴露，该部位对Aβ单体具有较强的亲和力。TTR与Aβ聚集体作用，由于TTR单体与Aβ聚集体均为富含β折叠的结构，使得二者能够共聚集形成聚合度更高的聚集体，从而降低Aβ聚集体的细胞毒性。结论 TTR四聚体和单体通过“扣押”Aβ单体来抑制Aβ的聚集，TTR单体与Aβ聚集体形成高聚合度复合物来降低Aβ聚集体的细胞毒性。本工作为基于TTR神经保护作用的抗AD药物设计和发现提供了重要的理论依据。]]> 2024/3/20 17:39:39 105true 目的 最近在金纳米粒子（AuNPs）表面重构抗体片段的天然构象和功能的研究表明分子构象工程的可行性。本质上，分子构象工程就是要像蛋白质折叠一样，通过精确控制柔性非功能分子的构象使其产生新功能。本文在铂纳米粒子（PtNPs）表面重构抗体互补决定簇区（CDR）片段的天然构象和功能，旨在探索分子构象工程的普适性及揭示蛋白质结构-功能机制。方法 本文将抗溶菌酶抗体（cAB-lys3）中的CDR3片段（在单独存在时没有稳定构象和功能）通过两个Pt-S键偶联到PtNPs表面。CDR片段的天然构象和功能的恢复通过它对溶菌酶活性的抑制来表征。结果 通过多肽密度优化和表面聚乙二醇修饰，制得基于PtNPs的抗溶菌酶人工抗体（简称铂抗体）。溶菌酶活性测试结果表明，铂抗体可以特异性结合溶菌酶并显著抑制其活性。结论 本文第一次在PtNPs表面重构了蛋白质片段的天然构象并恢复了其功能，证明分子构象工程可作为一种通用方法制备基于纳米粒子的人工蛋白质。]]> 2024/3/20 17:39:44 104true 目的 胃癌（GC）严重影响人类的健康生活，研究表明其与丝氨酸/甘氨酸代谢密切相关。丝氨酸/甘氨酸代谢对于肿瘤细胞的增殖能力具有重要影响。本文的研究目的是探究丝氨酸/甘氨酸代谢能够影响胃癌细胞增殖能力的分子机制。方法 本文通过一种基于随机和非梯度系统的势能景观所建立的大型代谢网络动力学建模方法，构建了一个稳定的胃癌细胞代谢动力学模型。基于对模型的调控，定量分析丝氨酸/甘氨酸代谢影响胃癌细胞增殖的动力学机制。对一般代谢网络动力学方程添加随机噪声，通过随机动力学分解得到代谢网络参数空间的李雅普诺夫（Lyapunov）函数。进一步减少与随机波动相关的Lyapunov函数变化，从而得到稳定的代谢网络。结果 在动力学参数不足的情况下，成功构建了胃癌细胞代谢网络的动力学模型。当胞外丝氨酸可用时，模型优先消耗丝氨酸；当甘氨酸生成丝氨酸的速率增加时，模型显著上调生成S-腺苷甲硫氨酸（SAM）和S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）的稳态通量。结论 本文证明了胃癌细胞对于丝氨酸的优先摄取以及丝氨酸/甘氨酸转化速率对SAM生成的重要作用，其可能通过调节细胞甲基化进程影响胃癌细胞的增殖能力，为靶向丝氨酸/甘氨酸代谢的癌症治疗提供了新的思路和方向。]]> 2024/3/20 17:39:51 103true 目的 伤口中心产生的内源性电场是指导细胞定向迁移促进伤口愈合的重要因子。PIEZO1是机械门控阳离子通道家族成员之一，它参与细胞迁移，影响细胞的趋化迁移，并且受到电压的调节，在伤口愈合过程中发挥重要作用。但PIEZO1是否参与影响电场指导的细胞定向迁移过程尚不清晰，本文以HaCaT细胞为模型探讨PIEZO1及其下游相关蛋白质对细胞趋电性迁移的影响。方法 应用活细胞工作站追踪HaCaT细胞在微直流电场中的迁移，使用抑制剂及RNAi技术调控PIEZO1功能和表达，研究PIEZO1对于细胞趋电性迁移的影响；用蛋白质印迹（Western blot）检验细胞的整合素（integrin）β1与FAK磷酸化水平在电场作用下的变化情况，探讨PIEZO1与integrin β1及FAK等对电场信号的响应及细胞趋电性迁移的影响。结果 PIEZO1广谱抑制剂钌红、GsMTx4和RNAi处理显著抑制了HaCaT细胞向正极趋电性迁移的能力；电场和GsMTx4单独作用升高FAK磷酸化和integrin β1表达，GsMTx4阻止电场进一步升高FAK的磷酸化水平和integrin β1表达；siRNA干扰PIEZO1表达后显著下调FAK的磷酸化水平，并且电场对FAK磷酸化和integrin β1表达的促进作用受到抑制；Integrin β1和FAK的抑制剂使HaCaT细胞的趋电性迁移能力均显著降低。结论 PIEZO1参与HaCaT细胞的趋电性迁移，是影响HaCaT细胞趋电性迁移的重要分子之一；抑制integrin β1和FAK会影响HaCaT细胞的电性迁移；电场信号可能通过PIEZO1介导的信号通路调控integrin β1的表达和FAK的活化进而影响细胞趋电性迁移。]]> 2024/3/20 17:39:53 102true 目的 磷脂酰肌醇3激酶（PI3Ks）通过调控肌动蛋白在细胞定向运动中发挥重要作用。然而，PI3Ks的结构和功能很复杂，人们对PI3Ks在细胞趋电性运动中的作用并不完全清楚。因此，本文以模式生物盘基网柄菌细胞为实验材料，探究其中的PI3K1和PI3K2在细胞趋电性运动中的作用。方法 首先利用CRISPR/Cas9系统介导分别构建PI3K1编码基因pikA基因敲除突变株和PI3K2编码基因pikB基因敲除突变株；随后将2个突变株置于强度为12 V/cm的直流电场中，记录并分析两个突变株的趋电性。结果 数据分析显示，野生型细胞在直流电场中的方向指数为（0.86±0.03），而pikA-和pikB-突变株在直流电场中的运动方向指数分别为（0.95±0.02）和（0.94±0.03）；此外，野生型细胞在电场中的平均轨迹速度（3.34±0.08）μm/min，而pikA-和pikB-突变株的平均轨迹速度分别为（4.85±0.20）μm/min和（5.48±0.15）μm/min，t检验表明突变株和野生型的方向性指数和运动速度都存在极显著的差异。蛋白质印迹实验结果显示，pikA-和pikB-突变株中磷酸化Akt和磷酸化ERK都显著增加。结论 PI3K1和PI3K2在盘基网柄菌细胞趋电性运动中可能通过增加Akt和ERK的活性发挥抑制作用。]]> 2024/3/20 17:39:55 101true 目的 构建Y染色体短串联重复序列（Y-STR）微流控芯片扩增检测试剂，并进行性能验证，实现Y-STR基因座的快速全集成检测。方法 使用Y-STR微流控芯片检测体系，对其灵敏度、成功率和分型准确率、峰平衡性、精准性和准确性、检材适应性、混合物检测能力和抗抑制性进行验证评估。结果 DNA标准品9948的模板量≥8 ng，血卡片数≥3片以及口腔拭子刮擦次数≥7次时可获得Y-STR完整分型；165份样本的全集成检测成功率为91.52%，分型准确率为99.74%；不同荧光通道之间的峰高比值为89.81%；10次运行的等位基因分型标准品的片段大小标准差均在0.5 bp以内，20份样本全集成检测的等位基因片段和相应的等位基因标准品之间的片段准确性均在0.5 bp以内；能够对口腔拭子、血卡、唾液卡、烟蒂、血棉签、布片精斑等检材进行准确分型；混合样本中较小贡献者与较大贡献者在1∶3的比例时可获得完整基因分型；在不同浓度的腐殖酸（50~ 400 mg/L）、靛蓝（20~100 nmol/L）、血红蛋白（100~500 μmol/L）等抑制物的干扰下，该体系可获得完整基因分型。结论 该体系可应用于国产Quick TargSeq法医DNA现场快速检测系统使用，可在法医学实践中选用。]]> 2024/3/20 17:39:58 100true 目的 中药马钱子（Strychnos nux-vomica L.，SN）在临床上具有消肿止痛的功效，然而，由于含有生物碱类成分，马钱子具有一定毒性。人们对马钱子毒性所引起的大鼠内源性代谢变化及其对肠道微生物群代谢失调的潜在影响知之甚少，因此，马钱子的毒理学研究对其安全性评价具有重要意义。本研究将代谢组学和16S rRNA基因测序技术相结合来探索马钱子的致毒机制。方法 通过急性、蓄积性和亚急性毒性试验，分别确定马钱子的中毒剂量、毒性强度和毒性靶器官。超高效液相色谱-质谱联用技术用于分析大鼠灌胃马钱子后的血清、肝脏和肾脏样本。利用基于装袋算法的决策树和K最近邻（K nearest neighbor，KNN）模型对组学数据进行分类。从大鼠粪便中提取样本后，使用高通量测序平台对细菌的16s rRNA V3-V4区域进行分析。结果 装袋算法提高了样本分类的准确率。共鉴定出12个生物标志物，这些生物标志物的代谢失调可能是马钱子致体内毒性的原因。拟杆菌、粪厌氧棒菌、颤螺菌、双茎体菌等与肾肝功能的生理指标密切相关，这表明马钱子引起的肝肾损害可能与这些肠道细菌的代谢紊乱有关。结论 本文揭示了马钱子的体内致毒机制，为马钱子临床上的安全合理使用提供了科学依据。]]> 2024/2/22 16:33:38 99true 目的 探索江苏常熟地区汉族人群在47个常染色体微单倍型基因座的遗传多态性，评估应用效能及法庭科学参数。方法 采用MHSeqTyper47混合DNA鉴定试剂盒进行基因座复合扩增及文库构建，使用MiSeq FGx测序平台进行测序，测得的数据应用MHTyper数据分析软件进行分析，对获得的样本遗传信息进行评估，结合千人基因组数据（1000 Genomes Project phase 3，1KG）评估群体间遗传分化指数及遗传距离，并计算法庭科学参数。结果 江苏常熟地区汉族人群与1KG中的中国北京群体的遗传分化和遗传距离最小，并得到最接近的有效等位基因数（Ae），累积随机匹配概率（combined matching probability，CMP）与1KG中东亚参考人群的5个群体均接近，为1.25×10-36，累积非父排除概率达0.999 999 999 964 1。结论 本研究报告了47个微单倍型基因座在江苏常熟地区汉族人群中的等位基因频率及遗传多态性信息，为47个微单倍型在法医学应用中提供了数据基础。另外，比较了1KG参考人群与江苏常熟地区汉族人群的多态性差异，并揭示了47个微单倍型在江苏常熟地区汉族人群中的遗传结构。总的来说，1KG中的东亚人群参考数据更符合江苏常熟地区汉族人群的遗传特征。]]> 2024/2/22 16:33:40 98true 目的 越来越多的研究表明，代谢物的失衡与阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）之间存在密切的联系。近年来，代谢组学的发展使研究AD周围代谢的特征性变化成为可能。有研究表明，血清色氨酸（tryptophan，Trp）、酪氨酸 （tyrosine，Tyr）水平与轻度认知功能障碍（mild cognitive impairment，MCI）、AD相关。本文拟进一步阐明MCI和AD中色氨酸、酪氨酸水平的特征。方法 将来自阿尔茨海默病神经影像学倡议1（Alzheimer’s Disease Neuroimaging Initiative-1，ADNI-1）队列的765位参与者，分为认知正常（cognitive normal，CN，n=207）、稳定性轻度认知功能障碍（stable mild cognitive impairments，sMCI，n=201）、进行性认知功能障碍（progressive mild cognitive impairments，pMCI，n=171）和AD所致痴呆（n=186）。分析血清色氨酸、酪氨酸对MCI、AD是否具有诊断价值。分析在不同诊断组中，血清色氨酸、酪氨酸分别与脑脊液生物标志物、脑结构、脑代谢及认知功能之间的关系。结果 与CN组相比，sMCI、pMCI、AD组血清色氨酸水平偏低。pMCI组、AD组血清酪氨酸水平显著低于CN组。血清色氨酸对pMCI、AD有诊断价值。血清酪氨酸仅对AD有诊断价值。结论 血清色氨酸、酪氨酸有助于AD的早期诊断。色氨酸、酪氨酸的检测可以为AD的病理学机制研究提供新思路。血清色氨酸、酪氨酸与AD核心标志物、认知功能、脑结构、脑代谢之间均无明显相关性，故血清色氨酸、酪氨酸可能不是AD较好的外周生物标志物。]]> 2024/2/22 16:33:41 97true 目的 直接动脉血压（arterial blood pressure，ABP）连续监测是侵入式的，传统袖带式的间接血压测量法无法实现连续监测。既往利用光学体积描记术（photoplethysmography，PPG）实现了连续无创血压监测，但其为收缩压和舒张压的离散值，而非ABP波的连续值，本研究期望基于卷积神经网络-长短期记忆神经网络（CNN-LSTM）利用PPG信号波重建ABP波信号，实现连续无创血压监测。方法 构建CNN-LSTM混合神经网络模型，利用重症监护医学信息集（medical information mart for intensive care，MIMIC）中的PPG与ABP波同步记录信号数据，将PPG信号波经预处理降噪、归一化、滑窗分割后输入该模型，重建与之同步对应的ABP波信号。结果 使用窗口长度312的CNN-LSTM神经网络时，重建ABP值与实际ABP值间误差最小，平均绝对误差（mean absolute error，MAE）和均方根误差（root mean square error，RMSE）分别为2.79 mmHg和4.24 mmHg，余弦相似度最大，重建ABP值与实际ABP值一致性和相关性情况良好，符合美国医疗器械促进协会（Association for the Advancement of Medical Instrumentation，AAMI）标准。结论 CNN-LSTM混合神经网络可利用PPG信号波重建ABP波信号，实现连续无创血压监测。]]> 2024/2/22 16:33:43 96true 目的 TePixD（Tll0078）是一种来自细长嗜热聚球藻（Thermosynechococcus elongatus BP-1）的blue light-using flavin（BLUF）感光蛋白。TePixD蛋白在FAD口袋周围有一个保守的Tyr8-Gln50-Met93三联体，以介导质子偶联电子转移（proton-coupled electron transfer，PCET）过程。但具体的光响应机制有待进一步研究。本文的目的是解析TePixD在光响应关键位点突变体的结构以及生化性质，以此分析TePixD的光响应过程。方法 利用X射线衍射法解析TePixD Y8F突变体的晶体结构，Tyr8侧链在PCET过程中有重要作用，而突变体Phe8的侧链失去了羟基从而使分子无法介导PCET。本文比较了TePixD野生型和Y8F突变体之间的结构，并比较了同蛋白家族的SyPixD Y8F与TePixD Y8F的结构。此外，使用多角度光散射法分析几种TePixD在光响应关键位点突变体（Y8F、Q50L、W91F、Y8F/W91F和Q50L/W91F）在溶液中的生化特性。结果 本文以2.54 ?分辨率解析了TePixD Y8F突变体的晶体结构，发现其与TePixD野生型的整体结构相似，而与SyPixD Y8F存在显著差异。生化分析表明，对比黑暗和光照条件时，TePixD突变体与野生型的分子质量变化以及洗脱峰表现出差异，表明突变体对光诱导蛋白质构象变化产生干扰。结论 本文的结构测定和生化分析为揭示BLUF蛋白的光响应机制提供了新信息。]]> 2024/2/22 16:33:46 95true 目的 现有的人工视觉装置分为植入式装置和体外辅助装置两种，但它们都有一些不足之处。植入式装置需要手术植入、会造成不可恢复创伤；体外辅助装置指令相对简单、应用场景较为单一、过于依赖人工智能（AI）的判断不能提供足够的安全性。本文提出了一种将周边环境信息转化成头颈部触觉指令、并辅助以语音交互的系统，其有效性、安全性、信息量等均优于现有体外辅助技术，同时也具有低成本、低风险、适合多种生活和工作场景等优势。方法 该系统借助最新的远程无线网络通讯技术、芯片技术，利用前方人员随身佩戴的微小型电子设备、摄像头和感应器，以及云端庞大的数据库和计算能力，后台人员可以实时、充分地远程（比如跨越城市）了解前方的现场景象、环境参数和人员状态等信息，通过对比云端数据库和内存数据库、AI辅助识别和人工综合分析，快速获得最合理的行动方案，并将行动指令及时传给前方人员，实现盲人导航功能。同时，也用语音互动对话提供人文关怀、情感寄托。结果 本文首次提出了“远程虚拟陪伴概念”，并演示了相应的硬件和软件以及多种生活场景下的测试效果。除了可以实现基础的导航功能，比如帮助视觉障碍人群完成在超市购物、咖啡厅寻座、街道行走，以及完成更加复杂的拼图、日常娱乐打牌功能，还可以满足骑行等速度相对快的移动指令要求。结论 实验结果表明，这种“远程虚拟陪伴”装置适用大量场景和需求，不仅可以用于视觉障碍人群出行、购物、娱乐，也可用于陪伴老人出行、辅助野外探险或旅行等，具有广泛的发展和应用前景。]]> 2024/1/19 11:50:48 94true 目的 微藻养殖产业规模巨大，在养殖过程中微藻易受杂菌和其他污染物的影响，因此需要定期对微藻进行检测，以确定其生长情况。现有的光学显微成像法和光谱分析法对实验人员、实验设备及场地的要求较高，无法做到实时快速检测。为了实现实时快速检测，需要一套检测要求低、速度快的实时微藻检测系统。方法 本文开发了一种基于深度学习的微藻检测系统，通过搭建一套基于明场成像的显微成像设备，使用采集的图像训练基于YOLOv3的神经网络，并将训练好的神经网络部署到微型计算机，从而实现了实时便携微藻检测。本文对特征提取网络进行改进，包括引入跨区域残差连接机制和注意力选择机制，另外还将优化器改为Adam优化器，使用多阶段多方法组合策略。结果 加载跨区域残差连接机制时最高平均精度（mAP）值为0.92。通过与人工结果进行对比，得到检测误差为2.47%。结论 该系统能够实现微藻实时便携检测，提供较为准确的检测结果，可以应用于微藻养殖中的定期检测。]]> 2024/1/19 11:50:58 93true 目的 转录因子NFE2的异常表达在许多骨髓增殖性肿瘤患者中被观察到，然而造成这种异常的转录调控机制尚不明确，本研究旨在探究参与NFE2转录调控的元件和分子机制。方法 首先通过公共数据库中ChIP-seq数据和ATAC-seq数据预测NFE2基因的潜在增强子元件，并通过双荧光素酶报告实验进行体外验证。随后，通过PRO-seq和GRO-seq数据结合RACE技术克隆这些增强子RNA转录本，经在线编码潜能预测工具分析认为其为lncRNA，通过RT-qPCR检测该lncRNA在不同白血病细胞系中和这些细胞诱导分化前后的表达变化及其亚细胞定位。最后，通过慢病毒系统在K562细胞中过表达和敲降该lncRNA以探究其功能。结果 鉴定出调控NFE2转录的3个增强子元件，分别位于NFE2转录起始位点-3.6k，-6.2k和+6.3k区域，这些元件插入NFE2启动子上游均能增强下游萤火虫荧光素酶的表达。克隆出-3.6k增强子负链方向的转录本，将其鉴定为-3.6k-lncRNA。本研究发现，该lncRNA在K562、U937和HL-60这3种白血病细胞系中均有一定程度的表达，且均定位于细胞核内。当该lncRNA在K562细胞中过表达，NFE2水平随之提高，细胞增殖和细胞迁移能力受到抑制；当其被敲降时，NFE2水平相应降低而K562细胞增殖能力随之升高。结论 本文鉴定了调控人NFE2基因转录的3个增强子元件和一条增强子lncRNA转录本，并验证了该lncRNA对NFE2转录的正调控作用以及对K562细胞增殖能力具有抑制作用。]]> 2024/1/19 11:51:02 92true 目的 探讨胞外酸化对巨噬细胞脂噬的影响及其作用机制。方法 采用RAW264.7巨噬细胞，以pH 6.5培养液与 25 mg/L氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）共孵育24 h构建胞外酸化诱导的泡沫细胞模型。分别以ASIC1特异性阻断剂PcTx-1和RIP1抑制剂Nec-1干预胞外酸化诱导的RAW264.7巨噬细胞24 h，油红O染色检测细胞内脂质蓄积；蛋白质印迹（Western blot）检测总ASIC1、膜ASIC1、p-RIP1 Ser166、p-TFEB Ser142、LC3和p62蛋白的表达；激光共聚焦显微镜观察脂滴（Bodipy示踪）与自噬标志物LC3II和LAMP1共定位；透射电镜观察细胞内脂滴和脂噬泡的数量变化；胆固醇荧光试剂盒检测ABCA1介导的胆固醇流出。结果 与pH 7.4组相比较，pH 6.5胞外酸化组胞内的脂质蓄积和细胞质膜上的ASIC1蛋白表达显著增加，p-RIP1Ser166、p-TFEB Ser142水平升高，LC3II蛋白减少和p62蛋白增加，脂滴与LC3II和LAMP1的共定位都分别减少，细胞内的脂滴数量显著增加，自噬体和脂噬泡的数量则明显减少，ABCA1介导的巨噬细胞内胆固醇流出显著减少。然而，胞外酸化对RAW264.7巨噬细胞的上述效应能被ASIC1特异性阻断剂PcTx-1和RIP1抑制剂Nec-1所取消。结论 胞外酸化经激活ASIC1/RIP1途径促进TFEB磷酸化抑制巨噬细胞脂噬，ASIC1可能是防治动脉粥样硬化等脂质蓄积疾病的新靶点。]]> 2024/1/19 11:51:06 91true 目的 TEAD1转录因子1（TEAD1）在前脂肪细胞中表达，但是功能还不清楚。本研究旨在探讨TEAD1的两个转录本对永生化鸡前脂肪细胞系（immortalized chicken preadipocyte 1，ICP1）细胞增殖、迁移、凋亡和分化的影响。方法 克隆TEAD1基因的全长序列，对获得的两个转录本进行生物信息学分析。利用间接免疫荧光分析TEAD1转录本的亚细胞定位。通过RT-qPCR、CCK-8和EdU等方法，检测过表达TEAD1转录本对ICP1细胞增殖的影响。利用划痕实验检测TEAD1转录本对ICP1细胞迁移的影响。利用细胞凋亡-Hoechst染色和RT-qPCR，分析过表达TEAD1转录本对ICP1细胞凋亡的影响。通过RT-qPCR检测TEAD1转录本在不同组织、不同细胞系和ICP1细胞分化过程中的表达。利用油红O染色、BODIPY染色、RT-qPCR、Western blot和双荧光素酶报告基因技术，分析过表达TEAD1转录本对ICP1细胞脂滴积累及成脂相关基因转录的影响。最后，测定过表达TEAD1转录本的ICP1细胞中甘油三酯（TG）含量。结果 克隆TEAD1全长编码区，鉴定出两个TEAD1转录本。TEAD1-V1主要定位于细胞核，TEAD1-V2定位于细胞质与细胞核。过表达TEAD1-V1和TEAD1-V2均抑制ICP1细胞增殖。过表达TEAD1-V1促进ICP1细胞迁移，而过表达TEAD1-V2对ICP1细胞迁移没有影响。且过表达TEAD1-V1和TEAD1-V2均促进ICP1细胞凋亡。两个转录本在不同组织和细胞系中的表达模式相似，在前脂肪细胞分化过程中的表达先下降后上升。过表达TEAD1-V1能显著减少ICP1细胞中脂滴的积累（P<0.05），抑制C/EBPα表达；而过表达TEAD1-V2对脂滴积累和成脂相关基因的蛋白质表达水平没有明显作用（P>0.05）。过表达TEAD1-V1能显著降低ICP1细胞中甘油三脂的含量（P<0.05），而过表达TEAD1-V2对ICP1细胞中甘油三酯含量没有影响（P>0.05）。结论 本研究首次克隆并鉴定了鸡TEAD1基因的两个转录本。过表达转录本TEAD1-V1和TEAD1-V2抑制鸡前脂肪细胞增殖并且促进鸡前脂肪细胞凋亡；TEAD1-V1抑制前脂肪细胞分化并促进前脂肪细胞迁移，而TEAD1-V2对前脂肪细胞分化和迁移没有影响。]]> 2024/1/19 11:51:30 90true 目的 本研究旨在探究细胞周期蛋白依赖性激酶8（cyclin-dependent kinase 8， CDK8）在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）中的表达及其对ESCC细胞的影响，并探讨潜在的分子机制。方法 首先通过UALCAN数据库分析了CDK8 mRNA的表达水平，然后利用免疫组织化学技术检测了CDK8蛋白在ESCC患者肿瘤组织中的表达水平。利用慢病毒稳定转染食管癌Kyse-30及Kyse-150细胞株以敲低或过表达CDK8，通过EdU增殖实验、细胞集落形成实验、细胞周期实验、细胞划痕实验和侵袭实验等多种方法探究CDK8蛋白表达水平的改变对食管癌细胞表型的影响。随后，通过小鼠皮下成瘤试验观察CDK8对体外食管癌移植瘤生长的影响。最后通过蛋白质印迹法检测增殖和转移相关蛋白质的表达情况。结果 与正常食管组织相比，CDK8在ESCC组织中转录和蛋白质表达水平均较高。敲低CDK8的表达能够显著抑制ESCC细胞的增殖、迁移和侵袭；此外，抑制CDK8表达可显著影响JAK2/STAT3通路以及E-cadherin/ N-cadherin/Vimentin的表达，过表达CDK8则可以逆转上述结果，抑制STAT3通路逆转了CDK8过表达对ESCC细胞表型的促进作用。结论 CDK8是ESCC的促癌因子，可介导JAK2/STAT3磷酸化水平以及上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的过程。]]> 2024/6/19 14:40:02 89true 目的 刺芒柄花素（formononetin，FOR）常被用于脑卒中后的神经保护和神经功能康复，其在脑缺血再灌注（ischemia-reperfusion，I/R）损伤中的自噬溶酶体功能尚未见报道。本研究旨在探讨刺芒柄花素的治疗效果是否受到自噬流调节方式的影响。方法 雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠在接受大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）和I/R后被分为假组、模型组和MCAO+FOR（30 mg/kg）组。然后获得缺血半暗带的脑组织，分别用Beclin-1、LC3、SQSTM1/P62、Ubiquitin、LAMP-2、Cathepsin B、Cathepsin D抗体通过蛋白质印迹法（Western blot，WB）和双重免疫荧光检测自噬/溶酶体通路中的关键蛋白质。同时评估脑梗死体积、神经功能损伤和神经元坏死情况，以评价FOR的干预效应。结果 研究表明，与MCAO组相比，FOR干预除了能促进神经元中Beclin-1和LC3的自噬活性外，还能够改善自噬清除功能，如LAMP-2、Cathepsin B、Cathepsin D的溶酶体活性增强，以及Ubiquitin和P62的自噬积累减少。另外，FOR干预7 d后显著减少了脑缺血导致的神经功能缺损、梗死体积以及神经元死亡。结论 FOR的干预治疗可能是通过增强自噬流促进脑缺血半暗带恢复的神经保护机制。]]> 2024/12/23 14:28:31 88true 目的 慢性应激可引起认知功能障碍，但其机制尚不清楚。研究已经证实，HMGB1/TLR4通路与认知障碍密切相关。本研究旨在探讨HMGB1/TLR4通路是否参与慢性应激诱导的认知功能障碍。方法 采用慢性不可预知应激（CUMS）小鼠模型，连续4周每天随机给予不同类型的应激。采用新物体识别实验、Y迷宫实验和Morris水迷宫实验检测认知功能。蛋白质印迹法（Western blot）检测HMGB1、TLR4、BCL2和BAX蛋白的表达。苏木精-伊红（HE）染色观察海马CA1区神经元损伤。结果 暴露于CUMS的小鼠海马HMGB1和TLR4蛋白表达明显升高。此外，根据新物体识别实验、Y迷宫和Morris水迷宫实验，丙酮酸乙酯（EP，HMGB1的特异性抑制剂）和TAK242（TLR4的选择性抑制剂）抑制HMGB1/TLR4通路可减轻慢性应激小鼠的认知障碍。此外，注射EP和TAK242还能缓解慢性应激小鼠海马细胞凋亡的增加。结论 海马HMGB1/TLR4通路参与了慢性应激诱导的细胞凋亡和认知功能障碍。]]> 2024/6/7 19:25:59 87true 目的 本文探讨了太赫兹（THz）频率下的外电场对吸附在金(111)表面的水合双链脱氧核糖核酸（dsDNA）系统的影响。方法 采用GolDNA-Amber 力场进行分子动力学模拟。结果 DNA的碱基侧链比糖磷酸骨架更容易吸附在金层表面。当水合DNA分子置于频率高达10 THz的电场中时，振动态密度（VDoS）分别在5个不同频率下观察到峰值强度。此外，强电场会导致狭缝内DNA双链之间的氢键断裂。此现象在8.8 THz和9.6 THz的电场频率下尤为明显，并且在不同的电场强度下展示出不同的振动模式。结论 这些发现有助于加深对镀金生物界面的分子组织的理解。]]> 2024/6/26 0:00:00 86true 目的 通过DNA推断个体的生物地理祖源（biogeographical ancestry，BGA）在人类学、法医学等领域广受关注。目前常用方法是使用几十个祖先信息单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）位点，通过主成分分析（principal component analysis，PCA）、似然比（likelihood ratio，LR）等方法判断个体的祖源。伴随高通量测序技术的发展，批量获取人群样本的高密度SNP数据集变得容易，同时计算机领域中机器学习等技术的引入，使得BGA研究发展出新的变化。本研究旨在构建适应高密度SNP数据，且具有高准确率和良好泛化能力的BGA推断模型。方法 首先基于307 866个SNP的数据，使用机器学习领域中的监督学习模型XGBoost，构建了基于多维度主成分（principal component，PC）的PCA-XGBoost推断模型，其次基于LR对推断结果进行评估和优化模型，确定了最佳PC数目和模型训练轮数，最后在其他公共数据的测试集上进一步验证模型的表现。结果 基于LR的结果评估方法，模型在参考集中人群预测准确率可以达到95%以上，在测试集中准确率可以达到90%以上，结论 PCA-XGBoost模型具有较高的洲际人群预测准确性，基于LR的结果评估方法有助于对预测结果的可靠性进行进一步评估。该模型具有很好的泛化能力，更换参考集的人群数据后，有望实现更加精细的人群分析。]]> 2024/6/6 0:00:00 85true 目的 探讨石墨烯量子点（GQDs）的对体外RAW264.7巨噬细胞存活率、细胞凋亡及炎症因子表达的影响和细胞成像能力，为GQDs在生物医学领域的安全应用提供理论基础。方法 采用改性Hummer’s法制备了氧化石墨烯。利用H2O2和W18O49在水热条件下产生的羟基自由基，采用自上而下的方法将氧化石墨烯切割成GQDs。利用X射线粉末衍射、X光电子能谱、透射电镜、原子力显微镜、扫描电镜和傅里叶红外变换等技术对GQDs微观结构进行详细分析。通过CCK-8、流式细胞、激光共聚焦方法和实时荧光定量PCR（RT-qPCR），评价GQDs对巨噬细胞的生物兼容性和对炎症因子表达的影响。通过CCK-8、流式细胞和RT-qPCR，评价GQDs对巨噬细胞的生物兼容性和炎症因子的影响。激光共聚焦显示GQDs在巨噬细胞中成像情况。结果 水热条件下，以W18O49为催化剂可将氧化石墨烯切割为3~5 nm蓝光GQDs，产率为43%，荧光寿命（τ）=1.67 ns。三重态碳烯自由基的Zigzag型位点和缺陷态导致GQDs表现出激发波长的依赖性，其最佳激发和发射波长分别为330 nm和400 nm。GQDs表面丰富的含氧官能团和其亲水性使其具有良好的水溶性。CCK-8和死活染色表明，GQDs具有较高的生物兼容性。RT-qPCR分析结果显示，GQDs对体外RAW264.7细胞有生长抑制作用，可刺激RAW264.7细胞提高TNF-α的表达，使细胞膜破裂并产生IL-1β炎症因子诱导细胞凋亡。激光共聚焦结果显示，蓝光GQDs具有一定的体外细胞成像能力。结论 石墨烯量子点的水溶性、低毒、荧光特性和炎症因子的诱导效应，为其在免疫标记和细胞成像领域的应用提供了广阔的前景。]]> 2024/11/22 0:00:00 84true 目的 从运动调控细胞铁死亡的角度，探究8周跑台运动改善2型糖尿病（diabetes mellitus type 2，T2DM）合并非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）小鼠肝细胞脂肪变性的分子机制。方法 选取8只8周龄健康m/m小鼠作为对照组（Con），32只同周龄db/db小鼠被随机分为db/db组、db+Exe组、db+SB203580组及db+Exe+SB203580组，每组8只。db+Exe组、db+Exe+SB203580组进行持续8周的中等强度跑台运动干预（40 min/d，5 d/周），db+SB203580组及db+Exe+SB203580组进行8周的p38促分裂原活化的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）抑制剂SB203580腹腔注射处理（5 mg/kg，5 d/周），实验期间每周定时检测小鼠体重及空腹血糖。8周干预结束后，油红O及苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色法观察小鼠肝脏病理性改变状况，相应的酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒测定血脂、肝功能、肝脏铁离子及氧化应激水平，定量反转录PCR（quantitative reverse transcriptase-mediated PCR，qRT-PCR）测定脂肪合成及氧化应激相关mRNA转录水平，免疫组织化学染色观察铁死亡相关蛋白质的表达水平，蛋白质印迹（Western blot，WB）法检测肝组织中脂质合成及铁死亡相关蛋白质表达水平。结果 8周跑台运动降低了db/db小鼠体重、血糖、肝指数及血脂水平，改善其肝脏脂肪变性，下调肝组织Fe2+、MDA、MCP-1、IL-6、SREBF1、ACC1表达水平，并上调了db/db小鼠肝组织中GSH含量及铁死亡相关蛋白质NRF2、HO-1、SLC7A11、GPX4蛋白表达水平。运动联合p38 MAPK抑制剂干预显著下调db/db小鼠肝组织ACC1、MCP-1、IL-6的mRNA及Fe2+、MDA水平，并上调GSH水平。然而，与跑台运动组相比，运动联合p38 MAPK抑制剂组小鼠肝脏内Fe2+、MDA、MCP-1、SREBF1表达显著上升，GSH及铁死亡相关蛋白质表达水平显著下降。此外，与单纯抑制剂组相比，运动联合抑制剂干预组小鼠肝组织铁蓄积及脂质过氧化现象明显改善。结论 8周跑台运动可能是通过p38 MAPK依赖途径抑制肝细胞铁死亡，缓解肝细胞脂质过氧化及肝脏脂肪变性，从而改善T2DM小鼠的NAFLD。]]> 2024/11/22 12:23:16 83true 目的 哮喘是常见的慢性气道炎性疾病，重症哮喘是哮喘诊治中关注的重点。哮喘发病中，免疫细胞参与并发生改变，几种脂类代谢物可作为其诊断标志物。本研究在代谢和细胞层面，探讨了重症哮喘的特征。方法 使用多因素统计学分析和独立样本t检验筛选了重症哮喘（41例）和对照（18例）血液样本中的差异代谢物，通过KEGG富集分析鉴定关键通路，基于ROC曲线进行生物标志物的鉴定；基于细胞类型注释结果，识别了血液中免疫细胞的种类和比例（5例重症和3例对照）；使用单样本基因富集分析（ssGSEA）研究了差异代谢通路在单细胞中的特征。结果 相比于对照（健康），28种代谢物的丰度在重症哮喘患者血液中增加，13种代谢物丰度降低（P<0.05）；差异代谢物富集于4条通路：鞘脂代谢、甘油磷脂代谢、烟酸和烟酰胺代谢、组氨酸代谢。其中，有13种差异代谢物可以作为重症哮喘诊断的标志物，如L-谷氨酸（AUC=0.809）、烟酰胺（AUC=0.886）、植物鞘氨醇（AUC=0.882）、鞘氨醇（AUC=0.893）等。在单细胞分析中，鉴定出了5种主要细胞类型（CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、NK细胞、B细胞和单核细胞），NK细胞的数量在重症哮喘患者中增加；重症哮喘具有更加频繁的细胞通讯，其CD8+ T细胞与其他细胞通讯密集，而在健康样本中，密集通讯的细胞主要为单核细胞。ssGSEA表明，重症样本中，4条富集了差异代谢物的通路，在CD4+ T和CD8+ T细胞中具有更低的得分（P<0.01），推测这些通路相关的基因表达在这两种细胞中被抑制，被抑制的基因包括DGKA、NT5C3A等，这些基因与免疫过程相关，在调节T细胞信号转导、活化、分化及免疫应答中发挥关键作用。结论 L-谷氨酸、烟酰胺、植物鞘氨醇、鞘氨醇可以作为重症哮喘诊断的生物标志物；重症哮喘相关通路的基因在CD4+ T和CD8+ T细胞中被抑制表达。]]> 2024/11/22 12:23:25 82true 目的 通过邻位标记-质谱联用与生物信息学分析结合筛选与人冠状病毒229E（HCoV-229E）核衣壳蛋白（NP）相互作用的潜在宿主因子，并利用免疫共沉淀等技术验证，寻找HCoV-229E NP的相互作用蛋白，为揭示病毒复制增殖的分子机制，及不同人冠状病毒致病力差异奠定基础。方法 首先构建了表达HCoV-229E NP与生物素连接酶标签融合蛋白（NP-TurboID）的重组腺病毒Ad-V5-NPHCoV-229E-TurboID（Ad-N），感染人非小细胞肺癌细胞A549，48 h后添加外源生物素，通过生物素连接酶标记NP相互作用蛋白，利用链霉亲和素交联的磁珠纯化生物素标记蛋白，而后进行无标记（label-free）蛋白质组学质谱分析，筛选出潜在的与NP互作的蛋白质，并通过免疫沉淀和免疫荧光等实验进行验证。结果 无标记蛋白质组学质谱筛选出584个潜在互作蛋白，从中选取糖原合成酶激酶3（GSK3）A和GSK3B进行免疫共沉淀和免疫荧光验证，实验结果表明，二者与NPHCoV-229E存在相互作用。结论 邻位标记-质谱联用技术可以用于病毒-宿主相互作用因子的挖掘，为进一步研究冠状病毒复制、增殖及致病机制奠定了基础。]]> 2024/11/22 0:00:00 81true 目的 作为经典视觉通路的中枢门户，初级视觉皮层不仅负责视觉信息的编码处理，还与一些高级认知功能脑区存在着密切的神经环路连接。研究表明，40 Hz闪烁刺激可以诱导脑内产生γ振荡，显著改善神经退行性疾病引起的学习和认知障碍。同时，自然界中也存在着部分光闪烁现象。初级视觉皮层是视觉信息传入大脑的第一站中枢皮层，深入解析非侵入性闪烁光刺激对其信息处理的调控机制显得尤为关键。本研究系统探讨了非侵入性光闪烁刺激对成年小鼠V1神经元功能特性的影响，以期了解非侵入性光闪烁对脑功能的影响。方法 本研究通过给3组成年小鼠施加不同频率的闪烁刺激（20、40和60 Hz），利用在体多通道电生理技术探究了其对成年小鼠初级视觉皮层神经元感受野特性的影响。结果 连续2个月不同频率的闪烁刺激使小鼠V1神经元的方位调谐能力增强，40 Hz和60 Hz的闪烁刺激还使神经元的对比敏感度得到改善，而20 Hz没有明显影响。通过进一步分析，发现3种频率都可以使神经元的反应变异性下降，信噪比上升，神经元之间的噪音相关性下降。结论 非侵入性的光闪烁刺激通过影响初级视觉皮层神经元的信息处理效率，改善了方位调谐能力和对比敏感度，为多种闪烁光影响视觉感知提供了新的实验证据，也为深入理解特定频率的闪烁光如何改善脑功能的机制提供了新的线索。]]> 2025/6/12 0:00:00 80true 目的 本研究旨在通过网络药理学、分子动力学（MD）与实验验证等方法，探究茯苓酸（pachymic acid，PA）在治疗神经母细胞瘤（neuroblastoma，NB）中的潜在分子靶点及其作用机制。方法 首先基于网络药理学方法筛选PA可能作用于NB的靶点，随后结合分子对接、MD模拟、分子力学/泊松-玻尔兹曼表面积法（molecular mechanics/Poisson-Boltzmann surface area，MM/PBSA）自由能计算及实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR），蛋白质印迹法（Western blot）实验进行多维度验证。结果 CCK-8实验显示，PA对NB细胞具有浓度依赖性的抑制作用。京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通路富集分析提示，PA的抗NB作用可能通过调控磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路（PI3K-Akt）、丝裂原活化蛋白激酶信号通路（MAPK）及RAS GTP酶家族信号通路（Rat sarcoma，RAS）等信号通路实现。分子对接及分子动力学模拟结果表明，PA可与RAC-α丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（RAC-alpha serine/threonine-protein kinase，AKT1）、表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）、原癌基因酪氨酸蛋白激酶（proto-oncogene tyrosine-protein kinase，SRC）及热休克蛋白90α家族A1成员（heat shock protein 90 alpha family class A member 1，HSP90AA1）等核心靶蛋白稳定结合。RT-qPCR与Western blot分析进一步证实，PA处理可显著下调AKT1、EGFR及SRC的mRNA和蛋白质表达水平，同时上调HSP90AA1的表达水平。结论 茯苓酸可能通过抑制AKT1、EGFR和SRC的表达，调控PI3K/AKT信号通路，从而发挥其抗神经母细胞瘤作用。研究结果为PA在NB治疗中的潜在应用提供了重要的实验依据。]]> 2025/6/16 0:00:00 79true 目的 烟草相关疾病是全球可预防的主要健康问题之一，也是导致过早死亡的主要原因之一。吸烟成瘾作为一种慢性大脑疾病，已广泛被认定为影响大脑结构和功能的关键因素。然而，目前有效的诊断方法仍存在挑战。为了更好地理解吸烟成瘾的神经机制，并提高诊断的准确性，本研究提出了一种新型的图神经网络框架——TI-GNN，旨在通过功能磁共振成像（fMRI）数据揭示吸烟成瘾与大脑连接异常之间的关系。方法 本研究基于fMRI数据，利用图神经网络（GNN）对吸烟成瘾的功能连接模式进行建模。TI-GNN通过Transformer提取全局交互信息和空间注意机制有效获取脑区之间的联系，以提高模型的诊断性能。此外，模型内置因果解释模块，以深入挖掘大脑不同区域的因果关系，从而增强模型的可解释性。结果 实验结果表明，TI-GNN模型在吸烟成瘾数据集上的分类效果显著优于现有的最佳基线方法。特别地，TI-GNN在提高区分效果、准确识别吸烟成瘾与健康对照之间的差异方面表现出色，准确率、F1分数和马修斯系数分别达到0.91、0.91和0.83。同时揭示了杏仁核、前扣带皮层等关键脑区的异常连接模式，与临床研究结果一致。结论 TI-GNN框架为吸烟成瘾的客观诊断提供了高效工具，其揭示的脑网络异常与因果关联机制，深化了对成瘾病理机制的理解，为靶向干预策略和个性化治疗奠定了重要理论基础。]]> 2025/7/11 16:16:00 78true 目的 生物物证蛋白质组蕴含着丰富的遗传信息，即蛋白质序列的单氨基酸多态性（SAP）。然而，SAP分析工具的缺乏，严重制约了SAP在公安实战中的应用。本研究是为了满足法医样本蛋白质组SAP数据分析的应用需求。方法 分为3个模块设计SAP分型自动化分析软件。模块B内置了东亚人群常见非同义单核苷酸多态性（nsSNP）信息，与输入外显子组新增的nsSNP一起构建SAP蛋白质序列数据库。模块A利用模块B构建的SAP蛋白质序列数据库，调用预装的pFind或Maxquant搜索引擎分析质谱数据。模块C输出参考型与突变型SAP分型结果，反向推导对应的nsSNP分型（称为imputed nsSNP），并与输入的外显子组nsSNP分型结果比较，生成比对报告。使用2名中国个体的外显子组nsSNP数据、每人2根毛干蛋白质组数据，分别使用pFind与Maxquant搜索引擎对软件进行测试。使用文献中1个欧洲人、1个非洲人，每人3根毛干蛋白质组数据，勾选pFind搜索引擎测试软件，并与文献算法结果进行比较。结果 该软件以蛋白质组质谱数据与外显子组测序nsSNP结果为输入文件，输出SAP结果报告。测试结果显示，使用两种搜索引擎均可得到SAP结果，并且发现Maxquant得到的SAP数量略少于pFind的结果。使用文献数据测试结果显示，在文献方法完全匹配（即imputed nsSNP与外显子组nsSNP分型完全一致）的SAP位点中，SAPTyper得到了部分SAP结果，且分型一致。结论 针对东亚人群开发了一种自动化SAP分析算法，并形成软件SAPTyper。该软件为法医蛋白质组SAP进行个体识别与表型推断等方面研究与应用提供了一个便捷、高效的分析工具，具有良好的应用前景。]]> 2025/7/2 9:26:55 77true 目的 重复经颅磁刺激（repetitive transcranial magnetic stimulation，rTMS）是一种非侵入性脑刺激技术，为治疗阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）提供了一种非药物方法。研究表明，铁死亡可促进AD的病理发生和发展，而抑制神经元铁死亡可有效改善AD的认知障碍。钙离子（Ca2+）稳态失衡与AD的病理密切相关，并可通过多种途径驱动铁死亡的发生。本研究旨在探讨rTMS是否通过抑制神经元铁死亡或者维持钙稳态来改善AD小鼠认知障碍，从而为rTMS在治疗AD中的应用奠定理论和实验基础。方法 APP/PS1 AD小鼠分别经过0.5 Hz低频和20 Hz高频rTMS处理，通过新物体识别和水迷宫实验评估治疗结果。利用酶联免疫吸附分析（ELISA）方法测定各组小鼠海马体中谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、Fe2+的水平。使用Erastin诱导HT-22细胞铁死亡，经过高低频磁刺激处理后，CCK-8检测其细胞活性，Fluo-4 AM检测其胞内钙离子浓度变化。结果 与正常小鼠相比，AD小鼠表现出显著的认知能力下降，同时铁死亡水平和胞内钙离子浓度显著升高。高频和低频rTMS治疗都能够显著改善AD小鼠认知障碍，并且能够抑制AD小鼠神经元铁死亡和胞内钙离子异常增加。结论 高频和低频重复经颅磁刺激都能够有效改善AD小鼠认知功能障碍，这种效应可能是通过改善铁死亡或细胞内钙离子失衡来实现的。]]> 2025/4/30 11:25:34 76true 目的 通过与典型发育（typically developing，TD）儿童进行对比，基于功能性近红外光谱（functional near-infrared spectroscopy，fNIRS）脑成像技术探究孤独症（autism spectrum disorder，ASD）伴运动功能障碍（motor dysfunctions，MDs）儿童粗大动作任务脑功能活动特征，为进一步揭示ASD儿童MDs发生机制及从中枢角度设计靶向性干预方案提供理论依据。方法 根据纳入和排除标准，招募48名伴有MDs的ASD儿童纳入ASD组，40名TD儿童纳入TD组。利用fNIRS设备采集单手投袋和踮脚走路状态下皮层运动相关脑区血氧变化信息，分析两组儿童脑激活与功能连接差异。结果 与TD组相比，ASD组在物体操控性动作（单手投袋）任务中，脑激活方面表现出左侧感觉运动皮层（sensorimotor cortex，SMC）和右侧次级视觉皮层（secondary visual cortex，V2）脑区激活程度均显著降低（P<0.05），而右侧前运动皮层和辅助运动皮层（pre-motor and supplementary motor cortex，PMC&SMA）脑区激活程度显著升高（P<0.01），且表现为双侧脑区活动，脑功能连接方面表现出连接强度显著降低（P<0.05）且主要与背外侧前额叶皮层（dorsolateral prefrontal cortex，DLPFC）和V2相关联。ASD组在身体稳定性动作（踮脚走路）任务中，脑激活方面表现出DLPFC、SMC和PMC&SMA等运动相关脑区激活程度均显著升高（P<0.05），且表现为双侧脑区活动，脑功能连接方面表现出连接强度显著降低（P<0.05）且主要与PMC&SMA和V2相关联。结论 ASD儿童在物体操控性和身体稳定性动作任务中表现出不同于同龄TD儿童的脑功能活动异常特征，反映了局部脑区代偿性激活不足或过度以及跨脑区整合能力受损，这为进一步揭示其MDs发生机制并从中枢角度设计针对性的干预方案提供了理论和数据支撑。]]> 2025/5/22 15:10:56 75true 目的 本研究旨在探讨核仁蛋白PES1表达抑制对细胞衰老的影响及其可能的分子机制。方法 首先检测复制性衰老的小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）及阿霉素诱导衰老的人肝癌细胞系 HepG2内PES1的表达水平。然后利用siRNA技术敲低MEFs和HepG2细胞中PES1的表达，采用EdU染色和SA-β-gal染色分别评估细胞增殖和衰老状态。通过Western blot检测p53、p21和Rb等衰老相关蛋白的表达水平，qPCR和Western blot分析IL-6、IL-1β和IL-8等SASP因子的表达变化。最后利用Northern blot及免疫荧光技术检测PES1表达抑制对细胞内pre-rRNA成熟及核仁形态的影响。结果 衰老的MEFs及HepG2细胞内PES1表达下调。抑制MEFs、HepG2等细胞内PES1表达，可诱导细胞内EdU阳性细胞比例减少，SA-β-gal阳性细胞比例增加。分子水平上，PES1敲低激活了细胞内p53-p21信号通路，但对Rb表达无显著影响，同时显著上调了 IL-6、IL-1β和IL-8的表达。进一步研究发现，抑制PES1的表达可阻碍细胞内pre-rRNA的成熟并诱导核仁形态异常。结论 核仁蛋白PES1的表达抑制可诱导核仁应激，并激活细胞内依赖于p53而非Rb信号的衰老信号，进而诱导细胞发生衰老。]]> 2025/4/15 13:44:27 74true 目的 基于电阻抗断层成像（EIT）技术提出了一种新型床旁肺通气实时监测方法应用于慢性阻塞性肺疾病（COPD）诊断。计算通气中心（CoV）、整体不均匀性（GI）、区域通气延迟不均匀性（RVDI）和一秒率（FEV1/FVC）四个指标，来实现COPD时空诊断。方法 首先对COPD患者呼吸周期进行仿真，确认患者与正常人在某些指标存在明显差异后，再通过实验验证上述指标的差异性；实验共纳入93名受试者，对其进行了多次肺功能检查（PFT）和EIT同步测量，并比较了不同呼吸模式（包括用力呼气、用力吸气和平静潮气呼吸）下的通气异质性，通过分析EIT图像与指标，以区分不同年龄段健康人和COPD患者。结果 仿真结果表明，COPD患者与正常人在CoV、GI、FEV1/FVC和RVDI四个指标上存在明显差异。实验结果表明，在空间异质性方面，COPD患者的GI值显著高于其他两组，但健康人群之间无明显差异。在时间异质性方面，无论是平静吸气还是用力吸气，COPD患者的RVDI值均显著高于其他组别。此外，在强制呼气过程中，FEV1/FVC的频率分布进一步揭示了COPD患者区域肺功能的时间延迟异质性，区别于不同年龄段健康人。结论 EIT技术揭示了区域肺功能的时空通气异质性，对于COPD患者的诊断和治疗具有重要意义。]]> 2025/4/15 13:48:12 73true 目的 本实验旨在探究热量限制（caloric restriction，CR）对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的脓毒症心肌病（septic cardiomyopathy，SCM）预防效果，并探索CR发挥心肌保护作用的机制，为SCM的预防提供新的策略和理论依据。方法 48只8周龄的20~25 g雄性C57BL/6小鼠，随机分成4组，分别为：CON组、LPS组、CR组和CR+LPS组，每组12只。CR组与CR+LPS组适应性喂养2周后计算每只小鼠的进食量，第1周的CR设置为限制前的80%，后5周限制为60%。6周CR干预后，4组小鼠腹腔注射等量的生理盐水或LPS（10 mg/kg），12 h后测试心功能，然后取心脏和血液。酶联免疫吸附分析（ELISA）测定血清炎症因子水平；全自动生化仪测定血清心肌酶谱；心肌组织切片分别做苏木精-伊红（HE）染色和免疫荧光染色；蛋白质印迹法（Western blot，WB）检测心肌组织炎症因子（TNF-α、IL-9、IL-18）、氧化应激因子（iNOS、SOD2）、凋亡相关因子（Bax/Bcl-2比值、CASP3）和SIRT3/SIRT6的表达水平。结果 LPS注射后12 h，射血分数（ejection fraction，EF）和缩短分数（fractional shortening，FS）值显著下降，左心室收缩末期内径（left ventricular end-systolic diameter，LVESD）值显著升高；CR干预能够明显增加EF和FS值，降低LVESD。形态学和血液指标（AST、LDH、CK和CK-MB）显示，LPS注射能够造成心肌形态结构紊乱和心肌损伤，6周CR能够预防上述心肌损伤。LPS注射可显著增加小鼠循环炎症水平（IL-1β、TNF-α），免疫荧光和WB发现，LPS注射显著上调心肌组织炎症相关蛋白（TNF-α、IL-9、IL-18）、氧化应激相关蛋白（iNOS、SOD2）和凋亡相关蛋白（Bax/Bcl-2比值、CASP3）的表达。6周CR干预能够显著降低循环炎症水平，下调心肌组织炎症、氧化应激和促凋亡相关蛋白的表达。此外，LPS注射显著下调了小鼠心肌组织SIRT3和SIRT6蛋白的表达，且CR干预可恢复SIRT3蛋白的表达。结论 6周CR能够预防LPS造成的SCM，包括心功能下降、心肌结构损伤、炎症、氧化应激和凋亡，其机制可能与调节心肌SIRT3表达相关。]]> 2024/10/29 22:52:23 72true 目的 功能性近红外光谱（functional near-infrared spectroscopy，fNIRS）技术作为一种新型的无创脑功能检测方法，结合上肢康复机器人，可以及时获取脑功能变化指标，并应用于神经康复领域。康复机器人设计有被动、主动、阻力3种训练模式，其中阻力模式对具有一定肌力水平的患者有更好的康复效果。阻力模式下的控制方式分为动态控制和静态控制，而有关阻力模式下不同控制方式对于卒中上肢偏瘫病人运动功能的影响尚不清楚，不同控制模式下的重要参数——力度对脑区激活的影响鲜有报道。本研究旨在探讨动态与静态阻力模式在不同阻力水平下对脑卒中患者运动康复期间脑功能变化的影响。方法 本研究共招募20名患有上肢功能障碍的脑卒中患者，并预先进行了适应性训练和两种运动模式下3种不同力度的训练。采集双侧前额叶皮层（prefrontal cortices，PFC）、双侧初级感觉运动皮层（primary motor cortices，M1）、双侧初级躯体感觉皮层（primary somatosensory cortices，S1）和双侧前运动皮层和辅助运动皮层（premotor and supplementary motor cortices，PM）在静息和运动训练状态下的fNIRS数据，并计算样本数据在不同生理状态下的偏侧化指数（lateralization index，LI）、锁相值（phase locking value，PLV）和网络测度，来考察皮层激活特性和脑连接拓扑特性。结果 与静息态相比，动态模式和静态模式显著激活了脑的对侧M1区和同侧的PM区。与动态相比，静态模式对对侧M1区的激活更明显。脑网络分析结果显示，动态和静息状态下的对侧PFC区和对侧M1区（F=4.709，P=0.038），对侧PM区和同侧M1区（F=4.218，P=0.049）的网络连接强度存在显著差异。此外，研究结果显示，动态模式下M1区激活同力度增加呈正相关，静态模式下则相反。结论 动、静态两种阻力训练模式均能激活相应的脑功能区。动态阻力模式比静态阻力模式使脑氧水平变化更大、感兴趣区域（region of interest，ROI）之间的连通性更强，且力度的增加对于不同的模式产生的影响具有差异性。针对脑卒中患者，动态模式可能对运动相关的脑功能区激活有更强的促进作用。]]> 2025/4/1 15:20:05 71true 目的 探讨大肠癌LoVo细胞来源的外泌体（LoVo-Exos）对肿瘤血管生成的影响，并探讨其促血管生成的可能分子机制。方法 超速离心法提取LoVo-Exos，共聚焦显微镜观察其内化进入受体HUVEC细胞，体外管状形成实验分析LoVo-Exos对血管生成的影响；采用小鼠体内基质胶塞实验，分析LoVo-Exos对血管生成的影响。为探讨LoVo-Exos促血管生成的分子机制，蛋白质印迹（Western blot）分析LoVo-Exos携带磷酸化表皮生长因子受体（phosphorylated epidermal growth factor receptor，pEGFR）进入受体细胞。Western blot及酶联免疫吸附分析（ELISA）方法分析EGFR-ERK通路关键信号蛋白及下游血管生成核心分子表达情况，并观察敲减EGFR及细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulatory protein kinase，ERK）抑制剂处理对血管生成的影响。结果 共聚焦显微镜观察到LoVo-Exos内化进入HUVEC内皮细胞；体外血管生成实验显示，LoVo-Exos能够显著促进HUVEC细胞管状结构的形成。小鼠皮下基质胶塞实验显示，LoVo-Exos能够促进血管样结构的形成。进一步研究发现，LoVo-Exos递送pEGFR到HUVEC中，激活EGFR-ERK通路，促进血管生成。分析LoVo-Exos对下游血管生成核心分子表达的影响，发现LoVo-Exos能够促进HUVEC细胞白介素-8（interleukin-8，IL-8）的分泌，敲减EGFR的LoVo-Exos中pEGFR水平降低，其对IL-8分泌的促进作用降低，且该促进作用能够被MEK1/2抑制剂U0126抑制。结论 LoVo-Exos能够在体内外促进血管生成，其可能机制为LoVo-Exos递送pEGFR到HUVEC中，通过EGFR-ERK途径上调IL-8分泌水平，从而促进HUVEC血管生成能力，为癌症的转移提供新机制。]]> 2025/1/9 10:10:10 70true 目的 肝细胞核因子（HNF）4A是肝脏和胰腺中的关键转录因子，其功能障碍会导致青少年发病的成年型糖尿病 I型（MODY1）。值得注意的是，携带HNF4A致病性突变的MODY1患者表现出对精氨酸的响应降低，并伴有血浆甘油三酯水平下降，但其机制尚不明确。本研究旨在通过转录分析，探讨HNF4A调控的潜在靶基因，并探索其在上述代谢途径中的作用机制。方法 在稳定表达HNF1A报告基因的肾源293T细胞系E9细胞中过表达HNF4A，并进行转录组测序（RNA-seq）分析转录谱差异。随后，通过转录因子结合预测分析，鉴定HNF4A在相关靶基因启动子区域的结合位点。结果 RNA-seq结果显示，在HNF4A过表达的细胞中，跨膜4 L六家族成员5（TM4SF5）的mRNA表达显著上调。转录因子结合预测表明，TM4SF5启动子中可能存在5个HNF4A结合基序。最终，本文确认了位于TM4SF5启动子（-57到-48）区域的DR1位点是HNF4A的关键结合基序。结论 本研究揭示了TM4SF5是HNF4A的一个靶基因，并确定了其调控的关键结合位点。鉴于TM4SF5作为精氨酸传感器在mTOR信号通路激活和甘油三酯分泌中的作用，与在MODY1患者观察到的表型高度相关，本研究为HNF4A在肝脏甘油三酯分泌和胰腺精氨酸刺激胰岛素分泌途径中的调控机制提供了新见解。]]> 2025/2/12 0:00:00 69true 目的 Ca2+作为胞内信号转导的第二信使，在细胞迁移中发挥重要作用。研究表明，胞外Ca2+内流能够促进细胞趋电性迁移，但胞内Ca2+流对细胞趋电性迁移的影响尚不清楚。因此，本研究以盘基网柄菌为模型，探究胞内外Ca2+流对细胞趋电性迁移的影响及其作用机制。方法 应用模拟内源性电场的外源微直流电场和实时录像系统研究盘基网柄菌在电场中的趋电性迁移；利用激光共聚焦显微镜、钙离子通道抑制剂、胞外Ca2+螯合剂EGTA以及无Ca2+的发育缓冲液（development buffer，DB）缓冲液、咖啡因等探究细胞内外Ca2+流对细胞趋电性迁移的影响；应用基因缺失突变株探究内质网Ca2+释放调控细胞趋电性迁移的分子机制。结果 盘基网柄菌以电压依赖的方式向电场负极进行趋电性迁移；电场刺激会增加细胞内Ca2+浓度，抑制胞外Ca2+内流与胞内Ca2+释放均会抑制细胞趋电性迁移；咖啡因作用显著增加细胞内Ca2+的浓度，抑制内质网Ca2+释放会抑制细胞的趋电性迁移；Gα2、Gβ、Gγ、Erk2缺失均导致细胞趋电性迁移能力显著降低，咖啡因作用完全或部分恢复了Gα2-、Gβ -、Erk2-突变株的趋电性迁移，但没有恢复Gγ-突变株的趋电性迁移。结论 内质网Ca2+释放介导盘基网柄菌细胞的趋电性迁移，且参与G蛋白和细胞外信号调节激酶2（ERK2）对细胞趋电性迁移的调控过程。]]> 2025/1/8 15:32:21 68true 目的 无创磁刺激技术已广泛应用于阿尔茨海默病 （Alzheimer’s disease， AD） 的治疗，但缺乏便捷及时的疗效评估与反馈方法，难以有效指导磁刺激方案的调整。本研究旨在探究心率变异性（heart rate variability，HRV）诊断AD并引导AD磁刺激干预技术的可能性。方法 本研究采用频率40 Hz、磁感应强度10 mT的脉冲磁场对AD模型小鼠进行为期18 d的全身暴露实验，检测暴露前后的行为学和心脑电信号，并采集每天暴露后的即时心电信号。结果 利用单因素方差分析与皮尔逊相关系数分析发现：HRV部分指标可以和行为学及脑电（electroencephalogram，EEG）一样精确识别AD模型小鼠 （P<0.05）并显著区分病症程度（P<0.05），其中rMSSD、pNN6、LF/HF、SD1/SD2及排列熵展现出了与行为学及脑电良好的相关性及统计学意义（r>0.3，P<0.05）；磁场暴露前后这些HRV指标同行为学及脑电均得到显著调节（P<0.05），且在连续的心电变化中更精确地观察到刺激效果的变化趋势。结论 HRV能精确反映病理生理变化和病症程度，快速评估磁刺激效果，具有用于引导曝磁模式的潜力，为研究脑疾病的个性化电磁神经调控技术提供了新思路。]]> 2025/2/24 17:38:54 67true 目的 帕金森病 （Parkinson’s disease， PD） 的核心症状是运动功能受损。 大脑基底神经节运动网络中beta频段神经电活动同运动功能密切相关。本文结合头皮脑电、脑功能网络与临床量表评估，探讨beta频段神经电活动爆发期对脑功能网络特征的影响，为临床诊疗提供参考。方法 本文纳入13名PD患者为PD组，13名健康受试者为健康对照组，采集两组受试者的静息态脑电数据，提取脑电数据中的beta爆发期与非爆发期，利用加权相位滞后指数构建相位同步网络，对比两组受试者不同时期、4个频段下的相位同步网络拓扑特征参数的变化，讨论网络特征变化与临床症状之间的相关性。结果 PD患者beta爆发期时4个频段下相位同步网络拓扑特征参数较健康受试者显著升高，beta爆发期时beta频段下相位同步网络的平均聚类系数与UPDRS-III评分呈负相关，非爆发期时low gamma频段下相位同步网络的平均聚类系数与UPDRS评分和UPDRS-III评分、全局效率和平均度与UPDRS-III评分之间呈正相关。结论 PD患者beta爆发期脑功能网络特征显著提高，beta爆发期时beta频段脑功能网络特征与临床量表评分负相关，而非爆发期时low gamma频段脑功能网络特征与临床量表评分正相关，说明PD患者运动功能与beta爆发期有关。本文结果可为PD的诊断提供参考。]]> 2025/2/28 11:13:03 66true 目的 类Bola型短肽在C端间氢键的作用下可形成肽二聚体，从而展示出新颖的自组装特性。为探索亲水氨基酸种类对类Bola型短肽自组装行为的影响，本文以Ac-KI3-CONH2为模板，通过将亲水性的残基赖氨酸（K）分别替换为精氨酸（R）或组氨酸（H），设计合成了短肽Ac-RI3-CONH2和Ac-HI3-CONH2，系统研究了它们的自组装行为。方法 利用原子力显微镜和透射电子显微镜表征了组装体的形貌和尺寸，通过圆二色光谱术和傅里叶变换红外光谱术探索了组装体的二级结构，借助小角中子散射获取了组装体的内部结构信息。在此基础上，系统分析了亲水氨基酸种类对类Bola型短肽自组装行为的影响，阐明了组装体的形成机制。结果 研究表明，Ac-KI3-CONH2和Ac-RI3-CONH2均可自组装形成直径较大的双层纳米管，宽度约为200 nm。这些纳米管是由扭转（twist）带转变为螺旋（helical）带，并进一步发生边缘融合形成的。然而，它们的初级组装体纤维的手性相反，Ac-KI3-CONH2为左手螺旋，而Ac-RI3-CONH2为右手螺旋，这主要是K和R残基与水形成氢键的能力不同导致的。Ac-HI3-CONH2则形成了扭转带结构，由于咪唑环间较大的位阻作用，带宽度显著减小，约为30 nm。同时，咪唑环既可以作为氢的供体，又可以作为氢的受体，促进了组装体在高度方向的生长，导致形成的带具有多层高度。结论 短肽组装体的形成是不同非共价键力共同作用的结果，通过改变类Bola型短肽中亲水氨基酸残基的种类，有效调控了促进组装体形成的非共价键力的相对强弱，进而控制了组装体的形貌和手性。本研究为不同组装体的构筑提供了简便有效的途径，也为功能性生物材料的开发提供了理论依据。]]> 2025/2/14 0:00:00 65true 目的 GHz电化学阻抗谱（GHz electrochemical impedance spectroscopy，GHz-EIS）虽然可以实现对细胞溶液的快速、无标记检测，但在复杂样本的GHz电阻抗数据解析方面仍然面临诸多挑战，限制了该技术在细胞研究中的有效应用。为此，本研究提出了一种融合GHz电化学阻抗谱与深度学习算法的方法，旨在提升对细胞溶液浓度的精准识别与量化能力，从而为GHz电化学阻抗谱数据的解析提供一种高效且准确的全新解决方案。方法 首先通过GHz-EIS细胞溶液介电特性提取方法，从实验得到的细胞溶液电化学阻抗谱（EIS）中获取不同浓度细胞溶液的介电特性数据，构建包含浓度标签的数据集，随后设计具有Relu、Lrelu等特定激活函数的后向传播（BP）神经网络模型，通过数据训练实现对细胞溶液介电特性的智能提取与分析，从而实现细胞溶液体积分数的精准识别。结果 通过与传统的离心法结果对照，可以观察到细胞悬浊液的浓度识别值与离心法所得结果十分接近，细胞悬浊液浓度识别值的相对误差均小于5%。对于高浓度的样本，误差相对更小，表明本文提出的细胞悬浊液浓度自动识别方法可以准确快速地计算未知样本细胞悬浊液的浓度。结论 结合GHz-EIS和BP神经网络算法可以实现对未知样本细胞悬浊液的浓度细胞浓度的准确高效识别，为构建便捷的在线细胞分析平台奠定了基础，展示出重要的应用前景。]]> 2025/2/27 16:40:06 64true 目的 基于甲型流感病毒神经氨酸酶（neuraminidase，NA）蛋白抗原抗体复合物结构数据，探究抗原蛋白表位与抗体的空间结构识别关系。方法 完整收集SAbDab数据库中NA蛋白抗原抗体复合物结构数据，对蛋白质结构进行处理分析，获取抗原表位和相应抗体配位氨基酸序列和空间分布信息，统计分析结合抗体序列、基因使用频率、氨基酸使用偏好性和互补决定区（CDR）氨基酸长度；分析抗体结合的热点区域，进一步对抗体配位空间结构相似性进行计算和层次聚类，深入探究抗原表位与抗体的空间识别关系，通过生物膜干涉（BLI）实验验证靶向不同抗原表位的抗体的识别特异性。结果 SAbDab数据库中甲型流感病毒NA蛋白的抗原抗体复合物结构数据以H3N2、H7N9、H1N1亚型为主，抗原表位的热点位置主要集中在催化活性位点区域，抗体物种来源以人源和鼠源为主，鼠源抗体VJ基因组合使用频率最高的是IGHV1-12*01/IGHJ2*01，人源抗体VJ基因组合使用频率最高的是IGHV1-69*01/IGHJ6*01。结合在催化活性位点区域内与结合在催化活性位点区域以外其他区域的抗体，在重链CDR氨基酸长度与氨基酸使用偏好性方面存在显著差异。抗原表位与抗体配位具有特定的识别关系，部分相似的抗体配位结构特异性地识别相同的表位，可在结构上观察到结合区域的重叠，BLI实验也验证了这类抗体对表位的竞争结合。结论 NA蛋白抗原表位位点分布以催化活性位点及周围环状区域为主，空间构象互补与静电相互作用在抗体与抗原的催化活性区域识别和结合过程中发挥重要作用。抗原与抗体存在不依赖于抗体唯一序列的空间识别关系，不同序列的抗体也可能形成识别同一抗原表位的局部空间结构。]]> 2024/12/4 10:35:01 63true 目的 灰尘作为重要的微量物证检材，在法庭科学领域有极大的应用潜力，随着DNA测序技术的发展，越来越多的研究者开始关注灰尘中的微生物群落分布。不同地区灰尘中的微生物群落分布存在差异，利用灰尘中的微生物群落信息进行生物地理位置推断在法庭科学领域有重要意义。通过分析不同地区灰尘样本的微生物DNA，可以揭示该地区的微生物组成，从而推断该地区的生物地理位置。本研究旨在探索中国4个城市的真菌群落组成结构差异，评估基于真菌的内转录间隔区（internal transcribed spacer，ITS）2区测序对灰尘样本进行生物地理位置推断的准确率，为公安实战基于环境DNA进行地域推断奠定基础。方法 使用通用引物5.8S-Fun/ITS4-Fun扩增真菌基因组的ITS2区，在Illumina MiSeq FGx平台进行测序。采用非度量多维标度分析（non-metric multidimensional scaling，NMDS）可视化样本之间的差异。使用相似性分析（analysis of similarities，ANOSIM）和多元方差分析（permutational multivariate analysis of variance，PERMANOVA）两种不同的非参数分析方法衡量样本间的群落差异程度。使用LDA Effect Size（LEfSe）分析筛选出不同城市间有显著差异的物种。使用微生物来源分析软件SourceTracker对灰尘样本进行生物地理位置来源推断。结果 北京、福州、昆明、乌鲁木齐4个城市的灰尘样本中，北京的物种丰富度最高，物种注释结果显示，4个城市的真菌群落物种组成结构和相对丰度有明显差异。NMDS结果显示，灰尘样本在多维空间中基于生物地理来源进行分组，同一城市的灰尘样本有明显的聚类现象，不同城市的灰尘样本在第一轴明显分开。ANOSIM和PERMANOVA结果也表明，4个城市间的真菌群落组成均具有显著差异，其中以福州和乌鲁木齐两个城市之间的差异最为明显。所有已知来源的灰尘样本的生物地理位置均被成功预测。结论 北京、福州、昆明、乌鲁木齐4个城市的真菌群落物种组成结构和相对丰度具有显著差异，基于真菌的ITS2区测序对这4个城市的灰尘样本进行生物地理位置推断具有较高的准确率，在法庭科学领域利用灰尘中的真菌群落信息进行生物地理位置推断有较高的可行性。]]> 2024/11/24 23:03:07 62true 目的 利用体液斑迹的组织特异性RNA标记，构建一套基于毛细管电泳平台，可同时检测唾液-精液-阴道分泌物特异性标记的多重复合扩增体系，旨在用于对犯罪现场发现的可疑体液斑迹进行组织来源鉴定。方法 收集唾液、精液、阴道分泌物样本，通过引物筛选、体系调配以及PCR条件优化，构建出一套多重荧光复合扩增体系，并对该体系的特异度、灵敏度以及对混合样本的检出能力进行探究。结果 本复合体系对上述3类体液均表现出较高的特异性，每类体液标记物与其他两类间无交叉反应，对3类体液的最低检测阈值分别达到了0.002 9、0.001 5和0.42 mg/L。同时，本体系对混合样本的检验也有较高的区分度，能够应用于实际样本。结论 该复合扩增检测体系可实现唾液、精液与阴道分泌物的正确筛检，灵敏度满足实际工作需求，操作简便，为办案实践提供了一种体液斑迹的分析筛选方法。]]> 2024/11/6 14:47:13 61true 目的 本研究以高脂饮食诱导的肥胖小鼠为研究对象，以海马神经元结构可塑性和神经发生为切入点，探讨8周运动干预对肥胖小鼠记忆功能的影响及其可能的神经机制。方法 6周龄雄性C57BL/6小鼠（20~30 g，60只）随机分为对照组（CON）、高脂饮食组（HFD）和高脂饮食运动组（HFD-Ex）。运动干预前，高脂饮食组和高脂饮食运动组进行20周高脂饮食。运动组小鼠进行8周跑台运动。运动方案为前10 min运动负荷8 m/min，后50 min运动负荷12 m/min，1h/d，5d/周，跑台坡度0°。利用Y迷宫和新物体识别测试评估小鼠的记忆水平，并应用免疫荧光染色、蛋白质印迹法（Western blot）、高尔基体染色和酶联免疫吸附分析（ELISA）探究神经元轴突、树突、树突棘、c-fos、双皮质素（DCX）、突触后致密物95（PSD95）、突触素（Syn）、炎症因子IL-1β 和主要组织相容性复合体II（MHC-II）阳性小胶质细胞水平。结果 肥胖小鼠呈现记忆损害，而运动干预有效改善肥胖小鼠海马依赖性记忆损害。运动通过提高肥胖小鼠海马神经元轴突长度、树突复杂性、树突棘数量、DCX和PSD95表达以增强神经发生和神经元结构可塑性。同时，运动降低肥胖小鼠海马MHC-II阳性小胶质细胞数和IL-1β水平。结论 8周有氧运动有效提高肥胖小鼠海马神经发生和神经元结构可塑性，并降低小胶质细胞活化和神经炎症，这可能是运动改善高脂饮食诱导的肥胖小鼠海马依赖性记忆损害的机制之一。]]> 2024/11/24 21:06:35 60true 目的 探讨组蛋白脱乙酰酶3（histone deacetylase 3，HDAC3）对小鼠银屑病样炎症发生发展的影响及相关免疫机制。方法 选取6~8周龄健康C57BL/6小鼠，将小鼠随机分为对照组（Control），银屑病模型组（IMQ），HDAC3抑制剂RGFP966处理的银屑病模型组（IMQ+RGFP966），提前1 d对小鼠进行剃毛处理。待稳定1 d后，Control组涂抹等量的凡士林，IMQ 组背部涂抹咪喹莫特（imiquimod，IMQ，62.5 mg/d），建立小鼠银屑病样炎症模型；IMQ+RGFP966组在银屑病模型基础上以高剂量HDAC3选择性抑制剂RGFP966（30 mg/kg）进行干预处理。各组持续处理5 d，观察记录背部皮肤银屑病样炎症症状（鳞屑、红斑、皮肤厚度）、体重变化及精神状态，并拍照存档。在小鼠解剖后，采用苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色检测RGFP966对银屑病模型小鼠皮肤组织层次结构的影响，并测量皮肤厚度。通过实时荧光定量 PCR（reverse transcription real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）和蛋白质印迹法（Western blot，WB），分别检测皮肤组织中 HDAC3的mRNA和蛋白质表达水平。采用流式细胞术检测各组小鼠外周血和淋巴结中性粒细胞、外周血CD4+ T淋巴细胞和CD8+ T淋巴细胞及外周血CD4+ T淋巴细胞的白介素-17A（interleukin-17A，IL-17A）分泌水平，检测脾脏CD4+ T淋巴细胞HDAC3、CC基序趋化因子受体（CC motif chemokine receptor，CCR）6、CCR8表达及 IL-17A分泌水平。采用免疫组化检测皮肤HDAC3、IL-17A、白介素-10（interleukin-10，IL-10）水平。结果 与Control组相比，IMQ组小鼠展示出明显的银屑病样炎症，出现红斑、鳞屑及皮肤褶皱。RGFP966加重了银屑病样炎症症状，皮肤角化增多。银屑病面积与严重性指数（psoriasis area and severity index，PASI）皮肤症状评分，IMQ组高于Control，IMQ+RGFP966组高于IMQ组。测量各组皮肤厚度，IMQ+RGFP966>IMQ>Control。Control、IMQ、IMQ+RGFP966组的血液和淋巴结的中性粒细胞依次增多，血液CD4+ T淋巴细胞和CD8+ T淋巴细胞也呈相同趋势。在皮肤组织中，与Control组相比，模型组HDAC3的mRNA和蛋白质水平下降，RGFP966未能使HDAC3的mRNA和蛋白质表达进一步下降。HDAC3主要定位于细胞核内，与Control组相比，IMQ组的皮肤组织核内HDAC3减少，RGFP966使核内HDAC3进一步减少。与Control组和IMQ组相比，RGFP966处理使脾脏CD4+和CD8+ T细胞HDAC3表达下降。RGFP966处理增加了脾脏CD4+ T细胞CCR6和CCR8的表达；同时，外周血和脾脏CD4+ T淋巴细胞的IL-17A分泌显著升高。此外，与IMQ组相比，RGFP966减少了皮肤组织IL-10蛋白并上调了IL-17A表达。结论 RGFP966通过抑制HDAC3，增加细胞因子IL-17A分泌和趋化因子CCR8、CCR6的表达，加重银屑病样炎症反应。]]> 2024/12/31 11:50:28 59true 目的 表征一条三酰甘油（TAG）生物合成替代途径中的跨膜蛋白68（TMEM68），并确定TMEM68与经典TAG合成酶酰基辅酶A∶二酰甘油酰基转移酶（DGAT）之间的相互作用。方法 通过比较DGAT抑制剂处理与否的脂滴形态、油红O染色面积以及TAG水平，研究外源脂肪酸和单酰甘油对TMEM68过表达和敲除细胞的TAG合成和脂滴形成的影响。脂滴采用荧光染料染色并使用共聚焦荧光显微术观察。TAG水平使用基于酶法的脂肪检测试剂盒测定。TMEM68和DGAT1的共定位通过共表达和共聚焦荧光显微术检测，并采用免疫共沉淀检测它们的相互作用。采用逆转录定量聚合酶链反应和免疫印迹法检测DGAT1的表达。结果 TMEM68催化的TAG合成不依赖DGAT活性。在人神经母细胞瘤细胞中，外源脂肪酸和单酰基甘油主要通过DGAT促进TAG合成。TMEM68与DGAT形成的脂滴具有不同的形态。此外，TMEM68和DGAT1在同一内质网（ER）区室共定位，但不发生物理相互作用。TMEM68的过表达降低了参与TAG合成的主要DGAT酶DGAT1的表达，然而TMEM68敲除没有影响。结论 TMEM68介导的TAG合成途径具有不同于经典DGAT通路的特征，然而TMEM68和DGAT可能共同调控细胞内TAG水平。]]> 2024/11/6 14:54:16 58true 目的 探讨槲皮素对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的泡沫细胞脂滴形成的影响及作用机制。方法 用50 mg/L的ox-LDL诱导小鼠RAW264.7细胞构建泡沫细胞模型，分别用不同浓度的槲皮素处理不同时间后，通过CCK8筛选槲皮素最佳作用浓度和时间。基于构建的泡沫细胞模型，在添加或不添加AS1842856（FOXO1抑制剂）的情况下，用槲皮素处理后，通过油红O染色观察脂滴形成，通过流式细胞术检测细胞凋亡；通过免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞FOXO1蛋白表达水平；通过吖啶橙染色观察自噬小体形成情况；通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blot检测各组细胞Beclin1、LC3II和P62的mRNA和蛋白质表达水平。结果 100 μmol/L槲皮素干预12 h后，泡沫细胞脂滴形成和细胞凋亡被显著抑制（P<0.05）。与对照组相比，模型组细胞脂滴形成和细胞凋亡增加（P<0.05），自噬小体减少（P<0.05），FOXO1蛋白表达减少（P<0.05），Beclin1和LC3II蛋白的mRNA和蛋白质表达水平均显著下降（P<0.05），P62的mRNA和蛋白质表达水平显著增加（P<0.05）。与模型组相比，槲皮素处理上调FOXO1蛋白表达（P<0.05），诱导自噬小体形成（P<0.05），促进Beclin1和LC3II的蛋白质和mRNA表达水平（P<0.05），抑制P62的蛋白质和mRNA表达水平（P<0.05）。而FOXO1抑制剂会逆转槲皮素对ox-LDL诱导的泡沫细胞的作用效果。结论 槲皮素通过上调FOXO1的表达诱导自噬，抑制ox-LDL诱导的脂滴形成。]]> 2024/10/8 21:21:44 57true 目的 中风是导致世界范围内人类致死和致残的主要病因之一，在老年人中尤为突出，其中80%~85%的病例是缺血性脑卒中。已有大量文献表明，暴露于高浓度的ATP会导致神经元死亡，从而导致中风和其他创伤性脑损伤二次伤害。细胞焦亡是一种最新发现的细胞程序性死亡方式，主要通过激活包含caspase-1在内的多种caspase蛋白类型，造成包括GSDMD在内的多种Gasdermin家族成员发生剪切和多聚化，引发细胞穿孔，进而引起细胞死亡。本研究旨从细胞焦亡的角度探究高浓度ATP诱导的神经毒性作用和硫化氢（H2S）的神经保护机制。方法 利用SH-SY5Y细胞建立ATP毒性损伤模型，检测H2S对ATP诱导的神经毒性的影响，并探讨其潜在的分子机制。利用CCK-8细胞活性检测试剂盒和LDH检测试剂盒检测细胞活性。使用YO-PRO-1染色后，流式细胞仪测定法评估细胞膜渗透性。使用免疫印迹技术测定焦亡相关蛋白质水平。结果 SH-SY5Y细胞暴露于高浓度的ATP诱发了显著的细胞毒性和细胞膜通透性增加，这两者都被H2S供体NaHS抑制。此外，暴露于ATP增强了NLRP-1、caspase-1的激活和N-GSDMD表达。通过NaHS预处理后，这些ATP诱导的作用显著减弱。结论 本实验研究结果表明，H2S通过调控NLRP1/caspase-1/N-GSDMD通路抑制ATP诱导的细胞焦亡发挥神经保护作用。]]> 2024/10/2 0:00:00 56true 目的 为了探讨2,3,5,4"-四羟基二苯基-2-O-β-葡萄糖苷（TSG）是否通过抑制炎症改善多囊卵巢综合征（PCOS）样特征。方法 皮下注射脱氢表雄酮建立雌性SD大鼠PCOS模型，然后腹腔注射TSG。颗粒细胞（GCs）KGN转染小分子干扰RNAs（si-NC和si-CYP19A1）后，先用脂多糖（LPS）预孵育，再用（/不用）TSG处理。阴道脱落细胞监测发情周期；苏木精-伊红（HE）染色分析卵巢卵泡形态；酶联免疫吸附分析（ELISA）法检测血清雌二醇（E2）、睾酮（T）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、IL-6、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、晚期糖基化终末产物（AGEs）、C反应蛋白（CRP）、网膜素1（Omentin-1）水平；免疫组化法检测GCs中增殖细胞核抗原（PCNA）和芳香化酶（CYP19A1）的表达；原位末端标记（Tunel）染色检测GCs的凋亡情况；采用实时定量PCR（qPCR）和蛋白质免疫印迹（Western blot）检测卵巢和转染细胞的CYP19A1表达；qPCR分析LPS和TSG处理后转染细胞中IL-6和TNF-α的表达。结果 TSG治疗的PCOS鼠恢复了动情周期。与PCOS相比，TSG治疗的PCOS鼠卵巢中窦状卵泡减少，黄体增多。与PCOS相比，TSG处理的PCOS鼠E2升高，T和LH降低；促炎因子（IL-6、TNF-α、CRP、AGEs）降低，抗炎因子（Omentin-1）升高。TSG能部分抑制PCOS引起的PCNA阳性GCs的减少和Tunel阳性GCs的增加。与PCOS相比，经TSG处理后GCs的CYP19A1表达上调。转染si-CYP19A1的细胞中IL-6和TNF-α表达量与si-NC细胞比明显增加。转染细胞经LPS预孵育后，IL-6和TNF-α的表达明显增加，CYP19A1表达下调。与经LPS孵育的细胞相比，经LPS和TSG处理后，细胞IL-6和TNF-α表达量减少，而CYP19A1表达增加。与LPS和TSG处理转染si-NC细胞相比，转染si-CYP19A1的细胞经LPS和TSG处理后，IL-6和TNF-α表达量明显增加。结论 TSG通过上调GCs中CYP19A1的表达抑制炎症反应来缓解PCOS样特征。]]> 2024/11/19 0:00:00 55true 目的 通过8周游泳运动干预Shank3基因敲除（Shank3-/-）诱导的孤独症谱系障碍（autism spectrum disorder，ASD）大鼠模型，基于细胞自噬视角探索运动干预改善大鼠孤独症样行为的机制。方法 根据基因型鉴定结果及运动干预情况将大鼠分为野生对照组（WC组）、Shank3-/-组（KC组）、野生游泳组（WS组）、Shank3-/-游泳组（KS组），每组15只。KS组和WS组进行8周游泳运动锻炼，5 d/周，逐步递增至40 min/次并保持。游泳运动干预后24 h进行行为学实验，包括：自梳理实验、埋珠实验、孔洞实验。行为学测试12 h后进行取材，通过透射电镜观察纹状体区域自噬体数量，免疫荧光染色观察微管相关蛋白1轻链3（LC3）蛋白及选择性自噬接头蛋白（p62）蛋白表达水平，实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，qPCR）和免疫印迹法（Western blot）检测纹状体组织中B细胞淋巴瘤蛋白2相互作用蛋白1（Beclin1）、LC3、p62、自噬相关蛋白质5（Atg5）、自噬相关16样蛋白1（Atg16L）、溶酶体相关蛋白1（LAMP1）的蛋白质和mRNA的表达。结果 与WC组相比，KC组大鼠自梳理次数（P0.05）及时间（P0.01）显著增加，埋珠数量显著增加（P0.01），孔洞探索次数（P0.05）及单一孔洞探索次数（P0.01）显著增加，8周游泳运动后，相比于KC组大鼠，KS组大鼠自梳理时间、埋珠数量及单一孔洞探索次数显著降低。此外，与WC组相比，KC组大鼠纹状体区域有大量自噬体形成，同时Atg5（P0.05）、Atg16L（P0.01）、p62（P0.01）的蛋白质及mRNA表达显著上升，LC3II/LC3I比值上升（P0.01），Beclin1蛋白显著上升（P0.01），LAMP1的蛋白质及mRNA表达显著下降（P0.01）。8周游泳运动后，相比于KC组大鼠，KS组大鼠蛋Atg5、Atg16L、p62的蛋白质及mRNA表达显著下降，LC3II/LC3I显著下降 （P0.05），Beclin1蛋白显著下降（P0.01），LAMP1的蛋白质及mRNA表达显著上升（P0.05）。结论 8周早期游泳可以调节纹状体细胞自噬缓解Shank3-/-大鼠刻板行为。]]> 2024/10/2 8:03:25 54true 目的 脑电图（EEG）是一种记录脑电波的非侵入式电生理监测方法，然而传统脑电采集电极易受参考活化的影响，而且空间分辨率低。拉普拉斯电极参考独立，并且有望提高EEG空间分辨率。本研究基于双环拉普拉斯电极，探究拉普拉斯电极独立参考特性，对比拉普拉斯电极与传统电极的空间分辨率差异。方法 使用21个Ag/AgCl双环拉普拉斯电极，进行三维（3D）半球水箱试验，模拟全脑信号采集，检测400 mVpp@13 Hz正弦信号的分布。更换拉普拉斯电极的地电极位置以及传统电极的参考电极位置，提取并分析13 Hz源频率成分的空间分布。结果 不同地电极位置下，拉普拉斯电极信噪比（SNR）空间分布基本一致，其相关系数为0.94，而传统电极在不同参考电极位置下的SNR分布相关系数为0.07，拉普拉斯电极参考独立，传统电极对参考电极位置敏感。拉普拉斯电极幅值3 dB衰减面积比率为2.1%，而传统电极为6.9%，拉普拉斯电极SNR 3 dB衰减面积比率为1.0%，而传统电极为30.1%。结论 拉普拉斯电极不受参考电极影响，具有参考独立特性，且空间分辨率更高，有望实现更精确的脑电活动定位，为拉普拉斯电极用于脑-机接口（BCI）奠定了基础。]]> 2024/10/5 22:13:45 53true 目的 癌症作为一个全球性公共卫生问题受到众多关注，早发现、早治疗是提高癌症患者生存率的关键，但由于设备成本高、检测速度慢、检测准确度差等因素影响，早期癌症筛查推广受限。因此，本文基于多频同步生物阻抗谱技术，提出了一种面向肿瘤识别的高精度高速生物阻抗谱检测方法。方法 首先，基于多频同步技术搭建一套多频同步生物阻抗谱检测系统，实现生物阻抗谱的高速检测，设计同心圆传感器减小生物组织各向异性对阻抗检测带来的影响，提高不同组织之间生物阻抗谱的区分度。其次，建立胃壁组织模型，通过仿真研究传统四电极传感器与同心圆传感器受到各向异性影响的程度。最后，通过猪肉组织检测实验和临床胃癌组织检测实验，验证使用同心圆传感器的多频同步生物阻抗谱检测系统具有更高的检测精度。结果 使用同心圆传感器时，检测结果平均重叠率（rat）为13.4%，对比传统电极的检测结果减小了41.7%，平均离散系数（CV）为7.6%，对比传统电极减小了54.0%，并且多频同步生物阻抗谱检测系统进行一次检测的时间约为20 ms，本文提出的检测方法具有较高的检测精度和检测速度。最后选取同心圆传感器对人体胃癌组织进行了临床实验，成功区分正常组织和肿瘤组织。结论 本文提出的面向肿瘤识别的高精度高速生物阻抗谱检测方法能有效减小生物组织各向异性的影响，以较高速度获得更高精度的检测结果。]]> 2024/10/18 14:55:14 52true 目的 针对青春期前及急需治疗的恶性肿瘤患者，卵巢组织的冷冻和移植是更合适的生育力保存方法。目前临床上通常采用高浓度的低温保护剂（cryoprotectants，CPAs）进行卵巢组织冷冻并采用水浴进行复温，这会导致卵巢组织受到不同程度的毒性损伤和反玻璃化损伤。因此，本文基于海藻酸钠水凝胶包封及磁热复温技术，提出了优化卵巢组织玻璃化保存的方法。方法 首先研究了海藻酸钠浓度、水凝胶包封与保护剂加载的顺序对包封卵巢组织玻璃化冷冻效果的影响，并验证了海藻酸钠水凝胶包封对CPAs浓度的降低作用。其次，搭建了水浴结合磁热复温的平台，在不同磁纳米粒子浓度及磁场强度条件下对卵巢组织进行复温，评估了复温后卵泡存活率、抗氧化能力及卵巢组织完整性。结果 研究发现，2%浓度海藻酸钠水凝胶包封卵巢组织冷冻后的卵泡存活率最高。先加载保护剂再进行包封的方式更适合卵巢组织冷冻保存，并能将所需冷冻保护剂浓度降低至原浓度的50%。8 g/L Fe3O4磁纳米粒子与300 Gs的交变磁场对卵巢组织的复温效果最佳。水浴结合磁热复温卵巢组织后卵泡存活率最高，抗氧化能力最好且组织形态得到了良好的保持。结论 海藻酸钠水凝胶包封卵巢组织能够在冷冻环节中降低保护剂浓度，磁热与水浴的结合使用能够更高效地实现卵巢组织的复温。本研究为卵巢组织玻璃化冷冻及复温的优化提供了新的方法。]]> 2024/8/27 13:39:37 51true 目的 化疗是当前癌症治疗的重要手段之一，但化疗过程中多药耐药性的产生及副反应的发生严重限制了其应用，因此化疗常与其他药物或疗法联合应用。在已经鉴定的13个人类岩藻糖基转移酶（focosyltransferases，FUTs）中，FUT8（alpha-(1,6)-fucosyltransferase）是唯一负责核心岩藻糖基化的酶。核心岩藻糖基化在癌症的发生、转移及化疗耐药中有着重要作用，抑制FUT8是一种潜在逆转多药耐药的方法。本研究旨在探究FUT8的小分子抑制剂2FF（2-deoxy-2-fluoro-L-fucose）联合化疗药物多柔比星（doxorubicin，DOX）治疗恶性肿瘤的可行性。方法 凝集素印迹实验检测2FF、DOX或二者联合对肿瘤细胞核心岩藻糖基化水平的影响。通过CCK-8法、Transwell侵袭实验探究2FF与DOX联合作用对人肝癌细胞HepG2及小鼠结肠癌细胞CT26细胞活性或侵袭的影响；通过流式细胞术检测2FF、DOX或二者联合对HepG2细胞表面程序性死亡受体配体1（programmed death-ligand 1，PD-L1）表达的影响；构建BABL/c小鼠结肠癌细胞皮下荷瘤模型以探究2FF与DOX联合作用对肿瘤生长的抑制作用。结果 在本研究中，证实FUT8的抑制剂2FF能有效抑制HepG2及CT26细胞核心岩藻糖基化水平，而DOX可增强HepG2细胞核心岩藻糖基化水平，并且2FF可抑制这一作用。2FF能够有效增强HepG2及CT26细胞对DOX的敏感性。此外，2FF联合DOX可协同抑制HepG2细胞的侵袭能力。在体内水平，2FF联合DOX可增强对BALB/c小鼠CT26皮下荷瘤模型的疗效，但二者联合造成小鼠体重的下降。此外，DOX可引起HepG2细胞PD-L1表达上调，而2FF可削弱这一作用。结论 FUT8抑制剂2FF可抑制DOX对肿瘤细胞的核心岩藻糖修饰和PD-L1表达的促进作用，并增强DOX的抗癌作用。]]> 2024/9/4 16:03:12 50true 目的 光敏剂被特定波长的光激发后，产生的活性氧类能破坏细胞组织，介导细胞死亡，对微生物感染、肿瘤等相关疾病的治疗具有重要意义。方法 基于粳稻类向光素1B（Oryza sativa japonica phototropin-1B-like）的LOV（light-oxygen-voltage）结构域，设计得到光敏剂LovPSO2及其突变体LovPRO2。在445 nm、70 μmol·m-2·s-1蓝光照射下，每隔 2 min测量LovPSO2和LovPRO2的单线态氧产量，持续10 min，每隔1 min测量其超氧阴离子产量，持续5 min，并研究温度、光照对其稳定性的影响，最后将其转入E. coli BL21（DE3）和HeLa细胞中表达并分析光毒性效果。结果 在445 nm、70 μmol·m-2·s-1蓝光照射下，LovPSO2是一种能产生大量单线态氧的II型光敏剂（ΦΔ=0.61），LovPRO2是一种能够同时产生单线态氧和超氧阴离子的光敏剂。蛋白质稳定性分析结果表明，LovPSO2和LovPRO2具有较好的温度稳定性，其中LovPRO2的光稳定性更好。蛋白质的光毒性分析结果表明，445 nm、30 mW/cm2蓝光照射30 min后，LovPSO2和LovPRO2对E. coli BL21（DE3）菌株有较好的光毒性，致死率高达90%。结论 LovPSO2和LovPRO2可作为抗菌光敏剂，在食品和医疗等方面均有较为广阔的应用前景。]]> 2024/9/10 0:00:00 49true 目的 探讨下丘脑室旁核（paraventricular nucleus，PVN）促肾上腺皮质激素释放素（corticotropin releasing hormone，CRH）神经元在慢性束缚压力应激（chronic restraint stress，CRS）诱导焦虑样行为中的作用，以及运动干预是否通过PVN CRH神经元缓解慢性束缚压力应激诱导的焦虑样行为。方法 20只8周龄雄性C57BL/6J小鼠，随机分为空白对照（control，Ctrl）组和CRS组，并通过旷场（open field test，OFT）和高架十字迷宫（elevated plus maze test，EPM）范式，评估其焦虑样行为，并对慢性束缚压力应激后的小鼠摄食量进行统计。通过免疫荧光染色的方法观察PVN脑区c-Fos的表达情况，以及与CRH神经元的共标情况。利用化学遗传学激活PVN CRH神经元，检测其焦虑情况。通过8周跑台干预（10~16 m/min，60 min/d，6 d/周），观察其对慢性束缚压力应激诱导的焦虑样行为的改善作用。最后，探讨PVN CRH神经元在运动改善焦虑样行为中的作用机制。结果 与Ctrl组相比，CRS组小鼠出现明显的焦虑样行为，在旷场中间区域的时间减少（P<0.001），在高架十字迷宫的开臂时间减少（P<0.001），并且出现食欲下降的现象（P<0.05）；与Ctrl组相比，CRS组小鼠能够促进PVN脑区c-Fos的表达（P<0.001），并且这些c-Fos信号与CRH神经元有大量共标（P<0.001）；利用化学遗传学直接激活PVN CRH神经元，小鼠出现焦虑样行为（P<0.05），并且出现抑制摄食的现象；运动干预可以缓解CRS诱导的焦虑样行为（P<0.001），并缓解摄食抑制现象（P<0.05）；运动干预可以抑制由CRS诱导的PVN CRH神经元活性增强（P<0.001），并且消融PVN CRH神经元可缓解CRS诱导产生的焦虑样行为。结论 慢性束缚压力应激通过激活PVN CRN神经元，诱导小鼠产生焦虑样行为和食欲下降的现象；8周运动干预可能通过抑制PVN CRH神经元缓解慢性束缚压力应激诱导的焦虑样行为；CRH PVN神经元损毁，慢性束缚压力所诱导的焦虑样行为得到改善。这一研究结果揭示了运动缓解压力诱导的焦虑样行为的潜在神经机制，为治疗焦虑等精神疾病提供了新的思路和理论基础。]]> 2024/9/5 16:38:29 48true 目的 番茄是世界范围内产量高、种植面积广的经济作物之一，具有较高的经济效益。番茄早疫病感染速度快、传播范围广、破坏性强，导致番茄减产减收带来严重的经济损失。番茄早疫病早期病状的判别可以为病害的科学防治提供参考，实现病害区域的可视化定位，精准指导病害防治。本文使用高光谱图像结合机器学习算法建立了番茄早疫病早期病状的判别模型，实现了番茄早疫病早期判别和病害区域的可视化定位。方法 针对高光谱图像的噪声干扰，利用鲁棒主成分分析（RPCA）实现高光谱图像的去噪处理；为了避免主观选择感兴趣区域造成信息表征不足的问题，使用最大类间方差法（OTSU）算法从背景中有效提取了番茄叶片，并以整个番茄叶片的平均光谱作为研究对象，结合多元散射校正（MSC）算法以及标准化建立了光谱预处理的综合方法；针对预处理后的光谱，为了提高模型的判别能力，建立了基于特征波长和线性核函数SVM的番茄早疫病早期判别模型。结果 较全光谱波长建模在测试集上的准确率提高8.33%；对SVM模型的参数进行优化，当参数C=1.64时，训练集和测试集上准确率分别达到了91.67%和94.44%，较参数优化前的模型在训练集上的准确率提高了1.19%，而测试集准确率保持不变，有效缓解了模型欠拟合问题。结论 本文建立了番茄早疫病高光谱图像早期判别模型并实现了早期病状的可视化定位，基于特征波长和线性核函数SVM的判别模型可以有效判别番茄早疫病病害的早期病状；利用患病概率的形式对番茄早疫病早期病状进行可视化定位，可视化分析更直观地发现早期病害并采取防治措施。本研究为植物病害早期病状的判别和可视化研究提供了参考，对作物病害的监测识别和科学防治具有重要意义。]]> 2024/10/2 9:50:33 47true 目的 基于控制和脑网络理论来探讨青少年吸烟者结构脑网络的可控性变化，考察可控性指标是否可以作为预测青少年吸烟者睡眠情况的有力因子。方法 在内蒙古科技大学筛选出50例青少年吸烟者和51例健康对照者。基于弥散张量成像（DTI）构建每例受试者的基于各项异分数（FA）加权矩阵的结构脑网络。依据控制和脑网络理论计算平均可控性和模态可控性。采用双样本t检验进行组间差异比较，采用Pearson相关性分析对存在组间差异脑区的平均可控性和模态可控性与Fagerstr?m尼古丁依赖测试（FTND）进行相关性分析。选取可控性得分在前10%的节点作为超级控制器，最后采用反向传播（back Propagation，BP）神经网络来预测青少年吸烟者的匹兹堡睡眠质量指数（PSQI）。结果 吸烟组的背外侧额上回、辅助运动区、豆状核壳、豆状苍白球脑区的平均可控性，以及眶部额下回、辅助运动区、回直肌、后扣带回的模态可控性，均与健康对照组有显著性差异（P<0.05）；吸烟组右侧辅助运动区（SMA.R）的平均可控性与FTND呈正相关（r=0.380 1，P=0.006 5），模态可控性与FTND呈负相关（r=0.329 2，P=0.019 6）；利用可控性指标预测青少年PSQI睡眠指数时，平均可控性的预测效果（R=0.722 81）要优于模态可控性的预测效果（R=0.602 26）。结论 青少年吸烟者结构脑网络的可控性存在异常，其可控性指标可以有效预测其睡眠情况，可为评估其认知功能损伤提供影像依据。]]> 2024/6/18 0:00:00 46true 目的 INF2是formins蛋白家族的一员，INF2的异常表达和调控与多种肿瘤进展有关，但INF2在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）中的表达及作用仍不清楚。HCC是高度致命的恶性肿瘤，鉴于传统治疗的局限性，为寻求新的治疗靶点，本研究探索了INF2在HCC中的表达水平、临床价值及潜在作用机制。方法 本研究利用公共数据库分析了INF2在泛癌及HCC中的表达情况及INF2表达水平对HCC预后的影响。采用实时定量PCR（quantitative real time polymerase chain reaction，RT-qPCR）、蛋白质印迹技术、免疫组化检测了INF2在HCC细胞及人HCC组织中的表达水平。利用公共数据库及人HCC标本临床数据分析了INF2表达与临床病理特征的相关性。随后，通过体外和体内实验阐明了INF2表达水平对HCC细胞生物学功能及Drp1磷酸化的影响。最后，通过数据库和免疫组化实验，进一步分析了INF2在HCC中的预测价值及潜在作用机制。结果 INF2在HCC中异常高表达，且INF2高表达与HCC患者总生存期、肝硬化和病理分化相关。INF2表达水平在预测HCC预后及病理分化程度上有一定的诊断价值。在体内外HCC模型中，INF2的表达上调会触发HCC细胞的增殖和迁移，而INF2的敲除可以抵消这种作用。HCC细胞中的INF2可能通过诱导Drp1磷酸化影响线粒体分裂，并上调PD-L1的表达介导免疫逃逸，进而促进肿瘤进展。结论 INF2在HCC中高表达并与不良预后相关。INF2高表达可能通过诱导Drp1磷酸化及PD-L1表达上调促进HCC进展，靶向INF2可能对高表达INF2的HCC患者有利。]]> 2024/8/31 22:33:11 45true 目的 溃疡性结肠炎是一种常见的免疫炎症性疾病，Th17/Treg细胞失衡和肠道微生物群失调在其发病机制中起主要作用。肌动蛋白细胞骨架有助于调节Th17和Treg细胞的增殖、分化和迁移。Wdr63是一种含WD重复结构域的基因，与肌动蛋白细胞骨架的形成和功能调控密切相关。近来研究表明，WDR63可能通过抑制肌动蛋白聚合作为细胞迁移的调节因子。本文拟探究WDR63对Th17/Treg细胞的调节作用及对溃疡性结肠炎的影响。方法 本文构建Wdr63-/-小鼠，使用葡聚糖硫酸钠盐诱导小鼠结肠炎，收集结肠组织进行组织病理学染色，收集肠系膜淋巴结进行流式细胞术分析，收集健康小鼠粪便进行微生物多样性检测。结果 与野生型结肠炎小鼠相比，Wdr63-/-结肠炎小鼠的结肠组织缩短更明显，疾病活动指数和组织学损伤指数评分更高，结肠组织和肠系膜淋巴结中的Treg细胞减少，Th17细胞增多，抗炎细胞因子IL-10水平较低，而促炎细胞因子IL-17A水平较高。此外，WDR63在维持肠道微生物群稳态方面显示出积极作用，它能够维持拟杆菌门和厚壁菌门的平衡，促进与免疫炎症相关的肠道有益菌的形成。结论 Wdr63缺失加剧了小鼠溃疡性结肠炎，WDR63 可能通过调节 Th17/Treg 平衡和维持肠道微生物群稳态来抑制结肠炎症。]]> 2024/8/24 21:04:40 44true 目的 自闭症谱系障碍（ASD）是一种神经发育疾病，其核心特征是交流和社会互动困难，限制性和重复行为。以往研究表明，ASD患者表现出早期和终身的注意力缺陷，这些缺陷与ASD的核心症状密切相关。基本的视觉注意加工可能为其社会交流和互动能力提供关键的基础。因此，本研究探索了ASD儿童对拓扑性质变化捕获注意的行为。方法 招募27名由专业医生根据美国精神障碍诊断与统计手册第5版（DSM-5）诊断的ASD儿童和28名年龄匹配的正常发展（TD）对照儿童。在一项注意捕获任务中，记录ASD儿童和TD儿童对拓扑变化和非拓扑变化刺激的眼跳行为。眼跳反应时（SRT）、视觉搜索时间（VS）和首次注视停留时间（FFDT）被用作注意偏向的指标。本研究还进行了注意偏向与临床评估量表之间的皮尔逊相关性检验。结果 与非拓扑变化刺激相比，TD儿童对拓扑变化刺激有更快的SRT（P0.05）和VS （P0.05），而ASD儿童在两种指标上均没有表现出显著性差异（P0.05）。此外，ASD儿童对拓扑变化目标的注意力（由FFDT测得）显著少于TD儿童（P0.05）。而且，ASD儿童的注意偏向（由VS测得）与其强迫行为分量表得分之间存在显著负相关（P0.05）。结论 在变化检测过程中ASD儿童难以将注意转移到发生拓扑变化的物体上。这种非典型注意可能影响儿童的认知和行为发展，从而影响其社会沟通和互动。本研究表明，对拓扑变化刺激捕获注意的缺陷可能是自闭症儿童注意缺陷的一个关键特征。]]> 2024/6/27 11:29:54 43true 目的 早疫病是茄科作物生长过程中的一种常见破坏性病害，严重时会导致作物欠收而损失严重，传统的作物病害检测方法难以在病害潜育期及时发现病害特征从而采取科学有效的防治措施。本文通过高光谱成像仪连续监测从而获得不同感染期辣椒早疫病的高光谱图像，利用光谱角余弦-相关系数和切比雪夫距离确定了辣椒早疫病潜育期最早可识别时间（本实验潜育期最早可识别时间为接种后24 h）。方法 以辣椒早疫病潜育期病状作为研究对象，采用遗传算法筛选出13个特征波长，经特征波长优化组合并结合逻辑回归模型建立基于光谱特征的作物病害潜育期病状识别模型。同时，利用局部二值模式建立基于图像纹理特征的辣椒早疫病潜育期识别模型。结果 实验以120个样本进行测试，基于光谱特征的作物病害潜育期病状检测识别模型在训练集和测试集的准确率均达到93%以上，基于纹理特征的作物病害潜育期病状检测识别模型在训练集和测试集的准确率分别达到了98.96%和100%。结论 利用光谱特征或者纹理特征均可实现作物病害潜育期病状的检测识别，纹理特征相比光谱特征更显著地揭示了病害潜育期特征，有效提升了模型检测性能。本文研究成果可为其他作物病害潜育期病状的监测识别提供理论参考。]]> 2024/7/3 14:18:31 42true 目的 非编码RNA（non-coding RNA，ncRNA）在多种生命过程中发挥着重要的调控作用，二级结构对于其正常功能实现至关重要。现有的方法在预测RNA二级结构时普遍存在模型复杂度高、难以捕获长程依赖关系以及在复杂结构预测上泛化能力差的问题。因此，需要提出新的方法来预测RNA二级结构。方法 本研究提出一种端到端预测模型RMDfold，使用 残差Mamba（residual Mamba，resMamba）与密集连接（dense connection，Dense）相结合的特征提取策略。模型采用一维和二维两阶段的学习过程进行特征建模，在一维序列空间中学习核苷酸间的依赖关系，再将其映射到二维空间进一步学习核苷酸间的配对模式，并通过配对约束确定核苷酸的唯一配对，得到最终的二级结构。在一维与二维阶段中均通过Dense捕捉短程依赖特征，resMamba建模长程依赖关系，实现信息表征的逐级增强与短长程特征的有效融合。为了验证本方法的有效性，与Ufold、REDfold、TransUfold和sincfold四种方法在RNAStralign、ArchiveII和bpRNA-new三个公开数据集上进行了比较。结果 本研究所提出的RMDfold方法在结构预测、假结预测、不同长度的序列预测和模型复杂度分析上优于其他算法，并且所需参数最少且推理速度最快。在结构预测中，该方法在RNAStralign的F1分数（F1 score，F1）、马修斯相关系数（Matthews correlation coefficient，MCC）、精确度（precision）和召回率（recall）分别达到0.973 5、0.973 1、0.975 6和0.972 3，在ArchiveII的F1、MCC、precision和recall分别达到0.854 3、0.855 6、0.874 7和0.876 2，在bpRNA-new的F1、MCC、precision和recall分别达到0.382 8、0.401 5、0.536 5和0.318 7。在假结预测中，基于ArchiveII数据集，模型的F1、MCC、precision和recall分别达到0.741 4、0.743 3、0.752 5和0.739 6。在不同长度的序列预测中，该方法在200~500 nt序列中仍保持0.70的准确率。在模型复杂度分析中，RMDfold所需参数量为2.886 7 M，推理速度为0.026 0 s。结论 RMDfold能够准确预测RNA的二级结构，有助于揭示RNA分子在基因表达调控、分子识别和催化中的核心作用，也为疾病相关变异机制解析、RNA靶向药物设计以及进化与比较基因组学研究提供重要支持。]]> 2025/10/31 12:07:56 41true 目的 本文提出一种面向警察极限训练疲劳检测的电阻抗成像方法，以预防警察极限体能训练中过度劳损造成的肌肉损伤问题。方法 首先，依据人体无氧运动机理确定了肌肉疲劳的标志性指标——乳酸，证明了针对肌肉乳酸的测量能够有效反映局部部位的疲劳情况。其次，建立了人体小腿的数值仿真模型，剖分了小腿内部各组织成分结构，确定了乳酸扩散变化的阶段。然后，比较了3种不同正则化算法下，电阻抗成像（EIT）对乳酸扩散过程的重建效果，选取了后续实验所使用的正则化方法。最后，进行了模拟乳酸扩散的水槽实验，验证了TK-Noser正则化算法对于复杂成像场域内部目标的成像能力。结果 仿真结果表明，对于肌肉内部乳酸目标成像，TK-Noser正则化与TV正则化算法取得较好的成像效果并有效抑制了伪影，平均ICC/RMSE分别达到了0.754/0.303、0.772/0.320，平均SSIM/PSNR为0.677/61 dB、0.488/60 dB。在乳酸扩散水槽实验结果中，基于TK-Noser正则化算法的EIT重建结果平均ICC/SSIM达到0.701/0.572。此外，相较于TV正则化算法，TK-Noser正则化重建结果极大程度上保留了成像目标的形状结构信息（SSIM数值比TV正则化结果高21.2%），保证了实验结果的稳定性，突破了电阻抗成像技术对于复杂场域内部乳酸扩散监测的能力。结论 该方法具有实时便捷非侵入的优点，有望应用于警察极限训练肌肉乳酸的动态监测。]]> 2025/4/11 8:39:58 40true 目的 建立一种灵敏、高效的多重PCR-毛细管电泳检测体系，能够在单管反应中同时鉴别牛、小鼠、犬、大鼠、猪、中国仓鼠、猫、马、人、鸡、鸭、驴、羊等13个物种的DNA，并验证其在法医物证及食品安全领域的应用潜力。方法 针对上述物种线粒体DNA，筛选具有物种特异性的序列并设计引物，构建多重PCR体系，优化引物浓度、退火温度等反应条件，使用毛细管电泳检测平台对多重PCR扩增产物进行检验，根据特征性片段长度及荧光差异表征不同物种，建立多重PCR-毛细管电泳体系，并评估其特异性、灵敏度，模拟混合样本、市售肉类样本及真实案件样本检测能力。结果 所建立的多重PCR-毛细管电泳检测体系物种鉴别能力强，灵敏度在0.05~0.001 ng之间，可检测掺假比例为0.1%~0.5%的模拟混合样本，成功鉴别真实案件检材并识别出标签信息不实的肉类及肉制品。结论 本研究所建立的多重PCR-毛细管电泳检测体系特异性强、灵敏度高，具有良好的物种鉴别能力，在法医物证分析、食品安全监测等司法问题中具有较好的应用价值。]]> 2025/10/17 13:11:36 39true 目的 研究牛磺酸对二氢睾酮（DHT）诱导的雄性C57BL/6小鼠雄激素性脱发（AGA）的潜在保护作用及其机制，重点研究毛囊周期调节、细胞增殖/凋亡及相关信号通路。方法 使用雌性C57BL/6小鼠来评估牛磺酸的毛发生长促进潜力。将6周龄雌性C57BL/6小鼠适应性饲养，然后随机分为3组（n=8）：对照组（普通饮用水）、牛磺酸组（含1%牛磺酸的饮用水）和米诺地尔组（外用2%米诺地尔，阳性对照组）。将6周龄雄性C57BL/6小鼠适应性饲养，然后随机分为5组 （n=8）：对照组（生理盐水）、DHT（模型组，DHT 1 mg/d）、DHT+低剂量牛磺酸（DHT 1 mg/d+牛磺酸2 mg/d）、DHT+高剂量牛磺酸（DHT 1 mg/d +牛磺酸10 mg/d）、DHT+米诺地尔（阳性对照组，DHT 1 mg/d，局部应用2%米诺地尔）。使用剪刀剃去背毛，并在治疗前一天使用脱毛膏去除毛发。毛发再生通过定期拍摄脱毛区域并用四点分级系统（0~3）量化评估。在第14天采集背部皮肤样本，用于组织学分析（苏木精-伊红（HE）染色）、免疫荧光染色（Ki67用于检测毛囊细胞增殖，原位末端转移酶标记法（TUNEL）用于检测毛囊细胞凋亡）、酶联免疫吸附分析（ELISA）（DHT定量）、逆转录-实时定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）和蛋白质印迹（Western blot，WB）分析，以评估关键基因和蛋白质（雄激素受体（AR）、转录生长因子（TGF）-β1、TGF-β2、Dickkopf相关蛋白1（DKK1））的表达。结果 在雌性小鼠中，补充牛磺酸能显著加速毛发生长，表现在小鼠皮肤较早从粉红色（毛发休止期）向黑色（毛发生长期）转变，以及毛发生长评分增加，其效果与米诺地尔相当。形态学分析结果显示：牛磺酸显著增加了毛囊数量和真皮厚度。免疫荧光证实，毛发基质中角质细胞增殖增强。在DHT诱导的AGA模型中，DHT显著延长休止期，抑制毛发生长，增加皮肤DHT含量，并诱导毛囊小型化。牛磺酸的治疗，特别是高剂量牛磺酸有效地抵消了这些影响：它促进了毛发由休止期向生长期转变，改善了毛发生长评分。形态学分析结果显示：牛磺酸显著恢复了DHT导致的真皮厚度、毛囊数量、毛球深度和毛囊大小的改变。Ki67和TUNEL分析表明，牛磺酸处理减少了毛囊细胞凋亡并促进了毛囊细胞的增殖。至关重要的是，RT-qPCR和WB分析表明，DHT在mRNA和蛋白质水平上显著上调了小鼠背部皮肤中AR、TGF-β1、TGF-β2和DKK1的表达。牛磺酸的施用显著下调了这些致病因子的表达，使它们更接近对照组的水平。结论 牛磺酸对DHT诱导的雄性C57BL/6小鼠AGA有明显的缓解作用。它的保护作用是通过多方面的机制介导的。a. 促进毛囊周期进展：它加速毛发从休止期向生长期转变，抵消DHT诱导的毛囊休止期延长。b. 调节细胞动力学：它刺激毛囊基质角质细胞的增殖，并减少了DHT诱导的毛囊细胞凋亡。c. 抑制雄激素驱动的致病途径：它下调AGA途径中关键分子的表达，包括AR、细胞因子TGF-β1和TGF-β2，以及Wnt途径抑制剂DKK1。鉴于其良好的安全性和多靶点作用，牛磺酸有望成为治疗AGA的新型候选药物或辅助药物，值得进一步研究其临床潜力和精确的分子机制。这项研究为考虑在脱发治疗策略中补充牛磺酸或局部应用牛磺酸提供了坚实的临床前基础。]]> 2025/9/22 8:44:34 38true 目的 在基于病理切片的脑胶质瘤临床诊断中，细胞核密度估计是最关键的任务之一。脑胶质瘤密度估计通常高度依赖细胞核的分割效果，而细胞核的形态多样性与染色差异性易导致语义分割模型的过拟合，最终带来密度估计误差而影响临床决策。鉴于此，本研究提出U-net+DropBlock分割模型驱动的细胞核密度估计方法，通过提升模型的泛化性以降低过拟合风险，获得精确的细胞核密度估计。方法 首先，对脑胶质瘤的全切片图像（whole slice image，WSI）进行预处理，包括数据清洗、数据增强、颜色正则化、金标准确立等。然后，利用脑胶质瘤全切片的补丁图像，构建引入DropBlock正则化模块的U-net领域分割模型，称为U-net+DropBlock模型。特别是，DropBlock模块通过随机丢弃特征图中的区域信息，能够削弱特征间的过度空间相关性，以降低分割模型的过拟合风险。最后，对各补丁图像中的细胞核分割结果进行密度计算与可视化，以形成全切片范围的密度热力图。结果 与最先进的细胞核领域分割模型相比，本文采用的U-net+DropBlock模型可获得更优的分割性能，确保提出的密度估计方法的准确性。结论 本文提出的全域化细胞核密度估计方法，可助力脑胶质瘤临床诊疗的精准化和高效化发展。]]> 2025/9/9 17:39:37 37true 目的 本研究提出发展微波热声和超声双模态显微成像技术，集成两者优势，进行细微层次生物组织介电特性研究。方法 首先讨论短脉宽微波结合高频点聚焦超声换能器提高系统分辨率的方法，基于此方法构建三维微波热声显微成像系统，发展成双模态系统。然后进行铜丝成像测试分辨率，不同浓度盐水成像验证双模态图像间信息互补，脑和骨骼软骨成像验证技术适用性，骨质疏松检测验证技术疾病检测能力。利用相应实物或micro-CT图进行验证。结果 微波热声和超声三维成像分辨率经铜丝实验估算可分别达178×178×88 μm3和177×177×42 μm3，双模态显微图结合微波热声介电特性和超声声阻抗特征，提供功能和结构信息，完整显示并区分不同浓度盐水管，识别多种脑组织，呈现完整软骨、骨骺线和骨骼区，鉴别骨质疏松和正常骨切片。成像结果均与相应实物或micro-CT图吻合良好。结论 微波热声超声双模态显微成像有潜力进行细微层次的复杂组织介电特性探测，有望为脑和骨骼系统的功能评估及疾病发病机制研究提供新型影像工具。]]> 2025/9/22 17:53:26 36true 目的 自然界中的物体因光照而形成阴影，这也是立体化感知的基础，鸟类需要适应光照的变化（即容忍阴影形状的变化），才能对不同立体形成准确感知，然而鸟类关键视觉脑区如何应对光照变化目前尚缺乏报道。本文以鸽子（Columba livia）为对象，旨在分析鸽子腹外侧中皮质（MVL）对不同光照条件下立体形状的不变性神经表征模式。方法 采用视觉认知训练结合神经电生理的方式，首先训练鸽子识别不同的立体形状（凹/凸），并测试光照角度及外观形状对识别准确率的影响，进一步验证相关结果是否依赖于特定的光照颜色，同时记录鸽子MVL在不同图形呈现期间的放电活动，分析神经元响应对立体形状的选择性以及对图形变化的容忍性。结果 6只鸽子行为学结果显示，光照角度和外观形状均不影响鸽子对立体形状的识别，准确率在80%以上；采集的88个神经元统计结果显示，83%的神经元（73/88）表现出了对特定立体形状的选择性（选择性指数>0.3），对凸起的响应强度普遍大于凹陷，且在光照角度和外观形状发生变化时维持稳定，蓝色光照和橙色光照的结果较一致，但蓝色光照下学习的速率更快；采用单一条件下神经元集群响应训练的支持向量机模型能够较准确地解码其他条件下的响应（准确率达70%以上）。结论 鸽子MVL区神经元对不同的立体形状保持一致的神经编码模式，不受光照条件和外观的影响，以确保鸽子在变换的视觉环境中稳定地识别物体。本研究为理解鸟类如何在应对视场变化并维持不变性神经表征提供了新的生理学证据。]]> 2025/9/10 0:00:00 35true 目的 近期研究强调了核苷二磷酸连接部分X型基序19（nucleoside diphosphate-linked moiety X motif 19，NUDT19）在特定类型癌症的起始、进展和预后中的关键作用。然而，它在不同癌症中的表达及作用仍未得到充分表征。本研究旨在通过多组学分析系统地探讨NUDT19在多种癌症类型中的表达模式、临床意义及免疫相关功能，进一步揭示其在癌症中的潜在作用，特别是在白血病中的功能和治疗靶点价值。方法 为了实现上述目标，本研究采用多种生物信息学方法评估NUDT19在肿瘤和正常组织中的表达模式、临床意义以及免疫相关功能。分析NUDT19的突变特征及其与表观遗传修饰的关系。使用单细胞分析工具SingleCellBase，探讨NUDT19在肿瘤中不同细胞亚群中的分布。为了验证这些发现，通过qRT-PCR实验测定了特定肿瘤细胞系中NUDT19的表达水平，并通过建立急性髓系白血病（AML）细胞系（HL-60和THP-1），进行NUDT19敲低和过表达实验，评估其对白血病细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。结果 泛癌症分析结果揭示了NUDT19在多种癌症类型中的表达失调，且与不良预后、临床分期和诊断指标密切相关。此外，NUDT19与肿瘤生物标志物、免疫相关基因和免疫细胞浸润存在显著关联。突变分析显示，NUDT19的多个突变与表观遗传改变显著相关。单细胞分析进一步揭示了NUDT19在癌细胞中的表达异质性，提示其在不同细胞亚群中可能发挥多样化功能。qRT-PCR实验验证了NUDT19在多种肿瘤细胞系中的显著上调。在AML细胞系中发现，NUDT19敲低导致细胞增殖和侵袭能力下降，且细胞凋亡增加，而NUDT19过表达则显著增强了细胞增殖和侵袭能力，同时减少了细胞凋亡。结论 NUDT19在多种癌症类型中发挥多样化作用，尤其在白血病中的功能作用突出。NUDT19不仅与肿瘤的发生发展相关，还可能通过调节免疫微环境和表观遗传机制影响癌症进程。本研究揭示了NUDT19作为潜在治疗靶点的价值，尤其是对于白血病等恶性肿瘤的靶向治疗具有重要的临床应用前景。]]> 2025/7/10 11:14:24 34true 目的 常规可见光图像对作物病害检测主要集中在发病期的显著特征进行识别，而病害潜育期由于症状尚不明显，相关识别方法较为匮乏，因此利用可见光图像对作物病害潜育期症前特征进行识别具有重要的意义。本文提出一种用于识别作物潜育期可见光图像的三通道识别模型。方法 以茄科作物辣椒和番茄为例，通过连续拍摄健康与接种早疫病病株的叶片可见光图像并划分出病斑区域，提取出病斑区域颜色特征的一阶矩、二阶矩、三阶矩。通过对颜色矩变化率的分析，将最能反映早疫病病斑像素变化情况的S通道一阶矩作为特征，划分出健康、早疫病潜育期、早疫病早期、早疫病晚期四种类别，并结合颜色空间三通道信息构建用于识别早疫病潜育期病状的三通道识别模型。结果 实验以1 258张可见光图像进行测试，基于L-a-b颜色空间建立的三通道模型对辣椒早疫病潜育期的识别准确率达到94.44%，基于H-S-V颜色空间建立的三通道模型对番茄早疫病潜育期病状的识别准确率达到100%。结论 本文提出的三通道识别模型实现了对辣椒和番茄早疫病潜育期病状的有效检测，这为农作物病害的早期监测和科学防控提供了新的技术路径，亦可推广应用于其他作物病害潜育期的可见光图像识别研究。]]> 2025/9/23 0:00:00 33true 目的 频率差异阈值（FDL）是量化听觉系统感知能力的核心指标，然而传统测量方法易受主观因素的影响，且已有研究范式忽略个体感知差异。本研究旨在基于脑机接口（BCI）技术，通过解析阈值状态下的特异性神经响应，建立听觉频率辨别能力的客观量化评价方法。方法 设计基于个体FDL的个性化快速序列听觉刺激（RSAP）范式，通过连续刺激模拟真实感知环境，探究阈值状态下微弱频率突变诱发的神经表征。鉴于听觉刺激诱发的响应特征在多频域下呈现复杂且差异化的时空分布规律，本文进一步将跨尺度特征交互模块与动态时空注意力分配策略深度融合，创新性地提出多尺度时空双注意力网络（MS-STAMNet）。具体而言，该网络构建多感受野并行处理分支，并引入动态自适应权重策略精准定位核心神经活动信号，进而通过跨分支特征信息交互深层融合多尺度信息，实现对微弱听觉诱发响应的鲁棒单试次解码。结果 阈值下微弱听觉频率偏差刺激在前额、中央和颞区诱发了N2与P3事件相关电位特征。时频特征表现为δ与θ频段的事件相关同步化及α频段的去同步化。模型性能对比分析表明，MS-STAMNet的平均未加权平均召回率（UAR）为（69.67±6.12）%，曲线下面积（AUC）为0.761 8±0.07，其性能显著优于EEGNet、PLNet等基线模型。神经解码与行为表现的分离现象表明，本模型能有效捕获微弱频率偏差的内隐特征，权重可视化分析则进一步揭示了模型对关键特征的准确聚焦。结论 本研究系统揭示了长序列听觉阈值刺激下的神经响应演变规律，验证了MS-STAMNet在单试次微弱信号解析中的有效性，为听觉能力的客观量化评价奠定了基础。]]> 2026/7/6 23:17:29 32true 目的 经颅聚焦超声（transcranial focused ultrasound，tFUS）作为一种具有前景的无创神经调控技术，能够以高空间特异性调节神经活动。然而，在缺乏外部周围感觉输入的情况下，tFUS对初级体感觉皮层（primary somatosensory cortex，S1）的刺激能否可靠地诱发有意识的触觉感知，目前尚不明确。本研究旨在探讨通过靶向S1刺激诱发手部相关触觉知觉的可行性，并进一步探究作为关键时间参数的超声持续时间（sonication duration，SD）如何影响该知觉反应的一致性。本研究结果有望为优化人类体感觉调控中的tFUS参数提供实证依据。方法 48名健康成年人参与了本研究，并被分配到两个实验中。实验1包括24名参与者，初步考察S1的tFUS刺激能否诱发与手相关的触觉。该实验包含两个子实验，即实验1a和实验1b，各招募12名受试者，其中，实验1a采用针对双侧S1的随机化有效刺激方案，评估诱发对侧触觉感知的基本可行性，而实验1b则采用交替半球设计，结合真刺激和假刺激，验证tFUS诱发感觉的特异性。实验2招募了另外24名参与者，并采用真假刺激双探头设计，控制可能源于探头与头皮接触的空间触觉线索。系统测试了5个SD条件，包括200、400、600、800和1 000 ms，评估刺激持续时间如何影响行为反应。主要行为结果指标为感知一致率，该指标根据对侧触觉定位的准确性进行量化。结果 在实验1中，91.7%的受试者在真实tFUS刺激期间报告了可靠的手部相关触觉感觉，包括麻木、刺痛或类似的触觉体验。真实刺激下的对侧定位准确率显著高于0.50的偶然水平（P<0.05）。相比之下，假刺激下的表现与偶然水平无异，这表明，所观察到的触觉反应主要由针对S1的真实tFUS刺激诱发，而非来源于非特异性刺激线索。在实验2中，400和1 000 ms条件下的感知一致率显著高于偶然水平（P<0.05），而在200、600和800 ms条件下未达到显著水平。进一步的两两比较显示，400和1 000 ms条件下的感知一致率显著高于200 ms条件（P<0.05）。结论 对S1进行tFUS刺激可在没有外周感觉输入的情况下引发明显的手部相关触觉，这表明利用靶向皮层超声刺激诱导有意识的体觉感知是可行的。这种感知效应的可靠性受SD的影响，该参数对行为反应的产生及其一致性具有重要的调控作用。在测试的各种条件下，400 ms可能提供了产生稳定触觉感知的一个理想时间窗口，而刺激时间过短可能不足以产生一致的反应。这些发现凸显了体觉网络对超声调制的敏感性，并为tFUS在无创感觉增强和皮层功能映射中的应用提供了有价值的参数指导。]]> 2026/6/19 21:26:30 31true 目的 偏头痛是全球范围内导致健康寿命损失的主要疾病之一。通过作用于背外侧前额叶皮层，重复经颅磁刺激技术为偏头痛患者提供了一种安全且前景广阔的治疗方案。然而，重复经颅磁刺激改善偏头痛症状的具体作用机制尚不明确，阐明该机制对提升其临床疗效具有重要指导意义。方法 本研究采用经颅磁刺激-脑电图同步记录技术，旨在揭示重复经颅磁刺激治疗偏头痛的神经可塑性及神经环路机制。研究一对比偏头痛患者（30例）与健康受试者（28例），探查其神经可塑性与神经环路活动的异常特征；研究二则在34例健康受试者中观察重复经颅磁刺激对这些异常特征及疼痛体验的调节作用。结果 偏头痛患者存在以N120波幅为指标的局部神经可塑性异常，且在初级躯体感觉皮层、后脑岛、前脑岛及中扣带皮层等疼痛处理脑区表现出异常升高的显著电流密度。单次背外侧前额叶重复经颅磁刺激干预可降低初级躯体感觉皮层、前脑岛及中扣带回的显著电流密度，且初级躯体感觉皮层和中扣带回的神经活动与疼痛感知程度呈相关性。结论 本研究从神经可塑性与神经环路两个维度为重复经颅磁刺激治疗偏头痛的机制提供了实证依据，这有助于深入理解其治疗原理，并为开发更有效的偏头痛治疗方案提供指导。]]> 2026/6/2 15:59:26 30true 目的 I型干扰素（IFN-I）信号通路是抗病毒天然免疫应答的核心通路，其持续或过度活化与干扰素病、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病的发病相关。现阶段以Janus激酶（JAK）抑制剂为代表的靶向策略主要作用于IFN-I下游信号转导，对上游IFN-I生成的的直接调控有限。传统药用植物余甘子（Phyllanthus emblica L.）可用于炎症性疾病的治疗，但其调控IFN-I通路的活性成分及分子机制尚未阐明。本研究旨在鉴定余甘子的抗炎活性成分，并阐明其在巨噬细胞中作用于IFN-I通路的机制。方法 基于中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）与DrugBank数据库，采用网络药理学方法筛选余甘子活性成分及候选靶点，并通过分子对接评估候选成分与IFN-I通路蛋白（TANK结合激酶1（TBK1）、干扰素调节因子3（IRF3）、信号转导与转录激活因子1（STAT1））的结合，以BX795和GSK8612为参照TBK1抑制剂。同时在人单核细胞白血病细胞（THP-1）分化巨噬细胞与骨髓来源巨噬细胞（BMDM）中进行实验：经转染聚肌胞苷酸（poly（I∶C））、聚脱氧腺苷-胸苷酸（poly（dA∶dT））或脂多糖（LPS）刺激激活上游信号，经外源IFN-β激活下游信号，并构建siRNA介导的3""-核酸修复外切酶1（TREX1）沉默模型以模拟内源核酸驱动的干扰素病。采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测IFN-β1及干扰素刺激基因（ISGs）表达，蛋白质印迹法（Western blot）检测蛋白磷酸化，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测IFN-β分泌；采用细胞热位移分析（CETSA）和药物亲和反应靶点稳定性分析（DARTS）探究（-）-表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）与IRF3的相互作用。结果 网络药理学分析提示EGCG为余甘子中候选的IFN-I抑制性成分，预测其可结合TBK1、IRF3与STAT1。分子对接显示，EGCG与TBK1、IRF3、STAT1的结合能分别为-9.2、-7.2、-8.2 kcal/mol，其对TBK1的亲和力与参照抑制剂BX795（-5.7 kcal/mol）和GSK8612（-6.4 kcal/mol）相当。在THP-1巨噬细胞与BMDM中，EGCG均可抑制poly（I∶C）、poly（dA∶dT）及LPS刺激下IFN-β1与ISG的mRNA表达。EGCG降低TBK1与IRF3的磷酸化，但不影响上游感受器环磷酸鸟苷-腺苷合成酶（cGAS）和视黄酸诱导基因蛋白I（RIG-I）的水平，并浓度依赖性地降低IFN-β分泌。CETSA与DARTS结果显示，EGCG未增强IRF3的热稳定性或蛋白酶抗性，提示其对IRF3的作用为间接性。在IFN-β刺激后，延长EGCG处理可时间依赖性地降低STAT1磷酸化，而干扰素调节因子9（IRF9）无明显变化，并部分减弱ISG转录；该作用并非单调性的浓度依赖，其中趋化因子配体10（CXCL10）的抑制最为稳定。在TREX1沉默细胞中，EGCG可降低升高的ISG15、ISG56和CXCL10的mRNA水平。结论 EGCG通过同时抑制TBK1-IRF3依赖的IFN-β生成与JAK-STAT1介导的下游转录，抑制IFN-I应答。上述体外结果为余甘子在传统医学中的抗炎应用提供了机制依据，并提示EGCG可作为候选化合物在干扰素驱动的自身免疫病模型中进一步评估。]]> 2026/6/18 16:26:03 29true 目的 探寻脱落酸（abscisic acid，ABA）通路关键组分蔗糖非发酵1相关蛋白激酶2.6（sucrose non-fermenting1-related protein kinase 2.6，SnRK2.6）新的翻译后修饰方式，如SUMO化，为揭示新修饰方式调控SnRK2.6的生理功能与分子机理奠定基础。方法 利用酵母双杂交（yeast two hybrid，Y2H）及牵拉沉淀实验（pull down experiment）检测SnRK2.6与SUMO E3连接酶SIZ1及SUMO蛋白酶ESD4之间相互作用；采用体外SUMO化修饰体系检测SnRK2.6是否被SUMO化修饰，并通过质谱分析其SUMO结合位点。通过体外去SUMO化实验进一步分析SUMO蛋白酶ESD4是否能够介导SnRK2.6的去SUMO化。在拟南芥哥伦比亚生态型（Columbia 0，Col 0）及siz1突变体中，通过体外降解实验检测SnRK2.6蛋白的积累量，比较其在Col和siz1背景下的稳定性差异。此外，构建snrk2.6 siz1双突变体，观察ABA诱导的气孔关闭表型，分析SnRK2.6与SIZ1的遗传学上下位关系。结果 SnRK2.6与SIZ1以及SUMO蛋白酶短日照早花基因4（early in short days 4，ESD4）存在直接结合，结合区域分别在SIZ1的C端和ESD4的N端。SnRK2.6存在SUMO化修饰，且有两条特异性SUMO化条带，分子质量均位于70~100 ku之间，但未鉴定到其关键SUMO化位点。与酶活性缺失突变体ESD4C448S不同，野生型ESD4能够将SnRK2.6去SUMO化。SnRK2.6在siz1中的稳定性显著高于Col对照。SIZ1负调控ABA诱导的气孔关闭功能，但该功能完全依赖SnRK2.6，因此在气孔开闭调控上SnRK2.6上位于SIZ1。结论 SnRK2.6存在SUMO化修饰，但具体修饰位点未知。SIZ1和ESD4分别介导SnRK2.6的SUMO化和去SUMO化过程，二者动态调控其SUMO化平衡。SUMO化负调控SnRK2.6的蛋白质稳定性，SIZ1负调控ABA诱导的气孔关闭功能，且该功能有可能是通过SUMO化抑制SnRK2.6的稳定性实现的。]]> 2026/6/3 7:43:15 28true 目的 液液相分离创造了能够调控酶功能的特殊物理化学微环境。本研究旨在阐明相分离在拓展肠道微生物酶催化可塑性中的作用，并为O-糖基化天然产物的合成提供新机制。方法 通过显微成像观察凝聚体形成及底物招募过程；运用高效液相色谱法（HPLC）和液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）分析类黄酮富集、反应产物及区域选择性。结果 本研究表明，富含精氨酸-甘氨酸-甘氨酸基序的相分离蛋白（RGG）介导的凝聚体能够选择性招募并富集疏水性类黄酮。更重要的是，研究进一步发现，通常以切割和异构化C-糖苷键著称的DgpB/C复合物，在这些凝聚体中发生了功能重塑。与需要核苷酸糖供体的传统糖基转移酶不同，被包裹的DgpB/C复合物在液相分离环境中利用天然糖直接催化O-糖苷键的合成。此外，研究结果显示，这种非常规的催化机制在不同的人类肠道微生物菌株（包括P581a和W974-1）中具有保守性，并对多种类黄酮苷元表现出广泛的区域选择性。结论 这些发现凸显了相分离在扩展肠道微生物酶催化可塑性中的关键作用，并为O-糖基化天然产物的合成提供了一种全新机制。]]> 2026/4/15 0:00:00 27true 目的 本研究采用构象工程（conformational engineering，CE）技术，在银纳米颗粒（AgNP）上模拟α胰凝乳蛋白酶的活性位点，构建包括催化三联体、氧阴离子孔及底物结合位点的活性中心，制备高催化活性的人工水解酶，探索天然酶模拟和高性能人工酶设计的新思路。方法 以AgNP为骨架，通过CE使设计的多肽的关键催化残基位于α螺旋构象一侧，构建与α胰凝乳蛋白酶相似的催化活性中心。通过三氟乙醇诱导构象、Ag-S键稳定构象和冷冻干燥去除诱导剂三步法实现多肽构象的精准控制。圆二色谱用于证明α螺旋构象的形成与稳定；关键残基的突变结合停流动力学实验用于证明各关键残基的不可或缺，以及催化三联体、氧阴离子孔及底物结合位点之间的协同作用。结果 成功构建了高效的银基人工水解酶——Silverzyme。Silverzyme对4-硝基苯基乙酸酯表现出极高的水解活性，单位活性位点的催化反转数达到3.5 s-1，甚至超过了α胰凝乳蛋白酶。而且Silverzyme还能显著催化水解邻苯二甲酸二乙酯——一种被美国环保署列为环境优先污染物的、难以降解的非活化酯。结论 本文通过CE技术在AgNP表面实现对α胰凝乳蛋白酶的复杂催化中心的模拟，得到具有明确结构和清晰催化机制的高活性人工水解酶，显示了CE技术的广阔应用前景。]]> 2026/5/23 10:07:21 26true 目的 脑缺血损伤后病灶微环境活性氧类（reactive oxygen species，ROS）过度蓄积引发氧化应激，进而加剧神经炎症级联反应与神经元凋亡。针对这一病理过程，本研究旨在构建负载聚多巴胺纳米颗粒（polydopamine nanoparticles， PDA NPs）的ROS响应型水凝胶，解决脑缺血损伤微环境下抗氧化与抗炎协同调控、药物时空精准递送的核心问题，通过体外模型系统评估该水凝胶的ROS响应释药特性及抗氧化、抗炎与神经保护作用，为脑缺血损伤的原位注射靶向治疗奠定基础。方法 采用氧化自聚合的方法制备PDA NPs，随后将其负载于由N1-（4-硼苄基）-N3-（4-硼苯基1,N1,N3,N3-四甲基丙烷-1,3-二铵（N1-（4-boronobenzyl）-N3-（4-boronophenyl）-N1,N1,N3,N3-tetramethylpropane-1，3-diaminium，TSPBA）和聚乙烯醇（polyvinyl alcohol，PVA）交联而成的ROS响应型水凝胶中。通过粒径分析、Zeta电位分析、扫描电子显微镜、透射电子显微镜及流变仪等表征聚多巴胺纳米颗粒及水凝胶的形貌、力学性能与ROS响应释药特性。在体外以HT22神经元为模型，借助CCK-8、活/死细胞染色（live/dead cell staining）实验验证生物相容性，构建氧葡萄糖剥夺/复氧模型（oxygen-glucose deprivation/reoxygenation，OGD/R）评估水凝胶ROS清除及抗神经元凋亡作用，结合免疫荧光染色、逆转录实时荧光定量聚合酶链反应（reverse transcription quantitative real-time polymerase chain reaction，RT-qPCR）及Transwell共培养，探究其对BV-2小胶质细胞极化的调控及间接神经保护效能。结果 制备的PDA NPs为粒径均一且带负电的球形纳米颗粒，兼具良好的生物相容性与抗氧化性能。制备的负载PDA NPs的ROS响应型水凝胶，可在ROS富集的微环境中响应ROS并释放PDA NPs，且表现出优异的抗氧化性能。体外细胞实验结果表明，该水凝胶可有效清除神经元OGD/R模型中过量产生的ROS，显著抑制神经元凋亡，同时能有效促进小胶质细胞向抗炎M2表型极化，进而显著降低共培养体系中受损神经元的凋亡水平。结论 本研究成功制备出可注射的负载PDA NPs的ROS响应型水凝胶，该材料可在ROS富集微环境中响应释放PDA NPs，兼具优异的抗氧化性能，并可以调控小胶质细胞极化、抑制炎症反应，通过抗氧化-抗炎协同策略实现了显著的体外神经保护效果。该水凝胶为聚多巴胺等生物活性材料的靶向递送提供了新策略，也为脑缺血损伤的原位注射治疗奠定了重要实验基础。]]> 2026/5/14 19:41:23 25true 目的 肝细胞癌占原发性肝癌90%以上，外科手术是治疗肝细胞癌的主要治疗方法。近年来，免疫治疗（包括免疫检查点抑制剂和过继性细胞治疗）的突破为不可手术的肝细胞癌患者提供了替代治疗方案，但肝细胞癌患者的复杂遗传异质性和代谢异质性制约了治疗效果。本研究旨在探究沉默信息调节因子5（silence information regulator 5，SIRT5）介导的赖氨酸去酰基化修饰在肝细胞癌代谢重编程中的调控作用，并明确其通过去酰基化激活谷胱甘肽硫转移酶M1（glutathione S-transferase Mu 1，GSTM1）解毒功能，从而促进肝细胞癌发生的关键分子机制。方法 通过蛋白质印迹法分析了肝细胞癌临床标本中的蛋白质赖氨酸酰基化水平及SIRT5表达水平，通过基于CRISPR-Cas9的基因编辑技术构建了在肝组织中特异性过表达SIRT5的转基因小鼠，并以此建立原发肝癌模型，以分析肝组织SIRT5在原发性肝癌发生发展中的作用。结果 SIRT5在肝细胞癌临床标本中表达水平升高，其表达水平与蛋白质赖氨酸酰基化水平降低相关。蛋白组学分析及生物信息学分析表明，肝细胞癌组织中与代谢、生物合成、解毒及氧化还原稳态相关蛋白质的酰基化修饰（包括丙二酰化修饰、琥珀酰化修饰）发生改变，进一步通过蛋白质修饰分析及酶活性分析证明GSTM1的活性受丙二酰化修饰影响。在肝组织中特异性过表达SIRT5加速二乙基亚硝胺引发的肝组织纤维化，促进肝细胞癌的发生和发展。结论 SIRT5通过擦除GSTM1等关键酶的酰基化修饰而影响肝细胞代谢及氧化还原稳态，从而促进肝细胞癌的发生发展。干预蛋白质酰基化修饰可能为肝细胞癌的免疫治疗带来新的机遇。]]> 2026/5/9 9:17:09 24true 目的 饮酒作为一种常见的生活习惯， 与帕金森病 （Parkinson’s disease， PD） 的发病关系存在争议。 为证明饮酒与PD的相关性并找出关联基因，本文整合了临床调查、基因组、转录组和动物实验的结果。方法 调查了中国的244名和美国NHANES数据库的177名PD患者的饮酒率（包括发病前后）；收集MRC IEU OpenGWAS数据库3个饮酒和7个PD的全基因组关联研究（genome-wide association study，GWAS）数据进行孟德尔随机化（Mendelian randomization，MR）分析；收集GEO数据库3组PD患者脑黑质转录组数据（GSE：7621/20141/49036）分析RIT2（Ras like without CAAX 2）基因的转录情况；最后设置3组动物实验（水/20%乙醇/20%白酒，4只C57BL/6J小鼠/组），检测饮酒后大脑RIT2基因的表达变化以及对转录组的影响。结果 中、美PD患者的饮酒率（9%~18.87%）显著低于本地区居民饮酒率15%~45%（P< 0.001），提示饮酒与PD负相关的可能。随后，3个饮酒×7个PD GWAS数据的21次双向MR分析，在暴露因素饮酒对结局PD的21次正向MR分析中，出现12次负相关（ORIVW<1）和9次正相关（ORIVW>1）结果，仅2项负相关结果有显著性：酒精摄入频率（alcohol intake frequency；ORIVW=0.75，P=0.010）与酒精消耗量（alcohol consumption；ORIVW=0.20，P=0.026），提示饮酒降低PD风险。正向MR分析（饮酒→PD）共识别了235个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）位点，注释了316个基因，反向MR分析（PD→饮酒）识别了37个SNP位点，注释了53个基因，仅有RIT2基因同时出现在双向MR分析中（饮酒→PD：rs28597806，rs8083110；PD→饮酒：rs4588066）。通过3组独立的人体脑黑质转录组数据发现，RIT2基因在PD患者中的下降趋势（GSE20141 array signal：3.49±1.23 vs. 2.33±0.87，P=0.044）。动物实验中，不同组织qPCR结果表明，RIT2基因在大脑中高表达。饮用20%乙醇或20%白酒（约8%乙醇）均可刺激小鼠大脑中RIT2基因上调>2倍。而转录组测序发现，两饮酒组差异表达基因数分别为96和4，证实低剂量饮酒可在实现RIT2基因上调的同时，降低对大脑其他基因的影响，并主要影响PD、朊病毒病（Prion病）等神经退行性疾病信号通路。结论 本研究为饮酒与PD的负相关性增添了新的证据，并首次通过MR分析识别出RIT2基因可能介导了饮酒对PD的作用。在已有证据表明PD发病时脑黑质RIT2基因表达下调的基础上，通过实验证实了低剂量饮酒可上调大脑RIT2基因表达。本研究将为PD长期的预防和治疗策略，以及分子机制的研究提供重要参考。]]> 2026/5/23 0:00:00 23true 目的 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的大量定植是加重特应性皮炎（atopic dermatitis，AD）瘙痒及皮损的重要因素。本研究通过建立金黄色葡萄球菌感染小鼠模型，阐明金黄色葡萄球菌在AD中的致痒作用，并探讨土荆皮乙酸（PAB）混合双网水凝胶（DN）水凝胶新型载药体系（PAB@DN）对金黄色葡萄球菌诱导瘙痒的改善效应。方法 分离AD小鼠皮损部位定植的金黄色葡萄球菌，并构建金黄色葡萄球菌单独感染模型，明确金黄色葡萄球菌的致痒作用。通过体外抑菌实验检测土荆皮乙酸的抑菌效果及抑菌浓度，构建PAB@DN缓释给药系统，评估其抗菌止痒，皮肤修复作用。结果 金黄色葡萄球菌感染可引起小鼠搔抓行为显著升高，呈现AD样皮损。PAB@DN缓释给药后，模型小鼠搔抓次数明显减少，表皮增厚缓解，皮损区S.aureus载量较模型组降低34%。结论 本研究通过金黄色葡萄球菌单一感染模型，明确土荆皮乙酸混合水凝胶缓释给药可以明显缓解金黄色葡萄球菌引起的瘙痒及皮肤损伤。]]> 2026/4/9 11:05:19 22true 目的 高尔基体带状结构（Golgi ribbon）的稳态维持依赖于胞内各运输通路间的膜流平衡，但特定运输支路对高尔基体宏观形态的调控机制尚不完全明确。本研究旨在阐明包被蛋白复合物 I（coat protein complex I，COPI）介导的逆向运输在高尔基体带状结构维持中的核心作用，并解析跨膜货物受体LEPROT/LEPROTL1（LEPROTs）与COPI接头蛋白GOLPH3在此过程中的协同关系。方法 通过 siRNA干扰或基因缺失手段，在HeLa细胞中特异性阻断COPI或接头蛋白复合物1（adaptor protein complex 1，AP-1）介导的膜运输通路。结合共聚焦显微镜定量分析高尔基体带的“角度”分布特征，并通过透射电子显微镜观察高尔基体超微结构及周边囊泡密度。此外，利用免疫荧光共定位技术检测COPI组分在亚细胞结构中的动态分布。结果 选择性抑制COPI逆向运输显著诱导高尔基体带沿核周发生过度延伸，而阻断AP-1介导的正向运输则导致高尔基体皱缩，二者呈对立效应。LEPROTs缺失细胞表现出与COPI功能受损高度一致的高尔基体延伸表型。在LEPROTs双敲除背景下进一步敲低GOLPH3导致高尔基体延伸程度显著加剧，呈典型的叠加效应，提示二者在COPI相关运输过程的调控中发挥非冗余作用。机制研究显示，LEPROTs或GOLPH3缺失导致COPI组分在内质网出口位点异常积聚，并伴随高尔基体周边COPI样囊泡密度显著降低。超微结构分析进一步揭示，缺陷细胞的高尔基体扁平囊在堆叠数不变的情况下，呈现“长度缩短、厚度增加”的形态重塑特征。结论 活跃的COPI逆向运输是限制高尔基体带过度延展、维持其紧凑形态的关键因素。LEPROTs与GOLPH3协同促进COPI组分的循环与囊泡化过程，从而在高尔基体边缘维持其结构约束。本研究为理解高尔基体形态稳态的膜运输动力学基础提供了新的实验证据。]]> 2026/4/8 11:42:02 21true 目的 本研究旨在以重组高密度脂蛋白（rHDL）为载体包载金线莲苷（KD），探究负载金线莲苷的重组高密度脂蛋白（KD@rHDL）增强小胶质细胞吞噬β淀粉样蛋白（Aβ）能力并改善小胶质细胞炎症状态的功能。方法 使用薄膜水化法制备KD@rHDL并表征其粒径、电位、包封率，载药量及其形态，通过表面等离子共振实验（SPR）验证KD@rHDL对Aβ的亲和力。将KD@rHDL给予小胶质细胞，通过荧光标记验证KD@rHDL增强Aβ吞噬的作用，通过蛋白质印迹法（Western blot）验证NLRP3与IL-1β的表达变化。结果 表征数据显示，KD@rHDL在电镜下呈现盘状结构，具备适宜的粒径和电位，载药量和包封率良好。CCK-8实验显示，KD@rHDL具有良好的安全性。小胶质细胞Aβ吞噬实验表明，KD@rHDL可以增强小胶质细胞对Aβ的吞噬作用。SPR实验表明，高密度脂蛋白与Aβ具有高亲和力，可以作为促进小胶质细胞吞噬Aβ的媒介。蛋白质印迹法结果表明，KD@rHDL可以降低NLRP3与IL-1β表达，改善小胶质细胞炎症状态。结论 KD@rHDL通过增加小胶质细胞吞噬Aβ能力并调节NLRP3与IL-1β水平，表现出对阿尔茨海默病（AD）的治疗 潜力。]]> 2026/5/21 8:57:04 20true 目的 探讨男性大学生吸烟者大脑白质微观结构与自发神经活动的改变及其与尼古丁依赖的关联。方法 本研究共招募115名男性在校大学生，最终纳入52名男性大学生吸烟者和42名人口学资料匹配的健康非吸烟者。所有参与者均接受多模态磁共振成像扫描。采用自动化纤维量化方法（automated fiber quantification，AFQ）识别18条主要白质纤维束，并分别沿纤维束核心计算100个节点的分数各向异性（fractional anisotropy，FA）与低频波动振幅（amplitude of low-frequency fluctuation，ALFF），以评估白质微观结构完整性和自发神经活动强度。采用双样本t检验比较组间差异，并利用Pearson相关分析探讨差异显著的影像指标与尼古丁依赖测试（Fagerstr?m test for nicotine dependence，FTND）之间的相关性。结果 与对照组相比，男性大学生吸烟者左侧丘脑放射束、右侧皮质脊髓束、胼胝体大钳、左侧钩状束、右侧弓状束的FA值显著升高；吸烟组在胼胝体大钳、右侧钩状束、左侧弓状束的ALFF值显著升高。相关性分析表明，吸烟者左侧丘脑放射束、右侧皮质脊髓束的FA值与FTND评分呈负相关，而胼胝体大钳、右侧钩状束的ALFF值与FTND评分呈正相关。结论 男性大学生吸烟者存在特异性的白质纤维束微观结构和功能活动异常，这些异常与尼古丁依赖严重程度相关。本研究提示，男性大学生长期吸烟可能对大脑白质的发育产生影响，AFQ方法为揭示尼古丁依赖的神经机制提供了新的视角。]]> 2026/4/9 10:20:48 19true 目的 细胞形态是遗传决定的关键特征，也可通过基因改造或环境因子调控而发生改变，这一过程称为细胞形态工程。通过基因修饰构建具有特定形态且对磁场敏感的细胞，进而实现远程、无创的磁场调控生长，是细胞形态工程的重要目标之一，具有显著的应用潜力。动物磁感应依赖磁受体（magnetoreceptor，MagR）感知地磁场并指导定向导航。本研究旨在探究MagR异源表达对细菌形态及磁感应能力的影响，筛选基于MagR的磁敏感形态工程途径，并揭示其潜在分子机制。方法 系统筛选了28个物种的MagR同源基因在大肠杆菌中的表达和相应的表型效应，通过显微成像结合MagR铁硫簇辅基的铁氧化还原态分析，以及静磁场（100 mT）暴露实验，比较不同MagR重组蛋白质表达菌的磁场响应差异，从而解析其分子机制。结果 不同来源的MagR同源基因表达可诱导细菌出现不同程度的丝状化表型。从中筛选出两类典型形态：水螅来源的hyMagR偏好结合Fe2+，其表达促进细胞均一伸长与丝状化，且表现出较高的磁场敏感性（即在静磁场下丝状化显著增强）；鸽子来源的clMagR偏好结合Fe3+，仅诱发低频出现的极端长度的丝状化，磁场响应较弱。表型差异主要由MagR对不同铁价态的偏好性主导，而与总铁含量无关。结论 MagR的铁硫簇价态（特别是对亚铁的偏好性）是调节细菌形态和磁敏感性的关键因素。本研究为构建磁响应细胞系统提供了理论依据，也为理解MagR介导的磁感应机制提供了新视角。]]> 2026/3/26 0:00:00 18true 目的 经颅磁声刺激（transcranial magneto-acoustic stimulation，TMAS）是一种新型非侵入性神经调控技术，为帕金森病（Parkinson’s disease，PD）治疗提供了新的非药物干预策略。PD的核心病理特征是多巴胺能神经元进行性死亡，而线粒体功能障碍及其质量控制失衡（包括自噬与动力学平衡）是介导多巴胺能神经元死亡的核心机制。本研究旨在探讨TMAS是否通过调节线粒体自噬及裂变/融合的动态平衡，改善PD小鼠的神经损伤和运动功能障碍，从而为TMAS在PD治疗中的应用提供理论和实验支持。方法 采用 C57BL/6小鼠构建1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）诱导的PD模型。干预组接受14 d的TMAS刺激，通过爬杆实验和旷场实验评估运动能力。采用免疫组织化学检测运动皮层（M1）区c-Fos表达及黑质致密部（substantia nigra pars compacta，SNc）酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）阳性神经元数量；采用蛋白质印迹法检测线粒体自噬相关蛋白（PINK1、Parkin、LC3-II、p62）及线粒体动力学相关蛋白（Drp1、Opa1）的表达水平；同时测定SNc区域线粒体活性氧类（reactive oxygen species，ROS）水平及三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）含量以评估线粒体功能和能量代谢状态。结果 TMAS 能够有效激活目标运动皮层神经元，表现为健康刺激组M1区c-Fos阳性细胞数量较健康对照组显著增加（P<0.000 1）。与健康对照组相比，PD小鼠运动功能显著受损，表现为旷场实验中总移动距离显著降低（P<0.000 1）、平均速度显著下降（P=0.000 1），以及爬杆实验中转向时间和爬下时间显著延长（均 P<0.000 1），同时，SNc区域TH阳性神经元大量丢失（P<0.000 1），并伴随线粒体功能障碍。机制研究显示，MPTP抑制了PINK1和Parkin的表达，导致自噬底物p62异常下降及LC3-II累积，提示线粒体自噬过程受损，同时Drp1过度激活而Opa1受抑制，提示线粒体动力学平衡向过度裂变状态偏移。经TMAS干预后，PD小鼠运动障碍明显改善，爬杆实验中转向时间和爬下时间显著缩短（均P<0.000 1），TH阳性神经元存活率显著提高（P<0.000 1），同时ATP含量升高（P<0.001），ROS水平降低（P<0.01）。此外，TMAS还可上调PINK1、Parkin和p62的表达，减少LC3-II异常累积，并纠正Drp1/Opa1失衡，从而促进受损线粒体清除并重建线粒体动力学平衡。结论 TMAS能够有效减轻PD小鼠的神经损伤并改善运动功能，其作用机制与对线粒体质量控制系统的调控密切相关。TMAS可通过修复PINK1/Parkin介导的线粒体自噬过程、重建线粒体动力学平衡并改善线粒体能量代谢，恢复线粒体稳态，从而发挥神经保护作用。]]> 2026/4/3 11:25:24 17true 目的 SPBC1604.04基因编码一种未被正式命名的粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）线粒体载体蛋白，预测该蛋白质负责焦磷酸硫胺素在线粒体的转运，但其对有丝分裂的细胞动力学影响尚不明确。方法 本研究以SPBC1604.04基因缺失的粟酒裂殖酵母为研究对象，构建SPBC1604.04基因缺失（SPBC1604.04Δ）菌株的线粒体、微管、肌动蛋白、肌球蛋白、核膜和染色体荧光蛋白标记，并在常温（25℃）和高温胁迫（37℃）下，使用激光共聚焦显微镜进行活细胞成像，探究SPBC1604.04基因缺失对有丝分裂的细胞动力学影响。结果 25℃下，SPBC1604.04Δ菌株线粒体含量出现异常，线粒体荧光强度减弱，同时，肌动蛋白-肌球蛋白环的收缩时间延长。37℃高温胁迫下，SPBC1604.04Δ菌株线粒体含量恢复，荧光强度增强，肌动蛋白-肌球蛋白环的收缩时间也恢复正常。结论 本研究揭示了SPBC1604.04基因缺失导致裂殖酵母的线粒体含量异常，且线粒体载体蛋白SPBC1604.04能够参与调控有丝分裂中肌动蛋白-肌球蛋白环的收缩过程，但不参与有丝分裂中纺锤体和染色体分离的调控，为深入解析SPBC1604.04基因在线粒体与有丝分裂调控之间的联系提供了关键实验依据。]]> 2026/3/24 0:00:00 16true 目的 疟原虫通过输出蛋白质与宿主红细胞膜骨架蛋白相互作用，从而重塑红细胞结构，以维持其胞内寄生及致病性。骨架结合蛋白1（SBP1）是一种疟原虫输出蛋白，在不同疟原虫种属中高度保守。研究表明，恶性疟原虫SBP1与感染红细胞膜骨架蛋白相互作用，但该蛋白质在伯氏疟原虫（Plasmodium berghei， Pb）中的作用尚未阐明。本研究拟探究PbSBP1在宿主红细胞重塑及疟原虫致病性中的作用。方法 在伯氏疟原虫中，通过免疫共沉淀方法探究PbSBP1与红细胞的细胞骨架蛋白4.1R的关系。基于双臂同源重组原理构建Pbsbp1基因敲除的伯氏疟原虫突变体（Pbsbp1?），通过微流控方法分析Pbsbp1?疟原虫感染红细胞的变形能力，对红细胞膜骨架连接复合体成分原肌球蛋白调节蛋白进行荧光标记，对疟原虫感染红细胞骨架网络进行超分辨率随机光学重建显微镜成像，分析Pbsbp1?感染红细胞骨架超微结构的变化。进一步利用患疟鼠模型和小鼠脑型疟疾模型，监测红内期Pbsbp1?疟原虫生长情况及其诱导小鼠发生脑型疟疾的能力。结果 PbSBP1可能通过与红细胞细胞骨架蛋白4.1R的直接或间接的相互作用，参与感染红细胞的重塑。微流控结果显示，Pbsbp1?疟原虫感染红细胞的变形能力较野生型疟原虫感染红细胞显著增强。超分辨率随机光学重建显微镜成像结果表明，Pbsbp1?感染红细胞骨架超微结构较野生型感染红细胞发生变化。进一步表型分析发现，红内期Pbsbp1?疟原虫生长速度较野生型疟原虫显著减慢，其诱导小鼠发生脑型疟疾的能力也降低。上述结果提示，PbSBP1可能通过与4.1R蛋白的相互作用参与感染红细胞的膜骨架重塑，从而调节感染红细胞的变形性，并影响红内期疟原虫的致病性。结论 本研究阐明了PbSBP1在宿主红细胞重塑及疟原虫致病性中的作用，为疟疾的防治提供理论基础和新的研究思路。]]> 2026/3/1 21:36:43 15true 目的 郑氏三七散（Zheng’s San Qi San，ZSQS）是用于治疗肌肉、肌腱、韧带等软组织损伤的经典中医药方剂，但其治疗机制尚未明确。本研究旨在筛选并鉴定ZSQS中的药效活性成分及其候选生物分子靶点，进一步阐明该方剂治疗骨骼肌损伤的分子机制。方法 采用网络药理学方法构建“ZSQS-成分-靶点”、“蛋白质相互作用（PPI）”以及“活性成分-核心靶点-通路”网络，预测ZSQS治疗骨骼肌损伤的关键成分和潜在核心靶点，并通过GEO数据库的基因芯片分析数据验证这些预测结果。随后，通过分子对接技术评估筛选出的活性成分与候选核心靶点的结合能力，并利用液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）对ZSQS及含药血清活性成分进行定性和定量分析验证。最后，借助离心运动骨骼肌损伤动物模型和氧化应激肌管细胞损伤模型，验证ZSQS的临床疗效及其对关键靶点生物学功能的调控干预效果，进而明确其潜在治疗机制。结果 在ZSQS中鉴定的111种活性成分和其对应的204个骨骼肌损伤修复相关靶点中，筛选出包括AKT1在内的14个核心靶点，以及槲皮素、木樨草素、山柰酚、β谷甾醇4个核心活性成分，在含药血清中也检测到槲皮素、木樨草素、山柰酚3种核心成分的代谢产物。在核心靶点中，IL-6、CASP3、HIF1A、STAT3、JUN等5个候选基因与基因芯片差异表达筛选结果重合，并且IL-6被证明富集于PI3K/AKT通路。结合AKT1表达水平预测结果推测，AKT1的磷酸化水平在ZSQS的治疗机制中发挥核心作用。分子对接分析进一步提示AKT1的PH结构域与所有4种已通过质谱验证的核心活性成分都具有较高的结合能。最后，动物模型研究显示了ZSQS给药对骨骼肌损伤修复的促进作用及其可能的抗氧化损伤机制，细胞模型研究进一步从机制上证明ZSQS含药血清，核心活性成分联合用药及槲皮素单体可提高AKT磷酸化水平，促进Nrf2核转位，上调下游抗氧化酶（SOD、GPx、GR）的表达，并抑制炎症因子（IL-6、TNF-α）的表达，从而减轻氧化应激与炎症反应。结论 ZSQS主要通过激活AKT/Nrf2信号通路，增强细胞抗氧化和抗炎能力，减轻骨骼肌损伤。本研究结果为ZSQS的临床应用及现代化开发提供了科学依据。]]> 2026/1/23 15:27:52 14true 目的 基于本课题组前期血清代谢组学研究发现的二甲基甘氨酸（dimethylglycine，DMG）在长寿家系中显著富集的现象，探讨DMG的体内和体外抗衰老效应并初步阐明其分子机制。方法 以复制性衰老的人胚肺成纤维细胞WI-38为体外模型，采用CCK-8和乳酸脱氢酶法评估DMG的细胞安全性，通过SA-β-Gal染色、EdU染色、活性氧类检测评估DMG对细胞衰老表型、增殖及氧化应激的影响。以秀丽隐杆线虫为体内模型，通过线虫寿命、热应激、脂褐素及体内活性氧类和油红O染色实验，评估DMG在模式生物中的抗衰老效果。并进一步通过酶联免疫吸附分析、实时荧光定量PCR、分子对接等技术探究DMG抗衰老的分子靶点与通路。结果 在细胞水平上，50 μmol/L DMG处理5 d可安全、显著地降低WI-38衰老细胞的SA-β-Gal阳性率（P<0.000 1）、活性氧类水平（P<0.000 1），并促进其增殖（P=0.003 5），同时，DMG能下调p16、p21衰老关键蛋白及IL-6、IL-8等衰老相关分泌表型因子的表达。在线虫模型上，DMG可延长线虫平均寿命（P<0.000 1），增强热应激抵抗能力（P=0.017），并显著降低体内脂褐素水平（P<0.000 1）、降低活性氧类水平（P=0.008）及减少脂肪积累（P<0.000 1）。网络药理学预测表明，DMG可能与GST家族蛋白及CYP2C9等靶点稳定结合，从而通过调节氧化应激与代谢通路实现抗衰老效果。结论 DMG在细胞和动物水平均展现出显著的抗衰老活性，其作用机制可能与缓解氧化应激、抑制核心衰老信号通路及改善代谢紊乱密切相关。本研究为DMG作为潜在的抗衰老制剂提供了实验依据。]]> 2026/3/17 15:43:32 13true 目的 胃出血是上消化道最常见且最危险的急症之一，早期诊断和连续监测对于降低再出血率和病死率至关重要。传统的内镜和影像学检查虽能明确出血部位，但存在侵入性强、实时性差等不足。为实现对胃出血的无创、实时与动态监测，本文提出一种基于三维电阻抗成像（three-dimensional electrical impedance tomography，3D-EIT）的胃出血检测新方法（3D-gEIT）。方法 构建了包含胃的三维上腹部仿真模型，并设计了3种电极排布方案（双层环状、四层交错环状、对置双平面阵列），仿真对比了不同结构对成像效果的影响。在Tikhonov-Noser组合正则化的基础上引入区域聚类约束，形成TK-Noser-RCC算法，以提升空间连贯性和抗噪性能。随后，搭建基于琼脂介质的上腹部物理模型实验平台，通过控制嵌入半球体积（10~50 ml）模拟不同程度出血，采集边界电压并进行三维重建。此外，开展猪实验，通过注入100 ml自体血液来模拟胃出血，用以验证方法在真实生理条件下的可行性。结果 仿真结果表明，对置双平面阵列电极在纵深方向具有最佳灵敏度分布与空间分辨率，其平均图像相关系数（ICC）和结构相似性系数（SSIM）较双层环状结构分别提升55.9%与38.8%，较四层交错结构分别提升64.0%与39.5%。区域聚类约束有效抑制了噪声伪影，在40 dB和30 dB信噪比条件下仍保持清晰的边界与稳定的形态，ICC仍可保持在0.85左右。物理实验中，随着出血半球体积的增加，重建体积呈线性增长趋势，重建结果与实际出血区域高度一致。动物实验进一步验证了该系统在实际生理环境中的稳定性，重建出血区域随注血量逐渐扩大，空间位置稳定，无显著伪影，能够准确反映胃腔内出血的动态变化。结论 本文所提出的3D-gEIT系统可实现对胃出血体积与空间分布的定量重建，具备良好的抗噪稳定性与适应性。为胃出血的早期诊断、术后监测及床旁连续检测提供了一种无创、实时、低成本的新型成像手段。]]> 2026/2/26 9:22:55 12true 目的 邻近标记是近年发展起来的一种研究活细胞内蛋白质相互作用的技术手段，能够捕捉细胞内瞬时和微弱的蛋白质相互作用，本研究以高尔基体膜蛋白GP73为研究对象，建立APEX2介导的邻近标记技术，进一步解析GP73蛋白的生理病理功能。方法 构建GP73与APEX2融合表达的稳定细胞系，加入生物素-苯酚（Biotin-phenol）和H2O2催化GP73邻近蛋白的生物素化反应，链霉抗生物素蛋白（streptavidin）磁珠富集生物素化的蛋白质，联合质谱检测GP73的相互作用蛋白，进一步进行生物信息学分析。结果 本研究成功构建了基于APEX2的邻近标记体系，鉴定出95个GP73的高置信度相互作用蛋白。富集分析表明，GP73相互作用蛋白与核糖体结合（ribosome binding）功能相关，提示其可能发挥调控细胞翻译的功能，进一步的实验验证了GP73与真核翻译起始因子EIF3的亚基EIF3G和EIF3I存在直接的相互作用，而SUnSET（surface sensing of traslation）实验则证明了GP73能够促进细胞中的蛋白质翻译过程。结论 本研究通过APEX2介导的邻近标记技术系统研究了GP73的相互作用蛋白，揭示了其调控细胞内蛋白质翻译的新功能，加深了对GP73蛋白功能的认知与理解，并为进一步解析复杂的生物大分子相互作用和生物学过程奠定了技术基础。]]> 2026/2/4 9:25:54 11true 目的 探究口服丁酸钠经肠-肌轴对抗生素预处理的CT26荷瘤小鼠骨骼肌萎缩的影响以及其潜在的作用机制。方法 60只8周龄的SPF级BALB/c雄性小鼠，随机分为对照组（NC组，n=18），抗生素清扫组（ABX组，n=42）。ABX组经灌胃给予四联抗生素预处理，NC组则灌胃给予等体积的无菌水（0.2 ml/次，1次/d，6 d/周，持续2周），四联抗生素混合物由甲硝唑1 g/L、万古霉素0.5 g/L、氨苄西林1 g/L和庆大霉素1 g/L组成。确定预处理成功后，ABX组和NC组中各随机抽取6只（分别命名为Abx组和NC0组）进行肠道菌群测序分析。剩余ABX组背部皮下接种0.2 ml CT26细胞悬液（细胞密度为1×107/ml）后，再随机分为对照+荷瘤模型组（0_NaB组，n=12）、口服低剂量丁酸钠+荷瘤模型组（L_NaB组，n=12）、口服高剂量丁酸钠+荷瘤模型组（H_NaB组，n=12），剩余NC组相同部位接种0.2 ml生理盐水。L_NaB组给药量为 0.3 g/（kg·d），H_NaB组给药量为0.5 g/（kg·d），NC组和0_NaB组给予等体积的生理盐水（0.2 ml/次，1次/d，6 d/周，持续4周）。观察小鼠一般状态，测定各组小鼠前肢抓力、腓肠肌质量及其肌纤维横截面积，16S rRNA测序技术检测盲肠内容物评估肠道微生物菌群结构变化，苏木精-伊红（HE）染色观测小肠壁病理结构变化，酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清、腓肠肌TNF-α、IL-6、IL-1β及LPS含量，蛋白质印迹法检测小肠ZO-1、闭合蛋白（occludin）表达及腓肠肌TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白的表达。结果 a. Abx组α多样性显著性低于 NC0组（P<0.01），肠道中绝大部分微生物菌群被清除。b. 与NC组相比，0_NaB组小鼠皮下荷瘤凸显，并伴随第3、4周末体重均显著降低（P<0.05），腓肠肌质量及肌纤维横截面积显著降低（P<0.01），以及第5、6周时前肢抓力亦显著减弱（P<0.01）；与0_NaB相比，L_NaB组和H_NaB组小鼠荷瘤质量明显降低趋势，腓肠肌质量及肌纤维横截面积明显增加，第5、6周时前肢抓力显著增加（P<0.05，P<0.01）。c. 与0_NaB相比，L_NaB组、H_NaB组α多样性中Shannon、Observed species指数显著性升高（P<0.05）；在属水平上，与0_NaB组相比，L_NaB组Paratutterella 相对丰度显著性降低（P<0.01），H_NaB组Escherichia-Shigella、Parasutterella相对丰度值显著性降低（P<0.01）。d. 与0_NaB组相比，L_NaB组、H_NaB组小肠组织结构较完整，炎性细胞浸润明显减少，毛细血管轻微扩张。其中，L_NaB组ZO-1、occludin表达量显著升高（P<0.01）。e. L_NaB组、H_NaB组腓肠肌LPS浓度以及TLR4、MyD88、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达量显著性低于0_NaB组（P<0.05）；H_NaB组血清TNF-α浓度及L_NaB组、H_NaB组腓肠肌TNF-α浓度显著性低于0_NaB组（P<0.05，P<0.01，P<0.01）。结论 口服NaB可通过改善CT26荷瘤小鼠肠道微生物菌群物种α多样性，调整肠道微生物菌群的组成，改善小肠黏膜屏障功能，抑制LPS诱导的促炎反应，进而延缓骨骼肌萎缩，其潜在机制涉及骨骼肌TLR4/MyD88/NF-κB信号转导的下调。]]> 2026/2/6 16:34:46 10true 目的 研究不同量级单核苷酸多态性（single-nucleotide polymorphism，SNP）位点组合，基于筛选SNP位点集进一步提高远亲缘关系的预测能力。方法 首先选取3种芯片中国基因分型芯片（Chinese genotyping array，CGA，Illumina）、全球筛查芯片（global screening array，GSA，Illumina）、23魔方V2版高密度SNP芯片（23MF_V2 high-density SNP array，Affy，Thermo Fisher Scientific （formerly Affymetrix））位点进行合并、质控，筛选得到一组高密度SNP位点集（1 180 k）；从161份全基因组测序数据中获取1 180 k位点集，使用共祖片段（identity-by-descent，IBD）算法进行亲缘关系推断，通过IBD片段长度和预测准确性的变化趋势评估该位点集的亲缘关系推断能力。结果 经过筛选后，得到1 184 334个常染色体SNP位点集（下文称高密度SNP位点集）。与3种芯片位点集的平均结果相比较，高密度SNP位点集增加了总IBD片段长度以及1~9级的平均IBD片段长度；8级置信区间准确率为70.97%，提高了3.50%；1~8级平均置信区间准确率为91.39%，提高了1.00%；8、9级假阴性率分别降低2.42%、6.76%。高密度SNP位点集的1~8级亲缘关系推断系统效能达98.91%。通过随机减少位点结果发现，增加SNP位点数量能提升较远亲缘关系推断能力。结论 高密度SNP位点集显著增强远缘关系推断效能，可精准覆盖1~8级亲缘关系，且1~8级平均置信区间准确率稳定在90%以上。本研究发现，SNP位点数量增加，可以提高远亲缘预测能力。]]> 2026/1/4 22:38:33 9true 目的 驴皮保藏过程中的品质稳定性直接决定阿胶的药效与安全性。本研究聚焦于微生物群落结构的动态演变，旨在阐明微生物种群差异对驴皮胶原结构及关键生化成分的降解规律，为构建基于微生物调控的针对性保藏策略提供理论支撑。方法 选取4种不同地区的驴皮，通过微生物老化加速实验，模拟驴皮腐败变质的过程。采用高通量测序技术解析微生物群落组成，利用扫描电子显微镜和压汞仪分析其微观结构，同时测定油脂、蛋白质及糖分等主要成分含量。结果 老化96 h后，非洲驴皮（Africa donkeys hide，ADH）的胶原纤维结构出现明显降解与塌陷，新疆驴皮（Xinjiang donkey hides，XDH）次之；秘鲁驴皮（Peru donkey hides，PDH）与东阿黑毛驴驴皮（Dong’e black donkey hides，DDH）的微观结构则保持相对完整。4种驴皮的油脂与蛋白质含量均下降，ADH与XDH的胶原蛋白降解最为严重，PDH老化液中可溶性总糖和ADH老化液中羟脯氨酸含量大幅度上升。宏基因组学分析显示，老化96 h后，ADH、PDH和XDH中广古菌门相对丰度分别从93.19%、97.73%和30.08%急剧下降至0.79%、1.43%和0.02%，而厚壁菌门丰度均显著上升，尤其是在ADH中高达92.75%。此外，PDH中假单胞菌门的丰度由0.10%增至87.84%，这表明厚壁菌门和假单胞菌门可能是加剧驴皮腐败变质的关键因素。与其他3种驴皮不同，DDH的优势菌则由假单胞菌门演变为拟杆菌门。结论 不同地区驴皮在微生物老化过程中，存在差异化的结构降解与营养利用模式。驴皮的腐败变质与其特定微生物群落的演替密切相关。因此，通过精准调控环境因子以抑制厚壁菌门和假单胞菌门等有害菌群，针对驴皮的地域来源制定差异化的防腐策略，有望显著提升其保藏质量。]]> 2025/12/22 14:46:59 8true 目的 探讨清除内源性甲醛（formaldehyde，FA）对双环己酮草酰二腙（cuprizone，CPZ）诱导的多发性硬化（multiple sclerosis，MS）模型小鼠的脱髓鞘的改善效应及其机制。方法 采用0.2% CPZ建立MS慢性脱髓鞘模型，将80只C57BL/6J雌性小鼠随机分为4组：生理盐水（normal saline，NS）对照组、MS模型（CPZ+NS）组、甲醛消除剂治疗组（CPZ+NaHSO3）（NaHSO3，一种FA消除剂）、纳米虾青素（astaxanthin，ATX，一种高效FA消除剂）治疗组（CPZ+聚乙二醇包装的纳米ATX（PEG-ATX）@NPs）。通过旷场、Y迷宫及爬杆实验评估运动能力及认知功能；采用免疫荧光组化法检测脑组织离子化钙结合适配分子1（Iba1）表达；劳克坚牢蓝染色法检测脱髓鞘变化；通过酶联免疫吸附分析（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒检测血液、胼胝体与脊髓中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素（interleukin，IL）-1β和IL-6含量；采用甲醛探针（Na-FA）测定脑及脊髓内源性甲醛水平及荧光成像定量组织活性氧类（reactive oxygen species，ROS）强度。结果 与NS组相比，CPZ+NS组小鼠体重下降，运动协调及记忆能力减退，髓鞘再生受阻（P<0.05），血液、脊髓和胼胝体中促炎症因子及FA含量显著升高（P<0.05），脑和脊髓组织FA及ROS荧光强度均显著增强（P<0.05），Iba1阳性小胶质细胞数量明显增多（P<0.05），胼胝体脱髓鞘严重（P<0.01）。但是，FA消除剂NaHSO3和PEG-ATX@NPs干预显著降低脑与脊髓FA含量，减轻髓鞘损伤，抑制小胶质细胞活化，下调促炎症因子，并改善模型小鼠的运动能力及认知行为。结论 纳米包装ATX可减少CPZ产生的FA，从而减缓MS模型小鼠的脱髓鞘及改善认知能力。]]> 2025/12/29 0:00:00 7true 目的 Y染色体单倍群分配的准确性在男性样本的父系祖先溯源中至关重要。随着高通量测序技术的发展，目前研究常基于全基因组或芯片数据中高密度Y染色体单核苷酸多态性（Y-SNP）的分型来判别个体的Y染色体单倍群。本研究系统评估了4种常见的高密度单核苷酸多态性（SNP）分型检测体系，包括全球筛查芯片（Global Screening Array，GSA）、中国基因分型芯片（Chinese Genotyping Array，CGA）、Affymetrix芯片及1240K捕获体系的单倍群判别效能，为不同体系的数据比对提供参考依据。方法 基于千人基因组计划1 590例男性样本的30×全基因组测序（whole genome sequencing，WGS）数据提取了上述4种Y-SNP位点集的分型结果，收集了109个中国汉族家系的384对1~12级亲缘样本的GSA芯片分型数据，利用Y-LineageTracker v1.3.0软件进行单倍群判别。评估4种Y-SNP位点集与全基因组分型数据获取的单倍群一致性、分辨率。评估千人基因组计划及本研究收集的109份家系样本的单倍群一致性、分辨率。评估不同量级Y-SNP对单倍群判别结果的影响。结果 GSA和CGA位点集在判别单倍群亚群和分辨率上优于其他两种位点集；GSA、CGA和1240K位点集的单倍群判定与全基因组分型数据一致性均超过88.70%，而Affymetrix平台的一致性显著降低至61.89%。所有家系样本中4组位点集均未出现单倍群不匹配亲缘关系对。在1 000~10 000个Y-SNP范围内，Y-SNP位点组合数量与分类一致性呈正相关，但当Y-SNP数量超过10 000时，其分类一致性趋于平缓。结论 GSA和CGA位点集兼具高分辨率与高一致性，能够在法医实践中为Y单倍群判定提供可靠依据。]]> 2025/12/26 11:45:39 6true 目的 通过建立缺血性脑卒中大鼠模型并应用粪菌移植（fecal microbiota transplantation，FMT）技术，探究肠道菌群失调与缺血性脑卒中之间的相互作用机制。方法 预实验通过抗生素处理建立抗生素（antibiotics，ABX）伪无菌大鼠模型，大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）法制备脑缺血模型，通过FMT技术移植卒中患者和健康人粪便菌群，然后进行行为学测试，采用16S rRNA测序技术对微生物群落进行分析，通过苏木精-伊红（hematoxylin and eosin，HE）染色观察组织病理状态，透射电子显微术（transmission electron microscopy，TEM）观察小肠紧密连接结构，同时使用酶联免疫吸附分析（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）方法检测炎症因子及肠道屏障相关标志物的水平。结果 小鼠16S rRNA测序显示，与空白对照组和甲硝唑组相比，四联抗生素组粪便微生物丰度和种类明显减少，表明ABX模型建立成功；卒中患者粪便移植至ABX大鼠后，肠道菌群发生了明显变化。行为学结果显示，MCAO模型组水平运动和垂直探索能力均明显下降；ELISA检测显示，抗生素处理+卒中模型粪菌移植（ABX+mFMT）组白介素-17（interleukin-17，IL-17）浓度较抗生素处理+健康对照粪菌移植（ABX+cFMT）组下降，提示IL-17可能成为评估卒中干预影响肠道菌群的关键炎症指标；氯化三苯基四氮唑（triphenyltetrazolium chloride，TTC）染色结果显示，通过干预肠道菌群可能会加重卒中风险。HE染色显示，除对照组外，各组大鼠脑组织均呈现缺血性改变及炎症浸润；TEM显示，ABX-mFMT组小肠上皮细胞微绒毛较ABX-cFMT组稀疏，表明菌群干预影响肠屏障功能。结论 广谱抗生素建立的ABX模型在生理特征上与正常大鼠无显著性差异，其所得的研究结果与无菌大鼠模型的研究结果相吻合；卒中预后可能受肠道紊乱影响，促炎因子IL-17水平明显升高，并可通过“菌-肠-脑轴”加重神经损伤；行为学实验提示通过移植卒中大鼠肠道菌群会降低认知功能；肠道菌群改变后，IL-17对肠道菌群变化敏感，或成为卒中干预的关键靶点。]]> 2025/12/30 14:23:35 5true 目的 评估时空电阻抗断层成像（spatiotemporal electrical impedance tomography，ST-EIT）在言语发声任务下，能否有效捕捉并区分腭裂（cleft palate，CP）患者与正常对照（normal control，NC）的言语呼吸功能特征。方法 本研究纳入75名受试者（CP组37例，NC组38例）。在标准化发声任务中，同步采集电阻抗断层成像（electrical impedance tomography，EIT）图像与口鼻气流信号，构建涵盖时间、气流与空间维度的三域特征，采用曼-惠特尼U检验（Mann-Whitney U test）比较组间差异。基于肺量计法（spirometry）、鼻音计（nasometry）及ST-EIT等多源数据，分别训练极端梯度提升（extreme gradient boosting，XGBoost）分类模型，采用5折交叉验证评估性能，并引入Shapley加性解释（Shapley additive explanations，SHAP）方法进行特征贡献分析。结果 CP组呈现显著的呼吸表型差异。时间域中，吸/呼相位时长均显著缩短（P<0.001），吸/呼时间比显著升高；气流域中，呼气期平均气流与峰值气流显著增强，吸气期无明显差异；空间域中，感兴趣区（region of interest，ROI）1和4的潮气阻抗变化（tidal impedance variation，TIV）显著升高，ROI2显著降低，全局不均一性（global inhomogeneity，GI）较低，通气中心（center of ventilation，CoV）呈轻度升高。ST-EIT模型分类性能最佳，曲线下面积（area under the curve，AUC）达0.915，准确率优于单一肺功能检测或鼻音计检测。SHAP结果表明，时空特征对分类决策贡献最大。结论 ST-EIT技术能有效揭示CP患者言语呼吸功能在时间-气流-空间三域的特异性改变，为床旁筛查、康复评估及随访监测提供了优于常规检测的客观量化依据。]]> 2026/1/12 16:53:26 4true 目的 先锋转录因子（pioneer transcription factors，PTFs）能够识别并结合核小体DNA，启动染色质开放和基因表达，在胚胎发育、细胞重编程及肿瘤发生等过程中发挥关键作用。然而，核小体旋转定位调控PTFs与核小体的相互作用机制目前尚不明确。方法 本研究基于DNA形变能模型，探究DNA旋转定位在转录因子与核小体相互作用中的调控作用。结果 体外环境中，SOX7和P53等转录因子的结合强烈依赖于其识别基序在核小体上的旋转方位。然而，对8种PTFs在体内环境中的分析表明，PTFs结合的基序与未结合的基序在核小体上呈现出总体一致的旋转定位倾向，提示在体内环境下旋转方位并非调控PTFs结合的关键决定因素。此现象在细胞重编程和胚胎干细胞分化过程中同样存在。PTFs在体内能够结合被核小体包埋的基序，可能是借助PTFs的结构特性和核小体呼吸作用等因素来克服结合表面的空间位阻。结论 本研究揭示了DNA旋转定位在体内外环境中对转录因子结合的差异化调控，强调了PTFs通过超越旋转定位的机制来主导染色质开放性的独特能力。]]> 2025/12/4 14:50:58 3true 目的 严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2） omicron亚型的持续进化，尤其是BA.2.86及其子代JN.1的出现，给现有中和抗体的防控策略带来了严峻挑战。本研究旨在阐明JN.1变异株对广谱中和抗体的免疫逃逸机制，为广谱疫苗与中和抗体药物的理性设计提供结构指导。方法 通过生物膜层干涉技术（bio-layer interferometry，BLI），系统评估三株先前筛选获得的广谱中和抗体（XGv074、XGv302、XGv303）对BA.2.86及JN.1变异株的结合与中和能力；利用冷冻电镜解析BA.2.86刺突蛋白（Spike，S）三聚体与XGv074、XGv302及XGv303抗原结合片段（fragment of antigen binding，Fab）的复合物结构；结合分子动力学模拟和结合自由能分解，分析关键突变对抗体结合的影响。结果 XGv074、XGv302和XGv303对BA.2.86仍保持中和活性，但对JN.1的结合能力显著降低，仅XGv074保留微弱中和活性。结构分析表明，JN.1的L455S突变破坏了XGv302与受体结合域（receptor binding domain，RBD）之间的关键疏水相互作用，导致抗体逃逸。结合自由能分解进一步揭示，L455和Y421为能量热点残基，L455S突变直接削弱了抗体结合。XGv074因重链互补决定区3（heavy chain complementarity-determining region 3，HCDR3）构象柔性较高，部分耐受突变。结论 JN.1通过RBD区关键位点突变逃逸广谱中和抗体，其机制涉及能量热点破坏和抗体结合界面重构。抗体的构象柔性可能增强其对突变的适应性，本研究为广谱疫苗和抗体设计提供了重要指导，强调了表位能量热点和抗体柔性结构在维持中和广谱性中的重要作用。]]> 2025/8/20 14:57:08 2true 目的 构建基于液滴微流控的细胞共培养芯片，研究复杂微环境中多细胞相互作用对抗肿瘤药物敏感性的影响。方法 构建由12个共培养单元构成，每个单元含有4个容纳细胞液滴的微井（well）的芯片，可以实现4种细胞的共培养。通过细胞共培养实验考察微环境细胞及肿瘤细胞之间的相互作用。通过蓝色墨水及模型药物扩散实验考察药物在芯片中扩散和被细胞摄取的能力。通过细胞共培养及药物作用实验探究微环境细胞存在条件下肿瘤细胞药物敏感性的变化，并通过免疫荧光技术检测其DNA双链损伤标志物，探究共培养条件下肿瘤细胞产生药物抗性的原因。结果 细胞共培养实验显示，微环境中癌症相关成纤维细胞（cancer associated fibroblast，CAF）、人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）、巨噬细胞与肿瘤细胞之间存在明显的相互作用。蓝色墨水及模型药物扩散实验显示，药物在芯片内可以均匀有效地向不同方向微井中扩散，不同微井中的相同细胞具有一致的增殖能力和药物摄取能力。细胞共培养实验及药物作用发现，由CAF、HUVEC、巨噬细胞构成的复杂微环境通过细胞之间的相互作用明显降低肿瘤细胞LoVo对奥沙利铂的药物敏感性。免疫荧光结果显示，共培养条件下LoVo细胞内γH2AX的表达量下降。结论 本研究首次通过构建的液滴微流控细胞共培养系统，探讨了在多种微环境细胞存在条件下肿瘤细胞对药物敏感性的改变，为监测临床药物反应、发现新的药物作用靶点提供了新的方法和手段。]]> 2025/12/17 11:41:25 1true