929true 928true 927true 926true 925true 924true 923true 922true 921true 920true 919true 918true 917true 916true 915true 914true 913true 912true 911true 910true 909true 908true 907true 906true 905true 904true 903true 902true 901true 900true 899true 898true 897true 896true 895true 894true 893true 892true 891true 890true 889true 888true 887true 886true 885true 884true 883true 882true 881true 880true 879true 878true 877true 876true 875true 874true 873true 872true 871true 870true 869true 868true 867true 866true 865true 864true 863true 862true 861true 860true 859true 858true 857true 856true 855true 854true 853true 852true 851true 850true 849true 848true 847true 846true 845true 844true 843true 842true 841true 840true 839true 838true 837true 836true 835true 834true 833true 832true 831true 830true 829true 828true 827true 826true 825true 824true 823true 822true 821true 820true 819true 818true 817true 816true 815true 814true 813true 812true 811true 810true 809true 808true 807true 806true 805true 804true 803true 802true 801true 800true 799true 798true 797true 796true 795true 794true 793true 792true 791true 790true 789true 788true 787true 786true 785true 784true 783true 782true 781true 780true 779true 778true 777true 776true 775true 774true 773true 772true 771true 770true 769true 768true 767true 766true 765true 764true 763true 762true 761true 760true 759true 758true 757true 756true 755true 754true 753true 752true 751true 750true 749true 748true 747true 746true 745true 744true 743true 742true 741true 740true 739true 738true 737true 736true 735true 734true 733true 732true 731true 730true 729true 728true 727true 726true 725true 724true 723true 722true 721true 720true 719true 718true 717true 716true 715true 714true 713true 712true 711true 710true 709true 708true 707true 706true 705true 704true 703true 702true 701true 700true 699true 698true 2^-_·体系，用鲁米诺作为指示O₂^-_·的化学发光剂，观察了不同浓度的NaOH、鲁米诺、pH、碱性二甲基亚砜加入量、测定时间及心绿染料对此法的影响。测定了山羊烟雾吸入伤后SOD活力和肺淋巴SOD清除量的变化。结果证明，本法灵敏度高、特异性强、操作简便、方法稳定，可快速、重复测定粗提取生物样品的SOD活力。]]> 697true 696true 50为0.53μg，M olt-4细胞毒性试验IC为3.8×10^-10M与以前报道用改良Olsnes法所得结果相近。但操作简便、得率提高近5倍。]]> 695true 694true 14C-鸟氨酸释放的 ¹⁴CO₂量测定鸟氨酸脱羧酶(ODC)的活性，酶反应在置于液闪计数瓶内的玻璃小管中进行，释放的 ¹⁴CO₂被瓶内滤纸片上的海胺吸收。实验结果表明，加酸释放 ¹⁴CO₂后30分钟 ¹⁴CO₂吸收已达最大值，且吸收量与释放量成正比，酶反应测定证明 ¹⁴CO₂释放速度在40分钟内保持恒定。ODC活性与酶浓度呈线性关系，此方法不仅用于ODC活性测定，而且亦可用于其他脱羧酶活性的测定。]]> 693true 692true 691true 690true 689true 688true 687true 686true 685true 3H]地塞米松交换。实验结果表明，在此条件下，GCR活性不变，交换率达94.9±4.2%(皮质酮100_nM浓度下)，受体亲和力不变。本法适用于生理和病理条件下，特别是血浆糖皮质激素高浓度时的胞液GCR的检测。]]> 684true 683true 682true 681true 680true 3-SPRIA)是一种新的放射免疫分析技术。本工作是用纯化的兔抗三碘甲腺原氨酸免疫球蛋白(T₃-IgG)，与聚苯乙烯小球偶联，制成T₃-固相抗体(T₃-SP-Ab)。T₃SPRIA方法简便、灵敏、快速和稳定。试验内、试验间及批间的变异系数分别为：11.6%、4.1%和5.4%。]]> 679true 678true 677true 676true 675true 674true 6μ／mg蛋白以上的国际临床标准。]]> 673true 672true e计算机上运行。]]> 671true 670true 669true 6-甲基鸟嘌呤广泛应用于DNA损伤修复和肿瘤研究中。本文以巯基鸟嘌呤为原料经二步反应而制备。并对其进行了元素分析、紫外吸收光谱、高压液相色谱测定和同位素鉴定。]]> 668true M氨水＝2：3：1(V／V)]可得到满意的层析谱。本法可用以鉴定PG(或GAG)中硫酸基位置及有关二糖的相对含量。]]> 667true 666true 665true 664true 663true 9g。]]> 662true 3)、甲状腺素(T₄)固相放射免疫联合测定法，是将₃抗体涂布在塑料小球上，将T₄抗体涂布在塑料管上。这种联合测定主要解决了T₃抗体对T₄的交叉反应。本法能在同一试管内进行，只需50μl血清样品，90分钟反应，可同时精确地测出两种激素水平，它比以往单独测定T₃或T₄的PEG双抗法更精确、快速和简便。]]> 661true 660true 659true 658true -10—19^-11mol。]]> 657true I=a-b ln(B/T-r)+c ln²(B/T-r)+d ln³(B/T-r)将胰岛素放射免疫测定盒所测得的6个不同浓度胰岛素的T(cpm)及B(cpm),或B(k)/T(k)(％)(k=1,…,6)输入微机,运行事先编好的程序,即可定出参数a,b,c,d和r。如果使用同一测定盒测出了某些血清样品的百分率B/T(％),或直接将其B值和T值由微机键盘输入后,微机屏幕即回答出血清胰岛素浓度值I(μU/ml)。所得结果比常用的Logit曲线要精确得多。]]> 656true 655true 654true 653true 210的抗原簇十肽的研究,探讨了小肽氨基酸序列直接测定的快原子轰击质谱法(FABMS)。从谱图中可以观察到显著的分子量信息和序列离子,并由此确定出肽的氨基酸序列。结果表明,一般C-端无碱性氨基酸时肽链比较容易形成N-端序列离子。 对掺杂有氧化态的还原型谷胱甘肽及其经巯基乙醇处理后的混合物FAB谱图的研究表明,后者具有更强的分子离子峰和更完整的序列离子,为含有胱(半胱)氨酸的肽序列分析提供了一个方法。]]> 652true Gγ和 ^Aγ链比值,具有准确、快速和步骤简便等优点。将凝胶干燥后作区带的双波长扫描定量,不影响测定结果,有利于标本的长期保存和进行大量的筛选工作。]]> 651true 3H]-spiperone作为特异配体,与人的淋巴细胞膜上多巴胺受体进行结合反应,在淋巴细胞浓度1×10⁶个/ml,反应温度37℃,反应时间60min条件下,此结合反应具有低容量和高亲和力的特点。K_d=8.87nmol/L, B_max=181fmol/l×10⁶个淋巴细胞。用单点法分析,34例正常人特异结合平均值为139(fmol/1×10⁶LC)。此法用血量少重复性优,从而适用于临床研究。]]> 650true 649true 648true E.coli tRNA^Leu简便而稳定的纯化方法。粗tRNA经过BD-Cellulose柱层析和聚丙烯酰胺凝胶电泳两个步骤即可得到亮氨酸接受能力为1400pmol/A₂₆₀单位的tRNA^Leu。]]> 647true 646true Pseudomonas maltophilia)HCG受体进行重组,经电镜及结合实验证明该法是可行的,作者对pH及金属离子对重组的影响进行了初步探讨。]]> 645true 644true 3H标记物测得回收率分别为96.4％与96.5％,分离一个样品约需12—14分钟,分离了600份精浆样品,经放射免疫测定得到满意结果。]]> 643true 642true 35S]dATP制备DNA探针,用于检测真核单拷贝基因并初步获得了满意结果。本文还叙述了 ³⁵S取代 ³²P中标记DNA探针和Southern吸印杂交时,适宜的反应条件,优点及其意义。]]> 641true 640true 639true 638true 637true 636true 635true 634true 633true 632true 631true 630true 629true 628true +生成的速度作为酶活力的指标,在560um波长和pH7.4,以酚红作指示剂,建立了pH-比色测定肌浆网CaATPase(Ca²⁺,Mg²⁺-ATPase)活力的分光光度法。方法简易,可观察反应进行的过程。SR CaATPase对底物ATP的K_m=97.4μmol/L;在22—42℃间求得活化能(E_Ca)=20.40千卡。用本法初步观察了汉防己甲素(简称汉甲)对酶的抑制作用。]]> 627true 626true 625true 624true 623true 622true 2mG为例阐述建立RIA质量控制方法和制定质量控制指标。采用自制质控血清和国产微机放免仪的数据处理程序,均能满足WHO对质控的要求。]]> 621true 60Co辐照法聚合了直径1微米、大小均匀的羟基微球。用羟基微球制备了固相二抗,并成功地应用于T₃、T₄、TSH、β₂-MG和地高辛的RIA中。观察了用固相二抗识别人辅助T淋巴细胞的效果,结果与荧光标记二抗法的结果相符。]]> 620true p＜0.01)。本法为临床检验和基础研究提供了新的途径。]]> 619true 3H-NAN)的有效方法。其步骤主要采用在碱性环境中使氚水中的氚元素与游离乙酰神经氨酸(NAN)第三位碳原子上氢元素发生交换而得放射标记物。然后在CMP-NAN合成酶的作用下使其与CTP反应而得CMP-H-NAN。本法的特点是流程简便,成本低廉,CMP-NAN合成酶的提取与保存十分方便。]]> 618true 3H-酪氨酸比放射性基本恒定,蛋白质合成与分解速率基本不变。测定正常大鼠比目鱼肌酪氨酸掺入,释放和净释放,结果稳定,重现性好。此外,我们还观察了介质中亮氨酸、胰岛素的影响。]]> 617true 616true 615true 614true 3H-秋水仙碱与微管蛋白的特异性结合及DEAE纤维素对微管蛋白的离子交换作用,以测定 ³H-秋水仙碱微管蛋白复合物的含量,了解脑神经原的分化状态。此法简便、快速,稳定、经济。]]> 613true 612true 611true 4)₂SO₄和CCl₃COOH沉淀,及Cibacron blue F3G-A-SephadexG-100凝胶柱层析,经二步提纯了人血清α₁-酸性糖蛋白。PAGE鉴定,在阳极端仅显示一条蛋白带。Schiff氏试剂染色阳性,证实为糖蛋白。SDS-PAGE测得其分子量为45000。免疫电泳结果表明,纯化的α₁-酸性糖蛋白与兔抗人全血清及免抗人α₁-酸性糖蛋白均呈现单一沉淀弧。氨基酸组成测定亦与文献报告的结果基本一致。本方法简便、省时。]]> 610true E.coliB 同时分离和纯化四种酶的一般方法。先用硫酸链霉素沉淀把RNA连接酶,DNA连接酶与多核苷酸激酶和DNA聚合酶加以分离。然后用DEAE纤维素柱层析把DNA连接酶与RNA连接酶加以分离,用DEAE-Sephadex-A50柱层析把多核苷酸激酶与DNA聚合酶加以分离。本文着重介绍T4DNA聚合酶的分离纯化。]]> 609true 608true 607true 606true 605true 604true 603true CV=2.6～6.0％,批间CV=6.9～7.9％,回收率97.7—106.1％,可测范围为1—500ng,适合测定血清及体液中微量CuZn-SOD。]]> 602true 2-dhfr载体质粒SV40早期启动子下游60碱基对(bp)处重组的pSVEHβ₁质粒导入中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶缺陷型株,简称CHO-dhfr^-细胞。共转化后,于选择培养基中长出的265个细胞克隆中随机挑出13株细胞克隆进行表达水平检测,其中7株细胞有表达,表达阳性细胞克隆株占54％,共转化率为1.33×10^-4。]]> 601true 600true 599true 4H经硫酸铵分段盐析,DEAE-纤维素柱层析,Sephadex柱层析和HpLCmono-Q阳离子交挟柱层析,再经羟基磷灰石柱纯化,得到其纯度可达90—95％的产物。酶活性为212LTB₂nmol·mg^-1·min^-1。较纯化前活性提高350倍。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳显示酶的分子量为68000—70000的单体蛋白质。与以前报道人红细胞LTA₄H不同。]]> 598true sAgMcAb IgG为IgG₁亚类,不含IgM杂质;提纯的HB_sAg McAb IgM进一步确证为IgM,未检出常见的IgG杂质。]]> 597true 596true 595true 594true -11mg,与放射免疫检测方法相似。]]> 593true 592true + RNA为模板,通过逆转录酶制备标记的第一链cDNA探针的最佳反应条件和纯化方法进行了研究,并探讨了这一方法的应用价值。本文为同步研究多种基因在细胞中的表达提供了一可行的新途径。]]> 591true 590true 125Ⅰ-蛋白A的效价等方面进行了讨论。]]> 589true 588true E)与α链、δ与 ^Gγ链,测定了20例正常人溶血液δ链的含量(1.12±0.44％)。并对1例HbE/β⁰-地贫家系4位成员的HbE和HbA₂含量进行了同时分别测定,其结果表明该方法稳定、可靠、易行。]]> 587true -1·s^-1。标准差为±0.082,其直方图为单峰形,基本呈常态分布。它的稳定性表明在疾病时对它的测定具有参考意义。分离所得粒细胞的纯度和存活率可影响其泳动率。纯度愈纯,存活率愈高泳动率值愈可靠。双层分离法所获粒细胞较纯,并同时可获纯化淋巴细胞供其它实验用。]]> 586true 585true 3+标记技术中的pH值、螯合剂用量及反应时间等诸因素的影响,选出了最佳反应条件。]]> 584true 583true 582true 581true 125I-血凝块溶解试验表明尿激酶前体可特异地诱导血凝块溶解,对血浆纤溶系统无明显激活作用,血凝块溶解的时间曲线呈特征性“S”型。所得尿激酶前体是一种新的有别于尿激酶的纤溶酶原激活物。]]> 580true 579true 578true 25的反应体系中,使TdT催化εdATP加接至oligo(dA)₂₅的3′-OH末端可得聚合产物,经分离、酶解后,测定游离εdATP的荧光强度并根据εdATP的掺入量测定TdT活力。方法简便、灵敏,测定范围较宽、重现性好及无需放射性底物。适用于临床定量检测白血病患者白细胞中TdT酶活力及基因工程中TdT工具酶活力的测定。]]> 577true 5个细胞,简便、精确。保留值的变异系数小于2％。实验中发现了间歇时间现象并予解释。]]> 576true -14mol/L、1×10^-12mol/L和1×10^-9mol/L,是一种灵敏、快速的测试方法。]]> 575true 574true Laminaria japanic)具有解壁或破壁作用的工具酶,从皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)的消化腺提取制备了鲍鱼酶干粉。本文报道鲍鱼酶的制备及其主要性质,并与贻贝酶进行了比较。]]> 573true 572true 571true 570true 569true CV为3.16％,5’-AMP在17.0—90.7pmol/10μl、cAMP在138—1104pmol/10μl浓度范围内,相关系数分别为0.9986和0.9950。用5’-AMP生成率和cAMP的转化率表达PDE活力,两者吻合。本方法能灵敏地反映茶碱对PDE的抑制作用。]]> 568true 3H]-酪氨酸分析,直接测羟基化的酪氨酸量。根据测得的“总dpm”、“酶样品dpm”和“空白dpm”计算出微量样品中酪氨酸酶的活性。另一种方法是将各个含酶样品通过SDS-PAGE分离和适当处理,放入含多巴的磷酸缓冲液中染色,待深棕色的酶带完全显现后,再经过固定等,直接将凝胶进行光密度扫描,根据各酶带吸收峰的高度即可测出酶活性的相对变化。]]> 567true K_m值和V_m值等。该程序用BASIC语言编写,在IBM和APPLE-Ⅱ微机上运行通过。]]> 566true 565true 564true 563true 562true 561true 3McAb和2C₁₀McAb,取得了比较理想的效果。]]> 560true 559true 558true 557true 556true 555true 554true 553true T.aestivum L.)线粒体蛋白质进行了分析。电泳结果表明:改良后的电泳系统稳定性和重复性较好,并且分辨率较高;考马斯亮蓝染色图谱中线粒体多肽呈现150—180个斑点;本文还就一些技术理论等问题进行了讨论。]]> 552true 4)₂SO₄沉淀,二次不同pH的DEAE-Sephacel离子交换柱层析及Sephacryl S-200分子筛柱层析从人癌性腹水中分离并纯化了PⅢP,并制备了抗血清。经SDS-PAGE鉴定为均一蛋白带,分子量约为47kD。经西德药盒测定,与西德、芬兰PⅢP抑制曲线平行关系良好。氨基酸组成测定亦与文献报道基本一致。抗血清效价较高,特异性强。本研究在方法学上有一定创新,提纯方法简便易行。]]> 551true 1R)的ELlSA检测法。5只大鼠肝胞液GR_1R/mg蛋白为1.0875±0.0257(扫描值)。本法特异性好,适用于没有GR纯品,而Mab数量不多条件下GR_1R的检测,其原理也适用于其他受体蛋白的测定。]]> 550true 549true 32P]-dATP 和 [γ-³²P]-ATP分别对寡聚核苷酸的3’-末端及5’-末端进行标记,研究这两种标记方法的技术途径,并结合斑点杂交,比较这两种末端标记的探针的灵敏度及特异性。结果表明:[α-³²P]-dATP虽可在寡聚核苷酸的3’-OH末端标上多个[³²P]-dAMP分子,但所得标记探针的杂交灵敏度及杂交体的稳定性均不及[γ-³²P]-ATP标记5’-末端制备的寡聚核苷酸探针。因此,当实验需要极高灵敏度的寡聚核苷酸探针时,以选择[γ-³²P]-ATP标记其5’-末端为宜。]]> 548true K_a=4.94×10^-10mol/L。α-hANF应用氯胺-T氧化法进行 ¹²⁵I标记,再经DEAE-SephadexA25柱层析纯化,得到单碘 ¹²⁵I-α-hANF,比放射性为300μci/μg左右。最小检出量为1.8pg/管。与8种肽交叉反应为:α-rANF 98％、心房肽Ⅲ 40％,其它6种无交叉反应。样品变异系数,批内:4.4％,批间:16.3％。]]> 547true 546true 1含量为44.3％,CK-MM₂为38.9％,CK-MM₃含量最低为16.7％,MM₃/MM₁比值小于1。而12例患者血中CK-MM亚型有明显变化,初步证实本法对早期诊断急性心肌梗塞(AMI)和溶栓治疗后判断是否出现再灌注有较高的临床价值。]]> 545true 2O₂的方法。研究表明,PMNs为1×10⁶/ml、TPA为100—300ng/ml和测定波长为620nm是较理想的测定条件。该法简单易行、稳定、无需特殊的试剂及仪器设备,适合于一般实验室常规研究抗氧化剂、抗促癌剂的作用和作用原理。]]> 544true 543true 542true 541true 2+含量试样中Ca²⁺浓度EPMA测定值与原子吸收光谱测定值做了比较。分别获得相关系数为0.994和0.989。这些结果说明用EPMA分析生物薄试样的结果是可以信赖的。]]> 540true 539true 538true 50测定的新方法。与经典LD₅₀测定法比较,该法简易、经济、快速,结果可靠,特别适用于蓖麻毒素和凝集素这类作用慢、毒性强的毒蛋白的急性毒性试验。]]> 537true 536true 535true 534true -6mol/L,而躁狂症病人的红细胞内ACh/Ch的活度值为98.3±41.4×10^-6mol/L,是正常人的4倍。本文对ACh/Ch离子选择微电极的结构和特性参数亦作了描述。]]> 533true 3H, ¹⁴C, ¹²⁵I及 ³⁵S其计数效率(E％)分别达34.1％,89.9％,60.3％及77.4％。液相及两种固相闪烁体间的变异系数(CV％)范围为5.1％—10.3％,同系列样品对不同厂家型号的液闪谱仪,测量效率趋一致。其测量效率、精确度、平行度等近于或优于液相测量。对数波谱分析表明无需淬灭校正并可用于双标记测量。用固相闪烁体制样不需闪烁液,故无毒、无污染、污物体积小且使用方便,克服了液体闪烁测量的不足。因此是较理想的可推广的新型样品制备与测量技术。]]> 532true 531true 530true 50)为6.39mg。]]> 529true 528true 527true 526true -3mol/L磷酸吡哆醛),37℃时器件性能最优,同时还考察了硅烷化及膜厚对器件性能的影响.用该传感器初步检测强化赖氨酸饮料的含量,结果与经典的茚三酮显色法基本一致.]]> 525true 524true P＞0.05).同时还预测了49种磷脂酶A₂的等电点.这一预测结果不仅对这类酶的分离纯化有一定参考价值,也有助于了解磷脂酶A₂同功酶的性质.]]> 523true 522true 521true 520true x±SD);回收率为98.4±7.4％。测定值与RIA法测定值比较,相关性良好。]]> 519true 518true 517true 516true 32P,作为探针与高梁叶绿体DNA(ctDNA)进行分子杂交。结果证明油菜4.5Sr RNA可作为公用探针,对一般植物,特别是高等植物进行分子杂交研究。杂交的结果得到两条带。]]> 515true 514true 513true 512true 511true 510true -4—1.0×10^-2mol/L,检出限为5.0×10^-5mol/L。并对介质条件,pH影响,选择性以及动力学响应行为进行研究,电极寿命达一个月以上。电极用于合成样品测定,效果满意。]]> 509true 508true pI6.7)不同。]]> 507true 506true 505true 504true 503true -8mol/L,并能对抗坏血酸和多巴胺进行分辨。实验表明,这种恒电位预处理方法简便实用,灵敏度高而稳定性好,完全适合神经递质的离体和在体分析。]]> 502true 501true 500true 2+存在下,活化的蛋白激酶C以ATP为磷的供体使组蛋白H1磷酸化。用Dowex-1柱层析分离反应后的ADP与ATP,再用酸性磷酸酶水解ATP的磷酸酯键,测定磷的含量,建立了蛋白激酶C活力的非同位素酶解测定法。此法可靠易行。CV=5.2％。]]> 499true 498true 497true 325)。方法简便、快速,比用480nm的方法更为灵敏,并有良好的定量性和重复性。]]> 496true 495true ·的化学发光体系;用抗坏血酸-Cu²⁺-H₂O₂产生OH^·,加酵母扩增化学发光,并通过对测定条件的研究,得到测定的最佳方案。所做结果证明,其体系灵敏度高、稳定性好、特异性强、操作简便、测量快速,值得推广。]]> 494true 493true 3H-UR, ¹⁴C-Leu, ¹²⁵I-UdR为前体,采用三标记参入方法,更严格地在同一样品中同时观察了淋巴细胞染硒前后DNA,RNA,蛋白质的合成及变化。结果表明该方法可行,且显著提高了实验效率;三种受试硒化合物在10^-8—10^-4mol/L浓度范围内对DNA,RNA,蛋白质合成均具有双相性影响,在中毒浓度时,三种硒化合物的毒性顺序为:亚硒酸钠＞硒酸钠＞硒蛋氨酸。]]> 492true 491true 490true 489true 488true +和双硫腙检测。与原法比较,本法省去离心一步,但需要加入聚乙二醇(PEG)～6000作为保护剂。用本法可测定蛋白质含量低至0.2μg/ml的样品。本法操作简单、快速、经济,具有较好的可重复性。]]> 487true 486true 485true 484true 483true 482true 481true 480true 479true 478true d=0.5cm),使用 N-甲基吩嗪甲基硫酸盐 (PMS) 和铁氰化钾为介体,间接地测定酶促反应中生成的还原辅酶 I(NADH).工作电位+350mV (vs.Ag/AgCl),L-苹果酸测定的线性范围为 25μmol/L—300μmol/L,响应时间小于60s,电极的使用寿命可达10d.并对电极的选择和重现性进行了讨论.]]> 477true 476true 475true 474true 473true 472true 125I-EGF 采用 Iodogen 方法,其标记率为50%左右, ¹²⁵I-EGF 对受体的结合率为20—30%.大鼠肝细胞膜 EGF放射受体法的灵敏度为 28pg/管,精密度为6.3%.应用此法测定了大鼠血清,颌下腺和唾液中的 EGF 的含量.]]> 471true 470true 469true 3+方法,BCPDA-Eu³⁺标记物荧光光谱研究以及固相时间分辨荧光免疫分析法检测甲胎蛋白异质体(AFP-R-LCA)方法的建立.结果表明 BCPDA 能在温合条件下与蛋白质氨基结合并与 Eu³⁺螯合,BCPDA-Eu³⁺蛋白质标记物荧光特性、标记比度、生物结合活性与国外同类产品一致,所建立的检测 AFP-R-LCA 免疫分析法最小检测值0.6ng/ml,为提高我国非放射性同位素标记技术水平奠定了基础.]]> 468true 467true 466true 125I发生反应的酪氨酸或组氨酸残基,我们用3-(4-羟苯基)丙酸-N 琥珀酰胺酯做连接剂,通过酰氨键将酯连在 AAP 肽的末端氨基上,再将 ¹²⁵I 标记在酯的羟苯基的2,5位置上,成功地建立了 AAP 放射免疫分析法.]]> 465true r=0.9989),线性范围(10—3000ng),平均回收率(97.33%)及平均变异系数(5.5%)均属优良.]]> 464true 463true 462true 461true 460true 125I 标记同一抗体的放免法同属 pg 水平.加入保护剂低温保存,使标记物的使用期由原来的1个月延长到6个月.]]> 459true 2 和 (γ-³²P)ATP 条件下,仍然保留胞内所具有的对 EGF 敏感的使受体自身磷酸化的蛋白激酶活性.]]> 458true 457true -9mol/L 亚硒酸钠(S)及1mg/ml 牛血清白蛋白(BSA)等诸种添加剂成分而构成了本试验的无血清培养基,定名为 LDSF.试验表明,LDSF 可取代常规培养基 DMEM(含10—15%胎牛血清),用于骨髓瘤、杂交瘤细胞的长期传代培养,支持杂交瘤细胞稳定、持续地分泌特异单克隆抗体(McAb),并可用于细胞融合、冻存和复苏.]]> 456true f_s 和机械阻尼电阻 R_q.随干燥固化进行,f_s 开始降低经极小值后突增转慢变化;R_q 则很快增加达极值后迅降而趋稳定.f_s,R_q 开始突变的时间、峰值大小均随 Hct 增而降.初步探讨了压电响应与血液粘弹性及血块力学性能之间的关系和这种技术的应用潜力.]]> 455true 454true 453true 452true 451true E.coli DNA作为模板,用引物F1和R1时,在电泳中未观察到特定区带.此法最小能检出8.5fg精氨酸支原体DNA,相当于13个精氨酸支原体.这说明,当这些支原体污染细胞培养时,能用PCR法检测出来.]]> 450true 449true 448true 447true s)和腺苷酸环化酶(AC)两种蛋白组分的制剂,然后通过Sepharose 6B柱将两者分开.将含G_s高活力的级分用庚胺-Sepharose 4B柱进一步分离,即可获得高活力的G_s,SDS-PAGE显示为分子量45 000和36 000的两条蛋白带.该法具有简便、快速、重复性好、产率高等优点,且可同时获得无G_s污染的AC.用无G_s污染的AC脂酶体测定G_s活力亦简便、可靠、灵敏度高.]]> 446true 445true 1F为0.3698.Gc^1S为0.2812.Gc²为0.3490.观察值与期望值吻合良好(Σx²=1.057,P＞0.70)]]> 444true 443true 442true K大于10¹⁰L/mol.]]> 441true 440true 439true CV值分别为3.76%和4.70%,批间CV值为7.00%,免疫沉淀法与电泳法高度相关(n=22,r=0.976).72例正常人LD参考值为102.31±16.4U/L,LD1为23.65±4.39U/L,LD1/LD为23.12±3.85%.免疫沉淀法的优点是特异性高,操作简单,可用于自动生化分析仪.精确度高,线性关系好,测定范围宽,是测定LD1的理想方法.]]> 438true 437true 436true 435true 434true 35S dATP直接掺入,Taq DNA聚合酶直接测序PCR扩增产物的方法.实验表明:该方法简便、快速、稳定.用此方法对人食管癌组织中的抗癌基因p53进行了突变测序分析,发现食管癌组织中p53存在点突变,插入、丢失移码突变.并用此方法对人和恒河猴的p53内含子序列进行了测定,发现猴第5内含子为81个核苷酸,第8内含子为92个核苷酸.]]> 433true 432true 431true 430true 2.观察了使用不同剂量的GHRP对不同日龄小鼠的促生长效应,当使用最佳剂量(1000μg/kg)时,可使25日龄小鼠体重较对照组增加14.8%,同时发现鼠龄越小对GHRP越敏感,当使用剂量高达10mg/kg时仍然安全无毒.]]> 429true I为4.7,氨基酸组成分析表明其为一种酸性蛋白质;对2-磷酸甘油酸的K_m值为5.6×10^-4mol/L.]]> 428true -4～1.4×10^-2mol/L,斜率为51.2mV/decade,检测下限为1.0×10^-5mol/L,寿命可达45d.考察了传感器响应初速和底物浓度之间的关系,测定了微生物膜中脲酶的表观米氏常数K_m及最大响应初速v_m.]]> 427true 1F=0.4891,Gc^1S=0.2432,Gc²=0.2678.观察值与期望值吻合良好.(∑X²=1.404,0.7<P<0.8).Pi^M₁=0.7542,Pi^M₂=0.1808,Pi^M₃=0.0650,观察值与期望值吻合也良好,(∑X²=1.1233,0.7<P<0.8).]]> 426true 425true +,K⁺-ATP酶活力等．]]> 424true 423true Luffa cylindrica)籽中得到丝瓜蛋白α和β.它们在SDS-PAGE上均呈一区带,其分子量分别为28000和29000.等电聚焦测定等电点均为10.它们对无细胞体系蛋白质合成都有强烈的抑制活性,其ID₅₀分别为10μg/L和50μg/L,是目前发现的单链核糖体失活蛋白中活性最高的.]]> 422true 421true 420true 419true 418true 2萃取法,提取天然蛋黄粉中的磷脂.在40MPa,先去除蛋黄粉中甘油三酯和胆固醇,再萃取磷脂.结果显示,磷脂纯度为95%,N/P比值为1.003,λ_max=214nm,薄层层析显示磷脂着色点清晰,并去除了绝大部分甘油三酯和胆固醇.此法操作简单、产品质量高、安全和不污染环境,还可得到天然纯蛋黄油和蛋白.]]> 417true 74A₁₀小鼠腹水滴度为1:50 000,亲和常数为7.15×10⁹L/mol,T₇₁B₁₁小鼠腹水滴度为1:150000,亲和常数为8.75×10⁹L/mol.两个抗体与人绒毛膜促性腺激素(HCG)、促卵泡激素(FSH)和促黄体生成激素(LH)的交叉反应分别小于1.1×10^-6%、0.01%和0.016%.将T₇₄A₁₀和T₇₁B₁₁应用于TSH免疫放射分析中,得到了满意的结果.]]> 416true 415true 9L/mol,采用改良的BHR法制备了 ¹²⁵I-hMSE,后者非特异结合率为3%,与抗血清(1∶10³)结合率达50.16%;批内和批间CV分别为8.6%和13%.回收率为95%-105%.标准曲线范围为5-320μg/L.最小检出率为5μg/L.最佳反应条件:0.1mol/LpH7.4PBS(含5mmol/L MgSO₄,0.1%吐温-20,0.1%NaN₃);反应温度和时间:37℃反应0.5h和4℃,0.5h,作为快速测定;或选用4℃反应24h.65例健康人血清hMSE浓度为23.9±10.9μg/L(x±s).hMSE超过57μg/L(x+3s).为阳性值.测定了AMI和肌病患者,血清hMSE明显升高.]]> 414true 413true 412true n)后不同类型拷贝数的计算通式并以逐次代入方式归纳出PCR产物中无错误碱基拷贝最低比率(R)和有效循环数(N),拷贝酶促合成链长(H)及错配率(f)的关系式R_n=(1-Hf/2)^N-1(1-Hf),对PCR技术制备表达用DNA片段有指导意义.]]> 411true 410true 409true 2+/半胱氨酸诱导大鼠肝微粒体为基本模型,根据硫代巴比妥酸(TBA)反应原理,优化不同反应条件,建立了一种在96孔板上进行抗脂质过氧化测定的一步反应方法，该方法的灵敏度不低于传统的试管法，而且还具有微量、快速、简便等优点，特别适用于大规模筛选和研究抗氧化剂.此外，也可用于其它系统诱导的抗脂质过氧化的测定.]]> 408true 407true 1,CK-MB₂以及CK-MM₁,CK-MM₂,CK-MM₃的百分含量.CK-MB和CK-MM同工酶的亚型最低检出限分别为2.2U/L,3.2U/L.该法具有快速、灵敏度高、重复性好、无需特殊仪器、操作简单等优点.]]> 406true CV)为1.8%.在半连续使用状态下,酶电极可以使用10d以上.糖化酶保持活力为60%.对延长酶电极寿命和克服共存葡萄糖的干扰的方法作了探讨.]]> 405true 404true 403true L-抗坏血酸(Vit C)为终止剂改进的经典邻苯三酚法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性.反应体系:50mmol/L邻苯三酚,pH8.20,总体积9ml,25℃,加一滴DTT(100mmol/L)或Vit C(5%),约50μl,终止自氧化反应.终止后,反应体系的420nm光吸收在lh内保持恒定.终止剂法的邻苯三酚自氧化率及酶活测定灵敏度与经典法相近,一个酶活单位相当于纯SOD 100μg/L.]]> 402true 4)、黄素单核苷酸(FMN), 黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)以及Ca²⁺、钙调蛋白等溶液中加入大鼠脑组织匀浆离心上清液, 组成酶反应体系. 37℃温育80min, 应用N-(1-萘基)-乙二胺、对氨基苯磺酸的重氮、偶氮反应测定酶反应体系中一定时间内NO代谢产物NO^-₂浓度变化, 建立一种简便的NOS活性测定方法. 反应体系最佳pH为7.4, K_m=0.1mmol/L, 体系内NO^-₂生成量与加入样品量之间有良好线性关系(r=0.998). 此方法简单、方便、重复性好, 批内CV为3.69%, 批间CV为5.16%. 10只健康大鼠脑组织中NOS活性为(39.61±7.64)nmol/(min·g).]]> 401true 400true 2O₂/Fe^2＋所产生羟自由基的新方法. 羟自由基氧化反应后, 邻二氮菲-Fe^2＋的A₅₃₆明显下降, 且△A₅₃₆与邻二氮菲, FeSO₄及H₂O₂呈量效关系, 随反应时间延长, △A₅₃₆依幂函数规律上升. 此法试验结果表明, 甘露醇, 抗坏血酸及硫肥清除羟自由基作用呈明显的量效关系.]]> 399true +)中, 用PCR和限制性酶切分析鉴定出阳性重组子. 然后利用M₁₃通用引物直接对插入的E基因片段进行序列分析. 结果表明, 经限制性内切酶鉴定和DNA序列分析证明所克隆的序列与已报道的E基因序列是一致的.]]> 398true 3, G₈, G₁₀, A₅, A₇), 4株为IgM, 1株为IgG, 染色体数目92～110条. 腹水效价为3.2×10^-6～1. 6×10^-7.]]> 397true 396true 2O₂或CN^-的作用下消失, Mn-SOD在CHCl₃-CH₃OH作用下消失, Fe-SOD在H₂O₂或. CHCl₃-CH₃CH₂OH作用下失活, 从酶带消失或存活的情况, 可以判断SOD的类型.]]> 395true 394true 393true Mucor miehei脂肪酶可催化有机硅醇和脂肪酸的酯化反应．对固定化酶用量、脂肪酸链长、不同有机硅醇底物、有机溶剂极性和水含量等影响因素进行了初步研究．]]> 392true 391true 390true Brachybacterium)15个菌株的染色体DNA进行分子杂交．通过测定荧光强度，确定DNA间的同源值．根据其遗传相关性，对难以从形态特征、生理生化特性等进一步分类的细菌在种的水平上定论，确定其应有的分类位置．光敏生物素标记DNA，在微稀释板上进行分子杂交是一种准确、快速的杂交技术，在短状杆菌的分类学研究中起着决定性的作用．]]> 389true 388true +－RNA为模板，含Not I切点的oligo－（dT）15为引物，在反转录酶的作用下，合成第一股单链cDNA；用E.coli RNase H除去模板RNA，并以E.coli DNA聚合酶Ｉ，E.coli DNA连接酶和T4 DNA聚合酶催化合成cDNA第二条链，即成为双链cDNA；此双股cDNA除0．5μg用于插入pSPORT I载体，转入E.coli DH5a，建成cDNA文库外，其余保存在－20℃，以此cDNA为模板，应用PCR方法，先后克隆了谷氨酸脱羧酶（GAD，1800bp）、神经元特异性烯醇化酶（NSE，1340bp），甲状腺激素受体（T3－receptor，1230bp）、胆囊收缩素（CCK，345bp）的全编码基因．]]> 387true 386true ex＝515nm、λ_em＝550ｎｍ测定MDA－TBA复合物的荧光强度．此法操作简便、快速，结果准确，荧光稳定．LPO含量（以MDA表示）在0～20μmol／L与荧光强度呈线性关系（r＝0．9994），最低检测限为0．16μmol／L，回收率为105．08％，重复性CV＝4．23％．]]> 385true 384true ct%)的相互关系.结果显示，HeLa细胞、HL-60细胞、增殖性和非增殖性PBL的DNA ct%分别为36.5、 22.5、 20.2和0，表明不同增殖速度或周期的细胞具有不同的DNA交联反应，而非增殖性细胞或G₀期细胞不产生DNA交联反应.]]> 383true -6mol／L．]]> 382true 381true 32P标记实验对该方法分离效果进行了观察．此法适用于同位素标记和非标记样品中肌醇磷脂组分的比较分析及多磷酸肌醇磷脂的提取、纯化和定量．]]> 380true 2)-糜酶融合基因的转基因新生鼠鼠尾DNA进行PCR筛选, 低熔点琼脂糖凝胶电泳回收阳性样品PCR所扩出的DNA条带,纯化后用同一对引物中的一个进行单引物PCR测序,与所转外源基因序列比较,进一步确定整合有外源基因的阳性鼠.PCR及PCR 产物测序法检测转基因动物具有操作方便,灵敏度高及特异性强等优点.]]> 379true 378true 377true 376true 3区微透析液中游离氨基酸的浓度为10^-8～10^-6 mol/L, 并将其用于学习与记忆的研究, 为无损伤研究活体脑内神经递质和其他痕量生化物质的动态变化提供了一种新方法.]]> 375true 4Cl溶液为介质, 用2.5次微分伏安法测定了丙二醛, 线性范围为1.0×10^-6至1.0×10^-3 mol/L, 检测限达1.0×10^-7 mol/L. 并测定了细胞培养液介质中新生SD大鼠心室肌细胞样品中的丙二醛.]]> 374true －₂对4-羟基香豆素的荧光增强效应，建立了生物样本中NO荧光分光度测定法，其检测浓度范围为2×10^-5～2×10^-8 mol/L，采用该方法检测了大鼠大脑皮层和海马组织、细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的巨噬细胞培养上清和血清中NO含量.]]> 373true 2、 1D₂ 和4B₄瘤细胞株进行了鉴定.其抗体类别均为IgG，亚类分别为IgG1和IgG2a.用多种细胞因子和无关蛋白的鉴别试验结果证实它们均特异地识别rhIL-6.免疫转染结果显示，该单抗识别分子质量为21 ku的IL-6单一条带.IL-6单克隆抗体的亲和常数K_aff= 1.62×10⁹ (mol/L)^-1.]]> 372true ε=2.6×10^-3(mol/L)^-1·cm^-1,解离常数K_d=1.8 μmol/L，0.5 mol/L NaCl可使复合物解离.根据这一特点，用Blue-Sepharose CL-6B凝胶从栝篓块茎中亲和纯化了TCS.此法快速、简便、高效，易于大量制备.]]> 371true 370true 369true 2O₂的影响.此生物传感器选择性好、灵敏度高，对H₂O₂线性响应范围为5.0×10^-7～2×10^-4 mol/L，响应时间少于30 s.]]> 368true 367true 366true 365true 364true 15N标记蛋白GAL4(62)的2D ¹H-¹⁵N HSQC、HSQC-NOESY、HSQC-TOCSY谱，并对这几个谱在蛋白质 ¹H谱的归属中所起的作用进行了讨论.]]> 363true 362true 361true 360true 359true 5 U/mg.纯化第一步使用反相柱层析，可将样品体积浓缩约30倍.取其收集液进行DEAE-离子交换柱层析，最后进行分子筛层析，全过程回收率为40%左右.SDS-PAGE表明，所制备终产品分子质量为35～40 ku，等电聚焦方法测其等电点在3.75～4.15之间，均属文献报道范围；ELISA和蛋白质印迹实验结果证明其具有天然红细胞生成素抗原性；采用溴化氰裂解方法做肽谱电泳，结果与理论推测相符.该纯化路线简单、迅速、高效,重复性好，可用于规模化生产临床使用重组人红细胞生成素.]]> 358true 357true 356true 355true 354true Ile合成基因片段，经限制性内切酶BstNⅠ酶切后作为模板，利用T7 RNA聚合酶在体外无细胞体系转录由T7启动子带动的大鼠肝tRNA^Ile基因，生成不含修饰碱基的tRNA^Ile,并对体外转录反应条件进行了优化，回收的tRNA产量可达DNA模板量的40倍.]]> 353true 352true 2＝0.9992;平均回收率为97.1%.]]> 351true T＝5%,C＝2.6%, 分离胶T＝8%,C＝5%的条件下用聚丙烯酰胺凝胶电泳对人类短串联重复序列(STR)DNA片段进行分离.其中,成层胶内主要缓冲成分为2-二羟乙基亚胺-三羟甲基甲烷(Bistris)、H₂SO₄及N、N-2(羟乙基)甘氨酸(Bicine) ; 而分离胶以Tris、H₂SO₄及2-二羟乙基亚胺-三羟甲基甲烷(Bistris)为主,构成多相缓冲系统.DNA片段在成层胶中被有效地压缩, 在分离胶内又可完全解压缩,使其按片段大小分离;从而达到提高分辨率的目的.]]> 350true E.coli中高表达的中国汉族人源γ-干扰素是以包涵体的形式存在的，包涵体经各种溶液洗涤后，用8 mol/L尿素裂解，裂解上清在8 mol/L尿素存在下，经离子交换柱层析和凝胶过滤两步纯化，得到纯度大于95%的γ-干扰素，稀释复性后，其比活为5.5×10⁵ U/mg. 激光解析电离质谱分析表明，中国汉族人源γ-干扰素的分子质量为17.32 ku，其N端序列与Gray等报道的γ-干扰素N端序列一致.中国汉族人源γ-干扰素的氨基酸组成分析结果也与其理论值相吻合.]]> 349true 348true 347true 346true 345true 344true 343true 342true 341true 340true 339true 338true 337true 336true 335true 334true 333true 332true 331true 21细胞中表达成功后，将该质粒经脂质体包埋，再导入到小鼠的骨骼肌内，在体内亦获得了表达，一个月时小鼠血浆中人红细胞生成素的表达量高达1 340 ng/L,这为贫血病人的基因治疗提供了科学依据.]]> 330true 2 U/L.测量值的相对误差＜10%.测定了血清中的碱性磷酸酶浓度，回收率为93%～95%.]]> 329true 328true 327true 326true 125I-EPO和 ¹²⁵I-G-CSF放射比活度均较高；发现BET-2细胞有高、低两种亲和力的EPO受体，NFS-60细胞只有一种高亲和力的G-CSF受体，所获结果与文献资料相一致.说明氯胺-T双相碘标法是细胞因子同位素碘标记的理想方法之一.]]> 325true 2SO₄取代0.1 mol/L NaCl溶解粗品，发现前者溶解液中有2个组分，一个组分被十六烷基溴代吡啶(CBP)吸附回收，产物呈纤维状，另一组分保留在溶液中并能通过分级稀释而被沉淀回收，产物呈粉末状；而用0.1 mol/ml NaCl溶解粗品，除了被CBP吸附回收外，保留在溶液中的HA不能被回收；与同类方法相比，回收率提高1.7倍以上.还分析了产物的性质，与同类样品比较，提高了纯度，降低了提纯中有机溶剂的消耗.]]> 324true 323true 322true 2+-ATPase的Ca²⁺转运能力影响的研究中的应用.]]> 321true 2^-_·的发光行为.通过对测定条件的研究, 得出最佳测定方案.改进后的方法不需使用发光剂Luminol, 所用试剂价廉易得, 且方法稳定, 重现性好.此法灵敏度远高于邻苯三酚自氧化的其他文献报道法.]]> 320true 319true 318true 2，占视皮层细胞总数的23.9％.上丘浅灰层及视觉层甘氨酸免疫阳性神经元平均密度为750/mm²,占该层细胞总数的19.5％.外膝体中甘氨酸免疫阳性神经元密度较低.甘氨酸免疫阳性神经元包括不同类型的细胞.]]> 317true 316true 315true 3+标记链亲和素双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析技术(TRIFMA),建立新的γ-干扰素检测技术,提高γ-干扰素检测方法的灵敏度.用固相包被的兔多抗捕获样品中IFN-γ,以具有中和IFN-γ抗病毒活性的生物素化单抗作为二抗体,再加Eu³⁺标记链亲和素并荧光检测.已知不同浓度标准IFN-γ CPS值的标准曲线,判断待检样品中IFN-γ量.本方法最低检测值为0.02 μg/L,检测范围为0.02～400 μg/L,而TNF-α,IL-2和IFN-α等细胞因子无交叉反应.对基因工程IFN-γ的生产,纯化过程中定性, 定量监控以及对培养细胞上清中IFN-γ量的检测等都有实用价值.]]> 314true 313true 312true 5.这一改良法的建立，可望促进免疫PCR的普及应用.]]> 311true 310true ·NO)反应生成荧光性2,3-萘酚三唑(2,3-naphthotriazole,NAT)和 ^·NO的气体特性，设计了一个流动气体和荧光方法相结合的 ^·NO直接测定方法.此法以惰性气体氮气为流动气体使样品中的待测 ^·NO随流动气体进入测定溶液，溶液中的DAN捕集流动气体中的 ^·NO生成荧光性NAT.实验结果表明测定溶液的荧光强度与 ^·NO浓度呈正比，与酸化亚硝酸盐溶液的浓度亦呈良好线性关系.用此方法测得五份酸化正常人血浆的 ^·NO浓度为(31.04±4.70) nmol/L，并可用于连续观察 ^·NO从亚硝基硫醇的自发释放.]]> 309true Gγ和 ^Aγ）的点突变筛查技术——化学裂解法(CCM). 为分析nd HPFH点突变提供了简单可靠的分子诊断方法.]]> 308true 2O₂易通过细胞膜而到达核这一特点，初步探讨了不同浓度H₂O₂对HL-60细胞DNA的氧化损伤程度.发现H₂O₂浓度在0.4 mmol/L以上时，作用8～24 h可以用气相色谱/火焰离子检测器(GC/FID)检测到氧化损伤标志产物——8-羟基鸟嘌呤(8-oh-G)，并观测到在0.4～0.8 mmol/L H₂O₂作用一定时间时，8-羟基鸟嘌呤含量随H₂O₂浓度升高而升高.]]> 307true 2重组表达质粒，经转染在大肠杆菌中成功表达.表达蛋白经金属离子螯合亲和层析和SDS-PAGE回收纯化，得蛋白质纯品.为eNOS特异性抑制肽的筛选和eNOS特异性抗体的制备提供了必要的准备.]]> 306true 305true 304true 303true 302true 301true 300true 299true 5 U/mg, 同时可以协同GM-CSF促进人骨髓中CFU-GM增殖. 重组人可溶性SCF的获得对于实验室研究和临床应用具有一定价值.]]> 298true 2＋浓度为1.8 mmol/L、退火温度为55℃时，能得到可靠的检测结果.影响检测结果可靠性的另两个因素是抽提物的反应用量和阳性片段的污染.]]> 297true 2-Lys-Gln-Thr-Ala-Leu-Tyr-Tyr-Cys-COOH.对其N端Lys进行糖化反应后，经Sephadex G-10柱色谱纯化后，通过RP-HPLC分析，证明得到了糖化八肽的单一峰.使用Merrifield树脂，Boc保护化学法合成了白蛋白七肽NH₂-Gln-Thr-Ala-Leu-Tyr-Tyr-Cys-COOH.通过RP-HPLC半制备分离提纯后，得到了所需的肽段.对N^α-Boc-Lys的ε氨基进行糖化反应后，经RP-HPLC分析，证明得到了比较纯的糖化赖氨酸，与纯化后的白蛋白七肽偶联后，通过RP-HPLC分析，得到了偶联产物——糖化八肽的单一峰.]]> 296true 2＋-ATP引发的荧光猝灭可以被质子载体CCCP恢复,并被质子通道抑制剂DCCD抑制;并且发现质膜H^＋-ATPase专一抑制剂钒酸钠可以完全抑制荧光猝灭,同时发现荧光猝灭依赖于Mg^2＋,并受K^＋刺激,最适pH为6.5.以上证明所测荧光猝灭是由质膜H^＋-ATPase所进行的质子转运引起的.结果同时表明,维持H^＋-ATPase合适构象和提高质膜微囊封闭性是制备具有H^＋转运活力质膜微囊的两个关键因素.]]> 295true 10的寡核苷酸片段，克隆入噬菌体呈现载体噬菌粒pCANTAB5E的SfiⅠ，NotⅠ位点，即cpⅢ蛋白信号肽与成熟肽之间，电转化E.coli TG1，构建了噬菌体表面呈现的十肽库，实际库容为3.53×10⁷，插入率为66.7%.经辅助噬菌体M13KO7超感染后，获得滴度为4.8 ×10¹¹ pfu/ml的噬菌体上清.经过两轮panning筛选和富集，从构建的随机十肽库中筛选到26个具有血管形成素结合活性的重组噬菌体克隆，对其中12个阳性噬菌体克隆的短肽序列进行了分析，ELISA检测结果显示12个阳性噬菌体克隆都能够与血管形成素特异性结合.]]> 294true T=12.5%）的水平电泳为第二向，成功地得到了神经组织双向电泳图谱.]]> 293true 292true 2+存在的条件下，用DNaseⅠ切割成10～50 bp的小片段.这些小片段在不外加引物的前提下，利用PCR反应进行重聚，再将重聚物经过两轮正常的PCR扩增，获得了与原来片段大小相当的基因片段.这一技术有利于从一组序列同源性程度较高的基因库构建随机嵌合基因.]]> 291true 125I标记IL-6，经Sephadex G-25纯化，抗原抗体反应采用平衡一步法，4℃温育24 h后经PR试剂分离结合和游离的标记抗原.该法测定范围0.1～3.2 μg/L最低检出量为0.l μg/L，批内和批间误差分别小于6.4％和10％.健康男性115例血清IL-6含量为(0.27±0.13) μg／L.女性101例血清IL-6为(0.26±0.10) μg/L.男女无差异.此外，用该法检测兔失血性休克再灌注损伤后24 h血清IL-6水平明显升高.失血性休克大鼠淋巴液中IL-6水平明显上升，经山莨菪碱（l mg／kg）治疗休克后IL-6又明显下降.内毒素同人牙周纤维细胞共同培养不同时间也促进IL-6释放并明显高于对照水平.]]> 290true 289true 2O₂比色法因背景物质干扰而测得的植物叶片内H₂O₂含量偏高，5％三氯乙酸抽提，活性炭脱色，Ti（Ⅳ）-4-(2-吡啶偶氮)间苯二酚(PAR)比色法测得的H₂O₂含量偏低.萃取法有效地脱去丙酮提液中的色素，且H₂O₂的回收率在95％以上.用过氧化氢酶(CAT）处理作空白对照，利用H₂O₂与Ti（Ⅳ）-PAR的显色反应，建立了一种简便、快速、准确的植物叶片内的H₂O₂含量测定方法，H₂O₂的最低检测浓度为0.25 μmol·L^－1.用该方法测得多种植物叶片中H₂O₂的含量在0.1～0.8 μmol·g^－1.]]> 288true 2溶液浸泡褐藻裙带菜（Undaria pinnatifida）的叶状体，观察CaCl₂溶液的浓度和浸泡时间对裙带菜叶绿体提取率及其荧光特性的影响.结果表明，裙带菜的叶状体经过CaCl₂溶液浸泡后，其叶绿体的提取率有明显地提高.根据裙带菜叶绿体的提取率和室温荧光发射光谱的测定结果，认为最适的方法是采用0.2 mol/L的CaCl₂溶液浸泡10 min.在这种条件下，裙带菜叶绿体的提取率是传统制备方法的5倍.室温荧光发射光谱的测定结果说明叶绿体的完整性较好.]]> 287true 286true 2+NAA_0.2固体培养基上诱导出黄绿色、松脆愈伤组织.愈伤组织细胞在同样成分的液体培养基中培养获得成功.在悬浮培养液中可检测到分泌蛋白的存在.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明，低温锻炼或脱落酸（ABA）诱导后，细胞分泌蛋白的多肽谱带数增加.与此相对应的是，细胞的抗冻能力也明显提高.PAS染色揭示多肽中均含有糖基.通过测定热滞值，确信细胞分泌蛋白是具有抗冻活性的糖蛋白.]]> 285true 284true HaeⅢ酶切产物进行DNA印迹，获得了变异性较高的DNA指纹图谱.因此，高变异的RAPD产物可以有效地用作DNA指纹探针.]]> 283true 282true 281true 2+浓度、二甲基亚砜(DMSO)浓度、变性时间、延伸时间、循环次数等因素进行4因素6水平和6因素10水平均匀设计实验优化apo E基因244 bp片段的PCR扩增条件.采用纯化模板和简易模板，只需6～10次实验即可获得特异性、高产率扩增结果.研究表明，将均匀设计用于PCR条件优化以及有关的样品处理、试剂选择等研究方面可以避免盲目性，迅速获得满意结果.]]> 280true 279true 278true 277true 276true EcoRⅠ酶切初步鉴定, 编码该蛋白的cDNA长约1 kb.]]> 275true 2反应产生 ¹O₂， ¹O₂与组氨酸或咪唑反应的中间产物使RNO发生氧化，导致RNO在440 nm处吸光度减小，此即为RNO脱色反应.RNO脱色反应随着光照时间的增加而增大，表明RB受光照射后使 ¹O₂增加；随着组氨酸或咪唑浓度的增加，RNO脱色反应增大；咪唑在RNO脱色反应中的作用更明显. ¹O₂淬灭剂NaN₃或DABCO存在时，RNO脱色反应降低.利用RNO脱色反应检测到莴苣类囊体在强光照射下产生的 ¹O₂，随着光强和照射时间增加，类囊体中 ¹O₂的产生增加.]]> 274true 273true TM cDNA expression array检测鼻咽、气管、食管、膀胱四种组织中588个已知基因的表达谱，得到11个在鼻咽上皮中表达相对较高的基因，作为鼻咽部组织相对特异基因的候选者，并用RT-PCR进一步验证.]]> 272true 271true 270true 269true LtetO-1控制的自杀质粒pJG9/Cre，以切除CVD908株△aroC中同向loxP序列之间的neo基因.质粒pJG9/Cre电转化入菌中，加入去水四环素诱导Cre酶表达，通过重组切除neo基因，再通过自杀质粒上SacB基因的启动，使质粒清除出菌细胞.抗生素鉴定和PCR扩增都证明，CVD908株△aroC位点中的neo基因被成功切除.]]> 268true 2 .此方法操作简便快速，灵敏度高，重复性好.采用这个改良的方法，分析了拟南芥野生型和ast突变型基因表达的差异.从16 000个cDNA扩增产物条带中筛选出28个差异条带.二次PCR扩增后，进一步筛选出13个差异条带，其中7个是野生型特异表达的，6个是突变型特异表达的，为进一步认识ast突变表型的产生机制奠定了基础.]]> 267true psbH gene产物（10 ku）,20 ku小肽尚不清楚其来源.并与其他几种检测磷酸化蛋白的方法进行了比较.]]> 266true 265true 264true 263true 262true 261true 260true 259true 258true 257true 256true 255true －）化学发光的改进体系，测试了某些抗氧化剂清除ONOO^－的作用，其体系的组成和启动发光的程序如下：向pH 10.5碳酸缓冲液配的0.01 mol/L浓度NaN₃溶液通O₃ 30 s，取其800 μl原位注入含有100 μl水配样品和100 μl的0.001 mol/L鲁米诺溶液中，启动化学发光（chemiluminescence, CL），立即测定每6秒的脉冲数（CP6S），连续测定10～30次.根据实际需要，选其某一次的CL强度作为评判指标，对比抗氧化剂的活性.该发光体系灵敏、简便、且较稳定，最低可检测限为8.74 μmol/L的ONOO^－量，线性范围为8.74～74.04 μmol/L.批内变异系数3.35%（n=10），批间变异系数5.52%（n=10）.测得维生素C(Vit.C)、茶多酚（EGCG）、原花菁素、硫脲皆有抑制CL，即清除ONOO^－的作用.]]> 254true 253true 252true 251true 14CO₂的吸附剂，改进谷氨酸脱羧酶（GAD）活性的放射测定方法，结果发现NaOH为吸附剂组内变异系数为9.6%, 以苯乙胺为吸附剂组内变异系数为31.9%；以NaOH为吸附剂72 h后测量其放射活性仍稳定不变，以苯乙胺为吸附剂者1 h后放射性活性即下降47%，6 h后已降低至本底水平；¹⁴CO₂重吸收实验亦证明以苯乙胺为吸附剂吸附的¹⁴CO₂ 6 h内已有80%以上重新被NaOH吸附；以NaOH作为吸附剂测定GAD的活性,在0.39～17.8 mg脑组织样品范围内GAD量与¹⁴CO₂生成量之间有线性关系.NaOH代替苯乙胺作为¹⁴CO₂的吸附剂测定GAD的活性其灵敏度提高1.66倍.用此方法测定组织和细胞内GAD活性证明其具有良好的重复性和稳定性，值得推广应用.]]> 250true 249true P＜0.01）.将稳定表达的细胞系（3＃）植入裸鼠皮下，成瘤后用氩离子激光器产生的488 nm蓝光经扩束后直接激发，瘤体部位发出强烈的绿色荧光.用530 nm长通滤色片滤除激发光，数码相机记录荧光的分布情况.实验尝试利用激光作为激发光源，检测GFP标记的肿瘤细胞在裸鼠中的定位，期望建立一种新的肿瘤早期检测技术并改进肿瘤转移研究的手段，实验取得了阶段性进展.]]> 248true 247true 246true Ⅱbβ₃是血小板上的一种钙依赖性膜受体，其胞外结构域可与含有RGD序列的肽链特异结合.通过将含有NTA-DOGS的磷脂单分子层膜转移到50 nm厚的金膜上，制备了一种含有NTA头部的表面等离激元共振(SPR)传感器敏感膜.设计并合成了含有6个组氨酸和RGD基团的His-tagged短肽P1，并利用SPR生物传感器，对整合素蛋白与含有RGD配基的支撑平面膜的特异相互作用以及Ca²⁺、Mn²⁺对该相互作用的影响进行了研究.结果表明，NTA敏感膜能很好地将P1锚定在支撑平面膜表面，并能够保证P1维持一个有效的定向.将Ca²⁺从低结合位点去除或加入Mn²⁺都能够增加整合素蛋白的配基结合活性.二价阳离子对整合素蛋白配基结合能力的调节作用，可能在整合素发挥其生理功能的过程中具有重要的意义.]]> 245true 35S标记的氨基酸混合物喂养工程菌，成功地制备了³⁵S标记的拟南芥钙调素亚型2（³⁵S-ACaM2），对其纯度、放射活度、电泳行为及其灵敏性等进行了检测.结果表明从工程菌中制备的³⁵S-ACaM2纯度高、放射活度高、Ca²⁺与EGTA存在时的电泳行为与未标记的ACaM2相同，可作为一种高灵敏性的探针用于检测钙调素结合蛋白.]]> 244true 243true 242true 241true H/κ的体外复性.通过考察复性液中还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)比例、精氨酸浓度、pH值、洗脱速度、变性液中蛋白质浓度、凝胶过滤脲梯度长度等因素，发展了脲梯度凝胶过滤柱复性V_H/κ的方法.结果表明，与传统的稀释法和柱复性法相比，脲梯度法复性获得的V_H/κ的活性回收率和相对亲和力均有显著提高.]]> 240true 239true 238true 237true 236true 235true sfiⅠB酶切位点）合成cDNA第一链，同时根据真核生物mRNA5′端帽子结构特点，利用SMART核苷酸（含sfiⅠA酶切位点）作为cDNA第一链在mRNA 5′端延伸出去的模板，进而以此序列为引物利用LD-PCR（long-distance-PCR）合成双链cDNA，双链cDNA经sfiⅠ(ⅠA和ⅠB)酶切和过柱分级分离后，克隆入经sfiⅠ酶切的λTrip1EX2载体后经体外包装而成cDNA文库.结果表明，原始人胚鼻咽上皮cDNA文库获得1.0×10⁶个重组子，重组率达96%.文库扩增后，滴度达7.8×10⁹ pfu/ml，插入cDNA平均长度为1.2 kb，用PCR从该文库扩增出本实验室新克隆的鼻咽癌相关基因NAG4的全长cDNA.构建的人胚鼻咽上皮cDNA文库具有良好的质量，该cDNA文库为进一步筛选、克隆鼻咽癌抑癌基因及鼻咽组织特异性表达基因奠定了基础.]]> 234true 233true 232true Oryza sativa indica）广陆矮4号的L3173号BAC DNA全长序列（约100 kb），GenBank登录号：AL512542.]]> 231true 230true 229true 228true 227true 6f复合物，捕光色素复合物和1,5-二磷酸核酮糖羧化酶.还结合SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳将叶绿体多亚基复合物的50多种蛋白质分开，利用免疫印迹对蛋白质复合物进行了初步鉴定，同时还应用蓝色温和胶电泳分析基质、基粒类囊体复合物的组成.]]> 226true 0～10⁹ DNA拷贝每反应范围内，C_t值(每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数）和DNA拷贝数呈线性关系（r＞0.990）；对临床标本检测结果同LCR分析结果吻合率为100%.以上结果表明，所建立的基于TaqMan-MGB探针的沙眼衣原体DNA荧光定量PCR检测系统具有敏感性高、特异性强和线性检测范围广等特点，适用于对沙眼衣原体进行大规模筛选.]]> 225true Sulfolobus shibatae DNA结合蛋白Ssh10b，与没有凝胶介质的条件下相比，晶体的出晶速度减缓，晶体的外形变得更规则，晶胞的C轴变短，晶体衍射分辨率从0.65 nm提高到了0.35 nm.]]> 224true 223true 13C标记的碳源，用二维核磁共振技术(¹H-¹³C，HMQC)测定代谢中产生的氨基酸标记模式，研究对中间代谢途径胞内代谢通量进行定量分析的方法.通过开发软件包，改进同位素分布的数学模型，提出了反应映射矩阵(RMM)等概念.由简化算法，提高程序的执行效率，建立了定量分析胞内代谢通量的平台.代谢模型涉及了糖酵解途径、磷酸戊糖途径、三羧酸循环、几种回补反应、发酵途径和氨基酸合成途径.]]> 222true 221true 220true 219true IL6、IFτ、CX43、PSMC3、oct4和DNMT1在牛卵母细胞中的表达.IL6、IFτ和CX43的表达与前人报告的结果相同，而DNMT1和PSMC3在牛卵母细胞中表达情况此前未见报道.]]> 218true 217true 216true 215true 214true 213true 212true 211true 210true 209true 208true 207true 206true 205true 2006/6/14 0:00:00 204true 203true 202true PSA6_HUMAN克隆到酵母表面展示载体pICAS-H上，用流式细胞仪检测其抗原表位活性，以表面展示α6的重组酵母细胞，结合酶联吸附免疫检测技术，建立酵母(yeast)-ELISA检测技术，应用于检测小鼠单克隆抗体及单抗效价. 酵母细胞培养48 h后获得抗原α6的高效表面展示，展示的α6具有良好的抗原活性和特异性，将α6的展示酵母用于yeast-ELISA的初步实验结果显示可有效检测和筛选到抗α6抗体.]]> 2007/5/29 0:00:00 201true 2007/9/17 0:00:00 200true g高速离心后，包含微细胞、完整细胞、细胞核和细胞碎片的混合液，依次通过8 μm 和 5 μm 孔径的滤膜过滤后可获得纯化的微细胞溶液. 通过光学显微镜和吉姆萨染色观察，可见微细胞为一群直径约为3～5μm的类细胞核的球形物质. 微细胞PCR技术首次用于检测微细胞溶液的质量，检测结果显示，所制备的溶液中均匀分布着带有目的染色体的微细胞，适用于进一步作转染色体动物实验.]]> 2007/5/22 0:00:00 199true 2007/5/28 0:00:00 198true 2007/4/16 0:00:00 197true gfp基因被从基因供体pTLG上切除下来，然后转移到基因受体pET-LoxP上，从而快速、简便地完成了gfp基因高效表达载体pET-gfp的构建．gfp基因在大肠杆菌BL21(DE3) 中被诱导表达，使菌落产生了可视的绿色荧光．通过对荧光菌落的计数分析，比较了环状基因供体pTLG和线性基因供体pTLG对有效重组率的影响．使繁琐的传统载体构建变为简单的酶促反应，极大地简化了载体构建步骤，为Cre酶在基因克隆和亚克隆中的应用提供了很好的研究基础．]]> 2007/5/29 0:00:00 196true 2007/5/16 0:00:00 195true in situ MPs-PCR) 扩增的靶序列，通过与野生、突变标签探针以及双色荧光 (Cy3，Cy5) 通用检测子杂交实现对样本的分型. 应用该方法，对96个样本的亚甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR) 基因C677T位点的多态性进行了检测，其野生型和突变型样本的正错配信号比大于4.5，杂合型正错配信号比接近1，分型结果与测序结果一致.]]> 2007/4/16 0:00:00 194true A₆₀₀；测得单抗效价为1∶5×10⁵，与常规ELISA效价接近；交叉试验和阻断试验表明该方法特异性强；同时该方法可用于检测抗血清.结果表明，yeast-ELISA可直接应用于检测单抗，测得效价与常规抗原包被间接ELISA具有良好一致性，特异性好，无交叉反应性.]]> 2007/5/9 0:00:00 193true 2008/5/29 0:00:00 192true fabD、fabG、fabH、fabA、fabZ、fabB和fabI，并构建相应的表达载体，在大肠杆菌BL21(DE3)中分别诱导表达酶蛋白，并使用Ni-NTA琼脂糖纯化到7种酶蛋白．体外添加所需酶蛋白和辅因子，在不使用[2-¹⁴C]丙二酸单酰CoA的条件下，成功地实现了脂肪酸合成反应的重建，另外还建立了数个鉴定有关酶蛋白功能的标准反应，并用其鉴定了丙酮丁醇梭菌FabZ的功能．]]> 2008/4/8 0:00:00 191true 2008/6/12 0:00:00 190true 2008/5/8 0:00:00 189true 2007/12/19 0:00:00 188true 2007/12/19 0:00:00 187true 3+)标记抗胃蛋白酶原Ⅰ单克隆抗体(PGⅠ)及铕(Eu³⁺)标记抗胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体(PGⅡ)，建立了双标记时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)，同时检测人血清PGⅠ和PGⅡ．将抗PGⅠ单克隆抗体8003^#、抗PGⅡ单克隆抗体8101^#以一定比例共包被于96孔微孔板上，用Sm³⁺标记抗PGⅠ单抗8016^#、Eu³⁺标记抗PGⅡ单抗8102^#，采用双抗体夹心法建立PGⅠ/ PGⅡ的双标记TRFIA．标准曲线由TRFIA检测仪自带的Log-LogB函数处理．PGⅠ可测范围为0.2～300 μg/L，批内和批间变异系数(CV%)分别为5.2%和8.1%，平均回收率为96.9%；PGⅡ可测范围为0.05～55 μg/L，批内和批间变异系数(CV%)分别为7.1%和11.7%，平均回收率为103.7%；双标记PGⅠ/PGⅡ-TRFIA与PGⅠ-ELISA法、PGⅡ-ELISA法的测定结果高度相关，具有较好的一致性，相关系数分别为0.9426和0.9396．检测300例健康人员的PGⅠ为(157.3 ± 51.0) μg/L，PGⅡ为(10.6 ± 5.9) μg/L，PGⅠ/PGⅡ比值为(14.8 ± 4.3) μg/L．PGⅠ的正常参考值范围在55.3～259.3 μg/L之间，PGⅡ正常参考值为< 23μg/L，PGⅠ/PGⅡ> 6．双标记PGⅠ/PGⅡ-TRFIA方法的研究在国内外尚未见报道，是一种灵敏、简便、快速、经济并可用于大批量样品筛查的方法，有利于各种胃病的大规模普查筛选及患者病程监测．]]> 2007/10/15 0:00:00 186true 4) 与其他类型肝炎病毒抗原无交叉反应．采用该单抗与多克隆抗体所建立的AC-ELISA法，对临床上乙型肝炎病毒(HBV)的突变样品进行检测的特异性和敏感性较高．]]> 2007/11/8 0:00:00 185true 2008/5/21 0:00:00 184true 2008/5/13 0:00:00 183true 2008/6/3 0:00:00 182true 2008/6/20 0:00:00 181true 2008/4/8 0:00:00 180true 2009/4/24 0:00:00 179true PDS基因作为内标基因，在100个混合农杆菌样中，成功筛选到了PDS基因．]]> 2009/3/11 0:00:00 178true 2009/1/10 0:00:00 177true Bacillus anthracis中并成功敲除eag基因．以B.anthracis基因组为模板扩增得到上下游同源臂，联合两端带有LoxP位点的壮观霉素抗性基因片段构建好同源重组载体，转化B．anthracis AP422，通过一系列筛选得到带有抗性标记的重组菌．然后，通过转入Cre重组酶表达质粒，去除抗性标记，得到eag基因缺失的重组菌，并在DNA水平、RNA水平和蛋白质水平进行了系统的鉴定．最终建立了Cre-LoxP系统在B．anthracis中的应用方法，并成功敲除eag基因.]]> 2009/3/26 0:00:00 176true 2009/1/19 0:00:00 175true 2008/12/22 0:00:00 174true 2008/11/3 0:00:00 173true 2009/2/10 0:00:00 172true S/N=3)为6×10^-3 U/L，出峰时间和峰面积的相对标准偏差分别为5.32%和3.17%，该法操作过程简单，检测灵敏度高，在临床痕量酶检测中具有较好的应用前景．]]> 2008/11/18 0:00:00 171true 2008/7/14 0:00:00 170true 2008/11/3 0:00:00 169true 2009/5/13 0:00:00 168true 2N (拷贝数) =-0.935 4ΔCt + 3.411 6 (R²=0.997 4，P < 0.001)，两只转基因猪中外源基因拷贝数分别为30.85 ± 1.77和18.87 ± 1.34；TAIL-PCR能成功地克隆转基因猪中外源基因整合位点，得到25条特异性条带，经BLAST比对，共获得TgInS1 (1 440 bp)、TgInS2 (1 263 bp)和TgInS3 (1 861 bp) 3个整合位点．以整合位点侧翼序列特异性引物与外源基因特异性引物的组合引发Junction PCR，得到预计大小的特异性片段，确定了整合位点上、下游侧翼序列的准确性．采用整合位点5′上游和3′下游侧翼序列特异性引物与外源基因特异性引物的组合，进行Junction PCR，在两只转基因猪中都得到与野生型猪一致的侧翼序列特异性引物扩增片段，表明我们获得的转基因猪都为整合位点杂合子．初步建立了绝对定量PCR和TAIL-PCR对外源基因拷贝数和整合位点检测的体系，为今后研究外源基因在转基因猪中遗传和表达的稳定性打下了基础．]]> 2009/7/15 0:00:00 167true T_m≤58℃)作为旁侧引物．第一轮PCR产物12.5 μl直接加入到50 μl的第二轮PCR反应体系作为模板和大引物，在开始第二轮PCR反应时，增加在68℃退火温度下进行10个循环的不对称PCR，这一步骤大大提高了通过600 bp或800 bp大引物所导致的突变效率．结果表明，该方法的产物能够达到高保真、97%～98%的突变效率和高产率．]]> 2009/6/12 0:00:00 166true 2009/6/30 0:00:00 165true 2009/5/25 0:00:00 164true lef-1 dsRNA表达盒的转基因载体pigA3-LEF- Neo转染家蚕BmN培养细胞，通过G418(750～800 mg/L)筛选，获得了稳定转化细胞系．病毒感染试验显示，稳定转化细胞的病毒感染率比正常细胞低53%、转化细胞形成的多角体数量为普通细胞中的2/3、细胞培养上清中的游离病毒减少了90%以上，表明病毒在转化细胞中的增殖受到明显抑制；半定量RT-PCR结果显示，转化细胞中病毒lef-1的转录水平仅为正常细胞的2/5～3/5，表明转化细胞表达的lef-1 dsRNA抑制了病毒lef-1基因的表达．通过反向PCR分析外源DNA片段插入基因组位点，结果表明，在转化细胞中外源DNA可通过随机整合或按照piggyBac特定的转座位点TTAA插入细胞基因组．]]> 2009/9/3 0:00:00 163true 7 L/mol)，所得抗体对毒死蜱、对硫磷、丙溴磷、氧化乐果、除线磷、二嗪农、溴硫磷、辛硫磷、喹硫磷、三唑磷等农药有特异性反应．该检测技术可用于上述农药的快速定性或定量检测．]]> 2010/6/10 0:00:00 162true 2010/5/20 0:00:00 161true 2010/5/20 0:00:00 160true 2010/6/22 0:00:00 159true 2010/1/19 0:00:00 158true 5．间接竞争ELISA表明，桔霉素(CIT)的最低检测浓度为10 μg/L，其线性范围为10～250 μg/L，IC₅₀为100 μg/L．分析了不同方法制备的偶联抗原的免疫原性，实验表明，桔霉素抗原决定簇C₇位置的羧基保留是获得针对桔霉素特异性抗体的必要条件．为快速检测桔霉素的酶联免疫检测技术的建立和检测试剂盒的研制提供技术依据．]]> 2009/12/22 0:00:00 157true 2009/12/23 0:00:00 156true 3和HDL₂两种亚类得到基线分离．该法操作过程简单，重复性较佳，测试费用低廉，在临床HDL亚类的检测中具有较好的应用前景．]]> 2009/12/15 0:00:00 155true P < 0.05；54.0% vs. 19.6%，5.4%，18.7%)．扩张囊胚发育率，早裂胚胎同样优于其他组．早期卵裂的SCNT胚胎发育到第6天的囊胚比率高于中期卵裂胚胎(32.2% vs. 23.5%)，而晚期卵裂胚胎发育到囊胚的比率最低(6.3%)．早期卵裂的SCNT胚胎发育到第6天的扩张囊胚比率显著高于其余各组 (P < 0.05；18.9% vs. 5.9%、3.1%、7.4%)．囊胚细胞数在早期、中期、晚期三组之间表现出下降趋势．将早期卵裂的SCNT胚胎与未经挑选的对照组胚胎分别进行移植，观察其体内发育能力．移植早裂SCNT胚胎的受体在产仔数和克隆效率上均明显高于未经挑选胚胎的受体(4.7 vs. 2.1；3.9% vs. 0.9%)，说明早裂胚胎着床后具有更强的发育能力．以上结果表明：初次卵裂时间可以作为猪克隆胚胎发育潜能的重要标识，选择早裂的胚胎进行移植，有助于提高克隆效率．]]> 2010/8/31 0:00:00 154true 8 L/mol，单抗与黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮等毒素的交叉反应率均低于0.1%，与红曲色素中的橙色素和红色素的交叉反应率均低于0.01%．在此基础上建立了间接竞争ELISA检测方法，线性范围为0.05～1.0 μg/L，IC₅₀值为0.3 μg/L．结果为快速检测桔霉素的酶联免疫检测方法的建立和检测试剂盒的研制提供技术依据．]]> 2010/6/23 0:00:00 153true 2010/5/27 0:00:00 152true 2011/5/24 0:00:00 151true 2011/4/28 0:00:00 150true d_y(选择进化距离)．由于核苷酸替代模型有很多，选用其中的4种模型，计算出其相应的选择进化距离d_y，该进化距离包含了4种模型下的p距离、替代率为常数的距离d和替代率服从Г分布的Г距离d_G．进一步根据动力学方程的特点，将模型转化为一元线性回归问题，用最小二乘法求得选择模型中的动力学参数b和各核苷酸位点每年的平均替代速率r．以16个物种的线粒体基因序列为例，说明这种新的进化距离并通过构建不同进化距离下的基因进化树来对各进化距离进行比较．结果表明：选择进化距离d_y是一种有效的构建进化距离的方法．]]> 2011/4/2 0:00:00 149true P < 0.001)．检测RA、RAEB、RAEBt、AML和其他组差异表达发现，RAC2、RhoBTB3、SPA-1和Rap1GAP各组间有显著性差异性存在(分别为P < 0.000 1, P = 0.049 1, P = 0.020 6 和P = 0.004 6)，其差异显著性与实时荧光定量PCR一致，泊松相关系数分别为0.930，0.946，0.945 和 0.921，具显著性(P < 0.001)．结果表明，成功建立了基于荧光微球的液相基因表达阵列，其敏感性高、特异性强、重复 性好．]]> 2011/1/28 0:00:00 148true 3+)标记检测C肽(C-peptide)及铕(Eu³⁺)标记检测胰岛素(insulin)的双标记时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)，并初步尝试检测人血C肽以及胰岛素含量．将抗C肽单克隆抗体(Biodesign No. E54094M)与抗insulin单克隆抗体(Biodesign No. E86306M)混合包被96孔板，然后用Sm³⁺标记抗C肽单克隆抗体(Medix No. 9103)，Eu³⁺标记抗insulin单克隆抗体(Biodesign No. E86802M), 运用双抗体夹心一步法建立C肽/胰岛素双标记时间分辨免疫荧光分析法．结果显示：C肽分析灵敏度为0.2 μg/L,线性范围为0.5～22 μg/L，平均回收率达到99.6%，分析内和分析间变异系数分别为4.6%～6.0%和5.1%～7.6%．胰岛素分析灵敏度为0.8 mU/L，线性范围为3.6～180 mU/L，平均回收率为99.4%，分析内和分析间变异系数分别为3.7%～6.0%和5.1%～8.0%．C肽/胰岛素双标记检测试剂与PerkinElmer公司对应的单标记进口试剂盒分别同时测定血清样本200份，检测结果高度相关，具有较好的一致性，相关系数分别为0.98与0.99．总之，自建C肽/胰岛素双标记时间分辨荧光免疫分析方法的性能均可以达到临床检测要求，有望替代现有国内外较为昂贵的单标记试剂，可用于胰岛素分泌不足导致的糖尿病诊断及糖尿病的大规模普查筛选．]]> 2011/3/23 0:00:00 147true 2011/3/8 0:00:00 146true 2011/1/13 0:00:00 145true 5～4.3×10⁵，而经单细胞归一处理，上述表达变化范围为2到26倍．该项研究还发现，看家基因U6 ncRNA 和5S rRNA的表达水平存在显著的变化，在以基因组DNA为归一化基准时，其表达量变化为1.5和4.8倍，而在以RNA水平为归一化基准时，其表达量变化为5.8和3.8倍，表明这些基因不适合作为数据处理的基准．据此，为microRNA的定量研究提供了一种新的、可靠的归一化方案．]]> 2010/12/27 0:00:00 144true 2010/12/27 0:00:00 143true 2010/11/18 0:00:00 142true XmnⅠ位点改造成HindⅢ位点，产生入门载体pENTR*-2B，然后将番茄1, 5二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)小亚基3C的启动子(PrbcS)及其转运肽序列(*T)和绿色荧光蛋白(GFP)报告基因亚克隆到pENTR*-2B中，构建通路克隆入门载体pENTR*-PrbcS-*T-GFP．实验结果证实，用pENTR*-PrbcS-*T-GFP和通路克隆的植物表达载体进行LR反应，构建GFP的光诱导型植物表达载体，可以成功地将表达的GFP定位到转基因植物的叶绿体中．利用β-葡糖苷酸酶(GUS)报告基因替代该入门载体中的GFP基因做试验也得到相似的结果．这说明用目的基因替换该入门载体中的GFP可以构建目的基因的入门载体，然后用通路克隆技术可以快速构建其光诱导型植物表达载体，将表达的目的蛋白定位到转基因植物或组织细胞的叶绿体中．]]> 2010/11/18 0:00:00 141true 2010/8/24 0:00:00 140true 2010/11/23 0:00:00 139true P < 0.05)．该方法的回收率约95.96%～102.04%，相对标准偏差(n=5)小于10%．结果表明，改良2, 4-DNPH法用于脑内源甲醛的测定，其操作简便、可信度高．]]> 2011/11/29 0:00:00 138true 2011/11/14 0:00:00 137true 2011/11/23 0:00:00 136true K_a，在绿色荧光蛋白GFP及其突变体，以及光转化荧光蛋白mEOS2荧光活性中心中分别用3-Cl-Tyr取代Tyr，使得GFP发色基团的pK_a降低到4.7，并且具有与EGFP相似的量子产率，使mEOS2 发色基团的pK_a降低到4.2.这样使得荧光蛋白的发色基团在酸性条件下仍然能以去质子化形式存在，在500 nm以上仍然具有较强吸收，避免了用400 nm左右激光激发及其对细胞及细胞器造成的光损伤．这种新型的荧光蛋白突变体将适用于溶酶体、吞噬酶体等酸性细胞器．]]> 2011/10/24 0:00:00 135true Sorangium cellulosum So0157-2表达的特异性蛋白，实验优化了S. cellulosum So0157-2双向电泳方法．首先，S. cellulosum So0157-2蛋白在裂解液中有更好的溶解度．pH 3～10非线性胶条和1 mg的蛋白上样量适用于第一向等电聚焦，分别提高了蛋白质点的分辨率和低丰度蛋白质的表达．15% SDS-PAGE 改善了S. cellulosum So0157-2蛋白分离的分辨率和重现性．最终，通过优化的双向电泳方法获得了S. cellulosum So0157-2 在M26培养基中培养3天的全蛋白质表达谱，并检测到552个蛋白质点．进而对表达蛋白通过MALDI-TOF-MS进行质谱鉴定，其中474个蛋白质得到鉴定，鉴定率85.9%．得到鉴定的蛋白质包括细胞结构和功能组分，以及细胞代谢合成酶类，其中8个蛋白质与糖类的转化和代谢相关，这有助于糖基化埃博霉素A的深入研究．该优化方法为进一步建立纤维堆囊菌So0157-2在各种培养条件下的蛋白质组表达数据库打下基础．]]> 2011/7/26 0:00:00 134true 2012/3/19 0:00:00 133true c-fos基因转录水平的动力学变化等指标，确认了毒性模型的成功建立．本工作不仅对建立小脑颗粒神经元谷氨酸兴奋性毒性模型的实验室具有重要参考意义，而且，其针对不同条件分析比较的结果及优化原则，对其他神经毒性模型的建立也具有普遍参考意义．]]> 2013/8/21 0:00:00 132true 2013/7/24 0:00:00 131true 2013/5/22 0:00:00 130true 2013/4/23 0:00:00 129true 2013/3/26 0:00:00 128true S/N>3)分别为1.9291、1.8794 和166.5 nmol/L，定量限(LOQ，S/N>10)为1.9632、1.9672和185.6 nmol/L，且加标回收率为81.8% ～107.8%，相对标准偏差小于7.55%．AMP、ADP和ATP的日内偏差(RSD)分别为6.16%、5.13%和7.66%，日间偏差(RSD)分别为6.36%、2.74%和6.77%．该方法快速、简单、灵敏，能满足细胞内AMP、ADP和ATP含量的检测要求．通过检测分析在不同浓度高良姜挥发油作用下人肺癌A549细胞内AMP、ADP和ATP含量变化，结果显示细胞总的腺苷酸水平和能荷呈浓度依赖性下降，且当浓度达到500 mg/L时ATP/TAN明显下降，而A549细胞中AMP/ATP比例水平呈浓度依赖性增加．这提示高良姜挥发油可通过影响细胞能量代谢抑制细胞增殖．]]> 2013/3/22 0:00:00 127true 2013/2/26 0:00:00 126true P < 0.05)，电脉冲次数对克隆胚胎体外发育促进作用不显著(P > 0.05)，而相同电激活条件下克隆胚胎和孤雌胚胎的体外发育能力变化趋势不同；电激活后再利用放线菌酮 细胞松弛素B(CHX CB)处理4 h能显著提高克隆胚胎的囊胚率(P < 0.05)，而用二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)处理没有提高克隆胚胎囊胚率 (P > 0.05)，但6-DMAP或CHX CB处理均可显著提高孤雌胚胎的囊胚率(P < 0.05)．上述结果表明，最佳的孤雌激活条件并不一定是克隆胚胎的最佳激活条件．本研究中猪克隆胚胎的最佳激活方法为1.6 kV/cm、100 μs、2次直流电脉冲间隔100 μs，再辅以CHX CB处理4 h．利用优化的激活条件成功获得了乳腺特异表达人溶菌酶的转基因猪，为猪转基因育种奠定了基础．]]> 2013/2/28 10:38:33 125true 2013/12/20 0:00:00 124true 2014/9/22 0:00:00 123true 2014/7/19 0:00:00 122true 2014/6/18 0:00:00 121true 2014/5/22 0:00:00 120true 2014/4/22 0:00:00 119true 2014/4/22 0:00:00 118true 2014/11/21 0:00:00 117true 2015/8/18 0:00:00 116true 2015/7/20 0:00:00 115true 2015/4/24 0:00:00 114true 2015/3/24 0:00:00 113true 2015/2/6 0:00:00 112true 2015/1/19 0:00:00 111true 12C₆]-和[¹³C₆]-苯胺同位素修饰糖链还原性末端技术，然后利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)，进行膀胱上皮细胞不同病理状态的糖组相对定量分析．从6株细胞中共鉴定出52种N-连接糖链结构，并定量分析了不同类型的糖链在不同细胞中的分布差异，发现唾液酸化、岩藻糖化的N-连接糖链在膀胱癌肿瘤细胞恶化过程中呈现显著升高的趋势，同时平分型糖链和高甘露糖型N-连接糖链也呈表达升高趋势，说明这些糖链结构的表达变化与膀胱癌发生关系密切，从而有助于进一步阐明膀胱癌发生过程中糖链相关的分子机理．]]> 2015/12/18 0:00:00 110true 2015/10/21 0:00:00 109true 2016/8/5 0:00:00 108true 2016/7/18 0:00:00 107true v/v)二甲基亚砜(Me₂SO)低温保护剂时细胞内保护剂浓度变化、细胞体积变化，以及对细胞存活率与发育率的影响，并与传统的加载方法(一步法、分步法)做了比较．结果表明：微流控法能够实现卵母细胞冷冻保护剂的连续线性加载，避免了卵母细胞体积的骤变，显著减小了细胞的渗透损伤，提高了细胞的存活率．其中细胞的最小渗透体积减小为0.86V₀，细胞的存活率达到92.8%，比一步法高33%，比两步法高16.3%，但与四步法之间无显著性差异．经孤雌激活后体外培养，细胞的卵裂率和囊胚率分别达到75.8%和27.4%，都显著高于一步法和分步法(P < 0.05)．因此，微流控线性加载低温保护剂能够显著减小细胞的渗透损伤，为卵母细胞低温保存技术提供新思路．]]> 2016/6/21 0:00:00 106true 2016/3/21 0:00:00 105true 2016/2/19 0:00:00 104true I_K1)，使心室肌细胞产生起搏行为，然后基于理想心室组织和真实人体心室切片数据，构建2D生物起搏器模型．基于该模型，我们研究细胞间的电偶联和起搏电流I_f对起搏器功能的影响．发现起搏电流I_f对起搏器功能有增强作用，但细胞间的弱电偶联对起搏器的起搏有更为关键的影响．]]> 2016/12/22 0:00:00 103true 2016/11/22 0:00:00 102true 2017/9/21 0:00:00 101true P_r)．结果显示，Syt1 sgRNA组神经元丧失了Syt1的功能，并且与Syt1敲除(Syt1 KO)小鼠神经元的突触传递表型相似，而Scramble组神经元的各参数和野生型(WT)小鼠神经元相比没有显著性差异．本文为CRISPR/ Cas9技术应用于神经元中基因的急性修饰提供了依据．]]> 2017/6/20 0:00:00 100true 2017/6/20 0:00:00 99true 2017/5/22 0:00:00 98true 2017/11/20 0:00:00 97true 2018/4/27 0:00:00 96true TrCel12A和木聚糖酶TlXynA活性架构中不同突变体的催化活性及其迁移率的变化，进而通过在不同底物浓度凝胶中蛋白质相对迁移率变化程度的定量回归分析，发现由氨基酸单点突变导致蛋白质迁移率的相对变化，可以定量表征酶分子突变前后结合底物能力的变化．亲和电泳测定的有效阻滞常数K_b值与等温滴定量热法和荧光光谱法测定的相关参数比较具有明显相关性．由于亲和电泳技术在测定酶分子与底物的结合能力时具有简便、快速、灵敏的特点，因而可作为常规生化实验室常规普筛技术来检测突变文库中系列突变体导致结合力的变化．]]> 2018/5/18 0:00:00 95true 2018/4/19 0:00:00 94true 2018/10/8 0:00:00 93true 2018/8/27 0:00:00 92true 2018/7/18 0:00:00 91true 2018/10/22 0:00:00 90true 目的 利用透明质酸建立小鼠胎肝细胞3D培养体系。 方法 分离获得胚胎12-14天胎肝细胞，利用KM培养基进行初步2D肝干/祖细胞的筛选培养，并利用透明质酸及KM培养基配制水凝胶建立3D细胞培养体系。 结果 胎肝细胞在2D体系中呈现克隆状生长。分离培养获得的肝干/祖细胞克隆在透明质酸建立的3D培养体系保持增殖活性，并进一步获得肝细胞功能特性，表现为3D培养上清中白蛋白合成和尿素水平显著增加。Q-PCR结果显示随着3D培养时间的延长，其肝细胞干性标志如AFP、CK19、EpCAM、Prox1等表达水平都大幅度降低且接近成年小鼠肝脏表达水平。 结论 本研究成功建立基于透明质酸的小鼠胎肝细胞的3D无血清培养体系，并可促进小鼠胎肝细胞肝细胞功能进一步成熟。]]> 2018/5/18 10:13:37 89true 2019/9/25 0:00:00 88true 2019/7/1 11:17:51 87true 2019/7/1 11:34:40 86true 2019/5/22 0:00:00 85true ptsG mRNA翻译起始，参与细菌磷酸葡萄糖代谢的应激过程. 本研究应用单分子荧光原位杂交（smFISH）方法和超分辨显微技术可视化定位大肠杆菌细胞内小RNA SgrS，并初步验证伴侣分子Hfq蛋白和RNase E降解酶对小RNA SgrS定位的影响. 选取大肠杆菌模式菌MG1655（野生株）、sgrS敲除株（△sgrS）和过表达株（△sgrS-pBAD-SgrS），使用RNA印迹和smFISH方法验证SgrS的过表达. 应用smFISH方法分别在野生菌株、hfq敲除株（△hfq）和rne敲除株（△rne-710）中定位小RNA SgrS和ptsG mRNA，超分辨成像观察. 与野生株相比，△hfq和△rne-710中SgrS主要定位于近膜区域，ptsG mRNA定位于细菌胞浆中，并且这两种RNA拷贝数均极显著增加. 以上结果表明，分别敲除大肠杆菌hfq和rne-710基因导致SgrS和ptsG mRNA的表达量增加. smFISH方法和超分辨技术的结合应用为细菌RNA的直观定量和定位提供了高敏感性的检测方法，可用于基因调控的功能研究.]]> 2019/4/19 15:24:23 84true 2019/1/18 0:00:00 83true 2020/3/4 11:06:54 82true 2020/6/21 0:00:00 81true 2020/9/18 0:00:00 80true 2020/6/10 0:00:00 79true 2020/5/13 0:00:00 78true Brevundimonas）的新菌株，该菌株与Brevundimonas diminuta的相似性为97.8%，与Brevundimonas faecalis的相似性为98.1%. 抗生素敏感试验结果显示：“黑胶虫”对氯霉素（25 mg/L）、红霉素（200 mg/L）和四环素（2.5 mg/L）敏感，对氨苄青霉素（50 mg/L）、嘌呤霉素（2 mg/L）、青霉素-链霉素双抗（100×）和庆大霉素-两性霉素B双抗（100×）均不敏感. 细胞结晶紫染色结果显示：细胞培养基中添加一定浓度的氯霉素（25 mg/L）、红霉素（200 mg/L）或四环素（2.5 mg/L）均可抑制细胞培养中“黑胶虫”的增殖，降低其对细胞增殖的抑制作用. 综上所述，本研究分离鉴定的“黑胶虫”为一种短波单胞菌，低浓度的氯霉素、红霉素或四环素均可降低该菌对细胞增殖的抑制作用. 鉴于研究的局限性，我们不排除“黑胶虫”是其他物种的可能性，但是本研究为“黑胶虫”的种属鉴定及细胞无菌化培养提供了新的研究思路及方法，并有望帮助一些实验室解决“黑胶虫”污染的困扰.]]> 2020/5/12 0:00:00 77true 2021/3/18 0:00:00 76true 2021/1/19 0:00:00 75true 2021/1/19 0:00:00 74true 2021/8/24 0:00:00 73true 2021/8/24 0:00:00 72true 2021/7/28 0:00:00 71true 2021/6/24 0:00:00 70true 2021/6/24 0:00:00 69true 2021/4/26 0:00:00 68true CV-45V的补偿电压，120 min或150 min梯度时选择CV-45V-65V补偿电压组合，可以获得最佳的蛋白质鉴定结果. 从293T蛋白质组中分别在60、120和150 min中鉴定6 300、6 994和7 500个蛋白质. 在FAIMS DIA实验中，使用CV-45V-65V双补偿电压切换，60个隔离窗口来获得最佳的蛋白质鉴定数目和定量重现性. 在60 min内分别在293T细胞和去除高峰度的血浆中定量到7 019个细胞蛋白和1 077个血浆蛋白. 在TMT定量实验中设置APD开启、“Precursor Fit”阈值70和Turbo TMT功能的组合同时增加了TMT定量蛋白质的数量和TMT定量的准确性. 在TMT11-plex标记的酵母蛋白质组中60 min即可定量10 989个多肽和2 162个蛋白质. 综上所述，本研究中优化的多种非标记定量和TMT定量方法为Orbitrap Exploris 480在蛋白质组学更广泛的应用提供了参考.]]> 2021/4/8 0:00:00 67true 2021/4/2 0:00:00 66true 2021/12/23 13:41:03 65true 2021/11/23 0:00:00 64true 目的 血清抗磷脂酶A2受体抗体IgG（PLA2R-IgG）水平是诊断和治疗特发性膜性肾病（IMN）的重要依据，而目前国内外常规检测手段主要是酶免法。为提升检测的便捷性，同时满足灵敏、宽量程分析需求，本研究构建了一种新的PLA2R-IgG检测技术。方法 采用包裹铕元素的微球示踪，对反应步骤进行选择，对微球制备液的pH、微球-抗体反应比例和反应时间优化，本文基于间接法构建了PLA2R-IgG的荧光定量免疫层析检测方法，并进行了初步临床评价。结果 本方法的灵敏度达0.7 RU/ml，标准曲线方程为y=0.771x-1.437，相关系数0.995，线性测量范围为0.7~1 500 RU/ml，回收率为86.27%~98.98%，平均批内变异系数为8.13%，交叉反应率均小于0.1%，试剂37℃储存10 d稳定。本方法与市售酶免试剂盒相关性为0.953，阴阳性判断一致，对IMN的检出率为76.9%。结论 采用两步法反应的PLA2R-IgG间接荧光定量免疫层析分析，快速、灵敏、准确，具有临床实用性。]]> 2022/9/21 0:00:00 63true 目的 眼睛的光学生物参数中的眼轴长度（AL）和角膜曲率半径（CR）可以作为预防和监测眼球近视的两个重要参数。为了提高测量眼轴长度的速度与精度和同步实现角膜曲率高精度动态测量，本文提出一种基于低相干光干涉技术眼睛光学生物参数测量的系统。方法 该系统使用旋转光学延迟线快速改变参考光的光程，利用曲率半径为8 mm的标准件标定人眼角膜顶点到靶环之间的距离，利用角膜的干涉信号对相机和数据采集卡进行触发实现同步采集，从而实现眼轴长度的快速测量和精准定位靶环到角膜顶点之间的距离，同时保证成像系统的放大倍率恒定和数据的实时采集。结果 实验结果表明，这种低相干光干涉测量系统，可以实时测量眼轴长度和角膜曲率半径，眼轴长度误差低于40 μm，人眼角膜曲率半径方差为2.082 36×10^-2 μm。结论 该系统能够快速、精准地测量AL和CR，可在近视的预防和监测中发挥重要作用。]]> 2022/9/21 0:00:00 62true 目的 为了制备不同链种类、不同链长及磷酸化修饰的泛素样品。方法 本文主要以生物酶法为手段对以上样品的制备路线进行阐述。制备的主要方法分为两种，一是采用逐次添加的方式达到泛素链延长的目的，二是通过一次酶反应制备混合的多聚泛素链，然后对不同链长的泛素链进行纯化分离。结果 以上两种策略都能达到制备多聚泛素链的目的。进一步，通过对泛素进行磷酸化修饰，制备了磷酸化的泛素样品。通过K11和K48的泛素酶制备了K11/K48分支链泛素。结论 基于以上泛素链的制备路线，可以进一步对不同链接形式的不同亚基进行磷酸化修饰等翻译后修饰，也可以通过在特定亚基进行同位素标记及在特定位点引入小分子探针，进而进行NMR和FRET的测定。综上所述，本方法将为从事泛素信号通路和泛素生化研究的科学家提供借鉴和帮助。]]> 2022/8/19 11:34:39 61true 目的 白扁豆总皂苷是中药白扁豆经过提取分离纯化步骤制备得到，关于白扁豆的总皂苷成分如何影响前列腺癌细胞系PC-3细胞的生长情况缺少研究。因此，有必要探讨白扁豆总皂苷对前列腺癌细胞系PC-3细胞生长的机制研究。方法 本研究采用CCK8方法检测不同浓度的白扁豆总皂苷对前列腺癌细胞系PC-3细胞生长的影响。利用转录组学分析白扁豆总皂苷抑制前列腺癌细胞系PC-3细胞生长的分子机制，并且进一步通过实时定量PCR（qRT-PCR）和蛋白质免疫印迹（Western blot）实验对相关差异基因的表达进行验证。利用Western blot和CCK8检测白扁豆总皂苷处理过表达醛脱氢酶7家族成员A1（ALDH7A1）的PC-3细胞存活率。结果 随着白扁豆总皂苷浓度升高，前列腺癌细胞PC-3的存活率显著下降，白扁豆总皂苷的IC₅₀值为1 086 mg/L。转录组学测序结果显示，与对照组相比，白扁豆总皂苷处理的细胞中有2 360个差异表达基因，其中1 982个基因上调，378个基因下调。基因功能注释（GO）结果显示，差异表达基因显著富集到与有丝分裂纺锤体检查点（mitotic spindle checkpoint）、纺锤体组装检查点（spindle assembly checkpoint）等一系列跟癌症的发生发展密切相关的生物学过程。此外，基因组京都百科全书（KEGG）分析结果也显示，差异表达基因富集在肿瘤代谢等信号通路。进一步对其中的差异基因进行验证，结果显示，与对照组相比，白扁豆总皂苷处理的前列腺癌细胞中ALDH7A1、甘氨酸C-乙酰转移酶（GCAT）和磷酸甘油酸变位酶家族成员4（PGAM4）的蛋白质表达水平明显降低（P<0.05），而二甲基甘氨酸脱氢酶（DMGDH）和胱硫醚β合成酶样（CBSL）的蛋白质表达水平显著升高（P<0.001）。体外细胞实验结果表明，白扁豆总皂苷通过下调前列腺癌细胞中ALDH7A1的表达抑制PC-3细胞生长。结论 白扁豆总皂苷可能通过下调ALDH7A1表达从而在体外抑制前列腺癌细胞的生长。]]> 2022/8/19 0:00:00 60true 目的 长非编码RNA（lncRNAs）参与多种重要的生物学过程并与各种人类疾病密切相关，因此，lncRNA-疾病关联预测研究有助于疾病的诊断、治疗和在分子水平理解人类疾病的发生发展机制。目前，大多数lncRNA-疾病关联预测方法倾向于浅层整合lncRNA和疾病的相关信息，忽略网络拓扑结构中的深层嵌入特征；另外通过随机选取lncRNA-疾病非关联对构建负样本训练集合，影响预测方法的鲁棒性。方法 本文提出一种基于网络嵌入的NELDA方法，预测潜在的lncRNA-疾病关联关系。NELDA首先利用lncRNA 表达谱、疾病本体论和已知的lncRNA-疾病关联关系，构建lncRNA相似性网络、疾病相似性网络和lncRNA-疾病关联网络。然后，通过设计4个深度自编码器分别从lncRNA/疾病的相似性网络、lncRNA-疾病关联网络学习lncRNA和疾病的低维网络嵌入特征。串联lncRNA和疾病的相似性网络嵌入特征及lncRNA和疾病的关联网络嵌入特征，分别输入两个支持向量机分类器预测lncRNA-疾病关联。最后，采用加权融合策略融合两个支持向量机分类器的预测结果，给出lncRNA-疾病关联关系的最终预测结果。另外，根据已知的lncRNA-疾病关联对和疾病语义相似性，设计一种负样本选取策略构建可信度相对较高的lncRNA-疾病非关联对样本集，用以改善分类器的鲁棒性，该策略通过设计一种打分函数为每对lncRNA-疾病进行打分，选取得分较低的lncRNA-疾病对作为lncRNA-疾病非关联对样本（即负样本）。结果 十折交叉验证实验结果表明：NELDA能够有效预测lncRNA-疾病关联关系，其AUC达到0.982 7，比现有LDASR和 LDNFSGB方法分别提高了0.062 7和0.020 7。另外，负样本选取策略与决策级加权融合策略能够有效改善NELDA预测性能。胃癌和乳腺癌案例研究中，29/40（72.5%）预测的与胃癌和乳腺癌关联lncRNAs，在近期文献和公共数据库中能够发现相关的支撑证据。结论 这些实验结果表明，NELDA是一种有效的lncRNA-疾病关联关系预测方法，具有挖掘潜在lncRNA-疾病关联关系的能力。]]> 2022/7/20 0:00:00 59true 目的 构建在整个寄主植物中能同时表达两个非融合蛋白的病毒载体。方法 以烟草脆裂病毒（tobacco rattle virus，TRV）基因组RNA2的农杆菌侵染性克隆pYL156为材料，缺失TRV RNA2的2b基因5"端279 bp并将其起始密码子ATG改变为AGG、同时引入豌豆早枯病毒（pea early-browning virus，PEBV）外壳蛋白（coat protein，cp）基因启动子，获得pTRV2e²载体；在pTRV2e²载体的2b和PEBV的cp启动子下游插入不同的外源基因，测定病毒TRVe²表达外源蛋白的能力、携带外源基因后重组病毒的稳定性以及分析蛋白质的生物学功能。结果 病毒TRVe²能快速同时表达2个非融合的外源蛋白，且至少能表达70 ku外源蛋白，且该病毒携带~2.0 kb外源基因能稳定存活于寄主植物中；病毒TRVe²可用于分析蛋白质的生物学功能以及2个蛋白质间的相互作用。结论 本文构建的重组病毒TRVe²为快速有效地表达2个外源蛋白以及分析2个蛋白质间的相互作用提供技术工具。]]> 2022/7/20 0:00:00 58true 目的 目前，如何从核磁共振（nuclear magnetic resonance，NMR）光谱实验中准确地确定蛋白质的三维结构是生物物理学中的一个热门课题，因为蛋白质是生物体的重要组成成分，了解蛋白质的空间结构对研究其功能至关重要，然而由于实验数据的严重缺乏使其成为一个很大的挑战。方法 在本文中，通过恢复距离矩阵的矩阵填充（matrix completion，MC）算法来解决蛋白质结构确定问题。首先，初始距离矩阵模型被建立，由于实验数据的缺乏，此时的初始距离矩阵为不完整矩阵，随后通过MC算法恢复初始距离矩阵的缺失数据，从而获得整个蛋白质三维结构。为了进一步测试算法的性能，本文选取了4种不同拓扑结构的蛋白质和6种现有的MC算法进行了测试，探究了算法在不同的采样率以及不同程度噪声的情况下算法的恢复效果。结果 通过分析均方根偏差（root-mean-square deviation，RMSD）和计算时间这两个重要指标的平均值及标准差评估了算法的性能，结果显示当采样率和噪声因子控制在一定范围内时，RMSD值和标准差都能达到很小的值。另外本文更加具体地比较了不同算法的特点和优势，在精确采样情况下，ScGrassMC算法计算的精度较高，LMaFit和ScaledASD算法则在计算时间上更具优势。在抗噪性方面，ASD和ScaledASD算法表现更为突出。结论 本文可以得出，MC算法应用在蛋白质结构确定领域具有很好的效果，而且不同的算法在计算中具有不同的特点和优势。这些结论为新的MC算法的开发提供了参考。本文的研究结果对基于MC算法的蛋白质结构确定领域具有潜在的推动作用。]]> 2022/6/21 0:00:00 57true 目的 不同患者对同一抗癌药物的反应可能不同，了解患者之间对抗癌药物的反应差异对癌症精准医疗具有重大参考价值。方法 高通量测序数据为构建抗癌药物反应分类预测模型提供了强大的数据支撑。针对两大经典数据集癌症细胞百科全书（CCLE）和癌症药物敏感性基因组学数据集（GDSC），本文提出了基于最大相关最小冗余（mRMR）算法和支持向量机 （SVM）的计算模型mRMR-SVM。利用基因表达数据，通过方差排序和mRMR算法提取特征基因，借助SVM实现抗癌药物对细胞系的“敏感-抑制”二分类预测。结果 对于CCLE中的22种药物，mRMR-SVM的平均准确率为0.904；对于GDSC中的11种药物，平均准确率为0.851。结论 mRMR-SVM不仅在预测性能方面优于传统的支持向量机、随机森林、深度反应森林、深度神经网络和细胞系-药物复杂网络模型，而且具有良好的泛化能力，对于三类特定组织的抗癌药物反应分类预测也取得了令人满意的结果。此外，mRMR-SVM可以识别与癌症发生发展密切相关的生物标志物。]]> 2022/6/21 0:00:00 56true 目的 本文提出了一种基于主成分分析（PCA）的双对比光学投影断层成像（DC-OPT）方法，以获得活体中血流网络和骨骼的三维可视化。方法 使用主成分分析方法来提取吸收图像和血流图像，原始图像序列的第一主成分用于获取吸收图像；通过计算每个像素的调制深度来获得流动图像。不同投影位置的流动和吸收对比图像被用于三维血流网络和骨骼的同步重建。结果 采用PCA和OPT相结合的方法，通过将动态血流信号和静态背景信号分离，实现了对微生物样本的血流网络和骨骼的三维成像。结论 本文研究的新颖之处在于通过同一光学系统获得了快速、同步、双对比的血流网络和骨骼三维图像。实验结果可用于活体生物的生理发育研究。]]> 2022/4/22 0:00:00 55true 目的 蛋白质的柔性运动对生物体各种反应有着重要意义，基于蛋白质的空间结构预测其柔性运动是蛋白质结构-功能关系领域的重要问题。卷积神经网络（convolutional neural network，CNN）在蛋白质结构-功能关系研究中已有成功应用。方法 本研究借鉴计算机视觉研究中PointNet方法的思想，提出了一种蛋白质柔性预测的CNN模型。在该模型中，分别使用池化操作和空间变换网络来处理蛋白质原子三维点云的排列不变性和整体旋转不变性，针对蛋白质分子大小不一的特点，将大小不等的蛋白质小批量输入网络进行训练，并使用Pearson相关系数作为评价指标。此外为提升模型性能，在CNN模型的基础上，通过最大池化和平均池化串联的方法提取体系的全局特征，增强蛋白质全局信息的提取能力。利用243个非冗余蛋白质的B因子对所提出的模型进行训练和测试。结果 基于PointNet的CNN模型和改进模型对蛋白质B因子的预测值与实验值的平均Pearson相关系数分别为0.64、0.65，优于广泛应用的高斯网络模型（Gaussian network model，GNM）。尤其，对于天然无序蛋白质柔性的预测，本方法明显优于GNM。结论 本研究为蛋白质的柔性预测提供了有效的模型。]]> 2022/3/21 0:00:00 54true 目的 细胞力学特性与细胞生理病理变化过程及机体健康状态密切相关，研究细胞力学特性对于揭示生命活动内在机制具有重要科学意义。原子力显微镜（AFM）的出现为单细胞研究提供了新的技术手段，它不仅可以在溶液环境下对单个活细胞的形貌结构进行高分辨率成像，还能够对细胞力学特性进行定量测量。基于AFM的单细胞力学特性研究在过去数十年中取得了巨大的成功，为细胞生理病理行为带来了大量新的认识，已成为生命科学领域的重要研究方法。然而，由于AFM探针自身难以进行药物递送，目前在超微量药物刺激下的AFM细胞力学特性实时探测方面仍然面临巨大挑战。本文通过将微针与AFM结合，发展了可对单细胞进行精准药物激励及力学特性同步测量的方法。方法 基于三维操纵仪、微量注射泵、医用注射器、聚四氟管和玻璃微针在荧光倒置显微镜上搭建了基于微针的单细胞显微注射系统，并利用拉针仪对毛细玻璃管拉制得到玻璃微针。选取NIH 3T3（小鼠胚胎成纤维细胞）、HEK 293（人胚胎肾细胞）和MCF-7（人乳腺癌细胞）3种细胞进行实验。在光学显微镜导引下利用微针将染色剂/药物分子注射到单个细胞，随后控制AFM探针移动到被注射的细胞表面获取力曲线。利用Hertz-Sneddon模型对力曲线进行分析得到细胞杨氏模量。结果 首先分析了微针针尖孔径尺寸对细胞注射的影响，针尖尺寸较大（针尖外径大于1 μm）时容易对细胞造成明显机械损伤。随后在光学显微镜导引下利用微针将蓝色墨水/PI染液注射到单个细胞并对目标细胞进行连续光学成像，结果显示墨水/PI染液被成功注射至目标细胞。最后将微针和AFM结合对超微量化疗药物（阿糖胞苷）刺激下单个细胞杨氏模量变化进行了测量， 结果显示化疗药物刺激后会导致细胞力学特性改变。结论 结合微针和AFM可对单个细胞施加精准化学刺激并对化学刺激后的细胞力学特性进行同步测量，为超微量药物作用下的单细胞力学特性分析提供了新的思路。]]> 2022/2/21 0:00:00 53true 目的 扩散光学层析成像（diffuse optical tomography，DOT）在女性大尺寸乳腺检测时因信噪比低，导致其成像分辨率较低。本文基于计算机断层扫描激光乳腺成像系统（computed tomography laser mammography，CTLM），提出一种提高乳腺扩散光学层析成像分辨率的方式。方法 本文首先通过仿体实验探讨仿体直径和目标深度对扩散光学层析成像分辨率的影响；其次，本文使用高透性的光敏树脂通过3D打印制作外壳定位件，在验证其对扩散光学层析成像分辨率无显著影响后，利用外壳定位件对被测物进行约束压缩，以减小被测物直径来提高信噪比，优化扩散光学层析成像分辨率。结果 本文通过仿体实验验证了仿体直径的增加和目标深度的变化均会在一定程度上影响成像分辨率，随着仿体直径的增加，其感兴趣区（region of interests，ROIs）宽轴和长轴半高宽基本属于上升趋势；随着目标深度的增加，也会对ROIs宽轴和长轴半高宽产生影响。同时发现仿体直径对ROIs长轴半高宽有显著影响，目标深度对ROIs宽轴半高宽有显著影响。另外通过仿体实验结果验证了外壳定位件对扩散光学层析成像分辨率无显著影响，利用外壳定位件约束压缩后ROIs长轴半高宽降幅明显，降幅达到30%以上，远大于宽轴半高宽的降幅，达到了提高成像分辨率的作用。结论 本文所提出的方式能够达到提高乳腺扩散光学层析成像分辨率的作用，且所使用的材料和方法简单，具有较强的可实施性，为提高乳腺扩散光层析成像分辨率提供了新思路。]]> 2022/12/20 0:00:00 52true 目的 糖尿病视网膜病变（DR）是糖尿病的严重并发症，可导致患者视力下降甚至失明。脉络膜的早期检查在DR诊断中起着至关重要的作用。然而，由于DR患者的光学相干层析成像（OCT）中存在脉络膜和巩膜边界模糊、视网膜病变阴影等问题，导致大多数现有算法无法精准分割脉络膜层。本文目的在于提高DR患者OCT图像中脉络膜层分割的精准度。方法 本文提出了一种结合挤压激励连接（SEC）模块和UNet的网络，简称SEC-UNet，不仅增强Unet的局部细节目标关注能力，且能跳出局部最优来增强整体表达能力。结果 SEC-UNet模型的ROC曲线下面积（AUC）达到0.993 0，优于传统UNet模型和SE-UNet模型。这表明SEC-UNet能够获得准确、完整的脉络膜层分割结果。统计分析脉络膜参数变化发现，与正常眼相比，87.1%的DR患者脉络膜中央凹1 mm内体积增加，这证明了DR很可能导致脉络膜增厚。结论 该技术有望成为一种新的辅助诊断工具，帮助医生研究脉络膜在糖尿病眼病的预防、发病机制和预后中的作用。]]> 2022/12/20 0:00:00 51true 目的 细胞力学特性在细胞生理病理活动过程中起着重要的调控作用，开展细胞力学特性研究对于揭示生命活动内在规律具有重要意义。原子力显微镜（AFM）的发明为单细胞力学特性表征提供了新的强大工具，基于AFM压痕分析的细胞力学特性探测已成为生命科学领域的重要研究方法，为单细胞行为研究带来了大量新认识。然而，现有基于AFM的细胞力学特性研究主要集中在静态溶液环境，而癌细胞在体内转移过程中处于脉管系统的动态液流环境下，因此现有的测量结果无法完全反映溶液流动环境下的癌细胞真实生理行为，特别是目前对于肿瘤转移过程中液流环境与癌细胞之间相互作用的力学机制的认知还十分有限。本文通过将AFM与液流控制技术结合建立了溶液流动环境下的细胞力学特性测量方法。方法 基于两侧开口培养皿并结合注射泵/抽取泵液流控制搭建细胞培养基动态液流系统，并将其分别与AFM及光学倒置显微镜进行集成。选取MCF-7（人乳腺癌细胞）和HGC-27（人未分化胃癌细胞）两种癌细胞进行实验。利用细胞培养基动态液流系统培养细胞并分析溶液流速以及流动时间对细胞生长及力学特性的影响。在光学显微镜导引下控制AFM对培养基静态/流动环境下生长的细胞进行压痕实验以获取力曲线，并利用Hertz-Sneddon模型对力曲线进行分析得到细胞杨氏模量。利用荧光染色试剂分析溶液流动环境对细胞活性及细胞骨架蛋白的影响。结果 首先分析了溶液流动环境对细胞生长的影响，实验结果表明，与静态培养环境相比，培养基动态液流环境可更好地促进细胞生长。随后分别对静态和流动环境下生长的癌细胞力学特性进行了测量，结果表明当癌细胞生长环境由静态变为动态后细胞的杨氏模量显著减小，且溶液流动环境会导致细胞骨架结构的变化，显示了溶液流动环境对癌细胞力学特性的显著影响。结论 将AFM与液流控制技术结合可对溶液流动环境下的单细胞力学特性进行探测，为研究溶液流动环境与癌细胞之间的相互作用提供了新的方法和思路。]]> 2022/10/21 0:00:00 50true 目的 冷冻保存睾丸组织用于后期移植，是除精子冻存以外保持男性生育力的另一有效途径。本文对块状睾丸组织常用的慢速冷冻降温程序进行了改进。方法 通过缩短保护剂加载时间、提高第一阶段的冷却速率、第二阶段直接投入液氮等方法对小鼠睾丸组织进行冷冻保存。在不同温度对小鼠睾丸组织冻存体系进行诱导冰晶成核并冻存，降低睾丸组织慢速冷冻保存所需保护剂浓度。结果 改进的两步法冻后组织内生殖细胞的凋亡阴性率均较高，其中精原细胞98.4%、精母细胞99.2%、精子细胞88.4%、支持细胞98.1%，显著高于常用慢速冷冻组，与对照组均无显著性差异。相比于未置核组， -10℃置核可显著提高5% DMSO保护剂慢速冷冻保存的冻后效果，生殖细胞的凋亡阴性率为精原细胞82.9%、精子细胞92.1%、精母细胞93.2%及支持细胞88.9%，与较高浓度保护剂10% DMSO组冻存结果无显著性差异，说明置核能够降低所需保护剂的浓度，降低毒性损伤。结论 本研究通过改进两步法和置核提高了小鼠睾丸组织冻后的质量，为临床上人睾丸组织的冻存提供参考。]]> 2022/10/21 0:00:00 49true 目的 阴极荧光（CL）成像是一种以电子束为激发源的高分辨荧光成像技术，但生物材料对电子束的敏感性限制了CL技术在生命科学中的广泛应用。为了研究和发展CL技术在生物样品中的应用，本文旨在通过探究电子辐照引起碳基材料的结构损伤、有机基团的降解及荧光猝灭等问题，深入理解电子源对有机荧光团的激发特性。方法 本研究应用扫描电镜（SEM）和阴极荧光谱仪系统（SEM-CL），研究电子源对有机荧光团及荧光探针标记细胞的激发特性，观测了有机物的CL信号的发射特性、强度衰减、成像方式及特点。结果 实验结果显示，在低能量（2.5~5 keV）和低束流（~10 pA）电子辐照下，有机荧光微珠发射出较强的荧光，CL像分辨率达到~30 nm。荧光微珠经过12 min辐照，信号强度衰减了25%，CL像仍保持了可接受的发光强度和足够的信噪比。此外，还获得了从细胞表面到内部一定深度内，荧光标记的亚细胞结构信息。结论 在SEM-CL系统中，可以同时获得由电子束激发产生的电子像和CL像，实现阴极荧光与电子显微镜关联（CCLEM）成像。本实验的研究结果为CCLEM技术应用于生物结构研究提供了数据及技术支持。]]> 2023/8/14 11:16:01 48true 目的 细胞力学特性在生理病理变化过程中起着关键调控作用，开展细胞力学特性研究为揭示生命活动奥秘及疾病发生发展演变规律提供了新的视角。原子力显微镜（AFM）的出现为单细胞力学特性研究提供了强大的技术手段。AFM的独特优势是不需要对活细胞进行任何预处理即可在溶液环境下对天然状态的活细胞力学特性进行高精度（纳米级空间分辨率，皮牛级力感知灵敏度）探测。基于AFM压痕实验的细胞力学特性探测已成为生命科学领域的重要研究方法。然而，现有基于AFM的单细胞力学特性测量主要依赖于人工操作，特别是在测量过程中需要人工控制AFM探针移动到细胞表面特定位置进行压痕实验，导致实验过程耗时费力且效率低下。本文通过将AFM与光学图像自动识别相结合建立了单细胞力学特性快速测量方法。方法 分别利用UNet++深度学习网络模型和模板匹配算法识别出光学图像中的细胞及AFM探针，在此基础上自动确定细胞和AFM探针之间的空间位置关系，并控制AFM探针准确移动至目标细胞表面进行压痕实验。在光学显微镜视觉导引下利用AFM微操作将单个微球黏附至AFM探针悬臂梁制作得到球形针尖探针。选取HEK 293（人胚胎肾细胞）和MCF-7（人乳腺癌细胞）两种细胞进行实验。利用Hertz-Sneddon模型对在细胞表面获取的力曲线进行分析得到细胞杨氏模量。结果 基于光学图像识别结果可将AFM探针针尖准确移动至目标细胞（HEK 293或MCF-7）并对细胞力学特性进行测量，同时实验结果表明本文所提出的方法不仅适用于常规AFM锥形针尖探针，也适用于AFM球形针尖探针。结论 将AFM与光学图像识别结合显著提升了AFM细胞力学特性测量效率，为高通量自动化AFM单细胞力学特性探测提供了新的方法和思路，对于细胞力学特性研究具有广泛的积极意义。]]> 2023/8/14 11:16:21 47true 目的 研究单个病毒颗粒的行为特性对于揭示调控病毒生命周期的内在机制、发展新型抗病毒治疗方法具有重要基础意义。原子力显微镜（AFM）的出现为高分辨率探测单个病毒颗粒的结构和力学特性提供了新的强大工具，极大地促进了物理病毒学的发展。然而，目前人们对于力学特性在病毒生命活动过程中调控作用的认知仍然很不足，特别是利用多参数AFM成像技术对病毒颗粒开展的研究还不多见。本文结合AFM多参数成像技术和压痕实验技术研究了溶液环境下化学刺激诱导的单个天然状态病毒颗粒结构及力学特性动态变化。方法 通过在盖玻片基底表面覆盖一层多聚赖氨酸以将慢病毒颗粒吸附到基底，随后利用AFM直接在溶液环境下对天然状态的单个病毒颗粒进行探测。基于AFM峰值力轻敲（PFT）多参数成像模式，同时获取单个病毒颗粒的形貌结构及力学特性图。在AFM形貌图导引下控制AFM探针移动至单个病毒颗粒中央部位进行压痕实验以测量病毒力学特性。利用75%酒精溶液对病毒颗粒进行处理后，对病毒颗粒的形貌结构及力学特性变化情况进行观测。结果 利用AFM在溶液环境下可对单个病毒颗粒的形貌及力学特性进行高质量成像表征，实验结果显示病毒颗粒在空气中和溶液中分别呈现不同的黏附特性和弹性特性。经过酒精处理后，病毒颗粒形状变得不规则，且病毒颗粒的杨氏模量显著增加，形变能力显著减弱。结论 本文结果为研究溶液环境下单个天然状态病毒颗粒的结构和纳米力学特性提供了新的方法，对于病毒学研究具有广泛的基础意义。]]> 2023/7/19 12:03:54 46true 目的 隧道纳米管（tunneling nanotubes，TNTs）是存在于细胞间的膜管样结构，具有直接且远距离的生物信息交换功能。TNTs因结构易破坏、存在时间短以及形成后不稳定，故观察其动态形成与功能存在一定难度。而本研究采用高内涵分析系统（HCA）联合激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）尝试观察TNTs形成的动态过程及其对囊泡物质的转运功能。方法 荧光探针标记人肺腺癌A549及顺铂耐药A549/DDP细胞，分别利用HCA观察TNTs形成过程、LSCM观察TNTs三维结构、HCA联合LSCM分析TNTs囊泡物质转运功能。结果 同种肿瘤细胞（A549或A549/DDP）间、不同亚型肿瘤细胞（A549与A549/DDP）间均可形成TNTs结构；与A549细胞相比，A549/DDP细胞间TNTs结构长且粗、形成指数高（A549和A549/DDP细胞TNTs长度、直径和形成指数分别为14.71 μm、2.27 μm、4和25.44 μm、2.59 μm、11）；肿瘤细胞间通过细胞接触-膜融合-细胞反向易位-胞膜融合区拉长变细，以及细胞膜凸起-膜凸起丝状伪足样拉长-膜凸起与其他细胞膜/膜凸起融合两种方式形成TNTs；TNTs囊泡转运功能具有双向性，囊泡转运速率及数量因转运阶段和供体细胞不同而存在差异，A549/DDP细胞向A549细胞进行囊泡转运过程中表现为囊泡转运速率初始快、末期慢，A549作为供体细胞向受体A549/DDP细胞转运的囊泡数量和比例高于A549/DDP作为供体细胞的反向转运。结论 HCA联合LSCM可有效观察、分析TNTs动态形成过程及囊泡物质转运功能。]]> 2023/7/19 12:03:58 45true 目的 对肺通气过程进行床旁实时连续图像监控，是机械通气患者和临床医生的迫切需求。肺部电阻抗成像（EIT）可反映呼吸引起的胸腔电特性变化分布，在肺通气监测方面具有天然的优势。本文目的在于建立基于径向基函数神经网络（RBFNN）的肺部加权频差电阻抗成像（wfd-EIT）方法，实现对肺通气的高空间分辨率成像。方法 利用肺部wfd-EIT成像方法实时描绘胸腔电导率分布状况，再通过RBFNN将目标区域可视化并精准识别其边界信息。首先通过数值分析模拟，在各个激励频率利用COMSOL与MATLAB软件建立2 028个仿真样本，分为训练样本集和测试样本集，验证所提出成像方法的可行性和有效性。其次，为了验证仿真结果，建立肺部物理模型，选用具有低电导特性的生物组织模拟肺部通气区域，对其进行成像实验，并采用图像相关系数（ICC）和肺区域比（LRR）定量数据衡量成像方法的准确性。结果 wfd-EIT方法可以在任意时刻进行图像重建，并能够准确反映出目标区域的电特性分布；利用基于RBFNN的算法能够增强目标区域的成像精度，ICC可达0.94以上，更好地凸显其边界轮廓信息。结论 通过wfd-EIT成像方法，利用多频阻抗谱同步测量实现目标区域的快速可视化，并结合RBFNN网络逼近任意非线性函数的优点，实现对目标区域电特性变化的精准识别，为下一步进行临床肺通气的EIT图像监测奠定了理论和技术基础。]]> 2023/7/19 12:04:26 44true 目的 结合组织学染色技术和组织透明化策略研究耳部皮肤中神经纤维和血管的空间对应关系。方法 将耳廓前面和后面的皮肤从其中间软骨仔细剥离，然后直接分别用蛋白基因产物9.5（PGP 9.5）和鬼笔环肽对耳部皮肤的神经纤维和血管进行免疫荧光染色并进行组织透明化处理。随后，以全包埋方式将耳皮肤组织裱贴在载玻片上用于荧光显微镜和共聚焦显微镜观察。结果 本研究显示PGP 9.5阳性神经纤维伴随鬼笔环肽标记的血管一道从耳廓的基部走行到其外围区域形成耳廓的神经血管网。在传统的免疫荧光染色技术基础上，后续的组织透明化技术可以更好地展示耳部皮肤中神经纤维和血管的形态学细节。结论 从方法学的角度来看，组织透明化技术增进了耳部皮肤中免疫荧光标记的可视性，它可能成为有效的技术手段用于解析正常和病理状态下耳部神经血管网的空间结构。]]> 2023/6/20 16:51:44 43true 目的 在体外循环系统中，血栓的在线检测和可视化具有重要意义。本文提出了基于电阻抗成像（EIT）的体外循环血栓非侵入在线检测方法。方法 首先通过联合仿真研究了传感器尺寸对成像效果的影响。其次，根据仿真结果设计了直径为20 mm的16铜质电极EIT传感器，搭建了循环流动实验平台，并设计了静态和循环流动实验。使用尺寸为3~6 mm的猪血块代替血栓，将血块置于新鲜猪血样本中，采用Tikhonov正则化算法进行成像。将3 mm和5 mm的血块分别置于循环系统中，重建血块在传感器截面的大小和位置图像，并与高速相机拍摄结果进行对比。结果 仿真结果显示当目标物与传感器面积比（AR）不小于0.01时，传感器直径为20 mm和30 mm对应的图像相关系数（IC）均大于0.06，成像效果较好。静态成像结果显示，相对尺寸覆盖率误差（RCR）小于等于0.1。循环流动实验显示，血块经过传感器时，检测到归一化后的相对电导率变化值分别为80和200，结果显示该方法能够检测到循环系统中的血块。结论 该方法具有实时性和非侵入的优点，有望应用于体外血栓的检测。]]> 2023/6/20 16:51:51 42true 目的 单细胞生长检测可以更加科学地揭示微生物代谢变化的规律，为后期微生物工程应用提供指导。针对微生物生长应用于食品安全期和最佳食用期的精准检测问题，本文提出一种基于拉曼技术的单细胞生长检测方法。方法 首先，通过同步培养实验采集了枯草芽孢杆菌两个批次共900个单细胞拉曼光谱（SCRS）数据，其中600个用于训练和测试，另一批次300个用于模型验证。其次，基于主成分分析的特征关系矩阵，提出CP-SP特征评估方法以筛选SCRS特征用于模型检测。再基于XGBoost构建检测模型，并应用网格搜索和交叉验证对检测模型进行调优。最后，应用混淆矩阵、ROC曲线评估模型对细胞滞后期、对数期和稳定期的检测准确率、敏感性和特异性。结果 选用CP-SP筛选的第一、第二和第四主成分较特征贡献率前3个主成分的分类性能提高了3.1%，调优后的细胞生长检测模型测试准确率为96.0%，验证准确率为92.3%。结论 基于拉曼技术的单细胞生长检测方法能准确识别单细胞生长状态且具有较高的泛化能力，可为食品安全和保鲜制定精准调控机制提供科学指导。]]> 2023/6/20 0:00:00 41true 目的 以细胞膜绿色荧光活性染料DiO (DiOC₁₈(3)) 标记腹腔巨噬细胞（peritoneal macrophage），探讨在巨噬细胞消失反应（macrophage disappearance reaction，MDR）中腹腔巨噬细胞的示踪研究。方法 DiO标记腹腔巨噬细胞，过继移植给C57BL/6小鼠；以脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导体内MDR。采用荧光显微镜和流式细胞术检测DiO标记的腹腔巨噬细胞数量及荧光强度；分离收集小鼠的各组织，进行冰冻切片，检测DiO标记的腹腔巨噬细胞分布情况。结果 荧光显微镜和流式细胞仪观察发现，腹腔注射LPS能显著降低腹腔中DiO标记的腹腔巨噬细胞数量及荧光强度。在MDR过程中消失的腹腔巨噬细胞，通过冰冻切片发现在肝脏、胸腺及脾脏中有分布。结论 DiO标记对腹腔巨噬细胞的存活无影响且能长效保持荧光，是一种安全、有效的示踪腹腔巨噬细胞分布的技术手段。]]> 2023/3/22 0:00:00 40true 目的 长链非编码RNA在遗传、代谢和基因表达调控等方面发挥着重要作用。然而，传统的实验方法解析RNA的三级结构耗时长、费用高且操作要求高。此外，通过计算方法来预测RNA的三级结构在近十年来无突破性进展。因此，需要提出新的预测算法来准确的预测RNA的三级结构。所以，本文发展可以用于提高RNA三级结构预测准确性的碱基关联图预测方法。方法 为了利用RNA理化特征信息，本文应用多层全卷积神经网络和循环神经网络的深度学习算法来预测RNA碱基间的接触概率，并通过注意力机制处理RNA序列中碱基间相互依赖的特征。结果 通过多层神经网络与注意力机制结合，本文方法能够有效得到RNA特征值中局部和全局的信息，提高了模型的鲁棒性和泛化能力。检验计算表明，所提出模型对序列长度L的4种标准（L/10、L/5、L/2、L）碱基关联图的预测准确率分别达到0.84、0.82、0.82和0.75。结论 基于注意力机制的深度学习预测算法能够提高RNA碱基关联图预测的准确率，从而帮助RNA三级结构的预测。]]> 2023/3/22 0:00:00 39true 目的 针对从原发性肝癌中检测肝细胞癌（HCC）的灵敏度不高和诊断结果高度依赖放射科医生的专业性和临床经验，本文利用深度卷积神经网络（CNN）的方法自动学习B超和超声造影（CEUS）图像中的特征信息，并实现对肝癌的分类。方法 建立并验证基于CNN的多个二维（2D）和三维（3D）分类模型，分别对116例患者（其中100例HCC和16例非HCC）的B超和CEUS影像进行定量分析，并对比分析各个模型的分类性能。结果 实验结果表明，3D-CNN模型的各方面性能指标都优于2D-CNN模型，验证了3D-CNN模型能同时提取肿瘤区域的2D影像特征及血流时间动态变化特征，比2D-CNN模型更适用于HCC与非HCC分类。其中3D-CNN模型的AUC、准确率和敏感度值最高，分别达到了85%、85%和80%。此外，由于HCC和非HCC样本不均衡，通过扩充非HCC样本的数量可以提升网络的分类性能。结论 本文提出的3D-CNN模型能够实现快速、准确的肝癌分类，有望应用于辅助临床医师诊断与治疗肝癌。]]> 2023/3/22 0:00:00 38true 目的 声聚焦光声内窥成像具有成像深度大的优点，是一种非常有前景的功能成像技术，该技术被广泛应用于直肠、食道等内窥成像中。声聚焦光声内窥成像通常采用基于单个聚焦超声传感器的侧向扫描方式，同时采用传统的B扫描方法进行重建，会大大降低图像质量。为了获得高质量的图像，本文提出了几种动态聚焦的声聚焦光声内窥成像算法。方法 本文使用几种动态聚焦算法进行了数值仿真，并搭建系统进行了仿体实验验证，从横向分辨率和信噪比等多方面比较了各算法在动态聚焦中的成像效果。结果 相比B扫描方法，动态聚焦后的图像在离焦区域的横向分辨率与信噪比方面都有提升，仿真模拟中最高可将离焦区域的成像目标分辨率提升约26倍，其信噪比经动态聚焦后最高可提高2.3倍左右，实验中的远距离点目标经动态聚焦重建后分辨率提升3~6倍。结论 整体而言，基于时空响应的算法和合成孔径聚焦重建算法是在实验条件下更为适用的算法。本工作对后续的声聚焦光声内窥成像的设计具有指导意义。]]> 2023/3/22 0:00:00 37true 目的 单碱基编辑器作为修复基因组点突变的有力工具，在生物技术开发和临床应用中具有极大潜力。对于目标改造的单核苷酸变异（SNV），首先要选择可用于编辑的单碱基编辑器（base editors，BEs）和单向导RNA（single guide RNA，sgRNA）。目前，尽管有较多工具实现了设计sgRNA，但缺少将设计sgRNA与评估单碱基编辑器特异性完整结合起来的工具。方法 纳入主流的27种胞嘧啶碱基编辑器（CBEs）和12种腺嘌呤碱基编辑器（ABEs）对SNV设计编辑方案，并通过调用第三方工具BE-Hive对编辑方案进行效率预测。综合使用多个脱靶预测工具对编辑方案的脱靶图谱进行评估。最后结合BEs类型和脱靶位点，分析得到所有可能的脱靶编辑产物，再调用ANNOVAR这一变异注释工具进行脱靶产物的功能分析。结果 本文提出了一个综合性工具BE-dot，它可以实现对目标编辑的SNV从设计sgRNA到预测脱靶图谱的完整过程，并对脱靶产物进行功能注释。利用密码子的简并性，BE-dot除了提供DNA水平上的精确校正方案，还可以在蛋白质水平进行同义校正。在对单碱基编辑系统做脱靶图谱的预测时，BE-dot综合了Cas-OFFinder、CALITAS、CFD、uCRISPR、BEdeepoff等多个工具，可以更全面地评估单碱基编辑系统的特异性，为用户选择BEs和sgRNA提供参考。此外，BE-dot可以自动分析得到脱靶位点处所有可能的编辑产物，并转换为avinput格式供ANNOVAR进行功能注释，避免了以往手工注释的繁琐。结论 BE-dot能为单碱基编辑技术应用于纠正或引入SNV设计编辑方案，并且能够从编辑效率、脱靶图谱、脱靶带来的功能影响等方面对编辑方案进行全面的评估。]]> 2023/2/22 0:00:00 36true 目的 生物电磁学参数中的电导率与组织的功能性信息直接相关，精准重建生物组织电导率在医学成像技术和医学诊断领域中有着重要意义。本文改进定量微波热声层析成像（microwave-induced thermoacoustic tomography，MTAT）算法，使组织电导率的重建精度提高。方法 本文在利用有限元离散法求解热声波动方程和亥姆霍兹方程的基础之上，提出了一种基于正则化牛顿迭代法（regularized Newton iteration method，RNIM）定量重建组织电导率的改进方法。结果 通过数值模拟实验和含不同浓度NaCl溶液的仿体实验，验证了算法改进的有效性。组织仿体实验结果表明，目标在不同位置、不同大小、不同对比度情况下，相比于定量微波热声层析成像采用拟合（fitting）的方法，采用正则化牛顿法定量重建的仿体电导率相对误差明显降低，重建目标精度提高。在仿体实验中采用RNIM方法重建相同浓度的单目标在不同位置的电导率变化幅度更小，以及重建多目标电导率的相对比值与实际更接近，实验结果验证了改进方法的稳定性。结论 研究结果表明优化算法能更加准确地定量重建组织仿体的电导率，这对于肿瘤的定位和分期的早期筛查及精准诊疗，预防疾病恶化具有重要意义。]]> 2023/2/22 0:00:00 35true 目的 外泌体是细胞外囊泡的一种，被认为是一种生物信息载体。本文探究在AFM检测下淋巴瘤患者血浆中外泌体的物理特性。方法 从不同亚型淋巴瘤患者的外周血中提取外泌体，首先利用静电吸附法将分离的外泌体固定在云母基质上，然后应用原子力显微镜（AFM）扫描获取外泌体的多参数图像。在纳米/微尺度上，取得外泌体的形貌与力学信息并统计比较。结果 利用AFM表征单个外泌体的力学信息。其中，表面黏附力图像显示，外泌体边缘的能量耗散高于中心部分，因此具有显著边缘效应，来自不同亚型淋巴瘤患者的血浆中外泌体杨氏模量存在差异。结论 血浆中外泌体可被提取并在经过处理固定后可被AFM捕获并测量，血浆外泌体有望成为肿瘤诊断及治疗的新型生物标志物，外泌体的物理特性可能与其生物学性能存在关联。]]> 2023/1/16 15:04:36 34true 目的 植入式脑机接口在神经疾病的治疗方面已经得到了广泛应用，治疗的效果依赖于与神经组织接触的电极。与刚性材料制作的电极相比，碳基微纤维电极尺度小、生物兼容性好、组织炎症反应小，可以减少植入后的异物反应，改善神经记录信号的信噪比，可以长期保持稳定的电极特性。方法 本文设计了一种柔性碳纳米管（carbon nanotubes，CNTs）纤维电极的修饰方法，该方法采用电化学聚合的方式可以将聚3,4-乙烯二氧噻吩（poly（3,4-ethylenedioxythiophene），PEDOT）薄膜沉积到CNTs纤维电极上，作为微电极涂层。为了证明修饰涂层在电极表面具有良好的机械稳定性，对修饰电极进行了超声处理。此外，本文将PEDOT薄膜沉积到ITO玻璃上，评价了PEDOT薄膜的生物相容性。结果 恒电流方式在CNTs纤维电极表面沉积的PEDOT涂层降低了电极的电化学阻抗，提高了电极的电化学性能，且PEDOT沉积的时间越长阻抗减少的幅度越明显。对电极进行超声处理后，电极的电化学阻抗没有产生显著变化，说明超声处理后PEDOT涂层剥离较少，证明了修饰涂层在电极表面具有良好的机械稳定性。最后，细胞实验表明，PEDOT薄膜具有与ITO导电玻璃相当的细胞相容性。结论 PEDOT薄膜可以提高CNTs纤维电极的稳定性，有望提高脑机接口系统的寿命和可靠性，具有应用于长时间记录神经电信号的前景。]]> 2023/1/16 15:04:40 33true 目的 光泵磁强计（optically pumped magnetometer，OPM）脑磁图（magnetoencephalography，MEG）作为新一代脑功能成像技术，在多轴探测设计下具备了对传统MEG信号“盲区”的检测能力，为脑内功能活动研究提供更全面的技术工具。本文旨在探讨双轴OPM-MEG在测量真实生理反应时的信号分布差异特征。方法 采用9通道OPM-MEG对10名健康受试者的听觉相关频率跟随反应进行检测。通过每个被试1 000个试次的数据采集，获取所有通道头皮切向（Y轴）和径向（Z轴）的磁响应信号。结果 研究显示，双轴OPM-MEG记录到的信号在强度和分布上与传统MEG存在明显区别。双轴信号明显强于传统MEG，且传统MEG难以记录的切向信号显著强于径向信号。结论 本研究证实了双轴OPM-MEG在测量真实生理信号方面的能力，并且双轴测量能够获取更丰富的信息，特别是可能存在于传统MEG测量盲区中的脑功能活动信号。这为基于传统MEG记录的神经电活动模型带来了重大更新。双轴OPM-MEG的多轴记录特性在脑科学研究和脑疾病诊断领域都具有巨大的应用潜力。这项研究初步展示了双轴OPM-MEG在听觉诱发信号研究中的价值，为后续深入研究奠定了基础。]]> 2023/12/22 11:27:23 32true 目的 N⁶-甲基化腺苷（N⁶-methyladenosine，m⁶A）是RNA中最常见、最丰富的化学修饰，在很多生物过程中发挥着重要作用。目前已经发展了一些预测m⁶A甲基化位点的计算方法。然而，这些方法在针对不同物种或不同组织时，缺乏稳健性。为了提升对不同组织中m⁶A甲基化位点预测的稳健性，本文提出一种能结合序列反向信息来提取数据更高级特征的双层双向门控循环单元（bidirectional gated recurrent unit，BiGRU）网络模型。方法 本文选取具有代表性的哺乳动物组织m⁶A甲基化位点数据集作为训练数据，通过对模型网络、网络结构、层数和优化器等进行搭配，构建双层BiGRU网络。结果 将模型应用于人类、小鼠和大鼠共11个组织的m⁶A甲基化位点预测上，并与其他方法在这11个组织上的预测能力进行了全面的比较。结果表明，本文构建的模型平均预测接受者操作特征曲线下面积（area under the receiver operating characteristic curve，AUC）达到93.72%，与目前最好的预测方法持平，而预测准确率（accuracy，ACC）、敏感性（sensitivity，SN）、特异性（specificity，SP）和马修斯相关系数（Matthews correlation coefficient，MCC）分别为90.07%、90.30%、89.84%和80.17%，均高于目前的m⁶A甲基化位点预测方法。结论 和已有研究方法相比，本文方法对11个哺乳动物组织的m⁶A甲基化位点的预测准确性均达到最高，说明本文方法具有较好的泛化能力。]]> 2023/12/22 11:27:28 31true 目的 检测和定量细胞中RNA的合成是一种广泛应用于监测细胞活力、健康和代谢率的技术。在环境刺激下，内参基因和靶基因都会发生一定程度的降解。因此，在受到环境刺激后，必须考虑对新生RNA的精确捕获和RNA转录水平的检测。本研究的目的是创建一种点击化学方法，利用其特性从环境刺激的总RNA中捕获新生RNA。方法 使用5-乙基尿苷（5-EU）对新生RNA进行标记，利用“点击化学”和磁珠筛选相结合的方法，将叠氮化物-生物素介质配体与磁球连接，随后捕获新生RNA并利用荧光分子信标（M.B.）和定量反转录PCR（quantitative reverse transcriptase-mediated PCR，qRT-PCR）方法检测16S rRNA转录速率。结果 经过“点击化学”筛选捕获得到的细菌新生RNA可以被用作反转录模板进行反转录形成cDNA，结合荧光分子信标M.B.1准确反映37℃条件下rRNA的合成速率是15℃条件下的1.2倍，通过荧光定量PCR对16S rRNA基因和cspI基因进行检测，得到在25℃和16℃条件下用新生RNA而不是总RNA进行分析时，测量的相对基因表达的变化显著增强，实现RNA转录速率的精确检测。结论 本研究采用的技术方案较其他方法更适合细菌，操作步骤简单，易于实现，是适于研究人员使用的有效的RNA捕获方法。]]> 2024/9/19 20:43:47 30true 目的 植物叶片水分含量分布是衡量植物生理生化的重要指标，该指标也是农业科学领域中制定抗旱策略的重要依据。微波成像对水分含量分布和变化具有高对比度，超声成像对水分含量分布具有高分辨率。据此，本文提出兼具微波和超声成像优势的无损微波热声成像（thermoacoustic imaging，TAI）技术，并用此技术开展了植物叶片水分含量分布的无损检测研究，进行植物叶片水分含量分布的检测，对于实现精准灌溉、发展节水农业、提高水资源利用率有重要意义。方法 本文构建了激发频率3.0 GHz、横向分辨率406 μm的二维透射式TAI系统。基于主动加热技术（150°C热风，90 s），模拟3组曼陀罗叶片水分流失过程，对其TAI图像进行定量分析。结果 加热导致叶片局部水分流失，微波热声信号降低 （信号最大变化量为10%），验证了基于TAI技术实现植物叶片水分含量变化无损检测的可行性。实现了曼陀罗、野茼蒿和紫苏叶片水分含量分布的无损检测，检测结果与核磁共振成像吻合。结论 本研究有助于实现精准灌溉，为植物在正常和胁迫环境下对环境的响应特性研究提供技术支撑。尤其是与非接触超声检测技术相结合，可以实现植物叶片水分含量的遥感成像，更具实用价值。]]> 2024/8/15 12:35:51 29true 目的 基于规律成簇的间隔短回文重复（CRISPR）/CRISPR关联蛋白质系统（Cas）技术建立检测血液特异性血红蛋白α（HBA）mRNA的方法，以准确、快速地鉴定血液样本。方法 本研究通过设计和筛选血液特异性HBA mRNA上的CRISPR RNA（crRNA）短片段，基于CRISPR/Cas技术原理建立了SHERLOCK-HBA检测方法，对5种体液（包括外周血、月经血、唾液、阴道分泌液、精液）共79份样本进行检测以评价所建方法鉴别血液的能力，并通过种属特异性实验、灵敏度实验、模拟混合斑检测、模拟降解样本检测、实际案件样本检测等进一步验证实验体系的法医学应用能力。结果 该方法检测人源血液的相对荧光单位（RFU）值显著高于非血液（P<0.000 1）以及非人源血液样本（P<0.000 1），对血液RNA的检出灵敏度可达1×10^-3 ng，且可成功检测出混合斑迹以及陈旧降解斑迹中的微量血液成分。结论 本研究成功建立了一种基于CRISPR/Cas技术的SHERLOCK-HBA检测体系，能准确、灵敏地鉴定血液，操作简单、快速，为快速识别血液类样本提供了新的思路和参考。]]> 2024/8/15 0:00:00 28true 目的 识别癌症驱动基因，特别是罕见或个体特异性癌症驱动基因，对精准肿瘤学至关重要。考虑到肿瘤间的高度异质性，最近有一些方法尝试在个体水平上识别癌症驱动基因。然而，这些方法大多是将多组学数据整合到单一生物分子网络（如基因调控网络或蛋白质相互作用网络）中来识别癌症驱动基因，容易忽略不同网络所特有的重要相互作用信息。为了整合不同生物分子网络的相互作用数据，促进癌症驱动基因识别，迫切需要发展一种多层网络方法。方法 本文提出了一种多层网络控制方法（PDGMN），利用多层网络识别个体化癌症驱动基因。首先，利用基因表达数据构建针对个体病人的个体化多层网络，其中包括蛋白质相互作用层和基因相互关联层。然后，整合突变数据，对个体化多层网络中的节点进行加权。最后，设计了一种加权最小顶点覆盖集识别算法，找到个体化多层网络中的最优驱动节点集，以提高个体化癌症驱动基因的识别效果。结果 在三个TCGA癌症数据集上的实验结果表明，PDGMN在个体化驱动基因识别方面优于其他现有方法，并能有效识别个体病人的罕见癌症驱动基因。特别是，在不同生物分子网络上的实验结果表明，PDGMN能够捕获不同生物分子网络的独有特征，从而改进癌症驱动基因的识别结果。结论 PDGMN能有效识别个体化癌症驱动基因，并从多层网络的视角，加深我们对癌症驱动基因识别的理解。本文所用的源代码和数据集可以从https://github.com/NWPU-903PR/PDGMN获取。]]> 2024/7/19 0:00:00 27true 目的 化学交换饱和转移（CEST）成像技术已成为诊断与脑部和全身疾病代谢相关变化的有用工具，通过计算与水分子相邻化合物的可交换质子的含量进行定量分析。具体而言，酰胺质子转移（APT）CEST技术通过比较可交换的内源性蛋白质或肽的含量变化来区分正常组织与脑卒中和脑肿瘤组织。在体内的小器官病变诊断中，小视野（rFOV）成像技术已被广泛应用，本研究旨在应用rFOV成像技术来识别直肠中的CEST信号，探讨rFOV成像技术在直肠疾病临床诊断中的潜在效用，并为直肠疾病的放化疗提供代谢影像信息。方法 使用3.0T磁共振成像扫描仪对11名健康志愿者进行了横断面全视野（Full_FOV）和rFOV CEST成像。设置的分辨率分别为2.5×2.5×6 mm³和1.5×1.5×6 mm³。采用了0.7 μT和2 μT两种预饱和脉冲。rFOV成像采用了ZOOM成像方法。对于2 μT的饱和脉冲，采用了±3.5 ppm的MTRasym方法进行定量分析，而对于0.7 μT的饱和脉冲，则采用Lorentzian Difference的方法来量化CEST的对比度图和曲线。结果 相较于Full_FOV成像，rFOV方法可以在保持较好对比度的同时将扫描时间减半。与Full_FOV方法相比，rFOV成像方法可以得出与Full_FOV方法几乎相同的Z谱和MTRasym曲线。此外，以大约3 min的时间可以实现1.5 mm×1.5 mm分辨率的rFOV成像。这种rFOV成像方法可以更好地显示出整个直肠的解剖细节，包括CEST成像对比图及定量分析曲线。结论 CEST MRI在直肠疾病诊断方面具有较高价值，采用rFOV技术可以提供更高的空间和时间分辨率。由于其在直肠疾病诊断方面的潜力，CEST MRI可以作为临床诊断直肠疾病的首选。]]> 2024/7/30 17:10:45 26true 目的 细胞温度成像可以帮助科学家研究和理解细胞内部的温度分布，揭示细胞代谢和生物化学过程的关键信息。目前，基于荧光温度探针的细胞温度成像技术存在低温度分辨率和有限测量范围等限制。本文旨在利用单分子量子相干过程依赖温度的特性，开发一种单细胞温度成像和实时检测技术。方法 基于飞秒脉冲激光制备延时和相位可调的飞秒脉冲对，调制的脉冲对通过显微系统激发细胞内标记的荧光单分子，之后收集并记录每个荧光光子的到达时间。利用单分子相干过程与周围环境温度的关系，定义单分子量子相干可视度（V），建立V与环境温度的对应关系。通过调制解调荧光光子的到达时间，获取单分子周围环境温度，结合扫描成像，实现细胞的温度成像和实时检测。结果 该方法可以实现高精度（温度分辨率<0.1℃）和大范围温度（10~50℃）的温度成像和测量，并观测到了单个细胞代谢相关的温度变化。结论 该研究有助于深入了解细胞代谢、蛋白质功能和疾病机制，为生物医学研究提供重要工具。]]> 2024/5/21 20:01:42 25true 目的 基于荧光寿命成像技术，提出一种黏度检测的新方法，并评估不同权重荧光寿命在区分甘油-水混合物黏度的能力，从而提供对黏度区分的准确度和可靠性。方法 采用电子学中的权重依赖原理，分别引入了振幅加权平均荧光寿命（τ_m）和强度加权平均荧光寿命（τ_i）。通过τ_m和τ_i检测甘油-水混合物黏度变化。振幅加权平均荧光寿命反映了荧光信号振幅与时间的关系，而强度加权平均荧光寿命则关注荧光信号强度的时变特性。结果 τ_m和τ_i两种结果相互佐证，这不仅提高了对甘油-水混合物黏度变化的可靠性，同时也揭示了τ_m和τ_i在检测过程中的独特作用。尽管τ_m在捕捉荧光信号振幅变化方面发挥了关键作用，然而，τ_i在考虑荧光信号强度的时变特性时表现出更高的黏度检测准确度。特别值得注意的是，由于τ_i更为敏感，微环境黏度检测可以直接利用τ_i进行分析。这为实时、高灵敏度的微流体黏度监测提供了更为便捷的途径。通过对τ_m和τ_i的综合利用，不仅能够更全面、准确地了解甘油-水混合物的黏度信息，而且可以根据具体需求选择更为适用的参数进行深入分析。结论 振幅加权和强度加权的结合可以在不同条件下更为灵敏地识别黏度的微小变化。这种方法的创新之处在于其对多参数的同时关注，提高了对黏度变化的敏感性和可分辨性。因此，这种权重依赖的荧光寿命成像技术不仅为甘油-水混合物的黏度探测提供了一种全新的方法，同时也为微流体、流变学以及新型功能材料研究等领域提供了有力的分析手段。]]> 2024/5/21 20:01:49 24true 目的 通过微流控法制备载卵母细胞海藻酸钠微球，在低浓度保护剂下实现卵母细胞玻璃化保存。方法 采用流动聚焦型微流控芯片，通过调整芯片结构、海藻酸钠溶液浓度和流速比，制备大小均匀、空包率低、低温耐受的载卵母细胞海藻酸钠水凝胶微球。在低浓度低温保护剂下将微球玻璃化保存，复温后检测存活率，采用细胞松弛素B和氯化锶孤雌激活卵母细胞，与Cryotop玻璃化法对比卵母细胞存活率和卵裂率、囊胚率。结果 制备的海藻酸钠微球在冷冻复温前后的体积稳定且结构完整，在将卵母细胞包封在海藻酸钠水凝胶中后，空包率低，存活率、卵裂率和囊胚率与新鲜组相比无显著差异。在低浓度低温保护剂10% DMSO+10%乙二醇（EG）+0.5 mol/L海藻糖中玻璃化冻存后卵母细胞的存活率达到92.48%，卵裂率70.80%，囊胚率20.42%，与高浓度保护剂15% DMSO+15% EG+0.5 mol/L海藻糖中Cryotop玻璃化法相比无显著性差异。结论 本文设计制作了三通道内部交联芯片并用于卵母细胞玻璃化保存的微流控系统，可生成大小均匀、空包率低、低温耐受的载卵母细胞海藻酸钠水凝胶微球，在低浓度保护剂下实现玻璃化保存，为卵母细胞玻璃化保存方法提供新思路。]]> 2024/4/19 9:42:45 23true 目的 为了提高微量样本中miRNA的检测通量和检测效率，本文建立了一种能够同时准确定量两种miRNA的双重实时荧光定量PCR（real time fluorogenic quantitative PCR）检测体系，并通过实际样本检测验证其应用于体液鉴别的效果。方法 设计适用于miRNA双重检验的相关引物及探针并优化实验体系组分，建立基于TaqMan技术的miRNA双重实时荧光定量PCR检测体系并验证其特异性、灵敏度和可重复性；使用此检测体系对58份不同体液样本中的miR-451a与miR-21-5p进行检测，并借助miR-451a与miR-21-5p的比值鉴定法评估该体系的体液鉴别能力；使用该检测体系样本数据确定的最佳截断值对模拟案件样本进行鉴别。结果 优化的检测体系能够实现对血液与非血液、月经血与外周血的100%区分，同时可以实现对模拟案件样本的准确鉴别。结论 该双重实时荧光定量PCR检测体系将时间和材料成本均缩短至原来的一半，为后续建立更多重的实时荧光定量PCR检测体系并应用于体液鉴别打下了基础。]]> 2024/3/20 17:40:01 22true 目的 分子对接在预测分子之间的结合模式和亲和力方面起着至关重要的作用，是计算结构生物学和计算机辅助药物设计研究的重要方法。本研究团队近期开发了一款基于模板的新型对接方法FitDock，当存在近似的蛋白质配体模板时，它在准确性和速度方面都超过了业界常用的分子对接方法。为了增强FitDock方法的可用性，使其在分子模拟领域得到更广泛的应用，很有必要发展图像化的软件工具。方法 基于Python图像化编程，本文开发了FitDockApp，这是分子可视化软件PyMOL的插件软件。结果 FitDockApp能够通过操作窗口界面，实现基于模板的分子对接和配体结构比对，实时显示预测三维结构，并提供将对接文件上传到实验室服务器获取最优模板的便利。此外，FitDockApp还具备批量对接功能。结论 FitDockApp通过用户友好的界面简化了对接过程，并提供丰富的功能，帮助研究人员获得精确的对接结果。FitDockApp是一款免费软件，兼容Windows和Linux系统，可在http://cao.labshare.cn/fitdock/下载。]]> 2024/3/20 17:40:02 21true 目的 原子力显微镜（AFM）的出现为生命科学研究提供了强大工具，特别是AFM压痕实验技术已成为细胞力学特性探测的重要方法，从单细胞尺度为生理病理活动过程带来了大量新的认识，是对传统生化集群平均研究方法的有力补充。然而现有AFM压痕实验技术存在着依赖人工、效率低下等不足，严重制约了其在生命科学领域的实际应用。本文通过将光学显微成像自动目标识别技术与AFM压痕技术结合，建立了单个游离态细胞及聚团生长细胞的力学特性精准高效测量方法。方法 利用YOLO深度学习算法识别出光学图像中细胞的中心部位，并通过嵌入视觉转换器（ViT）模块的双UNet神经网络模型对细胞边缘部位进行精确分割，同时采用模板匹配算法对光学图像中AFM微球探针进行定位，在此基础上自动确定AFM探针上的微球针尖与细胞不同部位之间的空间位置关系，进而对细胞中心部位和边缘部位的力学特性进行快速测量。选取HEK 293（人胚胎肾细胞）和HGC-27（人未分化胃癌细胞）两种细胞进行验证实验，并利用Hertz模型对获取的力曲线进行分析以得到细胞杨氏模量。结果 在深度学习光学图像自动识别导引下可将AFM探针准确移动至细胞不同部位（中心和边缘）进行力学特性测量，同时实验结果表明，本文提出的方法不仅可对单个游离态细胞进行可靠测量，也适用于聚团生长的细胞。结论 深度学习图像识别在辅助AFM单细胞力学特性精准高效探测方面具有巨大潜力，将深度学习图像识别与AFM结合有助于发展面向生物医学应用的高通量单细胞力学特性测量方法。]]> 2024/2/22 16:33:48 20true 目的 头发是一类重要的皮肤附属物，主要由角蛋白和角蛋白相关蛋白等组成。不同种族及性别样本的头发蛋白质组成和占比存在差异，且目前缺乏高效率提取头发蛋白的方法。本文探究基于定量头发蛋白质组学方法，旨在探索该方法区分不同个体的可能性。方法 以3例头发样本，对样品处理方法和裂解缓冲液进行探究，发展一种名为PLEE（PTM lab for protein extraction from hair with high efficiency）的稳定、高效的头发蛋白质提取方法，对7例人发样本，以PLEE法进行提取，结合胶内消化方法进行蛋白质组学实验，产出蛋白质组学数据，分析个体间的头发蛋白质组成及占比。结果 共鉴定274种蛋白质，共有的蛋白质107种，非共有蛋白质种类在57~119，部分样本存在独特鉴定蛋白。使用共鉴定107种蛋白质进行定量蛋白质组分析，通过聚类和主成分分析，可将各样本进行区分，且技术重复样本可聚在一起，表明流程的稳定性。另外，筛选出10个关键蛋白（KRT33A、KRTAP9-6、KRT83、KRTAP7-1、KRT32、BLMH、KRT38、KRTAP11-1、NPAS1、KRTAP4-3）在不同个体之间差异比较大且在同个体中蛋白质鉴定稳定。结论 不同个体的头发蛋白质组成存在差异，筛选出的10个蛋白质有望作为区分个体特质的关键蛋白，在个体识别、刑侦方面具有重大的应用潜力。]]> 2024/1/19 11:51:33 19true 目的 灰尘作为法庭科学极具特色和应用价值的物证，其中包含丰富的环境DNA信息，逐渐成为领域内的前沿研究热点。然而，作为办案应用中的关键基础环节，从法庭科学领域实际应用出发的物体表面灰尘的采集及DNA提取研究，仍亟待开展。方法 使用Copan Liquid Amies Elution Swab拭子擦拭物体表面采集灰尘，将采集样品管内拭子头、沉淀、上清液分别提取DNA，评估DNA含量从而选定应处理和裂解的样品管内成分。按照5种不同采样面积（25~400 cm²）采集灰尘样本并检测DNA浓度，确定合适的采样面积。比较3种商业化DNA提取试剂盒对灰尘样本的提取效果，并检测评估提取的灰尘DNA片段大小以及是否含人源DNA，同时通过16S rDNA扩增子测序分析物体表面灰尘DNA中的细菌信息，从而建立灰尘DNA提取产物的质量控制方法。针对DNA提取中的细胞裂解关键步骤，比较评估在不同的细胞裂解方式以及震荡裂解次数下提取DNA的量，从而建立适合灰尘DNA提取的细胞裂解方法。结果 灰尘采样管内沉淀与拭子头为DNA的主要来源部位，后续提取时均应纳入处理。灰尘的采样面积与灰尘DNA浓度呈正相关，且灰尘采样面积宜大于5×5 cm²。使用DNeasy PowerSoil Pro试剂盒可以获得较高的DNA产量，同时3种DNA提取试剂盒提取的DNA片段大小无显著差异，从上述灰尘样本提取的DNA中未检出人源DNA，而物体表面灰尘DNA中含有细菌DNA，并且不同采样点之间的微生物物种组成存在差异。此外，使用生物样品均质器进行研磨裂解4 min（2 min×2次）时，得到的灰尘DNA浓度最高。结论 灰尘DNA的提取与采样面积、提取试剂盒、裂解方式均有关，建立完整且适合的灰尘DNA提取方案至关重要。这不仅为研究挖掘灰尘中的环境DNA数据打下基础，还为环境样本的实际办案应用提供了方法参考。]]> 2024/6/12 0:00:00 18true 目的 RNA的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism， SNP）与多种疾病和药物反应相关的蛋白质表达有关，因此对其检测具有重要意义。目前，splintR连接酶辅助方法是RNA直接检测的重要方法，但当连接酶的保真度不理想时，该方法的特异性将受到限制。本研究的目的是创建一种提高splintR连接酶检测RNA特异性的方法。方法 本研究提出了一种双竞争挂锁探针（dual-competitive-padlock-probe，DCPLP）检测方法，不需要额外的酶或反应，可提高splintR连接酶的特异性。为了验证该方法，采用双竞争挂锁探针介导的滚环扩增（rolling circle amplification，RCA）对CYP2C9基因进行RNA SNP基因分型。结果 通过双挂锁探针的竞争和链替换，SNP检测的特异性得到了很好的提高，非特异性信号降低了83.26%。通过引入合成RNA样品，实现了10 pmol/L~1 nmol/L的动态检测范围。并将临床样本应用于该方法进行性能评价，结果与qPCR方法的基因分型结果一致。结论 本研究成功建立了一种高特异性的RNA SNP直接检测方法，为准确鉴定各类RNA提供了新的途径。]]> 2024/11/22 0:00:00 17true 目的 谷胱甘肽（GSH）是细胞中巯基（―SH）含量最丰富的非蛋白质化合物，在提供还原当量、直接中和有毒反应物质以及维持细胞氧化还原平衡等方面发挥着至关重要的作用，因此，准确检测组织中的GSH含量具有重要意义。鉴于电子顺磁共振（EPR）技术在GSH检测方面的应用报道相对较少，本文提出了一种基于EPR技术的GSH检测方法。方法 首先，将ABTS（2，2"-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）溶液与K2S2O8溶液混合并在避光条件下反应12~16 h制备ABTS?⁺溶液，借助UV-Vis对ABTS?⁺溶液进行浓度测定。然后，基于ABTS?⁺的EPR信号变化来检测GSH浓度，在此基础上探究最适的反应时间和温度，建立ABTS?⁺的EPR信号强度和GSH 浓度之间的标准方程。最后，采用计算得到的标准曲线对C57BL/6J 小鼠全血的GSH浓度进行定量分析，并与文献结果进行比较，验证方法的准确性。结果 实验结果显示，本方法对GSH的检测范围（50 nmol/L~15 μmol/L）分布超过两个数量级，检测限（LOD）低至0.50 nmol/L，检测到的小鼠全血中GSH含量为（10 660±706）nmol/g（每克血红蛋白所含GSH纳摩尔数），与文献报道结果（（11 200±237）nmol/g）接近。此外我们还使用类似的方法进一步发展了对GSSG的检测方法。结论 本文提出了一种基于EPR技术，使用ABTS?⁺快速检测GSH的方法。得益于EPR技术的独特优势，相比于传统的比色法，本方法具有更高的检测灵敏度，更宽的线性范围。我们进一步拓展了其在血液样品中的检测应用，可以快速准确地检测全血中GSH的含量，为衡量组织中氧化还原平衡状态提供数据支持，具有重要意义。]]> 2024/11/22 12:24:13 16true 目的 随着生物信息学的发展，涌现出大量基于深度学习的蛋白质亚细胞定位方法。这些蛋白质亚细胞定位方法（如GapNet-PL、ImPLoc等）能够较准确识别细胞群体水平的蛋白质分布模式，但在单细胞水平或复杂微环境下的定位仍存在局限性。当前蛋白质显微图像缺乏单细胞标注，仅依赖细胞群体水平的标注无法解析单细胞尺度的定位异质性，且现有大多数蛋白质亚细胞定位模型基于卷积神经网络（CNN）设计，忽略了亚细胞结构间的功能关联性，导致单细胞蛋白质亚细胞定位精度差。因此，本文提出一种基于类相关图卷积网络（CP-GCN）的单细胞蛋白质定位方法。方法 首先，建立类相关模块（CPM），充分提取不同亚细胞类别的语义特征。然后，设计CP-GCN网络，挖掘多细胞中蛋白质亚细胞的全局特征并捕获标签图的拓扑信息，学习多标记蛋白质类别之间的关联性。接下来，利用K-means聚类方法区分类内多尺度特征，生成多细胞类激活图（CAM），根据CAM的预测区域，对单细胞图像进行伪标注，以有效区分细胞群中的异质性细胞。最后，使用伪标注训练单细胞蛋白质分类模型，实现单细胞蛋白质的精准定位。结果 在Kaggle2021 数据集的单细胞蛋白质预测任务中，该方法的mAP指标均优于现有的蛋白质亚细胞定位方法。对生成的CAM结果进行可视化分析，证明了模型可成功定位单细胞内蛋白质亚细胞。结论 通过CP-GCN网络与伪标签分配策略相结合，可以有效地捕捉蛋白质图像中的异质性细胞的特征，精确定位单细胞内蛋白质位置。]]> 2025/6/23 0:00:00 15true 目的 转运核糖核酸衍生片段（transfer RNA derived fragment，tRF）是一种新型的长度介于13~50 nt的非编码RNA，最近被发现可能通过靶向结合mRNA，促进mRNA降解，抑制蛋白质翻译，从而在细胞中发挥特定的生物学功能，但预测其靶基因的生物信息学方法尚且有限。为了研究这一种新型分子在基因网络调控中发挥的作用，开发一种更全面地预测tRF靶标的算法具有重要意义。方法 使用多层感知机神经网络深度学习算法，以确认结合的38 687对tRF∶mRNA为训练数据，将已知的tRF和靶标结合的特征用于模型学习，并扩大收录的tRF和靶标的范围。结果 将该基于神经网络学习的tRF靶标预测算法命名为tRF Prospect，算法AUC达93.4%，经与过表达tRF后的转录组高通量测序数据进行比对，具有良好的预测性能，证实该算法具有较高准确度。结论 tRF Prospect主要预测tRF发挥生物学功能可能作用的靶向mRNA，对现有的tRF靶标预测平台在收录tRF种类、靶标范围和预测模型上进行了补充，为研究tRF在生物中的新作用提供了基础。]]> 2025/7/14 10:25:13 14true 目的 运动功能区胶质瘤会破坏皮质脊髓束（CST），导致运动功能障碍。如何评估CST的破坏程度目前还缺少统一的方法，尤其是对病灶至CST最小距离（LTD）小于10 mm的高手术风险患者。本文拟进一步阐明此类患者CST形态改变的分类方法和意义。方法 本研究回顾性分析了2014~2024年间109例高风险功能区胶质瘤患者。所有患者均在术前开展弥散张量成像（DTI）并接受术中电刺激指导的神经外科手术治疗。所有患者CST与病灶的LTD均小于10 mm。根据术前的DTI评估CST受累导致的形态学变化。将患者分为3组：CST与健侧形态对称（对称组）17例（15.6%），CST形态较健侧明显改变（形变组）48例（44.0%），CST与肿瘤重叠（重叠组）44例（40.4%）。根据术前的评估受累导致的形态学变化进行分类，并对每种分类对应的患者的术后运动功能进行分析。结果 术后病理显示CST重叠组中高级别胶质瘤（HGG）的比例明显高于另外两组（P=0.001）。Logistics回归分析显示CST重叠是HGG的预测因素（P<0.001）。CST形变组和重叠组肿瘤的全切除率较CST对称组更低（P=0.008）。术后偏瘫者共41例，其中CST对称组偏瘫4例（23.5%），CST形变组偏瘫者11例（22.9%），CST重叠组偏瘫者26例（59.1%）。CST与肿瘤重叠可预测术后偏瘫（P=0.016）。对患/健侧和CST形态学分组进行双因素ANOVA分析，发现CST分组和健-患侧的主效应显著（P=0.017和P=0.010），交互作用不显著（P=0.31）。CST重叠组各向异性分数（FA）值和患侧的FA值更低。患侧FA值的下降可预测术后偏瘫（灵敏性为69.2%，特异性为71.9%）。结论 本文建立了一套根据术前CST的形态改变预测高危型的运动功能区胶质瘤患者术后偏瘫的方法。CST的重叠会导致通过CST FA值的下降。此方法可用于患者的精准管理，有助于精确开展术前手术规划。]]> 2024/12/31 11:51:55 13true 目的 药物研发成本高、周期长且成功率低。准确预测分子属性对有效筛选药物候选物、优化分子结构具有重要意义。基于特征工程的传统分子属性预测方法需研究人员具备深厚的学科背景和广泛的专业知识。随着人工智能技术的不断成熟，涌现出大量优于传统特征工程方法的分子属性预测算法。然而这些算法模型仍然存在标记数据稀缺、泛化性能差等问题。鉴于此，本文提出一种基于Bert+GCN的多模态数据融合的分子属性预测算法（命名为BGMF），旨在整合药物分子的多模态数据，并充分利用大量无标记药物分子训练模型学习药物分子的有用信息。方法 本文提出了BGMF算法，该算法根据药物SMILES表达式分别提取了原子序列、分子指纹序列和分子图数据，采用预训练模型Bert和图卷积神经网络GCN结合的方式进行特征学习，在挖掘药物分子中“单词”全局特征的同时，融合了分子图的局部拓扑特征，从而更充分利用分子全局-局部上下文语义关系，之后，通过对原子序列和分子指纹序列的双解码器设计加强分子特征表达。结果 5个数据集共43个分子属性预测任务上，BGMF方法的AUC值均优于现有其他方法。此外，本文还构建独立测试数据集验证了模型具有良好的泛化性能。对生成的分子指纹表征（molecular fingerprint representation）进行t-SNE可视化分析，证明了BGMF模型可成功捕获不同分子指纹的内在结构与特征。结论 通过图卷积神经网络与Bert模型相结合，BGMF将分子图数据整合到分子指纹恢复和掩蔽原子恢复的任务中，可以有效地捕捉分子指纹的内在结构和特征，进而高效预测药物分子属性。]]> 2024/12/4 0:00:00 12true 目的 光声泵浦成像可以有效排除传统光声成像中血液背景信号的干扰，实现深层组织内微弱的磷光分子及其三重态寿命的成像。然而，光声泵浦成像中背景差分噪声常常导致磷光分子浓度和三重态寿命的拟合结果偏大。为此，本文提出了一种新型的应用于光声泵浦成像中的三重态寿命拟合方法，通过提取三重态差分信号和背景噪声的相位，有效矫正背景噪声造成的拟合偏差。方法 通过数值仿真、仿体和活体实验，分别验证了新提出算法的优势和可行性。结果 数值仿真中，在噪声强度为信号幅值10%的条件下，新方法可将拟合偏差从48.5%优化到5%左右，并有更高的可决系数（0.88>0.79），极大地提高了拟合精度。仿体实验证明了光声泵浦成像对磷光分子高特异性成像的能力。活体实验验证了本文提出的新拟合方法在裸鼠肿瘤的光动力治疗中拟合磷光寿命以监测氧分压含量的可行性。结论 本工作对于光声泵浦成像在生物医学中的应用将起到重要的推进作用。]]> 2024/10/5 22:11:35 11true 目的 脑磁图（magnetoencephalography，MEG）是一种非侵入性的神经成像技术，能够检测和记录由大脑电活动产生的磁场。与基于超导量子干涉仪（superconducting quantum interference devices，SQUID）的MEG相比，基于光泵磁力计（OPM）的MEG 具有灵敏度更高、空间分辨率更高和成本更低的优势。但目前大多数研究为临床研究，缺乏基于OPM技术开展的MEG动物实验研究。疼痛是一种不愉快的感官和情感体验。疼痛感知涉及大脑活动的复杂变化，并显示出性别差异。尽管临床上通过 MEG 发现了与疼痛相关的神经元活动，但其特点尚未阐明，关于疼痛相关大脑活动变化的基础研究仍然不足。本研究旨在用MEG技术在大鼠模型中研究炎症性疼痛（通过完全弗氏佐剂（Complete Freund’s Adjuvant，CFA）诱导）对大脑活动的影响，分析疼痛感知期间的大脑活动变化，并探索疼痛相关MEG信号的性别差异。方法 本研究使用成年雄性和雌性Sprague-Dawley大鼠。通过在爪内注射CFA（100 μl，50%溶液，稀释于生理盐水）诱导炎症性疼痛，对照组注射生理盐水。采用von Frey纤维在基线及注射后1 h评估疼痛行为。进行MEG记录时，麻醉大鼠的头部放置OPM，并置于多层磁屏蔽内，以确保信号的清晰度。每只大鼠进行两个15 min的MEG记录，其中包括5 min的基线记录和10 min的机械刺激阶段。通过去除伪影和累积频谱图对自发脑活动进行时频分析，生成聚焦于4~30 Hz频率范围的频谱图。结果 注射生理盐水/CFA前后，雄性和雌性大鼠的机械刺激都能提高alpha波活动（4~30 Hz）。与注射前的状态相比，注射生理盐水/CFA会增强雌雄大鼠的平均alpha波活动。值得注意的是，雌性大鼠在注射CFA 1 h后表现出的平均alpha波活动高于静息状态下注射生理盐水后的平均alpha波活动。此外，通过von Frey行为学测试测量的疼痛阈值没有出现性别差异，但在注射CFA后的静息状态下，雌性大鼠比雄性大鼠表现出更高的平均alpha频谱功率。结论 与雄性大鼠相比，雌性大鼠对炎症性疼痛的感知能力更强。综上所述，CFA注射后大脑alpha波活动表现出性别差异，在炎症性疼痛期间处于静息状态的雌性大鼠大脑alpha波活动静息水平较雄性大鼠高。本研究提供了一种基于OPM的MEG记录用以研究麻醉动物脑活动的方法。此外，本研究的结果有助于深入理解疼痛相关的神经活动和疼痛性别差异。]]> 2024/7/24 15:45:28 10true 目的 N6-甲基腺苷（m6A）是真核生物 RNA 上最普遍的表观遗传修饰。它在调控细胞分化和发育过程中起着关键的作用，并且与许多疾病的病理机制相关。m6A位点的精确预测对解析其调控机制及指导药物设计至关重要。然而，传统的生物实验方法通常耗时长且成本高昂。尽管目前已开发出多种m6A位点预测的计算方法，但这些方法在特征学习、预测准确性和泛化能力方面仍有一定改进空间。本文提出一种基于双分支残差网络的m6A位点预测算法——m6A-PSRA，旨在充分利用RNA序列的特征信息，提高m6A位点预测的准确性和模型的泛化能力。方法 m6A-PSRA使用双分支网络架构，其中一条分支通过One-hot编码对序列进行编码，并利用双向长短期记忆网络（BiLSTM）进行特征学习，另一条分支通过k-mer分词编码，并利用预训练模型Doc2vec进行特征学习。在特征学习过程中，两条分支网络均整合残差网络（ResNet）和自注意力机制，以增强特征学习的准确性和模型的泛化能力。结果 在人类、小鼠和大鼠共11个组织中，m6A-PSRA对m6A位点的预测准确率（ACC）和曲线下面积（AUC）值均优于其他方法。特别地，其在各个组织的ACC值和AUC值分别超过90%和95%。消融实验也验证了m6A-PSRA具有较高的m6A位点预测准确性和泛化能力。结论 m6A-PSRA能有效捕获RNA序列特征，具备较高的预测精度和优异的泛化性能，可实现跨组织的高效m6A甲基化位点预测。]]> 2025/8/12 12:53:00 9true 目的 脂肪浸润已被证明与肌肉质量下降以及多种肌肉疾病密切相关。本研究提出一种基于相位角电阻抗成像（phase-angle electrical impedance tomography，ΦEIT）的方法，用于可视化肌肉脂肪浸润引起的肌肉电学特性响应，旨在为肌肉质量退化的早期无创检测提供新的技术手段。方法 本研究分为两部分。第一，构建实验室猪肉模型，通过向不同肌肉隔室分别注入1 ml和2 ml乳化脂肪溶液模拟不同程度的脂肪浸润，利用ΦEIT重建相位角图像；第二，开展人体实验，招募两个年龄段（20~25岁、26~30岁）的健康受试者（n=8），通过生物电阻抗分析法（bioelectrical impedance analysis，BIA）测量左、右腿脂肪含量百分比η_fat，并使用ΦEIT对左、右小腿进行相位角图像重建，进一步分析全局平均相位角Φ_M及各肌肉隔室空间平均相位角Φ_Mi与脂肪浸润之间的关系。结果 实验室猪肉模型中，图像灰度值随猪肉内脂率P_i增加而升高，Φ_M呈下降趋势。人体实验结果表明，全局平均相位角随脂肪含量百分比η_fat的增加而降低。此外，M₂（比目鱼肌）隔室对脂肪浸润最为敏感，M₂（比目鱼肌）、M₃（胫骨后肌和趾长屈肌）和M₄（胫骨前肌、趾长伸肌和腓骨长肌）隔室的空间平均相位角Φ_Mi均显示出明显的组间差异。结论 ΦEIT成像能够有效区分不同程度的脂肪浸润，特别是在深层、体积小或位置特殊的肌肉中表现出较高的敏感性，证明该方法在局部肌肉质量监测及早期无创诊断中的应用潜力。]]> 2025/7/2 9:24:00 8true 目的 细胞黏附是调控细胞生理功能的关键过程，对其进行定量表征有助于揭示生命活动的内在力学机制。原子力显微镜单细胞力谱技术虽应用广泛，但其依赖复杂的活细胞探针化学修饰步骤，存在操作复杂、检测通量低、易影响细胞活性等问题。本研究采用流体力显微镜单细胞力谱技术，以更简便高效的方式实现对单细胞贴壁黏附动力学的长时程定量表征，探究细胞在黏附建立过程中的动力学变化与差异。方法 以人胚肾细胞HEK 293T和人视网膜色素上皮细胞hTERT RPE-1为研究对象，在40 h贴壁培养过程中，通过流体力显微镜的微流控系统将活细胞非破坏性吸附于探针悬臂，通过细胞-基底分离实验采集力-距离曲线，获取黏附力、黏附能、最大脱附距离等黏附力学参数，结合细胞铺展面积的实时变化，系统表征单细胞的黏附动力学变化。结果 hTERT RPE-1细胞在贴壁1 h后即迅速进入黏附稳定期，单位面积黏附力、单位面积黏附能达到峰值，而HEK 293T细胞需要4 h，之后两种细胞的黏附力、黏附能与最大脱附距离分别稳定在约240 nN/ 30 nN、2.2 pJ/0.12 pJ、6 μm/4 μm，表明两种细胞呈现不同的黏附动力学模式，其中hTERT RPE-1细胞具有更强的黏附能力以及更高的黏附效率。结论 本研究采用流体力显微镜单细胞力谱技术实现了对单细胞贴壁黏附动力学的长时程原位定量检测，揭示HEK 293T与hTERT RPE-1两种细胞的黏附动力学特征存在差异，为深入理解细胞黏附行为提供了定量力学实验依据。]]> 2026/6/18 16:24:36 7true 目的 脑卒中具有高发病率与高致残率，病灶的精准检测是临床救治的关键。电阻抗成像（electrical impedance tomography，EIT）与微波成像（microwave tomography，MWT）作为非侵入、无电离辐射的生物医学成像技术，在床旁实时监测与快速筛查中具备显著优势。然而，单一模态面临成像精度低、信息单一的问题，难以满足临床精准检测的需求。因此，开展电阻抗与微波双模态成像研究具有重要意义。方法 为实现电阻抗和微波信息有效融合，提出双模态融合条件去噪扩散模型（dual-modality fusion conditional denoising diffusion probabilistic model，DM-DDPM），通过构建双编码器网络，分别提取EIT边界电压的信息与MWT散射场的深层介电特性信息，借助注意力特征融合实现异构特征的有效融合，生成互补融合先验。引入交叉注意力机制将融合先验数据作为条件，引导基于Transformer的扩散模型进行反向去噪，以实现电导率分布的高精度重构。结果 所提算法在不同噪声水平下均保持优异性能，在信噪比为30 dB的噪声环境下，该算法的平均相对误差降低至0.20以下，结构相似度和相关系数分别保持在0.90和0.89以上。相较单模态算法及多模态算法，伪影显著减少、病灶边缘更清晰、定位更准确。实物实验中，算法可有效抑制环境噪声与系统干扰，实现模拟病灶精准重建，验证了实际应用可行性。结论 该算法将双模态信息与条件去噪扩散模型结合，既解决单模态成像精度低、抗噪性差的问题，又避免多模态数据直接融合的噪声放大缺陷，实现了对不同数量脑卒中病灶的精准定位，为脑卒中检测提供了可靠的技术支撑。]]> 2026/4/25 11:33:17 6true 目的 准确区分LR-M型肝结节中的非典型肝细胞癌（HCC）与其他恶性肿瘤仍是超声诊断的难点。现有深度学习模型多依赖单一模态，未充分挖掘多模态信息的互补价值。为此，本文提出一种注意力加权三模态超声网络（TUS-Net），融合多模态超声信息以提升对非典型HCC的鉴别能力。方法 该模型融合超声造影（CEUS）、B型超声（BUS）及时间-强度曲线（TIC）三种模态。采用C3D主干提取CEUS视频的时空特征；通过双通道特征融合模块（DCFFM）自适应整合CEUS与BUS特征；利用时序强度特征融合模块（TIFFM）引导模型关注TIC所反映的关键时相变化。此外，模型结合YOLOX实现病灶自动定位，并采用类激活映射提升决策可解释性。结果 在包含161例患者的三模态超声数据集上，TUS-Net筛查非典型HCC的准确率达86.83%，敏感性为92.50%，特异性为75.50%，AUC为89.32%。消融实验验证了各模块的有效性，研究表明AI辅助可提升临床医生（尤其是低年资医师）的诊断特异性。结论 该模型表现优于现有基准方法，表明多模态融合结合注意力机制的策略可有效提升疑难肝结节的诊断准确率，为临床提供辅助决策支持。]]> 2026/4/16 8:30:33 5true 目的 便携式眼底相机在基层医疗和大规模眼病筛查中应用广泛，但现有自动对焦技术难以兼顾速度、精度与系统复杂度。基于图像清晰度评价的方法需迭代搜索，收敛慢；基于投影点的方法易受衍射伪影和杂散光干扰，可靠性不足。为解决上述问题，本文提出一种基于波前探测的自动对焦方法。方法 该自动调焦方法向眼底投射光点，并利用微型夏克-哈特曼波前传感器采集像面聚焦点的波前信息；通过Zernike多项式对波前相对于参考面的离焦量进行量化，进而驱动调焦镜完成闭环对焦。结果 基于此方法，设计并搭建了一套紧凑型眼底成像系统，总光路长度190 mm，视场角53°，屈光补偿范围±20 D。测试结果表明，该系统在5 mm的调焦行程内，可实现±20 D的屈光补偿范围，调焦精度优于0.08 D，单次调焦平均时间为0.5 s。结论 在模拟眼与真人眼实验中，该系统均表现出快速、高精度的自动调焦性能，验证了其作为便携式眼底相机自动调焦解决方案的有效性。本系统在紧凑结构内实现了快速、高精度的自动对焦，为便携式眼底相机提供了一种高效可靠的自动对焦解决方案。]]> 2026/2/11 10:22:25 4true 目的 N6-甲基腺苷（m⁶A）作为最丰富的mRNA表观修饰，在基因表达、mRNA翻译等各种mRNA代谢过程中起到重要作用。然而，由于缺乏有效的计算方法，目前还无法从计算角度识别哪些m⁶A甲基化修饰位点能够通过m⁶A RNA结合蛋白1（YTHDF1）介导的生物学机理调控mRNA翻译效率。鉴于此，本文设计了全新的计算方法（m⁶ATEpre），预测特定细胞系中调控翻译效率的m⁶A甲基化修饰位点。方法 m⁶ATEpre整合多组学数据，如MeRIP-seq数据、PAR-CLIP数据和Ribo-seq数据，针对含m⁶A修饰位点的序列提出了全新的特征表示策略，并采用自动编码器有效获取嵌入特征信息。结果 在HeLa细胞系测序数据集的各种实验结果表明，相比其他方法，m⁶ATEpre在调控翻译效率的m⁶A位点预测方面取得了较高的预测性能。生物信息分析表明，在HeLa细胞系中调控翻译效率的m⁶A位点具有特异性，并揭示了YTHDF1介导的m⁶A甲基化调控翻译效率的潜在机制。此外，在HEK293T细胞系测序数据集中进行预测和分析，发现调控翻译效率的m⁶A位点具有细胞特异性。结论 m⁶ATEpre是一个及时有效的计算工具，有助于对m⁶A甲基化调控翻译效率机制的理解。m⁶ATEpre的代码和相关数据可以从https://www.scidb.cn/s/bAZZFr获取。]]> 2026/3/17 15:08:44 3true 目的 针对光声断层成像（PAT）系统中因制造与装配误差导致超声换能器阵列单元实际位置偏离理论位置，进而引发图像伪影和分辨率下降的问题，本研究旨在建立一种精确校准方法以解决该问题并提升图像质量。方法 开发了一种基于非线性最小二乘估计的阵列单元空间位置精确校准方法，用于确定超声阵列单元的真实位置。此外，为减轻声透镜内声速不均匀性导致的图像伪影，提出了一种相位补偿算法，用于校正声波传播过程中引入的相位误差。利用定制的凹面弧形阵列，通过仿体成像与活体动物实验对所提出的方法进行了验证。结果 实验结果表明，经过阵列位置校准和相位补偿后，弧形阵列在焦点处的横向分辨率达到95 μm，相比未校准的情况下改善明显，且通过补偿信号质量显著降低了图像伪影。结论 本研究通过消除系统性几何与相位误差，显著提升了PAT系统在宽成像范围内的图像保真度与空间分辨率的一致性，为高分辨率临床光声医学影像诊断提供了可靠的技术保障。]]> 2026/2/10 11:03:13 2true 目的 旨在构建并验证一种基于深度学习的多维特征融合风险评估算法模型，以提升早期识别骨质疏松和预测骨折风险能力。方法 纳入来自多组数据库的12 856名受试者数据，通过多模态深度学习框架，整合骨密度测量值、骨微结构参数、骨转换标志物、临床风险因素、基因标记物和体感数据等多维特征，构建风险评估算法模型，并在独立外部数据集上评估算法性能。结果 在测试集上，该算法预测骨质疏松症的准确率为89.7%，敏感度为87.5%，特异度为91.2%，受试者工作特征曲线下面积（AUC）为0.936（95%置信区间（CI）：0.927~0.945），简化模型AUC为0.917（95%CI：0.905~0.931），优于传统FRAX^?模型（AUC=0.842，95%CI：0.829~0.855），在独立外部验证集上AUC为0.918（95%CI：0.905~0.931）。特征重要性分析显示，骨密度、骨小梁分离度、I型胶原C端肽、平衡参数和特定基因多态性是重要的预测因素。亚组分析显示，该算法在不同性别、年龄和种族人群中均表现良好。结论 基于多维特征融合算法模型可显著提高骨质疏松风险评估的准确性和个体化水平，具有良好的泛化能力和临床应用前景，有望为临床实践提供更精准的决策支持工具。]]> 2025/12/2 16:19:41 1true