摘要:细胞迁移 (cell migration) 在机体生命活动中的胚胎发育、免疫防御、损伤修复、血管新生以及肿瘤转移等许多重要生理和病理过程中发挥核心作用 . 越来越多的证据表明，细胞迁移中处于极性分布的细胞膜离子通道和离子转运体可以通过调节细胞体积变化协助细胞的移动 . 然而细胞膜水转运机制在这一过程中的作用尚未阐明 . Saadoun 等 2005 年 4 月发表于《自然》杂志上的一项研究发现细胞膜水通道蛋白在细胞迁移中发挥重要作用 . 为细胞迁移的分子机制增加了新的内容，也为水通道基因功能研究开启了一个新的领域 .

摘要:治疗性克隆为很多疾病的治疗提供了新的策略 . 以韩国科学家最近在这一领域的突破性进展为基点，回顾近年来这一领域的主要进展，着重对“核移植重编程”以及“人胚胎干细胞的建系，扩增和分化”这两个治疗性克隆策略中的关键问题进行评述，并对治疗性克隆的发展前景和目前所遇到的挑战进行了展望 .

摘要:神经限制性沉默元件 (NRSE) 是一段长度为 21~23 bp 的保守 DNA 序列，存在于许多神经元特异表达基因的转录调控区中，神经限制性沉默因子 (NRSF) 能特异性结合到 NRSE dsDNA 上，并通过其 N 端和 C 端阻遏结构域分别连接共阻遏蛋白 Sin3A/B 和 CoREST ， Sin3A 招募 HDAC 对组蛋白进行去乙酰基化修饰， CoREST 则作为平台蛋白招募特异的“沉默组件”，以此维持基因沉默 . 最近的研究显示， NRSE dsRNA 能在转录水平与 NRSF 蛋白直接作用，而不是作为 siRNA 或 miRNA 在转录后水平启动神经元特异性基因的表达 .

摘要:Fox 蛋白家族是 2000 年才发布统一命名的蛋白质家族 . 由于其在生物体内所起的重要作用，已迅速成为生命科学研究的热点 . 目前，已经发现其家族成员有 100 多种，其中， FOXO 亚家族在动物细胞的凋亡中起重要作用 . 细胞凋亡与动物的长寿、繁殖、代谢、肿瘤发生及免疫有重要关系，对 Forkhead (Fox) 蛋白分子的命名进行了回顾、对其分类与结构特征进行了总结，并重点对 FOXO 的化学修饰、活性调节及其在细胞凋亡和肿瘤发生中的作用进行了综述 .

摘要:Palladin 是肌动蛋白结合蛋白家族的新成员，广泛分布于平滑肌、中枢神经系统和胚胎的各种组织中，其主要的生物功能是参与构建肌动蛋白骨架系统，并在细胞骨架的动态变化中起作用 . 在肌动蛋白细胞骨架中 palladin 与 alpha- 辅肌动蛋白共存在 . 目前发现， palladin 在决定细胞的形态和迁移或运动等过程中起关键的作用 . 在转移性癌细胞和中枢神经受损伤后的星形胶质细胞中，都有 palladin 的特殊表达 . Palladin 的表达使星形胶质细胞形成了神经胶质疤痕 .

摘要:为研究蝙蝠葛碱 (dauricine ， Dau) 拮抗缓激肽 (bradykinin ， BK) 诱导的 Alzheimer 样钙稳态失衡及细胞骨架蛋白异常磷酸化的作用，采用双波长荧光分光光度计测定细胞内钙离子浓度 ([Ca2+] i) ，用 MTT 法检测细胞代谢水平，用免疫组织化学方法观察 tau 蛋白表达和磷酸化 . 结果表明，Dau (3 μmol/L ， 6 μmol/L) 可抑制 BK 诱导的 [Ca2+]i 升高，保护 BK 引起的神经元代谢降低，拮抗 BK 引起的 tau 蛋白异常磷酸化和聚集 . 结果提示： Dau 可拮抗 BK 诱导的 Alzheimer 样钙稳态失衡及细胞骨架蛋白异常磷酸化的作用 .

摘要:NGX6 是一个新克隆的鼻咽癌候选抑瘤基因 . 为进一步研究其功能，在构建 NGX6 的真核表达载体 NGX6/pcDNA3.1(+) 基础上，通过脂质体转染方法将 NGX6 基因导入鼻咽癌细胞株 SUNE-1 的亚株 5-8F 细胞 ( 具高成瘤高转移潜能 ) 中，并用 RT-PCR 和 RNA 印迹鉴定，建立了稳定表达 NGX6 基因的 5-8F 细胞系 . 借助细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验对转染细胞的生物学行为进行了检测，同时采用包含 1 176 个与肿瘤学相关的基因 cDNA 微阵列，分析了 NGX6 基因转染对 5-8F 细胞基因表达谱的影响 . 结果显示：转染了 NGX6 基因的 5-8F 细胞的生长速度明显减慢，在软琼脂中集落形成率较对照组显著下降 (P < 0.05) ，发现 NGX6 基因的转染能够上调 5-8F 细胞中 p19 、 catenin α 2 、 desmoglein 1 等基因的表达，同时下调 EphB4 、 TIE2 、 vitronectin 等基因的表达 . 综上所述， NGX6 基因可以抑制 5-8F 细胞的恶性生物学行为，并影响一些与细胞周期、细胞黏附和血管生成有关的基因的表达 . 上述结果为鼻咽癌转移分子机制的阐明提供了重要的线索 .

摘要:利用重叠 PCR 技术将干扰素 (interferon ， IFN) 基因与转铁蛋白 N 端半分子 (transferrin N-terminal half-molecule ， TFN) 基因在体外融合，融合基因和单独的 TFN 基因分别克隆至真核表达载体 pPIC9 中，转化毕赤酵母 GS115 ，得到的转化子经诱导表达后在发酵上清中均获得了表达 . 经 SP Sepharose Fast Flow 阳离子交换层析、 Phenyl Sepharose Fast Flow 疏水层析纯化，获得了纯度大于 93 ％的重组融合蛋白 IFN-TFN 和纯度大于 95 ％的重组 TFN 样品 . 生物活性实验证明融合蛋白 IFN-TFN 具有抗病毒活性 . 铁饱和实验证明融合蛋白 IFN-TFN 和单独的 TFN 具有相同的铁结合能力 . 因而 TFN 可望作为 IFN 的天然运输载体 .

摘要:以催化吲哚产生的靛蓝在 630 nm 处具有特殊的吸收峰为高通量筛选指标，将来源于 Bacillus megaterium 的细胞色素 P450BM-3 单加氧酶的基因序列用易错聚合酶链式反应进行定向进化，通过多轮突变，在原有的能产靛蓝的高活力突变酶的基础上成功获得了三个高于亲本酶的突变酶，突变酶的酶活分别是亲本酶的 6.6 倍 (hml001) ， 9.6 倍 (hml002) 和 5.3 倍 (hml003) ，并对突变酶的动力学参数进行了分析 . 突变酶 DNA 测序的结果表明， hml001 含有一个有义氨基酸置换 I39V ， hml002 含有三个有义氨基酸置换 D168N ， A225V ， K440N ， hml003 含有一个有义氨基酸置换 E435D ，这些突变位点有些远离底物结合部位，有些位于底物结合部位 .

摘要:趋化因子受体 5 (CCR5) 是 HIV-1 与宿主细胞结合的辅助因子之一，其功能缺失或被 CCR5 拮抗剂封闭则会阻止 HIV-1 感染细胞 . 为得到与 CCR5 特异结合的肽类拮抗剂，采用噬菌体展示技术，以稳定表达 CCR5 的 CHO 细胞 (CHO/CCR5) 作为靶标，通过噬菌体随机 12 肽库筛选与 CCR5 特异结合的多肽；经过四轮筛选后，挑选 20 个阳性噬菌体克隆进行测序，从中得到 11 个含有 AFDWTFVPSLIL 序列的小分子肽 . 含该序列的噬菌体能与抗人 CCR5 单抗 (2D7) 竞争性结合 CCR5 ，且合成肽 AFDWTFVPSLIL 对趋化因子 RANTES 与 CHO/CCR5 的结合具有明显的抑制作用，初步证明该小肽与 CCR5 具有特异性结合作用 .

摘要:半乳糖 -3-O- 磺酰基转移酶 -2 (GP3ST) 是一个新近克隆的磺酰基转移酶，其生物学功能还不明确 . GP3ST 在肿瘤细胞和肿瘤组织中差异性表达，以及催化所形成的磺酰化糖链与肿瘤转移潜能密切相关，是首次研究报道 . 在高转移潜能的肿瘤细胞中， GP3ST 及其产物的表达明显高于低转移潜能的细胞，在伴有淋巴结转移的喉癌组织中， GP3ST 的高表达率也明显高于无淋巴结转移的喉癌组织 (P < 0.05) ，而且在喉癌组织中的表达也明显高于相对应的癌周组织 . 利用 RNAi 技术下调肝癌细胞 SMMC7721 中 GP3ST 的表达，观察到稳定转染 RNAi/GP3ST 的细胞形态发生明显的改变，由多边形转变为近似梭形，与 TNF-α刺激后的 HUVEC 和 sL- 选凝蛋白的黏附能力下降 . 进一步研究表明， GP3ST 表达的下降能抑制细胞中的整合蛋白αV 亚基的表达，而β3 亚基表达无改变，同时在高转移细胞株中αV 的表达也明显高于低转移细胞株，与 GP3ST 表达的差异性相一致 . 上述结果充分说明 GP3ST 催化合成的糖链可通过调节肿瘤细胞的黏附性和影响整合蛋白αV 亚基的表达参与肿瘤转移 .

摘要:磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶 (PHGPx) 是谷胱甘肽过氧化物酶 (GPx) 家族的重要一员，是目前已知能直接保护生物膜免受过氧化损伤的唯一酶类 . 此前的研究表明，萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因 (RsPHGPx) 编码一个有生理功能的过氧化物酶 , 并且 RsPHGPx 基因的表达可能受发育和环境胁迫信号的复杂调控 . 要深入了解该基因的表达调控机制首先必须阐明 RsPHGPx 基因的结构及其上游调控序列 . DNA 印迹表明萝卜 RsPHGPx 基因以单拷贝的形式存在于基因组中 . 以基因组 DNA 为模板，通过常规 PCR 与染色体步行相结合的方法克隆到了一段 3.3 kb 长的 RsPHGPx 基因组序列 . 分析发现，该基因由 7 个外显子和 6 个内含子组成，所有内含子的剪切位点均符合真核生物 GT-AG 规则 . 另外还发现该基因的上游基因是生物素合成酶基因；位于 RsPHGPx 基因上游的调控序列只有不足 300 bp. 这些结构特征与拟南芥 AtGPX3 基因极其相似 . 顺式作用元件的数据库搜索发现 RsPHGPx 基因的上游调控序列含有多个响应激素 ( 如 E-Box 和 W-Box) 、胁迫 ( 如转录因子 MYB 和 MYC 的结合位点 ) 和光 ( 如 Box Ⅱ和Ⅰ -Box) 信号的元件 . RNA 印迹分析表明 RsPHGPx 基因的表达受到脱落酸 (ABA) 和连续光照 ( 在黄化苗中 ) 处理的负调控，受到冷胁迫 (4℃ ) 的正调控，这暗示了预测的顺式作用元件的调控作用 . 然而，除草剂 paraquat 对该基因表达的正调控作用，暗示了某些与氧化胁迫相关的未知元件的存在 . 这些结果进一步印证了 RsPHGPx 基因的表达受发育和环境胁迫信号复杂调控的推测 . 这是迄今为止首个关于植物 PHGPx 基因结构和上游调控序列的系统报道，为今后全面认识植物 PHGPx 基因的表达调控机制奠定了必要基础 .

摘要:使用分泌型表达载体，实现了重组炭疽毒素受体胞外区 (rATR(CMG2)-EXCELL) 在毕赤酵母 KM71H 培养物上清中的分泌表达 . 表达量约占培养物上清总蛋白质的 20%. 经过螯合柱初步纯化，每升诱导培养物可获得约 1 mg 电泳纯的 rATR(CMG2)-EXCELL. 体外与配基 PA 结合试验和细胞保护试验显示， rATR(CMG2)-EXCELL 具有很好的生物活性 . rATR(CMG2)-EXCELL 的成功表达为今后研究炭疽毒素受体的作用机理、发展新型炭疽治疗药物打下基础 .

摘要:采用时间分辨荧光免疫分析 (TRFIA) 技术建立快速的高灵敏度的赭曲霉毒素 A (OTA) 全自动检测方法 . 将 OTA-BSA 作为免疫分子免疫 Balb/c 小鼠， OTA-KLH 为筛选用抗原包被板，用间接酶联免疫分析 (ELISA) 法筛选出专一针对 OTA 的高效价的阳性克隆 3G9 ，用杂交瘤细胞制备抗 OTA 单克隆抗体 . 用 OTA-BSA 包被 96 孔板为固相抗原，与游离 OTA 共同竞争有限的抗 OTA 单克隆抗体，以稀土离子 Eu3+ 标记的羊抗鼠抗体进行示踪，采用间接竞争免疫分析方法在解离增强荧光免疫分析体系中建立 OTA-TRFIA. 该方法的灵敏度为 0.03 μg /L ，测量范围为 0.03 ~1 000 μg /L ，批内和批间变异分别为 3.7% 和 5.3% ，平均回收率为 94.2% ，与赭曲霉毒素 B 的平均交叉反应为 3.7% ，与黄曲霉毒素 B1 、 牛血清白蛋白和苯基丙氨酸无交叉反应，说明抗体的特异性很好 . 8 条不同时间进行的间接竞争 OTA-TRFIA 的效应点均值 ED80 、 ED50 、 ED20 分别为 (0.33±0.02) μg /L、 (1.44 ±0.08) μg /L 和 (5.22 ± 0.12) μg /L ，说明方法的稳定性好，样品经 TRFIA 和 ELISA 试剂盒同时检测 OTA ，两者的相关系数为 0.925 ，结果相符 . 研究表明， OTA-TRFIA 是目前报道的 OTA 检测中最灵敏的方法，该分析方法稳定性好，可测范围宽，具有很好的应用前景 .

摘要:为了考察飞行时间质谱基因分型方法 (MALDI-TOF) 的位点分型成功率和分型结果质量的关系，分析了 96 个 SNPs 位点的近 10 000 个基因分型数据 (用 MALDI-TOF “4 重”实验方法检测 ). 结果显示，位点分型成功率和分型结果的质量显著正相关 . 分型成功率低于 82% 的 SNP 位点，其高质量结果占的比例开始逐渐降低 . 提示 82% 的分型成功率可以作为衡量分型结果质量的数据点 . 为了进一步提高通量并降低成本，在 MALDI-TOF “ 4 重”实验方法的基础上，发展了两种“准 8 重”实验方法 . 用新的实验方法检测了 95 个样本的 32 个 SNPs 位点 . 结果显示“混合准 8 重”实验方法与“ 4 重”实验方法相比无显著差异，而“复点准 8 重”的结果差于“ 4 重”分型方法 .

摘要:采用双向电泳 - 质谱技术筛选肝癌特异的血清蛋白标记物，以利于肝癌的早期诊断和治疗 . 肝癌、肝炎和正常三组各 20 例血清先采用超声、高丰度蛋白去除、脱盐预处理以优化双向电泳，图像分析三组血清图谱寻找差异点，基质辅助激光解吸飞行时间质谱对差异点进行鉴定 . 结果显示，通过样品预处理，血清上样体积平均增加 3 ～ 4 倍，参考胶点数由 218 个增至 332 个，白蛋白和免疫球蛋白明显减弱，水平条带明显减少 . 图谱比较所得 37 个差异点，经鉴定为 7 种蛋白 . 与正常组比较，转铁蛋白、甲状腺素运载蛋白在肝炎和肝癌组低表达，α-1 抗胰蛋白酶、凝聚素、铜蓝蛋白、触珠蛋白在肝炎和肝癌组均高表达 . α-1 抗胰蛋白酶在肝癌组较肝炎组高表达，而热休克蛋白 27 只在肝癌组表达 . 上述结果提示，双向电泳-质谱技术可发现肝癌发生发展过程中血清蛋白表达谱质或量的变化，从而为肝癌的早期诊断及治疗奠定基础 .