摘要:对于不存在某单一基因位点经典的孟德尔显性或隐性遗传模式的疾病，称为复杂疾病，肿瘤是最常见的类型之一 . 目前，以连锁和相关分析为基础的功能克隆、功能候选克隆、定位克隆、定位候选克隆、系统生物学等复杂疾病易感基因定位策略逐渐发展起来 . 其中，系统生物学策略由于整合了从 DNA 到蛋白质的各个层面的信息，对复杂疾病基因调控网络做出了良好诠释，使其成为最有潜力的方法之一 . 目前，虽然已有近 100 种肿瘤 / 遗传性癌综合症的易感基因被鉴定出来，但未来的复杂疾病易感基因定位工作仍充满了挑战 .

摘要:溴区结构 (bromodomain) 是近年来发现的广泛分布于多种生物中的一种高度保守的结构域，溴区结构蛋白通过参与信号依赖性的基因转录调控而广泛参与细胞内重要的生命活动 . BRD7 基因是 1999 年克隆的一个新的 bromodomain 基因， GenBank 登录号为 AF152604 或 AF152605. eMotif 分析表明， BRD7 蛋白包含多个磷酸化位点和一个保守 bromodomain 功能域， Blast 显示 BRD7 蛋白与人的 Celtix-1 及鼠的 bromodomain 蛋白 BP75 具有高度的同源性 . 利用转基因技术已证实，在鼻咽癌细胞系 HNE1 中过表达 BRD7 基因可以抑制其细胞生长和细胞周期 G1-S 的进程，并部分逆转鼻咽癌细胞 HNE1 的恶性表型 . 为了全面地揭示 BRD7 基因的细胞内生物学功能，深入了解 BRD7 基因的细胞内整体信息流向，中南大学肿瘤研究所细胞遗传室已从上、中、下游三个不同层面对 BRD7 基因的功能研究展开了初步的探索 .

摘要:硫酸乙酰肝素酶是迄今为止在哺乳动物细胞中发现的唯一可以剪切胞外和细胞表面硫酸乙酰肝素多糖侧链的葡糖苷酸内切酶 . 在恶性肿瘤、炎症细胞以及胚胎组织等具有侵袭性组织中有较高的表达，肿瘤病人病灶部位的肝素酶 mRNA 表达量越高，病人存活期越短 . 在正常生理条件下，肝素酶基因及其表达蛋白的活性受到启动子甲基化、变化转录剪切、转录因子、蛋白质加工、 pH 环境以及免疫因子释放等多种内源因素的精确调控，以防止机体非正常恶性变化的发生 . 目前就有关乙酰肝素酶基因表达调控、酶活性的调控机制作详尽的专述 .

摘要:为了建立一种能够获得高纯度成年大鼠海马神经前体细胞 (HPCs) 的体外贴壁培养方法，并鉴定 HPCs 上是否存在功能性 L- 型钙通道，分离 Wistar 成年大鼠海马组织，制成单细胞悬液，利用无血清培养技术，在添加碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF) 、表皮生长因子 (EGF) 、 N2 和 B27 supplement 的 DMEM/F12 培养液中进行培养 . 连续传代，采用细胞免疫荧光法对第六代细胞进行鉴定，呈巢蛋白 (nestin) 阳性的细胞可达 99.9 ％ . 把培养高纯度的细胞在分化培养基中诱导分化 14 天后，表现为神经元和星形胶质细胞的形态，且分别呈Ⅲ型β-微管蛋白 (Tuj1) 阳性和胶质纤维酸性蛋白 (GFAP) 阳性 . 细胞免疫荧光和免疫印迹结果显示， HPCs 表达 L- 型钙通道的 Cav1.2α1C 和 Cav1.3α1D 亚单位，共聚焦钙成像证明了功能性 L- 型钙通道的存在，并且利用全细胞膜片钳技术记录到了 L- 型钙电流 . 以上结果表明成年 Wistar 大鼠的海马 HPCs 可表达功能性的 L- 型钙通道 .

摘要:为进一步研究肌动蛋白在杆状病毒感染晚期的作用，利用 Bac-to-Bac 系统构建了表达多角体基因、肌动蛋白与绿色荧光蛋白融合基因的重组病毒 vAc-ph/70GA ，同时构建对照病毒 vAc-ph. 实验发现，重组病毒 vAc-ph/70GA 感染 Sf9 细胞后能持续表达肌动蛋白，但不能形成多角体， vAc-ph 则能形成多角体 . SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 显示， vAc-ph/70GA 感染晚期，细胞内没有多角体蛋白的表达； RT-PCR 的结果进一步表明多角体基因的转录被抑制 . 肌动蛋白的表达并没有影响 vAc-ph/70GA 对细胞的感染力 . 结果表明，晚期表达的外源肌动蛋白抑制了多角体基因的转录和表达，从而导致多角体不能正常产生 .

摘要:Wnt 信号通路在造血干/祖细胞自我更新的过程中发挥至关重要的作用 . 纯化的 Wnt3a 蛋白可以实现造血干/祖细胞的扩增 . 通过病毒转染原代小鼠骨髓基质细胞，建立转基因滋养层细胞 . 通过共培养对转基因滋养层细胞扩增 CD34+ 造血干/祖细胞的作用进行了研究 . 实验结果显示 , 与普通滋养层加细胞因子组相比，经转基因滋养层加细胞因子组培养的 CD34+造血干/祖细胞集落形成能力 (CFC) 是其 (1.55±0.06) 倍；混合集落形成能力是其 (1.95±0.26) 倍；高增殖潜能集落形成能力 (HPP-CFC) 是其 (1.45±0.40) 倍； LTC-IC 活性是其 (3.83±0.86) 倍 . 结果表明，转基因滋养层细胞通过分泌具有天然活性的 Wnt3a 蛋白能在体外有效地扩增造血干/祖细胞的数量 .

摘要:为了研究 BRD7 基因对鼻咽癌细胞 CNE1 的影响，通过脂质体转染方法，将 BRD7 基因导入 NPC 细胞株 CNE1 细胞中 . 通过细胞生长曲线发现该基因能够抑制 CNE1 细胞的生长 . 为了探讨可能的作用机制，进而采用蛋白质组技术研究该基因对鼻咽癌蛋白质表达谱的影响，从而研究该基因在 CNE1 中的地位和作用 . 通过对过表达 BRD7 基因后鼻咽癌细胞系 CNE1 的蛋白质表达谱改变的研究，鉴定出 19 个差异表达蛋白，这些蛋白质包括 : BCCIP(BRCA2 and CDKN1A(p21(Waf1/Cip1)) ， FHL2(four and a half LIM domains 2) ， Chloride channel regulatory protein ； Hin-1(high-in-normal-1) ， WISP-1(connective tissue growth factor related protein) ， SREC-4(scav-enger receptor expressed by endothelial cells-2) ， folate receptor. 这些差异蛋白涉及到基因表达调控、细胞黏附等众多的事件 . 从另一个侧面研究了 BRD7 基因与鼻咽癌的关系，扩展了 BRD7 基因的研究范围，并进一步充实了该基因做为鼻咽癌候选抑瘤基因的证据 .

摘要:HER2/neu 基因在肿瘤中的过度表达使其成为许多肿瘤的标志分子 . 为了增加过度表达 HER2/neu 的肿瘤细胞对肿瘤坏死因子 (TNF) 的敏感性和提高 HER2/neu 抗体的肿瘤杀伤效应，将抗 HER2/neu 单链抗体 C6.5 与人肿瘤坏死因子 hTNF-α融合，构建了 scFvC6.5-hTNF-α融合蛋白，完成了重组蛋白在大肠杆菌中的表达，产率为 400 μg/L 菌液 . 经过亲和层析和柱复性，融合蛋白的纯度达 95％以上 . ELISA 试验表明， scFvC6.5-hTNF-α能够特异结合 HER2/neu 阳性卵巢癌细胞 SKOV-3 和乳腺癌细胞 MCF-7 ，而不结合 HER2/neu 阴性的黑色素瘤细胞 A375. MTT 试验表明， scFvC6.5-hTNF-α能够选择性地杀伤 SKOV-3 和 MCF-7 细胞，而不影响 A375 细胞的生长 . 这种肿瘤细胞特异性杀伤作用提示该免疫毒素具有肿瘤靶向治疗的潜在应用价值 .

摘要:根据 NCBI GenBankTM 中登录的 2 个牛抗体重链可变区 J 基因 (JH) ( 序列号为 AY158087 ， AY149283) 的序列不同之处设计 PCR 引物，能从同一个体的 Holstein 牛基因组 DNA 中扩增得到与以上 2 个基因分别相同的序列，证明这 2 个 JH 基因的差异不是由于牛个体或品种不同引起的 . 提取牛脾脏总 RNA ， RT-PCR 扩增 IgM cDNA ，测序结果显示：序列号为 AY149283 的 JH 基因中第六外显子 JH6 是一个功能基因，它可以编码牛 IgM 的部分 CDR3 区和完整的 FR4 区，从 2 种 IgM cDNA 克隆的测序结果可以看出，其恒定区序列分别与序列号为 U63637 和 AY230207 的 2 种抗体重链恒定区μ基因 (Cμ) cDNA 序列相同 . PCR 扩增 JH-Cμ序列，测序结果表明：序列号为 AY158087 的 JH 基因是同以上 2 种 Cμ基因分别串连在一起的 ( 序列号分别为 AY230207 和 U63637). 以上结果证明：序列号为 U63637 和 AY230207 的 2 个 Cμ基因分别与 AY149283 的 JH 基因串联在一起，都能够参与牛 IgM 的产生，它们与 AY158087 的 JH 基因共同存在于同一个体 Holstein 牛胚系基因中 .

摘要:TGIF (TG-interacting factor) 是 TGF- β信号传导通路的抑制分子， 而 TGF-β早期抑制肿瘤生长，晚期促进肿瘤浸润与转移，但 TGIF 在肿瘤发生中的作用尚不清楚 . 将 TGIF 基因稳定转染胃癌细胞株 SGC-7901 ，采用 MTT 法、平板克隆形成试验、流式细胞术和裸鼠成瘤试验探讨 TGIF 对胃癌细胞生物学行为的影响，通过免疫组织化学分析裸鼠瘤组织基质金属蛋白酶 (matrix metallo proteinases, MMP) MMP2 、 MMP9 和血管内皮生长因子 (vascular eudothelial growth factor, VEGF) 的表达，通过 ELISA 和明胶酶谱试验分别分析 TGIF 转染细胞上清液中 VEGF 和活性 MMP2 与 MMP9 的含量变化 . TGIF 对 SGC-7901 细胞的生长、细胞周期分布和克隆形成率无影响 . TGIF 转染细胞接种裸鼠后无癌栓形成，但对照组有癌栓形成，且其瘤组织 MMP9 和 VEGF 的表达明显低于对照组，但 MMP2 在 3 组间的表达无差别 . TGIF 基因转染细胞、 PcDNA3.1 转染细胞和 SGC-7901 细胞上清液中 VEGF 的浓度分别为 (635 ± 20.3) ng/L 、 (780±25.4) ng/L 和 (791±23.9) ng/L ， TGIF 转染细胞 VEGF 的含量明显低于对照组细胞 (P <0.01) ， TGIF 转染细胞上清液中活性 MMP9 的含量明显低于对照组 . 尽管 TGIF 能部分拮抗 TGF-β1 介导的生长抑制和细胞周期阻滞作用，但它并不能使胃癌细胞的生物学行为恶化，相反 TGIF 通过下调 VEGF 和 MMP9 的表达降低胃癌细胞的浸润与转移能力 .

摘要:采用 550 nm 内源信号光学成像 (optical intrinsic signal imaging ， OISI) 监测左侧大脑中动脉栓塞 (middle cerebral artery occlusion ， MCAO) 局灶性脑缺血大鼠顶叶皮层 . MCAO 后 4 h 内，观测到一系列自发扩散性抑制 (spreading depression ， SD) 波 (10.3±4.6) 次 . 前 2 h 内的 SD 波通常会侵袭整个左侧顶叶皮层，但光信号有明显的区域差异 . 后 2 h 内的 SD 波局限于顶叶皮层中央区域，且传播面积逐次减少；旁侧区域光强基线逐步升高， 4 h 时，反射光强升高 (8.4±1.2) %. 随后 TTC 染色证明上述旁侧区域已经梗死 . 实验表明光学成像为确定缺血半暗带并监测其动态发展提供了一种有效方法 .

摘要:Ca2+/H+ 反向转运体作为一类 Ca2+外向转运器，在植物的营养和信号转导中起着非常重要的作用 . 克隆了水稻 Ca2+/H+ 反向转运体基因 OsCAX3 ，序列分析表明 OsCAX3 具有 11 个跨膜区，其中在第 6 和第 7 个跨膜区之间有一个 17 个氨基酸组成的酸性基序 (acid motif) ，功能互补实验证明 OsCAX3 具有转运 Ca2+ 的功能，并且其 N 端 26 个氨基酸序列对转运 Ca2+ 具有一定的抑制作用 . RT-PCR 分析表明 OsCAX3 的表达受到外源 Ca2+ 的诱导 . 利用 PSORT prediction 进行亚细胞定位分析，和利用 OsCAX3-GFP 融合蛋白瞬时表达分析证明， OsCAX3 定位于细胞质膜 . 以上结果表明， OsCAX3 是一种定位于细胞质膜上的 Ca2+/H+ 反向转运体 .

摘要:为建立一种新颖、简便的荧光实时 RT-PCR 相对定量方法，根据实时定量标准曲线，推导出相对定量基因表达的公式 . 公式显示相对表达指数只与 CT 值和标准曲线的斜率相关 . 构建标准曲线的标准品需要通过克隆和体外转录获得，实验过程繁琐 . 当人为成比例增减标准品各个稀释度的具体拷贝数时，标准曲线的斜率并不改变，说明标准曲线斜率与标准品的具体拷贝数无关 . 因此，新的相对定量方法可以用任何一个待测样品的总 RNA ( 或 cDNA) ，经系列稀释后作为标准品，来构建相对定量标准曲线，获得斜率 . 与绝对定量法比较，新方法获得了基本相同的斜率和非常一致的定量结果 ( 差异小于4%) ，而传统的 2 -ΔΔCT法却表现出较大的定量误差 . 这些结果表明，新的相对定量方法是一种简便、准确和高效的定量基因表达的方法 .

摘要:为简化转染细胞的分选过程，构建了一个含有细胞表面标志 CD34 基因的双顺反子载体 p3.1-IRES-CD34. 利用来源于脑心肌炎病毒 (EMCV) 的内部核糖体进入位点 (IRES) ，实现目的基因与 CD34 基因的共同表达 . 将绿色荧光蛋白 (EGFP) 作为目的基因插入载体的多克隆位点，然后转染 NIH-3T3 细胞，通过免疫磁珠分选 (MACS) 方法来分选细胞 . 结果表明：对于转染细胞，均可实现快速分选 ( 瞬时转染细胞约 48 h ，稳定转染 10~15 天 ) ，并且获得较高纯度 (95% 以上 ) 的表达目的基因细胞 .

摘要:利用日本千叶重离子医用加速器 HIMAC 提供的碳离子束，对人类唾液腺细胞 (HSG) 在剂量率为 0.5 Gy/h 的低剂量率条件下进行了辐照，运用标准的克隆形成法得到了 3 种不同剂量平均线性能量转移 (LET) 碳离子束辐照 HSG 细胞的剂量存活效应 . 与先前 HSG 细胞在治癌剂量率 (1~5 Gy/min) 下对相近剂量平均 LET 碳离子束辐照的剂量存活效应数据相比， HSG 细胞对高 LET 碳离子束辐射表现出明显的剂量率效应 . 为在相同条件下得到碳离子束对 HSG 细胞的相对生物学效应 (RBE) ，利用 60Co-γ射线在剂量率为 0.5 Gy/h 的条件下辐照了 HSG 细胞，得到该细胞系对低 LET 射线响应的剂量存活效应 . 与先前在治癌剂量率下得到的 RBE 值相比，低剂量率条件下得到的 RBE 值总体减小 . 由实验发现的剂量率效应及低剂量率条件下 RBE 值的减小，表明由高 LET 碳离子束造成的辐射损伤在低剂量率条件下也存在着显著的修复效应 . 据此，对辐射造成细胞致死的原因进行了探讨 .