摘要:蛋白质翻译后修饰是调节蛋白质生物学功能的关键步骤之一，是蛋白质动态反应和相互作用的一个重要分子基础，同时，它也是细胞信号网络调控的重要靶点．目前，蛋白质翻译后修饰已经成为国际上蛋白质研究的一个极其重要的热点．在原核生物生命活动中，蛋白质的翻译后修饰具有十分重要的作用，如参与细胞信号传导、物质的代谢、蛋白质的降解、致病微生物的致病过程等． 综述了经典原核生物蛋白质翻译后修饰的种类、机制和功能，同时介绍了最近发现的原核生物的全局性乙酰化修饰以及结核分枝杆菌中类泛素化修饰．

摘要:跨损伤DNA合成(translesion DNA synthesis，TLS)是细胞应答DNA损伤时的一种耐受机制，它利用特异的低保真度的DNA聚合酶直接在损伤的对面合成DNA，使复制得以延续．TLS分为无错旁路和易错旁路两种途径，其中易错旁路途径是DNA损伤诱发基因组突变的主要机制．另外TLS也与肿瘤细胞耐药性相关．在体内执行TLS功能的DNA聚合酶主要是DNA聚合酶Y家族的成员，其中包括聚合酶kappa (Polκ)．就TLS的特性，哺乳动物Polκ的结构及催化活性、表达及调控、蛋白质相互作用及其在TLS中可能的调控机制和体内功能等方面做一阐述．

摘要:在不同生物体，如病毒、植物、真菌和哺乳动物中，几百种含Kelch构象的蛋白质已经被鉴定出来了，但大部分此类蛋白质的功能未知．而在哺乳动物中，已经有接近41种Kelch蛋白被报道．这些蛋白质在体内参与了很多重要的生理过程．根据Kelch蛋白的域结构不同，把这些哺乳动物中的Kelch蛋白分成了三类(BTB/Kelch 蛋白，只含有Kelch结构域的蛋白质，及含其他结构域的Kelch蛋白)，并把其已知的功能大致划分为5类：介导蛋白质-蛋白质的相互作用、参与蛋白质降解、信号传导、胞外功能及其他等．另外还认为Keap 1的Kelch结构域其晶体结构应该是研究哺乳动物Kelch蛋白的一个很好的参考模型．

摘要:目前肿瘤治疗主要使用放疗、药物化疗，具有很大的毒、副作用，研发肿瘤靶向性药物是未来发展趋势．成人T细胞白血病(adult T cell leukemia，ATL)是一种由HTLV-1病毒引起的人恶性CD4 T淋巴细胞白血病，目前尚无有效治疗方法．溶瘤性水泡性口炎病毒 (vesicular stomatitis virus，VSV)是一种肿瘤治疗病毒载体，利用HIV-1 囊膜蛋白gp160对野生型VSV病毒进行假型化改造，研制了具备人CD4受体靶向性的重组VSV病毒(VSV-ΔG-gp160G)，在对ATL病人肿瘤细胞进行的体外杀伤实验(ex vivo)中，显示出良好的应用前景．

摘要:研究甲胎蛋白(α-fetoprotein, AFP)对肝癌细胞内PTEN/AKT信息通路信号传递的影响．用Western blotting法分析全反式维甲酸(all trans retinoic acid，ATRA)处理人肝癌Bel 7402和HepG2细胞24 h后PTEN表达的变化．免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与PTEN相互作用．激光共聚焦显微镜观察AFP与PTEN在细胞共定位．RNA干扰(RNAi)技术抑制AFP表达，再用ATRA处理24 h后检测细胞内PTEN表达的变化，并分析蛋白激酶B(AKT)的磷酸化．用pcDNA3.1质粒和人afp基因连接构建表达AFP的载体(称为pcDNA3.1-afp)，然后转染到不表达AFP的人肝癌HLE细胞．结果显示，人肝癌Bel 7402和HepG2细胞均有PTEN的表达，ATRA(160 μmol/L)处理24 h后能促进这些细胞的PTEN表达．Co-IP技术研究发现AFP能与PTEN结合．共聚焦显微镜观察显示AFP与PTEN共定位于细胞浆．干扰AFP表达后，PTEN表达明显提高．抑制AFP表达后，ATRA能显著促进Bel 7402细胞内PTEN的表达，并能抑制AKT的磷酸化．转染pcDNA3.1-afp载体后，HLE细胞内有AFP表达，并与PTEN结合，且发现pcDNA3.1-afp载体能增加AKT的磷酸化[p-AKT(Ser473)]，对抗ATRA抑制HLE细胞增殖．研究的结论是：肝癌细胞内表达的AFP能与PTEN结合并抑制PTEN对AKT的去磷酸化作用，肝癌细胞内高表达的AFP能激活AKT信息通路．胞浆内的AFP是肝癌细胞耐受ATRA的重要因子．

摘要:在哺乳动物中发现一类新的能够抵制环境压力和保持组织完整性的应激蛋白．含有S100钙结合结构域的Cornulin (CRNN)是这类蛋白质之一，它在人类食管鳞状上皮细胞中高表达，而在食管鳞状上皮细胞癌中却低表达，它能抑制脱氧胆酸诱导的细胞损伤．S100结构域在CRNN的功能上具有重要作用．为了进一步探讨CRNN S100结构域的生物学特性，克隆、表达、纯化了该结构域，证明其折叠正确，适合用于生物物理和生物化学特性的研究．更为重要的是，通过核磁共振、凝胶过滤层析、超速离心、质谱和蛋白质交联分析，发现S100结构域具有钙依赖的多聚性质，而多聚体的形成更有利于保护细胞免受脱氧胆酸和乙醇的损伤．上述结果表明，S100结构域是CRNN发挥功能的关键结构域，它可以通过多聚化更好地保护细胞．该工作将进一步揭示S100结构域的生物学功能．

摘要:为探讨鼻咽癌候选抑癌基因STGC3中层粘连蛋白G结构域(LG domain)对CNE2生长增殖能力的影响，应用基因定点突变技术将该结构域缺失，亚克隆至真核表达载体上，并将野生型及突变型STGC3稳定转染人鼻咽癌细胞系CNE2，检测其对CNE2细胞系表型的影响，包括测定稳转细胞系的生长曲线、细胞集落形成能力和细胞周期分布．研究发现，LG domain的缺失明显降低了STGC3的肿瘤抑制活性，使受其稳定转染的细胞系恶性度显著增强，提示该结构域在STGC3发挥肿瘤抑制功能中起着重要作用．

摘要:中药臭灵丹中黄酮类化合物3, 5-二羟基-6, 7, 3′, 4′-四甲氧基黄酮(3, 5-hydroxy -6, 7, 3′, 4′-tetramethoxyflavone，HTMF)体外对多种肿瘤细胞有抑增殖作用，但机制尚未完全清楚．为探讨HTMF对人鼻咽癌CNE细胞凋亡的影响，用MTT法检测HTMF对CNE细胞株的增殖抑制率，倒置显微镜观察HTMF作用于CNE细胞后细胞形态变化，Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态的变化，流式细胞仪检测细胞的凋亡率，Western blot法检测凋亡蛋白Caspase3和Caspase9的变化，流式细胞仪检测线粒体跨膜电位(Δø_m)值的改变，并用JC-1荧光染料染色，激光共聚焦显微镜观察线粒体膜电位变化．结果显示，分离自臭灵丹的HTMF呈浓度、时间双重依赖性显著抑制CNE细胞的增殖，诱导细胞凋亡，引起线粒体膜电位下降及凋亡蛋白Caspase3和Caspase9的活化．提示：3, 5-二羟基-6, 7, 3′, 4′-四甲氧基黄酮对人鼻咽癌CNE细胞的生长有显著的抑制作用，并可通过降低线粒体膜电位激活Caspase9，进而活化Caspase3诱导CNE细胞凋亡．

摘要:选取糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)早期、中期、晚期以及正常移植供肾各15例，分别作为DN早期组、中期组、晚期组和正常对照组，利用各个病例的肾穿刺组织标本进行C3aR免疫组化染色，分析各组中高表达C3aR浸润细胞的数量和分布特点，及其与DN发生、发展的关系，利用连续切片、免疫荧光双套色染色、免疫电镜、及甲苯胺蓝染色等方法对DN患者肾组织中高表达C3aR的浸润细胞进行细胞类型鉴定．结果表明：a．光镜和免疫电镜的形态学分析显示DN患者肾组织中高表达C3aR的浸润细胞在形态上具有肥大细胞的特点，免疫荧光双套色染色的分析显示，C3aR浸润细胞CD45阴性、CD68和类胰蛋白酶阳性，与肥大细胞的情况一致，甲苯胺蓝特殊染色进一步证实这是一种肥大细胞．b．正常移植供肾组织中虽有肥大细胞分布，但数量很少；从DN早期组到DN中期组，再到DN晚期组，肾组织中肥大细胞的数量有一种不断增加的趋势；DN患者肾组织肥大细胞的数量与24 h尿蛋白和血肌酐水平均具有很好的线性相关性．上述工作不仅揭示了在DN发生发展过程中肥大细胞在DN患者肾组织中的数量及分布情况，提示肥大细胞很可能参与了DN的发生发展过程，同时，DN患者肾组织肥大细胞高表达过敏毒素C3a受体C3aR的发现，提示 C3a/C3aR通路很可能在DN患者肥大细胞的招募和激活过程中有重要作用．

摘要:Gateway(通路克隆)技术是最近开发出来的一种分子克隆技术，其特点是操作简单、省时高效，已经成功应用于很多基因表达载体的构建．然而，现有的通路克隆植物表达载体不包含任何将表达蛋白定位到叶绿体中的序列．将通路克隆入门质粒载体pENTR-2B的XmnⅠ位点改造成HindⅢ位点，产生入门载体pENTR*-2B，然后将番茄1, 5二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)小亚基3C的启动子(PrbcS)及其转运肽序列(*T)和绿色荧光蛋白(GFP)报告基因亚克隆到pENTR*-2B中，构建通路克隆入门载体pENTR*-PrbcS-*T-GFP．实验结果证实，用pENTR*-PrbcS-*T-GFP和通路克隆的植物表达载体进行LR反应，构建GFP的光诱导型植物表达载体，可以成功地将表达的GFP定位到转基因植物的叶绿体中．利用β-葡糖苷酸酶(GUS)报告基因替代该入门载体中的GFP基因做试验也得到相似的结果．这说明用目的基因替换该入门载体中的GFP可以构建目的基因的入门载体，然后用通路克隆技术可以快速构建其光诱导型植物表达载体，将表达的目的蛋白定位到转基因植物或组织细胞的叶绿体中．

摘要:蛋白质结晶条件筛选是蛋白质分子三维结构解析的主要限速环节之一，因此发展筛选效率较高的结晶条件筛选试剂盒有着十分重要的意义．目前广泛应用的结晶条件筛选试剂盒的设计方法主要有不完全因子法、稀疏矩阵法和系统筛选法．结晶学家基于这三种方法研发了一系列用于蛋白质结晶条件筛选的试剂盒．评述了20世纪以来筛选试剂盒的设计方法及应用进展，并展望了其未来的发展方向．