1998, 25(5):390-392.
摘要:介绍了染色体显微切割及微克隆技术的原理和主要方法,综述了显微切割及微克隆的研究进展,并讨论了其在植物中的应用.
1998, 25(5):392-395.
摘要:肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)或称凋亡素2配体(Apo2 ligand, Apo-2L), 是TNF家族的新成员.它是从表达序列标签库(expressed sequenced tag, EST)中寻找TNF的同源分子时发现的.TRAIL是一种分子质量为32.5 ku的Ⅱ型跨膜糖蛋白, 活性形式呈同源三聚体.TRAIL和可溶性的TRAIL强烈诱导肿瘤细胞株凋亡.新近发现的TRAIL受体DR4和DR5及TRID说明了TRAIL与TNF和Fas/Apo-1配体的作用途径是不同的.随着对TRAIL的受体及作用机理研究的深入, TRAIL很可能成为新一代抗肿瘤制剂.
1998, 25(5):396-403.
摘要:近年来,结构生物学的发展呈现出快速增长的新态势.精确测定的生物大分子结构以指数曲线增加,速率已达到5.1个/d.截止1998年4月的统计,已从PDB库释放出来的生物大分子原子坐标套数已达7 454.同时,以精确结构知识为基础揭示生命活动的规律已达到前所未有的深度和广度.在技术和方法方面,近年来第三代同步辐射的应用与一些新方法的结合,可用极小的晶体测定极大的结构,使某些膜蛋白及亚细胞器的精确结构测定成为可能.NMR溶液结构测定的分子质量已突破35 000,电子晶体学阐释结构的分辨率已接近0.3 nm,可探测的动态过程的时间尺度已达到10-9 s.结构生物学与基因组学的结合正在产生一个新的科学领域:结构基因组学(structural genomics),它在未来后基因组时代的生物学中占有重要地位.
1998, 25(5):404-407.
摘要:肿瘤细胞的粘附、迁移能力与癌转移密切相关. 细胞粘附分子选择素、整合素、免疫球蛋白超家族及钙粘素介导同型或异型细胞间以及细胞与基质间的粘附,其在肿瘤细胞表面表达数量或分布方式的改变直接或间接影响着转移潜能,是肿瘤细胞从原发瘤脱落以及着床的关键性环节.肿瘤细胞的迁移能力被认为是癌转移的限速环节.一般情况下,肿瘤细胞在体内或体外的迁移能力与其转移潜能呈正相关性,肿瘤细胞通过对迁移刺激物的趋化性及趋触性应答而完成向远离器官的转移,其具体分子机制目前还不清楚.
1998, 25(5):407-413.
摘要:邻啡罗啉-Cu是一种具有核酸酶活性的配合物,可产生多种形式的DNA损伤,包括碱基修饰、异常碱基位点、链断裂及交联等.近年来,邻啡罗啉-Cu因其切割核酸的性质及作为一种可产生活性氧的模型,引起了学者们浓厚的兴趣,在自由基生物学与医学及核酸化学领域受到广泛的关注.
1998, 25(5):413-418.
摘要:白细胞与内皮细胞相互作用由粘附分子介导.整合素、免疫球蛋白及选择素家族的粘附分子在这两种细胞的粘附中起关键作用.粘附的起始阶段由选择素介导,随后由CD11/CD18复合物与ICAM-1形成更为紧密的结合.多种细胞因子及炎症反应可诱导粘附.抗粘附分子单抗、药物等可抑制粘附.
1998, 25(5):418-421.
摘要:自从发现线虫死亡基因ced-3编码产物与哺乳动物白细胞介素-1β-转化酶(ICE)结构、功能上的相似性以来,一系列半胱氨酸蛋白酶基因相继被克隆,并显示出在细胞凋亡执行阶段中的重要功能.激活的ICE/CED-3家族蛋白酶(因其为Asp特异的半胱氨酸蛋白酶,又被称为caspase)能降解细胞中多个底物,进而引发随后的细胞学事件.
1998, 25(5):422-425.
摘要:无细胞翻译——利用细胞提取液在体外合成蛋白质,已是国外分子生物学实验室的一项常规技术,但在国内此项技术的利用却几乎是空白.对体外无细胞系统的特性、功能、优缺点及其进展等进行了全面的介绍,以期使国内学者了解和利用这一方便而有效的表达系统,进行应用生物化学与分子生物学的实验研究.
1998, 25(5):425-429.
摘要:Na+/H+交换泵(Na+/H+ exchanger, NHE)是存在于所有脊椎动物细胞中的重要跨膜蛋白,该蛋白质涉及细胞的多种功能,包括细胞内pH值调节、细胞体积的控制以及离子转运等.目前已克隆了五个亚型NHE的cDNA,它们构成了脊椎动物细胞离子转运泵的一个基因家族. 这五个亚型的表达水平及活性可受多种因素的调节.在肿瘤、高血压及糖尿病等疾病中,已发现NHE-1亚型的表达水平和活性显著增高.因此,研究NHE-1的转录及活性调节机制,将可能为这些疾病的诊治提供新的手段.
1998, 25(5):429-433.
摘要:溶栓疗法是血栓治疗中的一种重要措施.研制具有高选择性的导向性纤溶酶原激活剂有着重大的理论意义和实用价值.采用血栓特异的单克隆抗体及其片段来介导溶栓剂已展示出较好的应用前景.双功能抗体以及同时具有抗栓,抗凝活性的小肽正逐渐拓宽人们有关导向分子研制的视野.所有这一切都将随着分子生物学技术的不断完善而付诸实现.
1998, 25(5):434-439.
摘要:Auxilin蛋白诱导Hsp70c蛋白与笼形蛋白的结合,在真核细胞衣被小泡脱衣被的过程中扮演了重要的角色.通过对已有EST,STS等数据库的综合分析,我们将人类auxilin基因定位到1p31,D1S515和D1S198标记之间.26个EST构成的5个重叠群,占该基因中共约2.3 kb的部分cDNA序列,其中编码区长501 bp,得到的序列与牛的auxilin基因显示有极高的同源性.各EST数据显示,auxilin在人胚胎的多种组织中表达,在成人脑、表皮组织中也有表达.
1998, 25(5):439-443.
摘要:借助于单细胞阳离子测定系统等手段,研究了不同细胞外钙浓度下异搏定作用后,细胞存活率与细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的变化关系.同时还研究了异搏定对实验性硅肺大鼠模型的作用.结果表明:由α-石英引起的肺泡巨噬细胞内钙升高是由于大量细胞外钙内流,造成细胞内钙超载,引起细胞死亡,并进一步导致硅肺形成.异搏定可以抑制细胞内钙增加,降低细胞的死亡.动物模型实验结果还表明异搏定对硅肺的发生有明显的抑制作用.提示异搏定可能成为硅肺的防治药物.
1998, 25(5):444-448.
摘要:构建以CEA启动子控制HSV-TK基因表达的复制缺陷型腺病毒载体(AdCEATK).纯化的重组腺病毒滴度达1×1012pfu/ml.CEA阴性的HeLa细胞感染AdCMVTK后对丙氧鸟苷(GCV)很敏感,而感染了AdCEATK后不被GCV杀伤.与此相反CEA阳性的LoVo细胞中AdCMVTK和AdCEATK都有很好的表达活性,说明CEA启动子有良好的细胞专一性.AdCEATK/GCV系统还有明显的旁杀伤效应.此载体将有助于实现对CEA阳性肿瘤的专一性自杀基因治疗.
1998, 25(5):449-453.
摘要:针对丙型肝炎病毒RNA(HCV-RNA)的5′非编码区和部分C区的二级结构,设计并合成了四个不同的锤头型核酶(ribozyme A, ribozyme B, ribozyme C1, ribozyme C2).首先应用体外切割实验筛选出作用于HCV-RNA起始密码子上游GTA↓位点的核酶RzA有较好的活性.为初步验证核酶RzA在细胞内的切割活性,经脂质体介导,将RzA-RNA与另一携带该核酶靶基因的质粒表达载体pCl-neo-luciferase(载体中荧光素酶基因受核酶靶基因的调控)共转染HepG2细胞.通过测定荧光素酶基因的表达证实了核酶在细胞内有较好的切割活性.在此实验基础上,把RzA基因克隆至pCl-neo质粒表达载体中,再次经脂质体介导,将重组的表达载体pCl-neo-RzA与携带该核酶靶基因的质粒表达载体pCl-neo-luciferase共转染HepG2细胞,获得了更好的切割效果.
1998, 25(5):454-459.
摘要:随着胚胎干细胞基因打靶技术不断推广应用,如何有效地从小鼠基因组DNA文库中筛选得到基因组DNA并进行结构分析(如限制性内切酶酶切图谱分析,即mapping等)已成为一个被普遍关心的问题.设计应用了“分/合”的策略,即先对重组噬菌体插入片段制备一套亚克隆,在对亚克隆进行详细的mapping的基础上,再对完整的大分子噬菌体DNA进行酶切分析,将两者相结合,可以分析得到完整的酶切图谱.应用此策略,简便准确地对所克隆的含有小鼠凝血因子IX基因组DNA的大分子插入片段进行了限制性内切酶酶切图谱分析,结果得到了DNA印迹等的验证.
1998, 25(5):459-462.
摘要:结合应用激光扫描共聚焦显微镜系统(LSCM)和DiI-AcLDL及BODIPY FL-LDL两种荧光配基选择性标记技术,可在单细胞水平上同时测定LDL受体和清道夫受体活性.C57BL/6J小鼠巨噬细胞用终浓度为5mg/L的 DiI-AcLDL及BODIPY FL-LDL,在37℃负载5 h左右的条件下可获得良好的标记效果.两种荧光配基选择性标记具有高度特异性,在激光共聚焦显微镜下可清晰、定量地观察细胞对LDL和AcLDL摄入,是一种灵敏度高且可定量研究LDL受体和清道夫受体功能的非同位素方法.
1998, 25(5):462-464.
摘要:介绍一种在同一块凝胶板上染乳酸脱氢酶(LDH)与酯酶(EST)的染色方法. 该同板染色法利用两种同工酶显色反应互不干扰和颜色不同的特点, 先染LDH, 后染EST, 可以在同一块胶板上得到两种同工酶清晰的酶带, 每一种酶的酶带与单板染色的酶带完全一样. 这种染色法, 能节省同工酶分析所需的试剂、时间和经费, 也便于样品的鉴定与比较, 是一种经济有效的方法. 此方法, 同样适用于苹果酸脱氢酶(MDH)与酯酶等同工酶的同板染色.
1998, 25(5):465-468.
摘要:蓝藻类囊体膜用声波超时处理,然后在4℃下用低浓度的LDS增溶,并经改进的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后被分离成15条绿色的带. 其中CPa1~CPa6有着相似的吸收光谱. 这6个组分的低温荧光光谱也很相似,其荧光发射光谱的发射峰都位于685 nm处,表明它们都属于光系统Ⅱ叶绿素a蛋白复合体. 该系统对光系统Ⅱ的分离能力是传统电泳的3倍.
1998, 25(5):469-471.
摘要:采用PCR技术,从人肝cDNA文库中扩增获得了1.5 kb的脂多糖结合蛋白(LBP)的全长基因.序列分析表明,克隆的LBP基因编码的氨基酸序列与文献报道相同.
1998, 25(5):472-475.
摘要:通过RT-PCR技术扩增了甲肝病毒减毒株(H2)全长RNA,并对长片段RT-PCR扩增进行了方法学上的探讨.采用抗血清特异沉淀病毒;盐酸胍-酸性酚、氯仿一步法分离纯化病毒RNA,可得到高质量的RNA样品;以此RNA为模板,在无RNA酶的逆转录酶作用下,合成单链cDNA;继续以此cDNA为模板,利用32 mer寡核苷酸引物, 在Taq和Deep Vent DNA多聚酶的作用下进行PCR扩增,得到7.4 kb的扩增产物.
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