• 2000年第27卷第3期文章目次
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    • 蛋白质组学的进展

      2000, 27(3):227-231.

      摘要 (2054) HTML (25) PDF 0.00 Byte (2744) 评论 (0) 收藏

      摘要:蛋白质组学是在细胞的整体蛋白质水平上进行研究、从蛋白质整体活动的角度来认识生命活动规律的一门新学科.简要介绍蛋白质组学的科学背景及其最新发展.

    • >微型述评
    • 核糖体结构研究中的里程碑

      2000, 27(3):232-234.

      摘要 (2633) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3350) 评论 (0) 收藏

      摘要:核糖体是一个以RNA和蛋白质为基础的合成蛋白质的分子机器.其复杂的结构使它长期被结晶学家视为该研究领域中的喜马拉雅山.最近在核糖体结构研究中的突破性进展,首次在核糖体及其亚基高度复杂的电子密度图上定位了几种已知三维结构的蛋白质和许多双链rRNA区,并揭示了亚基界面的精细结构和tRNA、mRNA和核糖体间复杂的相互作用.

    • >综述与专论
    • Cre/LoxP系统在转基因小鼠上的应用策略

      2000, 27(3):235-238.

      摘要 (2801) HTML (2) PDF 0.00 Byte (8938) 评论 (0) 收藏

      摘要:Cre/LoxP位点特异重组酶系统已发展为在体内外进行遗传操作的一个新的有力工具.该系统在转基因小鼠上的应用,可使转基因的表达或靶基因的缺失/突变的位点特异DNA重组不仅发生在小鼠发育的某一阶段或特定的组织器官,而且,若与控制Cre表达或功能的诱导系统结合,则可以时空方式体现.这些基于重组的策略可能对基因功能的研究和人类疾病的动物模型的建立产生深刻影响.

    • 绿色荧光蛋白

      2000, 27(3):238-243.

      摘要 (3112) HTML (35) PDF 0.00 Byte (6045) 评论 (0) 收藏

      摘要:来源于水母Aequorea victoria的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)现已成为在生物化学和细胞生物学中研究和开发应用得最广泛的蛋白质之一. 其内源荧光基团在受到紫外光或蓝光激发时(λmax=395 nm, 小峰在479 nm)可高效发射清晰可见的绿光. GFP的高分辨率晶体结构为了解和研究蛋白质结构和光谱学功能关系提供了一个极好的机会. GFP已成为一个监测在完整细胞和组织内基因表达和蛋白质定位的理想标记. 通过突变和蛋白质工程构建的GFP嵌合蛋白在生理指示剂、生物传感器、光化学领域以及生产发光纤维等方面展示了广阔前景.

    • 植物脂质转运蛋白的研究进展

      2000, 27(3):244-247.

      摘要 (3845) HTML (483) PDF 0.00 Byte (5541) 评论 (0) 收藏

      摘要:高等植物脂质转运蛋白(lipid-transfer proteins,LTP)是一类小分子(约9 ku)的碱性蛋白质,已从多种植物中纯化出了LTP,且编码LTP的cDNA及基因也从不同植物中克隆.LTP能够在生物膜之间转运磷脂,因而认为LTP参与了细胞内生物膜形成.而近期的研究又发现LTP具信号肽,可从细胞内分泌到细胞外,位于细胞壁上,因而又对其在细胞内的转运脂质能力产生疑问.而有证据表明LTP参与了角质与腊质的形成、植物的抗病反应和植物对环境变化(温度、盐、干旱协迫)的适应.

    • 植物抗脱水胁迫的分子机制

      2000, 27(3):247-250.

      摘要 (2918) HTML (29) PDF 0.00 Byte (3407) 评论 (0) 收藏

      摘要:主要介绍植物在脱水胁迫下,逆激基因产物的功能和胁迫信号的转导过程.逆激基因产物的功能可分为两类:一类起“保护”作用,另一类起“调节”作用.在脱水胁迫起始信号和基因表达之间至少存在四条信号转导通路,两条依赖脱落酸(ABA),两条不依赖ABA,依赖ABA的途径中有1条必须有蛋白质合成.不依赖ABA的途径中有1条与低温胁迫应答有共同的信号转导通路.

    • 几种新型生物芯片的研究进展

      2000, 27(3):251-254.

      摘要 (3389) HTML (26) PDF 0.00 Byte (3960) 评论 (0) 收藏

      摘要:随着生物芯片技术的迅速发展,一些新型生物芯片,如生物电子芯片、凝胶元件微阵列芯片、药物控释芯片、毛细管电泳或层析芯片、PCR芯片及生物传感芯片等应运而生,这些芯片不同于常规的分子微阵列芯片,而是以各种结构微阵列为基础,用于分子杂交与扩增,以检测突变、分析多态性及测序,通过电泳及层析分离生物样品,控制药物释放以治疗疾病,作为生物传感器检测分子行为等,具有分析速度快、效率高、样品消耗少等特点,将成为生命科学与医学领域的新工具.

    • fMRI在视觉研究中的应用和进展

      2000, 27(3):254-257.

      摘要 (2842) HTML (120) PDF 0.00 Byte (3118) 评论 (0) 收藏

      摘要:视觉研究对于揭示大脑的奥秘有着极其重要的意义.功能性磁共振成像(functional magnetic resonance imaging,fMRI)用于研究人脑的功能结构,主要是基于静脉毛细血管内血氧浓度的变化.fMRI可以无损伤地在几毫米级的空间分辨率和少于1 s的时间分辨率上观察清醒状态下人脑的活动,因此自90年代以来fMRI已经成为研究人脑的重要方法.fMRI在视觉研究中的应用已经使人们对视觉系统的功能性组织有了更好的理解,并取得了很多成果.今后的研究方向是进一步探讨人脑的意识、注意、记忆等高级功能的神经机制.

    • 杆状病毒基因组DNA复制相关基因的研究进展

      2000, 27(3):257-261.

      摘要 (3050) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3843) 评论 (0) 收藏

      摘要:综述了与杆状病毒DNA复制相关基因的研究进展.杆状病毒表达系统是最重要的四大基因工程表达系统之一,杆状病毒还具有作为生物杀虫剂的潜能.DNA复制是杆状病毒复制循环的中心环节.

    • 氧化修饰高密度脂蛋白的研究进展

      2000, 27(3):261-265.

      摘要 (2864) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3171) 评论 (0) 收藏

      摘要:血浆高密度脂蛋白(HDL)与低密度脂蛋白(LDL)一样可以在体内外发生氧化修饰,引起其理化性质发生一系列的改变,如多不饱和脂肪酸过氧化,卵磷脂水解,蛋白质发生聚合或分解等.活体内HDL可能在动脉壁巨噬细胞、内皮细胞及中性粒细胞、单核细胞的作用下发生氧化修饰.氧化修饰HDL可能通过清道夫受体途径代谢.氧化修饰HDL产生多种致动脉粥样硬化作用.维生素E、C的摄入可能有助于防止脂蛋白的氧化.

    • 分子发动机研究进展

      2000, 27(3):265-269.

      摘要 (2999) HTML (113) PDF 0.00 Byte (3071) 评论 (0) 收藏

      摘要:分子发动机是利用化学能/化学势进行机械作功的生物大分子,包括线性分子发动机与旋转式分子发动机两大类.它们参与了胞质运输、DNA复制、基因转录、ATP合成/水解等一系列重要生命活动过程.目前对于各种分子发动机的结构及作用机制的研究取得了一些重要进展.

    • >研究报告
    • 尖吻蝮蛇毒碱性磷脂酶A2的表达及其生化特征

      2000, 27(3):270-274.

      摘要 (2803) HTML (3) PDF 0.00 Byte (3078) 评论 (0) 收藏

      摘要:将尖吻蝮蛇毒碱性磷脂酶A2A.aBPLA2)基因克隆至温敏表达载体pBLMVL2,在大肠杆菌RR1中成功诱导表达.表达产物A.aBPLA2约占细菌蛋白质总量的20%,并以包涵体的形式存在.纯化包涵体后,将产物变性、复性,然后用FPLC SuperoseTM12纯化,产物经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测只有单一条带.对纯化后的表达A.aBPLA2进行了酶活性、抑制血小板聚集活性和溶血活性的测定.结果显示,表达A.aBPLA2的酶活性与变性后复性江浙蝮蛇酸性磷脂酶A2酶活性相近,具有类似变性后复性江浙蝮蛇碱性磷脂酶A2的溶血活性,没有抑制血小板聚集活性.最后对磷脂酶A2的结构与这些活性的关系进行了讨论.

    • 壳聚糖固定化半纤维素酶的研究

      2000, 27(3):274-277.

      摘要 (2867) HTML (2) PDF 0.00 Byte (3615) 评论 (0) 收藏

      摘要:从青霉菌m8提取出半纤维素酶,将其固定在用戊二醛交联的壳聚糖载体上.0.5 g壳聚糖与4%的戊二醛结合固定2.5 mg蛋白质,酶活回收率为45.6%. 原酶的最适pH为4.6,固定化酶为pH 3.6.原酶的最适温度为55℃,固定化酶在60~75℃都具有较高活性.固定化酶的耐热性优于原酶. 以半纤维素为底物,固定化酶的表观Km值略低于原酶,前者为5.0×10-2 g/L,后者为3.58×10-2 g/L.

    • 分子信标探针用于PCR检测对虾白斑杆状病毒

      2000, 27(3):277-280.

      摘要 (3187) HTML (43) PDF 0.00 Byte (3305) 评论 (0) 收藏

      摘要:将对虾白斑杆状病毒的一段特异性DNA设计成分子信标探针,用于该病毒的PCR检测.温度与荧光强度之间的关系表明,所设计探针的发夹既可以形成也可以打开,符合PCR对分子信标探针的要求.结果表明,在PCR同时加入分子信标探针不影响PCR扩增,分子信标探针只能与目的DNA杂交,具有较高的特异性.随着PCR循环数的增加以及含目的DNA的质粒拷贝数的增加,荧光强度都随之增强.

    • 磁流体在交变磁场中的热效应

      2000, 27(3):281-283.

      摘要 (3218) HTML (24) PDF 0.00 Byte (3292) 评论 (0) 收藏

      摘要:以大豆卵磷脂为表面活性剂制备Fe3O4平均粒径为20 nm的磁流体,在10 kW,100 kHz的磁场中研究该磁流体的热效应.用温度计测量不同Fe3O4含量的水、琼脂的温度变化值,探讨Fe3O4含量和介质对温度的影响,为磁流体用于肿瘤热疗提供实验依据.实验结果表明,脂质磁流体在交变磁场作用下使周围升温,升温速度及平稳时的温度和Fe3O4的含量、磁场强度及周围介质有关,含量高,场强大,平稳温度值高,介质流动性好,加快热传递,升温快.通过调节磁场强度和磁流体的量可达到所需温度值.

    • 抑制启动子的三链DNA的结构模建及稳定性研究

      2000, 27(3):283-286.

      摘要 (2647) HTML (6) PDF 0.00 Byte (3211) 评论 (0) 收藏

      摘要:在IRIS Indigo2(SGI公司)工作站上,利用InsightⅡ/MSI软件包,以TAT三链DNA为模板,采用同源模建的方法,分别建立起两个含21nt的脱氧寡核苷酸CP1(G3TG2TGT2G5TG2TGT)和CP3(TGTG2TG5T2GTG2TG3)的三维结构.采用分子力学方法进行能量优化,将得到的能量最低结构作为分子的优势构象.研究结果显示,CP1的能量低于CP3的能量,即前者的结构较后者稳定.从而证明了CP1与乙肝病毒(HBV)的核心启动子(Cp)片段之间能稳定地形成三链DNA,并能特异性地抑制DNA结合蛋白与Cp片段的结合.这些结果表明,三链DNA的形成有可能抑制DNA的转录.

    • 蛇毒NGF对PC12细胞MAPK表达的影响

      2000, 27(3):286-292.

      摘要 (2839) HTML (9) PDF 0.00 Byte (2385) 评论 (0) 收藏

      摘要:有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)是磷酸化瀑布中涉及的一类重要蛋白激酶.阐明各种胞外因素对MAPK的调节,以及各种外界信息所经历的具体过程是摆在研究者面前的挑战性任务.用含有长白白眉蝮蛇(A.halys)蛇毒神经生长因子(NGF)的培养基培养PC12细胞, 观察MAPK和MAPK激酶(MAPKK)表达及MAPK的活性.结果表明,A.halys蛇毒NGF使PC12细胞的MAPK和MAPKK的表达及MAPK活性明显增加.当蛇毒NGF浓度在25~100 μg/L时,随浓度的增加,酶的表达和活性呈线性增加.由A.halys蛇毒NGF诱导的MAPK和MAPKK表达的增加依赖于蛋白激酶C(PKC).

    • 辐射敏感细胞ku80基因突变及其DNA结合活性研究

      2000, 27(3):292-296.

      摘要 (2662) HTML (3) PDF 0.00 Byte (2914) 评论 (0) 收藏

      摘要:RT-PCR克隆辐射敏感细胞及其亲本细胞的ku80基因cDNA,发现辐射敏感细胞的ku80基因与双链断裂DNA末端相互作用的位置存在基因突变,用凝胶阻滞和DNA-蛋白质印迹进一步证实突变ku基因编码蛋白结合双链断裂末端DNA的能力下降,暗示其细胞辐射敏感性可能与Ku蛋白功能异常有关.

    • 脂肪酸多相脂质体与癌细胞膜相互作用的ESR谱研究

      2000, 27(3):296-300.

      摘要 (2696) HTML (16) PDF 0.00 Byte (2935) 评论 (0) 收藏

      摘要:用电子自旋共振(ESR)技术对液晶态多烯脂肪酸多相脂质体与癌细胞膜相互作用进行了研究. 并探讨了其在抑制和杀伤癌细胞过程中可能具有的生物学意义.实验发现:油酸多相脂质体的影响使自旋标记物在Ec腹水肝癌细胞膜上的强固定化作用减弱, 弱固定化作用增强,使自旋标记物运动自由度增加.亚油酸多相脂质体的影响使自旋标记物在乳腺癌细胞膜上的强固定化作用增强, 弱固定化作用减弱,使自旋标记物运动自由度受到限制.蓖麻酸多相脂质体的影响使自旋标记物在S180实体瘤细胞膜上的强固定化作用增强, 弱固定化作用减弱,使自旋标记物运动自由度受到限制.结果表明,多烯脂肪酸多相脂质体作用于膜蛋白引起了膜蛋白构象的变化.

    • 肾癌相关基因克隆——肾癌cDNA消减文库的构建

      2000, 27(3):301-304.

      摘要 (2813) HTML (46) PDF 0.00 Byte (3422) 评论 (0) 收藏

      摘要:应用抑制性消减杂交技术,构建人肾癌与正常肾差异表达的cDNA消减文库.分别从肾癌及正常肾细胞系中提取poly(A)+RNA,依次合成单链及双链cDNA,经酶切成平均大小为400~600 bp的片段,将肾癌cDNA分为两组,分别与两种不同的接头衔接,再与正常肾cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR后,将产物与T/A载体连接构建成功cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增.构建成功具有高消减效率的人肾癌cDNA消减文库,非特异性cDNA片段被有效地消减,特异表达的cDNA得到富集.文库扩增后得到6 500个克隆,随机挑取350个制备质粒,酶切分析均得到400~600 bp插入片段.所构建的人肾癌cDNA消减文库为进一步大批量筛选、克隆肾癌特异性表达的未知新基因奠定了基础.

    • 利用cDNA-RDA技术研究BXSB狼疮小鼠差异表达的基因

      2000, 27(3):305-308.

      摘要 (2615) HTML (5) PDF 0.00 Byte (2862) 评论 (0) 收藏

      摘要:利用近年来发展起来的代表性差异分析cDNA-RDA(cDNA-representational difference analysis)技术筛选BXSB红斑狼疮小鼠发病相关基因.发现了3个新的表达序列标签(EST)片段,在GenBank中的登录号分别为AF060113, AF060111, AF060110,同时发现了一些已知与自身免疫病相关的基因如逆转录病毒衣壳蛋白、Line-1逆转录酶等.通过RDA技术可能发现系统性红斑狼疮发病相关新基因,为自身免疫病的理论研究提供新的思路和方法.

    • >技术与方法
    • 快速制备RNA小分子质量标记的新方法

      2000, 27(3):309-311.

      摘要 (2399) HTML (3) PDF 0.00 Byte (3160) 评论 (0) 收藏

      摘要:在锤头型核酶下游增加一段核酶作用的靶序列,使之成为自切割的核酶.将自切割核酶基因合成,扩增并克隆在质粒pBluescript SK上, 经连续4次克隆获得含10个拷贝的自切割核酶基因的载体. 5%聚丙烯酰胺变性凝胶电泳结果显示:体外转录过程中多体酶发生了自切割,核酶转录物切割成从70 nt到706 nt的RNA等梯度带,因此,可以作为RNA分子质量标记之用.

    • 用均匀设计优化apo E基因的PCR扩增方案

      2000, 27(3):311-315.

      摘要 (2859) HTML (48) PDF 0.00 Byte (3224) 评论 (0) 收藏

      摘要:由于PCR影响因素多,获得理想扩增结果比较困难,有必要寻找一种简单有效的方法建立最佳扩增体系.针对Mg2+浓度、二甲基亚砜(DMSO)浓度、变性时间、延伸时间、循环次数等因素进行4因素6水平和6因素10水平均匀设计实验优化apo E基因244 bp片段的PCR扩增条件.采用纯化模板和简易模板,只需6~10次实验即可获得特异性、高产率扩增结果.研究表明,将均匀设计用于PCR条件优化以及有关的样品处理、试剂选择等研究方面可以避免盲目性,迅速获得满意结果.

    • 定量RT-PCR中人干细胞因子的RNA-CRS的构建

      2000, 27(3):315-318.

      摘要 (2843) HTML (74) PDF 0.00 Byte (3354) 评论 (0) 收藏

      摘要:一种适用于定量RT-PCR、用ExonucleaseⅢ部分酶切剔除技术,构建人干细胞因子(hSCF)基因的RNA竞争性参考标准(RNA-CRS)的新方法:用RT-PCR技术,从HepG2细胞中扩增出全长人hSCF cDNA,并克隆入质粒pGEM-T获重组的pGEMSCF载体,经ExonucleaseⅢ和S1核酸酶适当处理,以导致hSCF cDNA中一小片段缺失,由此获得重组pGEMSCF模拟体(mimic),经体外转录得到hSCF RNA-CRS.测序表明:该RNA-CRS与hSCF mRNA比较,缺失了从第499位至608位共110个核苷酸,但二者RT-PCR反应可用同一对扩增引物,反应动力学极为相似.这种hSCF RNA-CRS可作为一种较理想的竞争性参考标准,适用于定量RT-PCR中,以对重组hSCF在真核细胞中的表达水平进行准确的定量分析.此方法亦可推广应用于其他真核基因的表达水平及/或调控的检测和研究.

    • >研究快报
    • 一个新鼻咽癌抑瘤候选基因的克隆及其功能初步分析

      2000, 27(3):319-324.

      摘要 (2936) HTML (42) PDF 0.00 Byte (3244) 评论 (0) 收藏

      摘要:从cDNA 代表差异分析法(cDNA representational difference analysis, cDNA RDA)分离的新cDNA片段入手,进一步采用RT-PCR验证,其中发现AF152605片段在74%鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)活检组织中表达下调和缺失,DNA印迹显示其代表一转录本为2.1 kb的基因,结合生物信息学,运用文库筛选克隆该基因,命名为NAG4基因,GenBank登录号AF179285,定位于6q22.1~22.33,至少含有两个外显子,并在第一外显子的上游有TATA盒样序列,编码一个508个氨基酸组成的、分子质量为57.4 ku的蛋白质;功能预测NAG4基因产物与小鼠溴区蛋白BP75有84%同源,是含有多个磷酸化位点和溴区结构域的核内转录因子;突变分析表明NAG4基因在HeLa细胞株中发生整码突变.以上结果说明NAG4基因是鼻咽癌抑瘤基因的良好候选者,其表达的下调参与了鼻咽癌的发生.

    • >研究简报
    • 一步法从人血浆中制备天然血管生成抑制素

      2000, 27(3):325-327.

      摘要 (2833) HTML (4) PDF 0.00 Byte (3375) 评论 (0) 收藏

      摘要:血管生成抑制素(angiostatin)能特异地抑制新生血管生成,有潜在的临床应用价值.利用亲和层析从人血浆中纯化纤溶酶原,并在原位进行弹性蛋白酶有限消化产生angiostatin片段,经过洗涤,然后用0.2 mol/L 6-氨基己酸溶液将angiostatin特异性洗脱.此改进使整个制备过程变得简单、快速和高效.体外对牛主动脉内皮细胞的生长抑制实验以及体内鸡胚尿囊膜血管生成抑制分析结果证实所制备的angiostatin有较强的抑制血管生成活性.

    • 红细胞嘧啶-5′-核苷酸酶的纯化及其抗血清的制备

      2000, 27(3):327-330.

      摘要 (2878) HTML (24) PDF 0.00 Byte (2801) 评论 (0) 收藏

      摘要:利用UMP-ADH-Sepharose4B亲和层析的方法纯化正常人红细胞嘧啶-5′-核苷酸酶(P5′N, EC.3.1.3.5).结果表明:利用UMP-ADH-Sepharose4B亲和层析柱可有效、专一性吸附P5′N,纯化液经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示一条蛋白质带,测定纯化物相对分子质量28×103,等电点(pI)5.2. 纯化物免疫家兔后,得兔抗人P5′N抗血清,为探讨遗传性及获得性P5′N缺陷奠定了基础.

    • >经验交流
    • 转移缓冲液对蛋白质印迹的影响

      2000, 27(3):331-332.

      摘要 (2738) HTML (2) PDF 0.00 Byte (2899) 评论 (0) 收藏

      摘要:利用三种转移缓冲液,分别以半干和湿转法,检测癌基因产物Bcl-2, 并获得不同强度的印迹结果.不含SDS的转移缓冲液转移效果明显优于含SDS的转移缓冲液,且SDS含量越高印迹带越弱;此外,半干转移与湿转相比,可大大缩短转移时间,但转移效果不及湿转理想且稳定性较差.

    • >新技术讲座
    • 微弱发光分析技术应用实例(六)——发光分析与肿瘤研究

      2000, 27(3):333-334.

      摘要 (2770) HTML (13) PDF 0.00 Byte (2661) 评论 (0) 收藏

      摘要:微弱发光分析技术已经用于肿瘤学研究,骨肿瘤病人和正常人的血液和尿液的发光强度使用BPCL型微弱发光测量仪进行了测量.结果指出,骨肿瘤病人血液和尿液的发光强度高于正常人(P<0.05).骨肿瘤病人尿液的发光强度在手术之后明显降低(P<0.05).裸鼠血液和各种脏器的微弱发光测量结果表明,荷瘤之后,各个脏器的发光强度显著增加.

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