2000, 27(5):455-460.
摘要:
2000, 27(5):461-465.
摘要:短散在元件(SINE)广布于真核生物,是基因组中的可转移成分,长约100~500 bp,拷贝数可达数百至数十万以上,根据序列变异和鉴别位点常可分为若干家族和亚家族,对基因组的复杂化、基因的钝化、新基因的产生、尤其是基因表达的调控都具有重要意义.除了灵长类Alu和小鼠B1家族等少数来源于7SL RNA,大多为tRNA的衍生物,由tRNA同源区、tRNA无关区和富含AT区等组成.在tRNA同源区含有RNA聚合酶Ⅲ内部启动子成分.其起源和进化有“主源基因模型”、“多源基因模型”、“寄生假说(转座子模型)”和“平行转移假说”等.以鲑科鱼类、鲸类及偶蹄类、高等灵长类和蛙类为例,介绍了近年来短散在元件在分子系统发生研究以及在遗传作图和抗癌治疗上的应用.
2000, 27(5):465-468.
摘要:机械刺激对生物器官、细胞的生理活动具有重要的影响.虽然生物细胞对各种机械作用具有各自不同的反应形式,但大多具有类似的机械感受机制,即首先由细胞膜、整合素-细胞骨架感受,在激活G蛋白等信号分子后,进一步引起生理、病理反应.因此,G蛋白可能是完成机械能向化学能转化的关键环节.
2000, 27(5):469-472.
摘要:破骨细胞形成抑制因子(OPG/OCIF)是最近发现的一种参与调节骨密度的糖蛋白,是一个肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族的新成员,其氨基酸序列中具有TNF受体结构类似区.成熟的OPG/OCIF具有7个结构域,可分为三个功能区,即:TNF受体结构区、致死结构区和肝素结合区.OPG/OCIF基因定位在8q23~24上,由5个外显子和4个内含子组成,其表达受到与骨的形成和破坏有关因子的调控:如TGF-β1、1,25(OH)2VD3、TNF-α等等.OPG/OCIF抑制骨的破坏和吸收机制主要是抑制破骨细胞的存活,引起破骨细胞凋亡和抑制破骨细胞形成.
2000, 27(5):472-476.
摘要:最近几年来,关于真核mRNA 3′UTR在肿瘤细胞恶性表型抑制中作用的研究, 取得了非常令人鼓舞的进展. 目前已经发现,3′UTR参与一些已知的癌基因和抗癌基因的功能调控; 一些抗癌基因的失活来源于其3′-UTR的结构变化;而且又发现了一些基因的3′UTR在转染恶性细胞后表现抗癌基因活性. 此外,3′UTR在mRNA表达调控中的作用也已研究得更加深入.现将最近几年来在这一领域的一部分研究进展情况,作一简单综述.
2000, 27(5):476-480.
摘要:苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)杀虫晶体蛋白的毒性肽由三个典型的结构域组成.结构域Ⅰ位于肽链的N端,为一组由6~7个两亲的α螺旋围绕着一个疏水的α螺旋形成的α螺旋束,参与了细胞膜的穿孔;结构域Ⅱ位于肽链的中间,为三组以“希腊钥匙”(Greek key)拓扑结构连接在一起的反平行的β折叠片层,其顶端的突环参与了毒素与受体蛋白的结合;位于C端的结构域Ⅲ是由两组反平行的β折叠片层组成的夹心结构,以β果酱卷(jelly roll)拓扑结构排列,可能能够防止蛋白酶对毒素分子的过度降解.
2000, 27(5):483-488.
摘要:线粒体对胞浆钙信号调节作用的研究已经历较长时间.近年,随着研究方法和技术的不断改进,发现在绝大多数生理条件下,线粒体都能参与胞内钙通信过程.线粒体可感受其周围钙微区的存在从而摄取钙,又可以通过钠-钙交换和大分子孔道将钙释放出来,因此可以调节胞浆钙信号的时空特性,影响相关的细胞功能.但是,由于技术上的局限性,目前的研究仍然存在模糊不清和自相矛盾之处,有待于进一步研究.
2000, 27(5):488-492.
摘要:神经生长抑制因子(neuronal growth inhibitory factor, GIF) 又名金属硫蛋白-Ⅲ (metallothionein-Ⅲ,MT-Ⅲ),特异分布于中枢神经系统(CNS),是神经系统中第一个被鉴定的具有神经元生长抑制功能的蛋白. GIF一级序列、高级结构、金属结合特性类似于其他MTs,基因结构也与其他MTs高度同源,但表达调控途径相异. GIF可能以其β结构域的CPCP区,与脑组织提取物中的相关因子结合,进而表现其生物学功能. 有研究认为GIF与阿尔茨海默等脑相关疾病均有密切关系.
2000, 27(5):492-496.
摘要:真核细胞核中转录因子与染色质模板如何相互作用调节基因转录是基因表达调控研究的一个中心问题.近来的研究表明,参与基因转录的各种调节因子在核内形成多种复合物,如RNA聚合酶Ⅱ全酶、染色质重塑复合物、核小体以及增强小体等.这些复合物之间相互作用,调节染色质结构,在染色质模板上进一步组装成转录复合物,参与转录调节的各个环节,调节转录复合物活性.这些复合物的形成,整合了转录调节的各种信息,提高了转录调节效率,是真核基因有效、严格、有序表达的基础.另一方面,这些复合物的存在给基因表达调控的研究提出了新问题,发展新的研究思路和新的研究技术具有重要意义.
2000, 27(5):496-500.
摘要:高效表达外源蛋白,在生物制药中有重要意义.中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell)是表达外源蛋白的最佳真核表达系统之一.影响外源蛋白在CHO细胞表达的因素甚多,主要包括载体、宿主细胞和外源基因几方面.深入了解和灵活运用它们之间的关系,有助于获得外源基因在CHO细胞中的高效表达.
2000, 27(5):500-504.
摘要:促黄体生成激素释放激素(LHRH)激动剂药物已商品化,用于治疗性激素依赖的癌症,LHRH拮抗剂的研究还处于试验阶段.近几年,在寻找高活性,低组胺释放,水溶性好,稳定性高的拮抗剂研究方面,已取得明显进展.一些较小的环肽及肽模拟物也表现出较好的生物活性.在十肽拮抗剂分子内,中间四肽的βⅡ-turn及N端的三肽对活性影响很大.
2000, 27(5):504-508.
摘要:单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)是生物体内一种十分重要的酶,它在大脑和周围神经组织中催化一些生物体产生的胺,氧化脱氨产生过氧化氢(H2O2).单胺氧化酶A和B基因的克隆清楚地证明了这些酶是由不同的多肽组成的.单胺氧化酶A和B的基因定位于X染色体(Xp11.23),都由15个外显子组成,而且它们的内含子-外显子组织是完全一致的.这些事实表明单胺氧化酶A和B的基因很可能从同一个祖先进化而来.单胺氧化酶A和B具有不同的底物和抑制剂专一性,在生物神经递质代谢和行为方面具有不同的作用.
2000, 27(5):508-512.
摘要:对动物线粒体分子生物学的最新研究进展进行了较详细的阐述.从线粒体基因组(mtDNA)的研究背景出发,重点介绍了动物线粒体基因组的组成和结构特点,以及目前动物mtDNA与核基因组的关系、线粒体基因的遗传、起源和进化研究中的热点问题.
2000, 27(5):513-516.
摘要:采用“界面亲和层析”,从商品Candida rugosa脂肪酶(CRL)中分离到三个同工酶(CRL-1、CRL-2和CRL-3),它们在水-有机溶剂双液相体系中催化(R,S)-萘普生甲酯的不对称水解反应,具有不同的立体选择性.分析表明:CRL-1和CRL-2上不同程度地非共价结合有小分子的酸性化合物,阻碍了其活性位点处疏水腔的完全开放;CRL-3上不含有该小分子酸性化合物,活性位点处疏水腔可处于完全开放构象.据此分别将CRL同工酶选择性地固定在不同的载体(GDX101和YWG-NH2)上.通过简单易行的选择吸附步骤,可同时达到同工酶的分离及固定化目的,提出了一种对结构上相差不大同工酶分离的便利方法.
2000, 27(5):516-520.
摘要:皖南尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅱ(ACFⅡ)与活化凝血因子Ⅹ(FⅩa)在钙离子作用下形成了1∶1的复合物,从而延长凝血时间.这个复合反应是依赖于钙离子的,ACFⅡ在没有钙离子存在条件下不能与FⅩa形成复合物.ACFⅡ是凝血因子Ⅸ或凝血因子Ⅹ结合蛋白家族中一个新发现的成员,其相对分子质量为29 468.1.ACFⅡ分子中含有251个氨基酸残基,其氨基酸组成与这一家族中其他成员十分相似.ACFⅡ在抗凝血反应中存在一临界浓度(12 nmol/L),只有在高于其临界浓度时,才表现出显著的抗凝血活性.
2000, 27(5):520-523.
摘要:利用肝素亲和层析从血清中提取玻璃粘连蛋白(vitronectin),以硫酸铵沉淀法从血浆中粗提含纤维蛋白原的复合蛋白质组分,向血浆蛋白、胎牛血清和DMEM组成的复合成分中加入凝血酶,制成蛋白质凝胶.观察血管内皮细胞在此基质上或在基质中的生长及在碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)的诱导下形成的血管样结构.结果表明血管内皮细胞可粘附在此凝胶基质表面正常生长,在bFGF的诱导下,内皮细胞向胶内迁移、生长并形成管状结构,多个管状结构连接、融合形成毛细血管网状结构.
2000, 27(5):523-524.
摘要:引进Hong的化学电容概念,将菌紫质膜光电响应系统(SPRBM)抽象为C-电容、N-电容、质子泵通道和质子返回通道等模块,构筑了功能模块框图模型.用该模型导出了SPRBM的冲击响应电流、“铁/紫膜/胶/铜”光电池的电势分布表达式及等效电路模型.
宋艳斌 , 伍志坚 , 尹芳 , 马文丽 , 杨光彩 , 伍柏松 , 徐钤
2000, 27(5):524-528.
摘要:去除供者骨髓中的T淋巴细胞可有效防止移植物抗宿主病(GVHD)的发生.用含大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(EC-CD)基因的高滴度逆转录病毒(1.5×105 CFU/ml)感染小鼠T淋巴细胞,G418筛选,获得稳定表达CD基因的T/ pCD2细胞.经PCR和RT-PCR方法检测证明CD基因已成功地导入T淋巴细胞中并有效表达.分别用不同浓度的5-FCyt作用于T/ pCD2及T淋巴细胞,光镜下观察不同时间细胞数目变化及MTT法检测细胞活性.结果表明,5-FCyt浓度大于1 μmol/L时,即对T/ pCD2细胞有显著的杀伤作用,而对正常T淋巴细胞基本无毒性,且T/ pCD2细胞在加入药物后生存时间(3~5 d)明显短于未转染的T淋巴细胞(大于14 d).
彭黎明 , 江虹 , J.J.LIU , C.J.BRADLEY
2000, 27(5):528-533.
摘要:为定量DNA断裂末端评价DNA的降解程度,以饱和标记(TdT)法定量DNA末端最大标记量(Lmax);并用流式细胞分析(FCA)、原位DNA末端标记(TUNEL)和琼脂糖电泳检测或标记DNA降解片段.结果发现: a.TdT法最低检测限5 ng DNA,线性范围为5~5 000 ng,较检测DNA降解片段的琼脂糖电泳敏感200倍以上;b.地塞米松(DEX)诱导淋巴瘤(Raji)细胞凋亡产生的Lmax呈DEX剂量与诱导时间依赖性增加;c.自发性高血压大鼠(SHR)心肌的Lmax呈年龄依赖性增加并与正常对照鼠(WKY)相比差异非常显著(P<0.01);d.TdT法定量Lmax与FCA、TUNEL或电泳分析的相关性良好(r>0.98).TdT法定量Lmax敏感、特异、准确,可应用于分子生物学、细胞生物学,尤其是细胞凋亡动力学DNA降解评价的定量研究.
2000, 27(5):533-536.
摘要:为了探讨胆囊收缩素(CCK)受体在中枢神经系统中的信号传递机制,观察了CCK8和CCKA受体拮抗剂L-364,718、CCKB受体拮抗剂L-365,260对大鼠大脑皮质钙调素(CaM)活性的影响.结果表明:a.CCK8对CaM活性的影响具有时间依赖性,15 min达到最高点后逐渐下降;b.CCK8在10-12~10-7 mol/L范围内可刺激CaM活性的增加,超过10-7 mol/L后,逐渐趋于饱和.c.CCKA受体拮抗剂L-364,718、CCKB受体拮抗剂L-365,260均可抑制10-7 mol/L CCK8引起的CaM活性的增加,但两者IC50相差40倍,L-365,260在较低浓度时即能明显拮抗CCK8引起的CaM活性变化.研究结果提示CCK8可能通过CCKB受体引起CaM活性变化,而CaM可能是CCKB受体的重要信号传递机制之一.
2000, 27(5):536-540.
摘要:运用透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术、原位末端标记法(TUNEL)染色等技术,检测了大剂量地塞米松处理小鼠腹腔巨噬细胞的各种变化.结果显示,大剂量地塞米松处理的巨噬细胞发生胞体皱缩、染色质凝聚、胞质浓缩;TUNEL染色呈阳性;0.5 h后DNA凝胶电泳即呈梯状条带;流式细胞术作周期分析出现凋亡峰等明显的凋亡特征.并且随处理时间延长凋亡率升高.结果表明,大剂量地塞米松快速、高效诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡.
2000, 27(5):541-544.
摘要:用人工重组的白介素6(IL-6)多次免疫兔和豚鼠,获取高效价的IL-6抗体.用氯氨T法制备 125I标记IL-6,经Sephadex G-25纯化,抗原抗体反应采用平衡一步法,4℃温育24 h后经PR试剂分离结合和游离的标记抗原.该法测定范围0.1~3.2 μg/L最低检出量为0.l μg/L,批内和批间误差分别小于6.4%和10%.健康男性115例血清IL-6含量为(0.27±0.13) μg/L.女性101例血清IL-6为(0.26±0.10) μg/L.男女无差异.此外,用该法检测兔失血性休克再灌注损伤后24 h血清IL-6水平明显升高.失血性休克大鼠淋巴液中IL-6水平明显上升,经山莨菪碱(l mg/kg)治疗休克后IL-6又明显下降.内毒素同人牙周纤维细胞共同培养不同时间也促进IL-6释放并明显高于对照水平.
2000, 27(5):544-547.
摘要:亲和胶合成实验以双环氧化合物1,4-丁二醇-2-缩水甘油醚(1,4-butanediol diglycidyl ether)为活化体及连接臂,在硼氢化钠(NaBH)存在的碱性条件下,将载体Sepharose CL―4B与雷诺普利(lisinopril)共价连接在一起,成功合成亲和层析胶,并利用亲和层析胶对猪肺血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme, ACE)进行分离提纯.猪肺组织匀浆经1.6~2.6 mol/L硫酸铵分级沉淀、透析平衡、亲和柱分离等步骤,从200 g猪肺中提纯得到0.79 mg ACE蛋白,酶活力回收11.9%,比活力38.8 U/mg.与层析前的酶液比较,亲和层析一步提纯可达264倍;与肺匀浆液比较提纯达808倍.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳可见,提纯的猪肺ACE为一条带,分子质量约为180 ku.
2000, 27(5):548-551.
摘要:Ti(Ⅳ)-H2O2比色法因背景物质干扰而测得的植物叶片内H2O2含量偏高,5%三氯乙酸抽提,活性炭脱色,Ti(Ⅳ)-4-(2-吡啶偶氮)间苯二酚(PAR)比色法测得的H2O2含量偏低.萃取法有效地脱去丙酮提液中的色素,且H2O2的回收率在95%以上.用过氧化氢酶(CAT)处理作空白对照,利用H2O2与Ti(Ⅳ)-PAR的显色反应,建立了一种简便、快速、准确的植物叶片内的H2O2含量测定方法,H2O2的最低检测浓度为0.25 μmol·L-1.用该方法测得多种植物叶片中H2O2的含量在0.1~0.8 μmol·g-1.
2000, 27(5):551-553.
摘要:在4℃条件下,采用CaCl2溶液浸泡褐藻裙带菜(Undaria pinnatifida)的叶状体,观察CaCl2溶液的浓度和浸泡时间对裙带菜叶绿体提取率及其荧光特性的影响.结果表明,裙带菜的叶状体经过CaCl2溶液浸泡后,其叶绿体的提取率有明显地提高.根据裙带菜叶绿体的提取率和室温荧光发射光谱的测定结果,认为最适的方法是采用0.2 mol/L的CaCl2溶液浸泡10 min.在这种条件下,裙带菜叶绿体的提取率是传统制备方法的5倍.室温荧光发射光谱的测定结果说明叶绿体的完整性较好.
2000, 27(5):553-555.
摘要:为了灵敏、方便地检测出细胞群体中含量极低的点突变,利用一β珠蛋白基因簇Gγ -202 C→G突变的杂合细胞株,优化传统的等位基因特异PCR的反应条件,以定量的PCR产物为模板,在含5%甲酰胺的体系中用半巢式的等位基因特异引物进行扩增.结果表明,该方法灵敏可靠,可快速检测到细胞群体中低于0.025%的点突变.
2000, 27(5):555-559.
摘要:选择青海高原海拔4000m高山上生长的唐古特红景天为实验材料,以叶片为外植体,在MS+BA2+NAA0.2固体培养基上诱导出黄绿色、松脆愈伤组织.愈伤组织细胞在同样成分的液体培养基中培养获得成功.在悬浮培养液中可检测到分泌蛋白的存在.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明,低温锻炼或脱落酸(ABA)诱导后,细胞分泌蛋白的多肽谱带数增加.与此相对应的是,细胞的抗冻能力也明显提高.PAS染色揭示多肽中均含有糖基.通过测定热滞值,确信细胞分泌蛋白是具有抗冻活性的糖蛋白.
2000, 27(5):560-561.
摘要:介绍一种快速、简便、几乎无背景的考马斯亮蓝G250(CBB G250)染色方法.该方法所用试剂仅为稀盐酸和CBB G250, CBB G250的工作浓度为0.0015%,灵敏度达0.02 μg/带, 染色2 h达70%,4 h以上或染色过夜即可充分染色.与以往的考马斯亮蓝染色方法相比,该方法有经济方便、灵敏度高、几乎无背景等优点,便于推广应用.
2000, 27(5):562-564.
摘要:为了提高血脂检验技术,探讨直接法测定低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),选用市售的两种直接测定LDL-C的试剂盒进行方法学的实验评价,结果表明:直接法具有简便、快速、准确和适合自动分析等特点.两种试剂盒的测定结果都能满足建立分析方法要求的目标,不精密度<4%,两法显著相关r=0.994, y=1.0572x-0.1052, Sy/x=0.1913,且各种方法学检验结果相近,使用者可结合实际选作常规测定之用.
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