摘要:

摘要:鸣禽受到声音信号的刺激或自身表现出发声行为时，脑内即刻早期基因(immediate early gene，IEG)能迅速被激活而表达.其中zenk、c-fos和c-jun表达的脑区及水平与鸟在鸣唱时神经元的活动区域及活动程度相一致，暗示IEG在鸣禽发声学习记忆中起重要作用.

摘要:

摘要:凋亡诱导因子（apoptosis-inducing factor, AIF）基因定位于X染色体上，其编码产物是一种可直接介导细胞核凋亡的效应分子. 鼠AIF前体蛋白在胞浆中合成后，通过其N端的线粒体定位信号（MLS）有效地穿入线粒体膜间隙，然后在102位甘氨酸处水解掉MLS，其余部分再与黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）结合，并重新折叠成为具有促凋亡潜能的成熟AIF分子，分子质量为57 ku.当凋亡信号刺激时，AIF分子从线粒体释放到胞浆，然后转位到细胞核内，引起染色体核周边凝集和DNA呈大片段断裂（～50 kb）. 该作用不受广谱caspases抑制剂z-VAD.fmk的抑制，也不受Bcl-2过量表达的影响.基因剔除实验表明，AIF蛋白的促凋亡活性是胚胎小鼠形态发生过程中类胚体成腔所必需的，而且是AIF独立作用的结果，可以不依赖caspase-3的活性.因此AIF介导的细胞凋亡可能代表了独立于caspase通路之外的另一条更原始、更保守的凋亡途径.

摘要:从分子生物学的角度而言，胚胎发育就是基因的时空调控过程，从而构建动物的三维模式.顺式调控是发育基因的基本原理；转录调控因子的激活与抑制决定了细胞分化与结构形成.

摘要:二价金属离子转运蛋白1(divalent metal transporter 1，DMT1)的发现是近年铁代谢研究领域最重大的一项突破.DMT1是哺乳类跨膜铁转运蛋白.这种蛋白质广泛分布于人体各组织.DMT1 mRNA有两种形式，一种含有IRE(iron response element)，而另一种则不含此结构.DMT1的功能主要是介导小肠上皮细胞的铁吸收以及参与铁从内吞小体移位到胞浆的过程.DMT1介导的铁转运是一个主动的和H⁺依赖的过程.DMT1也参与其他二价金属如Zn²⁺、Mn²⁺、Co²⁺、Cd²⁺、Cn²⁺、Ni²⁺和Pb²⁺的转运.小肠DMT1的表达受饮食或组织铁控制.第四跨膜区是DMT1的重要功能区.此区基因发生点突变（G185R）是导致不可逆性缺铁性贫血的原因.在帕金森氏病人的黑质发现DMT1表达异常增加，因而DMT1可能也与某些神经退行性疾病的形成有关.

摘要:信号蛋白分子的入核及出核转运是细胞因子和生长因子信号转导途径中的重要环节.核定位序列（NLS）是信号蛋白分子上与入核转运相关的氨基酸序列.核孔复合物（NPC）、核转运蛋白importin和能量供应体Ran/TC4在入核转运过程中也发挥了重要作用.另外，很多细胞因子和生长因子或其受体上所含有的NLS序列也具有核定位功能，并可能通过“伴侣机制”参与其他信号蛋白分子的入核转运.

摘要:p16^INK4a蛋白能抑制CDK4和CDK6的活性,使pRb处于非磷酸化或低磷酸化状态而能与转录因子E2Fs结合，从而抑制DNA 的合成,阻止细胞由G1期进入S期.p16^INK4a的表达受Ets1和Ets2的正调控，受Bmi-1的负调控.p16^INK4a基因缺失、突变、甲基化、RNA剪接加工错误可导致细胞周期失控和癌变.应用p16^INK4a对某些肿瘤进行基因治疗的研究正在进行中.

摘要:组织酸化是生理和病理下常见的现象.神经元可以通过酸敏感的离子通道（ASICs）来感受细胞周围的pH值的降低.ASICs属于NaC/DEG家族的一个成员.目前，已发现了6个ASICs亚基，它们在外周和中枢神经系统中广泛表达，其同聚体和异聚体通道有着各种不同的电生理学特性.ASICs在机体感觉尤其是痛觉中起着至关重要的作用.

摘要:纳米通道技术是近年来发展的一种直接解读核酸分子编码信息的新方法，它通过将单链核酸上的核苷酸序列直接转化为电信号，能以每秒超过1 000个碱基的速度对其进行超快速序列分析，较现有测序方法更简便快速和省钱.该技术除可用于核酸超快速外，还在病原体基因诊断、单核苷酸多态性和样品多成分的快速检测等多个领域有重要用途.

摘要:就供核与受体卵胞质细胞周期的相互关系问题进行了综述.核移植技术不管是在基础理论,还是在应用研究中都具有广泛的应用价值,但核移植的效率却很低,其根本原因是与核移植相关的许多基础理论问题尚不清楚,对这些问题的研究发现,维持重构卵核的正确倍性,并使其重新程序化是核移植成功的关键,不同的胞质受体及不同的供体细胞及其状态均对重构胚的发育有影响.

摘要:研究了具有抗HIV-1活性的大环多胺类化合物与RNA的识别作用，以及其对cos-7细胞凋亡的影响，以进一步探讨其抗HIV-1的作用机理.实验采用琼脂糖凝胶电泳方法, 观察化合物与RNA的识别作用；通过流式细胞计数法探讨其对cos-7细胞凋亡的影响；运用计算机分子模型, 从理论上Docking计算化合物与TAR RNA结合的可能性.结果表明, 大环多胺类化合物MP-1、MP-2和MP-3不仅具有断裂RNA的作用，并可抑制Tat-RNA的相互作用, 还可影响cos-7细胞亚二倍体的含量; 理论化学计算数据与实验结果基本一致.这一结果提示化合物的抗HIV-1活性可能通过作用于病毒基因组RNA而发挥作用，是多靶作用的结果.

摘要:细胞内胆固醇代谢的失衡和细胞凋亡都与动脉粥样硬化的发生有关.为了研究两者之间的关系，我们把猪的主动脉平滑肌细胞与15 mg／L氧化低密度脂蛋白共同孵育72 h，发现细胞内胆固醇酯与总胆固醇的比值由26.2%增加到64.1%，并且细胞内胆固醇酯的积聚有剂量依赖关系，表明细胞已经转化为平滑肌源性的泡沫细胞.另外，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜和流式细胞仪分别发现，与氧化低密度脂蛋白共孵育的细胞有典型的凋亡形态改变.从实验可以推测，由氧化低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞凋亡，除了低密度脂蛋白氧化的因素外，也可能与细胞内胆固醇酯与总胆固醇的比值升高有关.

摘要:为观察NDR2基因在人类正常组织及相应肿瘤组织中的表达分布特点，收集人脑与胶质瘤、肺与肺癌、胃与胃癌、结肠与结肠癌组织标本，分别进行组织石蜡切片和总RNA提取，应用免疫组化方法和RT-PCR技术检测NDR2蛋白质及mRNA表达水平，并通过DNA测序验证PCR产物的正确性.免疫组化结果表明，在上述各组织均有NDR2蛋白不同程度的表达.RT-PCR结果显示，在人脑和胶质瘤组织、肺与肺癌组织、胃与胃癌组织、结肠与结肠癌组织中均有NDR2 mRNA表达，其表达水平以脑组织为最高.NDR2 mRNA在正常脑和肺组织的表达水平分别显著高于胶质瘤与肺癌组织，而结肠与结肠癌组织，胃与胃癌组织NDR2 mRNA表达水平则无显著差别.以上结果表明，NDR2基因可能广泛表达于人体正常组织内，而在胶质瘤与肺癌中的表达较相应正常组织减低，提示该基因可能与神经系统及呼吸系统肿瘤的发生发展有关，为进一步探讨该基因功能提供了线索.

摘要:为了研究中胚叶叉头-1(MFH-1)基因在骨骼形成和细胞分化中的作用，利用基因重组、杂交瘤技术制作MFH-1单克隆抗体, 利用蛋白质印迹和RNA印迹分析观察了骨成形蛋白-2 (BMP-2)诱导小鼠肌胚细胞C2C12表达MFH-1、产生碱性磷酸酶和骨钙蛋白.小鼠肌胚细胞C2C12低水平地表达内源性MFH-1蛋白以及导入小鼠MFH-1 cDNA的人膀胱癌细胞HTB9也表达小鼠MFH-1蛋白，这种蛋白质定位于细胞核中.用BMP-2处理后, MFH-1蛋白和mRNA在C2C12细胞中的表达显著地增加.用反义MFH-1序列转染小鼠肌胚细胞C2C12可降低内源性MFH-1水平, BMP-2不能诱导导入反义MFH-1序列的肌胚细胞C2C12产生MFH-1蛋白，也不能诱导碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙蛋白量的增加.结果表明, BMP-2诱导的MFH-1蛋白在调节肌胚细胞C2C12向成骨细胞分化方面起关键作用.

摘要:在染色体7q31-32多种肿瘤杂合性丢失（loss of heterozygosity,LOH）高频区，采用表达序列标签（expressed sequence tag,EST）介导的定位候选克隆策略获得了一个定位于人染色体7q31-32的新基因（GenBank 登录号: AF196976）.该基因编码653个氨基酸，蛋白质理论pI/m:6.58/72.7 ku.它包含七个典型的LRR、一个IgC2样结构域.此外，它还包含一个N端信号肽、一个C端跨膜区.其结构特征表明它是富亮氨酸重复（leucine-rich repeat，LRR）超家族的新成员.经过人类基因组命名委员会的同意，将该基因命名为LRRC4.此外，通过序列相似性匹配还获得了定位于小鼠6号染色体的LRRC4的同源基因（GenBank 登录号: AF290542）.RNA印迹和RT-PCR检测发现LRRC4在正常人脑组织相对特异表达，而在多种原发性脑瘤表达明显下调或缺失.综合考虑LRRC4基因的序列特征及表达谱，提示LRRC4基因可能在神经系统中发挥重要作用.

摘要:采用高效液相色谱法分离鉴定了红细胞膜蛋白质跨膜域的亲水性肽链，结果显示血型糖蛋白A(GPA)Lys101～Asp130与带3蛋白有相关性.为进行深入研究，采用RT-PCR方法从K562细胞中扩增了410 bp的GPA基因,分别克隆到酵母双杂交BD端表达质粒和杆状病毒转移载体上.同时，以含有带3蛋白全长基因的质粒为模板扩增了348 bp的带3蛋白C端基因，将其克隆到酵母双杂交AD端表达质粒.经酵母双杂交营养缺陷培养选择和β半乳糖苷酶检测证实GPA与带3蛋白之间存在相互作用.GPA表达产物分别经抗带3蛋白和抗GPA抗体进行蛋白质印迹分析，表明二者具有免疫交叉反应.上述结果表明带3蛋白与GPA在结构与功能上存在着密切联系.

摘要:以胰岛素样生长因子受体－1基因为靶筛选抗肿瘤药物.根据IGF1RmRNA的二级结构设计了9条反义寡核苷酸药物，以脂质体介导进行转染，MTT染色计算细胞生长抑制率，从中筛选出一条序列并对之进行优化，最后以最佳序列进行体外作用持续时间及体内细胞生长抑制率分析.结果表明该序列在体内外具有良好的抗肿瘤活性，具有剂量依赖性关系，且对荷瘤裸鼠无明显的毒性.IGF1R可作为肿瘤治疗的新靶点.

摘要:用Fura-2显微荧光测钙技术，研究了用外源性一氧化氮（NO）供体S-亚硝基谷胱甘肽（GSNO）诱导的，人脐静脉内皮细胞系ECV-304细胞胞内游离钙离子浓度（［Ca²⁺］_i ）升高以及硒的抑制效应.结果表明，GSNO作用于ECV-304细胞，短时间内即可导致其胞内游离钙离子浓度升高.胞外液换为无钙液或向胞外液中加入CdCl₂（1 mmol/L）对GSNO引起的［Ca²⁺］_i升高无影响.提示，GSNO刺激主要引起胞内钙库释放.而且，一氧化氮清除剂血红蛋白（Hb）对这一过程有抑制作用，说明GSNO引起的胞内钙库释放由NO介导.经亚硒酸钠（1 μmol/L）处理的细胞，其NO引起的［Ca²⁺］_i升高幅度明显被抑制，说明NO的这种作用可能与细胞的氧化还原状态有关.

摘要:以扫描正弦光栅作为刺激，用冰冻法毁损皮层17、18、19区和外侧上雪氏回(LS区)来阻断皮层对外膝体的反馈投射，记录并描绘了猫外膝体597个细胞的方位调制特性.去视皮层猫外膝体神经元的平均方位选择性强度(Bias)为0.154,与正常猫(0.155)几乎相同,其最优方位偏向于水平方位.与正常猫外膝体不同的是，去视皮层猫外膝体失去了最优方位的切向分布规律，用GABA或KCl压抑皮层活动得到了相近的实验结果.结果说明正常外膝体的最优方位切向分布规律来自皮层反馈投射.

摘要:长波长光的强穿透能力和对活体细胞和生物组织光毒性很小的特性，使得双光子激发荧光显微术已经成为无损伤成像的重要工具.可是双光子激发的高光子密度可能会产生高次光子相互作用, 从而产生更快的光漂白.从实验上研究了离体和活体细胞内的若丹明123和若丹明B分别在单光子激发和双光子激发时的光漂白特性.在体的实验结果与离体的实验结果一致.正如期望的一样，单光子激发时光漂白速率非常近似地随着激发功率的增加而线性增加.可是，双光子激发时的光漂白速率并不是正比于激发功率的平方，而是正比于激发功率的高次方（＞3.5）.对绿色荧光蛋白（GFP）变异体CFP和YFP的实验也得到同样的结果，这就表明高次光漂白可能是双（多）光子激发中的普遍现象.因此多光子的应用可能会受到强光漂白的限制.

摘要:对120个较短编码序列(＜1 200 bp)的Fourier频谱进行分析表明，3-碱基周期性在短编码序列中并不是绝对存在的.统计分析提示，编码序列有无3-碱基周期性与序列的碱基组成和分布、所编码蛋白质氨基酸的选用和顺序以及同义密码子的使用都有一定的关系.一般地，非周期-3序列中A+U含量高于G+C含量，周期-3序列的情况则相反；非周期-3序列中碱基在密码子三个位点上的分布比周期-3序列中的分布均匀；非周期-3序列密码子和氨基酸的使用偏向没有周期-3序列的大.在利用Fourier分析方法预测DNA序列中的基因和外显子时，应充分考虑到这些现象.

摘要:为探讨食管癌高发区人群食管上皮癌变过程中的早期分子改变及早期癌变机理.应用流式细胞术和免疫荧光技术及碘化丙啶DNA荧光染色方法，对食管上皮癌前细胞的DNA含量、端粒酶含量和多个基因p53、p16、cyclin D1蛋白质表达进行了定量检测.检测结果发现，DNA含量在癌变形成时明显增加，异倍体率为87.9%；p53蛋白积聚发生在癌变早期，在癌细胞组的阳性率为100%（5/5）；抑癌基因p16在癌变早期有明显缺失；癌基因cyclin D1及端粒酶阳性率在癌细胞组都为100%（分别为6/6，7/7）.研究结果表明：在癌变早期，DNA含量及异倍体率增加，癌基因cyclin D1表达增高，抑癌基因p16缺失及p53蛋白积聚，端粒酶含量也明显增高，在癌形成时已有多个分子事件发生.

摘要:为了探讨白血病抑制因子 (LIF) 对胚泡着床作用的机理，胚泡经与LIF及其特异性抗体培养后，通过RT-PCR及免疫印迹技术，分析了LIF与着床前小鼠胚泡的基质金属蛋白酶9(MMP9)表达和分泌之间的关系.结果显示：LIF可明显诱导胚泡MMP9的分泌和基因表达； 经LIF特异性抗体封闭后，胚泡MMP9的分泌及基因表达下降，且下降趋势随着LIF被封闭时间延长而减弱，对MMPs组织抑制因子1(TIMP1)的影响则不明显.说明LIF可能通过诱导MMP9的分泌及基因表达来影响胚泡对子宫内膜细胞外基质的水解，促进着床.

摘要:为将αB-晶状体蛋白（αB-crystallin, αB-C）导入心肌细胞，采用蛋白质工程技术将人αB-晶状体蛋白全长cDNA基因克隆至具有细胞膜通透能力的膜移位序列（membrane-translocating sequence,MTS）的碱基顺序的下游，在大肠杆菌中表达谷胱甘肽5-转移酶(GST)-MTS-αB-C融合蛋白.用谷胱甘肽-Sepharose4B亲和层析分离表达产物,用Xa因子将其中GST切除，并通过阴离子交换层析纯化MTS-αB-C.纯化的MTS-αB-C在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)上呈单一条带，分子质量23 ku;免疫印迹显示GST-MTS-αB-C与MTS-αB-C均能为人αB-C抗体识别而在相应位置出现清晰条带.GST-MTS-αB-C与MTS-αB-C均有分子伴侣活性.用异硫氰荧光素（FITC）标记的MTS-αB-C与心肌细胞共培养后，在荧光显微镜下观察到其进入了心肌细胞.

摘要:应用多光子激发激光扫描显微镜对5-羟色胺（5-hydroxytryptamine, 5-HT）孵育的大鼠粘膜型肥大细胞进行自发荧光成像，首次观察到了活细胞内5-HT相关的可见荧光，并对其产生机理进行了初步探讨.实现了对活细胞内5-HT空间分布的高分辨成像，为研究活组织或细胞内5-HT的空间分布和含量与细胞功能状态的关系提供了新的实验方法.

摘要:根据实验测定的Ⅰ类金属硫蛋白(metallothionein, MT)三级结构的实验数据，给出该类蛋白质的两种特征结构(CXC、CXXC一级结构，半胱氨酸-金属络合簇三级结构)的原子间距离约束条件，然后运用距离几何算法计算出一系列可能的构象.从这些构象中经统计分析筛选出目标函数值显著较小的结构作为所预测蛋白质的三级结构模型.用已知结构的蓝蟹MT对方法进行检验证实其可行性后，对植物炭疽病真菌金属硫蛋白CAP3进行了三级结构预测.

摘要:研究了水/有机溶剂双相中,固定化啤酒酵母细胞催化三甲基硅乙酮不对称还原成（－）-1-三甲基硅乙醇的反应，系统探讨了振荡速度、有机溶剂疏水性、水相与有机溶剂相体积比、水相pH值和反应温度对反应速度、产率和产物光学纯度的影响.结果表明，上述因素对固定化啤酒酵母细胞催化三甲基硅乙酮不对称还原反应均有较显著的影响.正己烷为该反应最好的有机溶剂，振荡速度以150 r/min为宜,水相与有机溶剂相体积比以1∶2较佳，适宜的pH值为8，最佳反应温度为25～30℃.在该优化反应条件下，反应最大产率和产物的光学纯度分别高达96.8％和95.7％(ee).

摘要:为了进一步分离人鼻咽组织特异性表达基因和鼻咽癌特异相关基因，采用SMART(switching mechanism at 5′ end of RNA transcript)技术，构建了人胚鼻咽上皮cDNA文库.从原代培养的人胚鼻咽上皮分离总RNA并纯化mRNA，利用经修饰的oligo（dT）引物（含sfiⅠB酶切位点）合成cDNA第一链，同时根据真核生物mRNA5′端帽子结构特点，利用SMART核苷酸（含sfiⅠA酶切位点）作为cDNA第一链在mRNA 5′端延伸出去的模板，进而以此序列为引物利用LD-PCR（long-distance-PCR）合成双链cDNA，双链cDNA经sfiⅠ(ⅠA和ⅠB)酶切和过柱分级分离后，克隆入经sfiⅠ酶切的λTrip1EX2载体后经体外包装而成cDNA文库.结果表明，原始人胚鼻咽上皮cDNA文库获得1.0×10⁶个重组子，重组率达96%.文库扩增后，滴度达7.8×10⁹ pfu/ml，插入cDNA平均长度为1.2 kb，用PCR从该文库扩增出本实验室新克隆的鼻咽癌相关基因NAG4的全长cDNA.构建的人胚鼻咽上皮cDNA文库具有良好的质量，该cDNA文库为进一步筛选、克隆鼻咽癌抑癌基因及鼻咽组织特异性表达基因奠定了基础.

摘要:原位双膜法是一种基于免疫原理的快速筛选高表达甲醇酵母转化子的方法，即首先将固体培养基上的菌落转印至醋酸纤维素薄膜上，再利用硝酸纤维素薄膜原位捕获穿过醋酸纤维素薄膜的菌落外泌蛋白，然后用免疫方法检测与硝酸纤维素薄膜结合的蛋白.利用此法筛选到人Flt3配体（hFL）的甲醇酵母高表达转化子，液体诱导表达量约20 mg/L.ELISA结果证明，原位双膜法所得的菌落染色强度与该菌落液体诱导表达水平正相关.蛋白质印迹结果显示，培养上清在25 ku处有明显杂交条带，而对照组杂交呈阴性，且表达量随诱导天数增加.原位双膜法是一种良好的筛选方法，可以快捷、准确地筛选高表达酵母转化子.

摘要:为了制备蛋白质微阵列和研究芯片表面抗原-抗体的相互作用，研究了如何在玻片表面固化蛋白质和用荧光染料（Cy3,Cy5）对蛋白质进行标记.结果表明，在醛基修饰的玻璃表面，通过共价偶联的方法将抗原或抗体固定到芯片表面，能使二者保持其特异性结合能力.同时，荧光标记后的抗原或抗体仍然具有特异性结合能力.蛋白质微阵列是通过机械手在玻片表面排阵制作的.芯片上的荧光信号获取采用了激光共焦荧光扫描系统.用不同浓度的抗原探针阵列，对其相应的抗体靶分子的特异性结合进行了分析和研究.此外，还通过在玻片表面固定兔IgG和固定鼠IgG，对羊抗兔和羊抗鼠抗体与其相应抗原的特异性相互作用进行了检测.

摘要:

摘要:一种利用菌落直接PCR扩增DNA并用于测序的实验方法.通过对引物的设计和菌液浓度控制，使PCR反应后的内容物对测序干扰减到最小.与传统的测序过程比较，它省去了抽提模板DNA一步，节省了大量时间和实验成本.另外此方法可对BAC亚克隆库构建时由连接转化过程中导致的假阳性起筛选和鉴定作用.采用该法成功测定了籼稻（Oryza sativa indica）广陆矮4号的L3173号BAC DNA全长序列（约100 kb），GenBank登录号：AL512542.

摘要:用生物标记的方法将色氨酸类似物标记在DsbA蛋白中的色氨酸位置，分析标记蛋白质的谱学性质、色氨酸结构环境和潜在应用前景.5-OH-Trp标记的DsbA蛋白具有315 nm激发的荧光发射光谱；¹⁹F-NMR 能分辨5-F-Trp标记的DsbA蛋白的两个F-Trp残基(Trp76和Trp126)，Trp76化学位移变化反映二硫键交换引起的结构转化.进一步将利用标记蛋白的独特荧光和¹⁹F-NMR性质，研究DsbA蛋白的氧化还原及与底物蛋白的结合作用.

摘要:UBAP1(ubiquitin associated protein 1)基因是最近克隆的一个定位于人类染色体9p21-22鼻咽癌杂合性丢失高频区的泛肽相关蛋白家族新成员.为了深入研究UBAP1基因的功能，利用计算机对表达序列标签(expressed sequence tag, EST)、UniGene等数据库进行综合搜索分析，结合cDNA克隆测序的方法, 成功地获得了UBAP1基因在小鼠中的同源基因.小鼠UBAP1基因cDNA全长为2 676 bp，编码一个由441个氨基酸组成的蛋白质，在其蛋白质C端只有一个泛肽相关功能域（UBA domain）.与人UBAP1基因相比，两者编码的氨基酸序列有89%相同.基于EST的数字化表达分析显示UBAP1基因在小鼠正常组织中广泛高表达.

摘要:溴化氰是常用载体(树脂)活化剂，但其毒性很强，具有挥发性，活化后树脂带较强的电荷而导致非特异性吸附.羰基二咪唑(1,1′-carboxyl-diimidazole, CDI)近年来被用于树脂的活化，具有毒性低、相对安全、方便、活化效率高、活化后树脂所带电荷相对较少等优点.由于国内同行很少采用CDI活化树脂制备亲和层析柱或固定化酶，在此介绍该方法的一些关键步骤供同行参考.