• 2002年第29卷第5期文章目次
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    • >微型述评
    • 非核糖体多肽合成酶研究进展

      2002, 29(5):667-669.

      摘要 (3160) HTML (6) PDF 0.00 Byte (3862) 评论 (0) 收藏

      摘要:细菌和真菌采用非核糖体系统合成一些重要的多肽类物质.近年来的研究表明,在该系统中发挥关键作用的是一类分子巨大的非核糖体多肽合成酶.它们由顺序排列的组件构成,酶分子结构本身即蕴涵着多肽合成的信息.对非核糖体多肽合成酶结构和功能的了解,使人们期望可以通过对这类酶的修饰和重组来合成一些新的多肽类物质.

    • >综述与专论
    • 果蝇学习记忆行为的分子机制

      2002, 29(5):670-673.

      摘要 (2888) HTML (4) PDF 0.00 Byte (3720) 评论 (0) 收藏

      摘要:分子遗传学技术的应用一方面发展了新的神经组织学方法,使果蝇脑中的细微结构得以展示;另一方面,对记忆从形成到提取过程中信息处理的研究,表明蘑菇体可能在形成长时程记忆方面起重要作用,而一对背内侧核团(dorsal paired medial cells)与蘑菇体之间的信息传递对于记忆的“提取(retrieval)”是至关重要的.行为功能检测为视觉信号整和的研究提供了新的实验依据,从而使果蝇蘑菇体的高级脑中枢功能逐渐被揭示出来.

    • 小型核酶的结构和催化机理

      2002, 29(5):674-677.

      摘要 (2917) HTML (3) PDF 0.00 Byte (3758) 评论 (0) 收藏

      摘要:自然界存在的小型核酶主要有锤头型核酶、发夹型核酶、肝炎δ病毒(HDV)核酶和VS核酶.锤头型核酶由3个短螺旋和1个广义保守的连接序列组成;发夹型核酶的催化中心由两个肩并肩挨着的区域构成;HDV核酶折叠成包含五个螺旋臂(P1~P4)的双结结构;VS核酶由五个螺旋结构组成,这些螺旋结构通过两个连接域连接起来.小型核酶的催化机理与其分子结构密切相关.金属离子或特定碱基都可作为催化反应的关键成分.锤头型核酶的催化必须有金属离子(尤其是二价金属离子)参与,而发夹型核酶则完全不需要金属离子.基因组HDV核酶进行催化时要有金属离子和特定碱基互相配合.

    • RNA干涉分子机制研究进展

      2002, 29(5):678-681.

      摘要 (3055) HTML (32) PDF 0.00 Byte (3816) 评论 (0) 收藏

      摘要:RNA干涉(RNA interference,RNAi)是生物体内的一种通过双链RNA(dsRNA)来抵抗病毒入侵和抑制转座子活动的自然机制.双链RNA与同源mRNA互补结合而使特定基因失活,这一过程已经在包括拟南芥、线虫和真菌等多种模式生物中得到揭示.近来研究表明,21~25 nt的小干涉RNA(small interference RNA, siRNA)可介导哺乳动物细胞特异性基因沉默.RNAi具有高效性和高度特异性,可能成为关闭基因的新技术而在基因功能研究和疾病基因治疗中发挥重要作用.

    • 鱼类抗菌肽的研究进展

      2002, 29(5):682-685.

      摘要 (3069) HTML (34) PDF 0.00 Byte (4109) 评论 (0) 收藏

      摘要:鱼类抗菌肽是鱼体天然免疫的重要组成部分,其结构和组成复杂多样.根据生化和结构特点,可将它们分为4种基本类型:具有疏水或双亲性α螺旋结构的抗菌肽、含多对二硫键并可形成β折叠结构的抗菌肽、组蛋白样抗菌肽和具有糖基化修饰的抗菌肽.鱼类抗菌肽多以前肽原的形式合成,通过酶解切除信号肽和羧基端酸性片段后形成有活性的成熟肽.成熟肽具有很强的抑菌活性,其最小抑制浓度多在毫摩尔水平.目前,已克隆了多个鱼类抗菌肽基因,揭示了pleurocidin等基因家族的结构及其转录调控特点.鱼类抗菌肽的抗菌机制已建立了“桶-桶板”和“地毯”样两种模型,基本阐明了抗菌肽分子结构与抗菌功能间的关系.

    • γ-微管蛋白研究进展

      2002, 29(5):686-690.

      摘要 (2916) HTML (57) PDF 0.00 Byte (2748) 评论 (0) 收藏

      摘要:概述了近年来对γ-微管蛋白复合体结构、分子机制以及功能的研究进展.γ-微管蛋白是真核生物体内一种重要的保守性功能蛋白,以γ-微管蛋白小复合体和γ-微管蛋白环式复合体两种形式存在.通过γ-微管蛋白复合体结合蛋白定位于微管组织中心,参与微管的晶核起始以及有丝分裂纺锤体的组装等细胞功能.

    • 冷激蛋白的研究进展

      2002, 29(5):691-695.

      摘要 (2739) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3422) 评论 (0) 收藏

      摘要:冷激蛋白(CSPs)广泛存在于革兰氏阳性菌和阴性菌中,它是细胞在应对冷刺激时所产生的一系列7 ku左右的蛋白质,结构上富含芳香族氨基酸,起着重要的分子伴侣作用,能够增强细胞抵御冷激环境胁迫的能力.以大肠杆菌、枯草杆菌、嗜热链球菌、沙门氏杆菌等为例,介绍各种冷激蛋白在产生、结构、调控等方面的异同,以及它在生产、生活中的应用价值.

    • >研究快报
    • LRRC4融合蛋白的构建与表达研究

      2002, 29(5):696-701.

      摘要 (2947) HTML (31) PDF 0.00 Byte (3641) 评论 (0) 收藏

      摘要:在前期工作中,采用EST介导的定位候选克隆策略,克隆了一个在脑瘤中表达下调的脑特异表达新基因LRRC4,为进一步研究其结构与功能的关系,构建了含LRRC4基因全长编码区的pGEM-T Easy质粒,在此基础上通过亚克隆构建了LRRC4融合蛋白的绿色荧光蛋白(pEGFP-C1)表达质粒,瞬时转染哺乳动物细胞,结果发现表达的LRRC4融合蛋白定位于活细胞的细胞膜上.同时,构建了LRRC4全长和截短型原核表达pGEX-4T-2质粒,成功而高效地在大肠杆菌BL21 中表达LRRC4融合蛋白.上述工作为制备多抗,深入研究LRRC4基因的功能奠定了基础.

    • >研究报告
    • 斜纹夜蛾核多角体病毒抑制苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒诱导的斜纹夜蛾细胞凋亡

      2002, 29(5):702-707.

      摘要 (2754) HTML (36) PDF 0.00 Byte (3005) 评论 (0) 收藏

      摘要:野生型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus, AcMNPV)感染斜纹夜蛾(Spodoptera litura)细胞系Sl-zsu-1,可引起典型的细胞凋亡;但可以在草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞Sf-9中复制并形成多角体.比较了AcMNPV p35基因在病毒感染两种细胞的复制和转录情况,认为p35在非受纳细胞中及时有效的表达能阻止细胞发生凋亡;共感染实验结果表明,斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedrovirus, SpltMNPV)可以抑制AcMNPV诱导的细胞凋亡并可帮助病毒进行复制,推测SpltMNPV基因组中与p35同源的p49基因挽救了细胞的自杀行为.

    • 大鼠卵母细胞体外发育过程中的微管组装研究(英)

      2002, 29(5):708-713.

      摘要 (2528) HTML (9) PDF 0.00 Byte (2981) 评论 (0) 收藏

      摘要:大鼠卵母细胞的发育具有许多与其他哺乳动物不同的特点,用激光共聚焦显微术研究了大鼠卵母细胞发育过程中微管的组装过程,以及一些因素对微管组装过程的影响.结果表明,在大鼠卵母细胞减数分裂的细胞周期进程中,细胞微管系统发生广泛而剧烈的重组,紫杉醇、星形孢菌素和冈田酸等药物能显著改变卵母细胞内的微管组织状态.大鼠卵母细胞可以在体外发生自发的孤雌活化,也可以被细胞松弛素诱导发生胞质假分裂.因此,研究了在这些过程中微管结构的特殊构象,以期更加深入认识这些特殊细胞事件的生化机理.

    • 短暂脑缺血大鼠海马CA1区锥体细胞大电导Ca2+依赖K+通道活动降低(英)

      2002, 29(5):714-718.

      摘要 (3092) HTML (23) PDF 0.00 Byte (3360) 评论 (0) 收藏

      摘要:短暂脑缺血可对随后的损伤性脑缺血表现出明显的耐受.有研究表明大电导Ca2+依赖K+(BKCa)通道活动增强参与了缺血性脑损伤.采用膜片钳的内面向外式,观察了3 min短暂脑缺血后6 h、24 h以及48 h大鼠海马CA1区锥体细胞上BKCa通道活动的动态变化.短暂脑缺血后BKCa通道的单通道电导和翻转电位均未见明显变化,但通道的开放概率则在缺血预处理后的前24 h内显著降低.通道动力学分析显示通道关闭时间变长是短暂脑缺血后通道活动降低的主要原因,因为通道的开放时间未发生明显变化.结果提示短暂脑缺血所致的BKCa通道活动降低可能与缺血耐受的产生有关.

    • 慢性应激对大鼠海马锥体细胞形态结构的效应

      2002, 29(5):719-723.

      摘要 (2901) HTML (139) PDF 0.00 Byte (3666) 评论 (0) 收藏

      摘要:为研究慢性应激相关精神障碍的发病机制,采用尼氏(Nissl)染色法、高尔基(Golgi)镀染法和透射电镜技术,探讨慢性应激对大鼠海马CA1、CA3区锥体细胞形态结构的效应.结果显示应激组大鼠海马CA1区锥体细胞形态结构较对照组无明显变化.应激组海马CA3区锥体细胞数(35.14±3.85)较对照组(38.74±3.54)显著减少(P<0.05);顶树突的总长度(155.67 μm±33.32 μm)较对照组(195.63 μm±34.61 μm)显著缩短(P<0.05);应激组大鼠海马CA3区锥体细胞出现超微结构的改变,包括细胞固缩、体积缩小、核膜皱缩、线粒体变性和粗面内质网模糊不清.这提示海马CA3区锥体细胞形态结构的改变,可能是慢性应激相关精神障碍的病理生理基础.

    • 大鼠丘脑侧后核到初级视皮层突触传递的短时程可塑性

      2002, 29(5):724-728.

      摘要 (2635) HTML (21) PDF 0.00 Byte (2982) 评论 (0) 收藏

      摘要:大鼠丘脑侧后核(lateral posterior thalamic nucleus,LP nucleus)到初级视皮层的突触连接是膝体外视觉通路的重要组成部分.运用场电位记录和电泳的方法在位研究了该视觉回路突触传递的短时程可塑性.结果表明,无论是运用双脉冲刺激还是串刺激都能观察到明显的短时程抑制特性.电泳荷包牡丹碱(bicuculline)和2-hydroxy-saclofen使该抑制作用减弱,电泳钙离子使抑制加强,电泳APV对抑制作用没有明显影响.所以突触前递质释放水平的改变,和γ-氨基丁酸(GABA)能受体(尤其是GABAB受体)的活动都会影响该回路突触传递的短时程可塑性,而N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体则几乎没有作用.该回路很强的短时程抑制特性可能与LP核在视觉注意中的作用有关.

    • 红莲型细胞质雄性不育水稻线粒体atp6基因转录本的编辑位点研究

      2002, 29(5):729-733.

      摘要 (2606) HTML (37) PDF 0.00 Byte (3287) 评论 (0) 收藏

      摘要:以红莲(HL)型水稻细胞质雄性不育系A、保持系B及杂种一代F1为材料,首次比较研究了红莲型水稻线粒体atp6基因转录本的编辑位点及各位点的编辑频率.结果表明atp6基因的转录本有18个编辑位点,其中有15个发生在密码子的第一和第二位点上,这些位点的编辑最终会导致氨基酸种类的变化.18个编辑位点在A、B和F1中没有差异,但各位点的编辑频率在引入了核恢复基因的条件下发生了较大的变化,完全编辑的比例增加.这些结果首次证明HL型细胞质雄性不育与线粒体atp6转录本的编辑有一定相关性,编辑不充分的转录产物最终会干扰线粒体功能的正常发挥.

    • 电穿孔介导质粒DNA肿瘤内转移抑制恶性肿瘤生长与转移

      2002, 29(5):734-740.

      摘要 (2850) HTML (33) PDF 0.00 Byte (2885) 评论 (0) 收藏

      摘要:利用携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)编码基因的表达质粒,测试电穿孔方法介导目的基因活体组织内转移的效率并优化电击参数.在此基础上采用电穿孔技术直接将编码白介素12(IL-12)、白介素2(IL-2)、粒单细胞克隆刺激因子(GM-CSF)等免疫调节因子或反义血管内皮细胞生长因子121(VEGF121)、可溶性血管内皮细胞膜受体(sFlk-1及ExTek)等血管生成抑制因子表达质粒转移至肿瘤局部.实验结果表明电穿孔介导GFP表达质粒肌肉内转移的效率较高,GFP可在肌细胞内持续高水平表达3周以上,而在肿瘤细胞内只能表达4~6 d,但高电压短脉冲电击组肿瘤内GFP阳性细胞数比低电压长脉冲组高2.68倍.多次电击介导IL-12表达质粒转移至肿瘤组织内,可有效地抑制小鼠膀胱癌BTT-gfp、人乳腺癌MCF-7及肝癌SMMC 7721-gfp的生长.MCF-7对血管生成抑制因子基因转移治疗较敏感,单独应用反义VEGF121、sFlk-1或ExTek即显示明确的治疗效果.SMMC 7721-gfp单独应用sFlk-1有效.小鼠膀胱癌对单独应用反义VEGF121、sFlk-1或ExTek治疗效果不理想,但联合应用sFlk-1和ExTek仍然可以有效地抑制肿瘤生长与转移,甚至使肿瘤缩小或消失.提示电穿孔技术是一项高效、安全、经济的体内基因转移方法.

    • Tn细胞凋亡抑制蛋白(TnIAP)在粉纹夜蛾细胞中的表达和活性研究

      2002, 29(5):741-744.

      摘要 (2578) HTML (25) PDF 0.00 Byte (2737) 评论 (0) 收藏

      摘要:在粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)细胞Tn-5B1-4中,高效表达了来自粉纹夜蛾细胞Tn-5B1-4能够抑制细胞凋亡的TnIAP蛋白.聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹分析表明,表达的重组TnIAP只有少部分是可溶性蛋白,大部分以不溶的形式存在.这一结果与以往在昆虫细胞中往往表达出可溶性蛋白不同.活性实验表明,可溶的重组TnIAP能够直接抑制caspase-9酶解Ac-LEHD-AFC的活性,也能抑制caspase-9激活HEK293细胞抽提物酶解Ac-DEVD-AFC的活性.结果进一步证明,昆虫和哺乳动物的细胞凋亡分子机制在进化上是极为保守的.

    • 耐热嗜酸古细菌谷氨酰胺合成酶基因的克隆、诱导表达和活性测定

      2002, 29(5):745-749.

      摘要 (3233) HTML (356) PDF 0.00 Byte (3013) 评论 (0) 收藏

      摘要:采用DEAE-Sepharose及Sephacryl S-300柱分离纯化了耐热嗜酸古细菌Sulfolobus acidocaldarius谷氨酰胺合成酶(E 6.3.1.2,Sac-GS). SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分子质量为53 ku的单一条带.测定其N端氨基酸序列为PGLPKNEHEALEFLKSNNIKWVDLQ,与其他古细菌谷氨酰胺合成酶的氨基酸序列进行比较后,发现均存在ATP结合保守序列TFMPKP(I/L/F)(F/P/Y)(G/R).采用碱基的简并性设计出一对简并引物,以Sulfolobus acidocaldarius的基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得780bp的DNA片段,经克隆测序后确定为谷氨酰胺合成酶基因片段,以地高辛标记的该片段为探针,将Sulfolobus acidocaldarius基因组DNA用不同的限制性内切酶分别进行单双酶组合切割,然后进行DNA印迹分析,选出了2.4 kb的BamHⅠ/HindⅢ双酶切片段,并克隆到pBluescript KS+质粒中,通过菌落原位杂交获得阳性克隆, 进行DNA全序列测定后,得到完整的1.5 kb的谷氨酰胺合成酶全基因序列,再将其克隆到pET3c载体中,在大肠杆菌BL21中进行诱导表达并进行相应的活性测定,其酶活力的最适温度为90℃.该酶在高温下所表现出的高活性充分说明其来源于耐热微生物.

    • 成梯度增加的拉伸刺激对成骨细胞胶原合成的影响

      2002, 29(5):750-753.

      摘要 (2360) HTML (4) PDF 0.00 Byte (2966) 评论 (0) 收藏

      摘要:使用四点弯曲加载装置研究机械拉伸对成骨细胞胶原合成的影响,在生理应变范围(500~1 500 με)研究了不同加载时间、不同应变水平对成骨细胞胶原合成的影响.发现在500 με下的拉伸刺激提高了成骨细胞合成胶原的能力,而在1 000 με和1 500 με下的拉伸刺激使成骨细胞的胶原合成受到了明显抑制(P<0.01).设计了应变成梯度增加的加载方式:使细胞在500 με加载一段时间后,将应变增加到1 000 με加载同样长的时间,最后将应变增加到1 500 με加载同样长的时间.在梯度加载实验中发现,成骨细胞接收到有利于其胶原蛋白合成的信号时,大量地吸收用于合成胶原的脯氨酸,当力学刺激变为抑制信号时,储存在胞内的3H-脯氨酸又重新释放回溶液中.说明在应变逐渐增加的加载过程中,细胞会进行自我调节以适应新的机械刺激.

    • 60Co辐照对水稻基因组DNA诱变的分子生物学效应

      2002, 29(5):754-759.

      摘要 (2766) HTML (60) PDF 0.00 Byte (3278) 评论 (0) 收藏

      摘要:以水稻品种农林8号及其60Co γ射线辐照突变体农林8号m为研究材料,选用360个10碱基寡核苷酸随机引物,利用随机扩增多态性DNA标记技术筛选出1个引物OPG18在农林8号和农林8号m之间表现出共显性的多态性.通过对该共显性标记的克隆和序列分析表明,突变体农林8号m与农林8号相比有29 bp DNA片段的缺失.研究结果为60Co γ射线辐照导致植物基因组DNA缺失提供了一个最直接明确的证据.

    • Fisher线性判别函数在基于COGs分类的基因组间距离研究中的应用

      2002, 29(5):760-765.

      摘要 (3092) HTML (6) PDF 0.00 Byte (3035) 评论 (0) 收藏

      摘要:利用全基因组信息构建系统发育树.基于COGs类,对每一个基因组的每一个基因,都用一个17维的向量来描述其编码蛋白隶属于17个COGs类的程度;而与一个基因组的所有基因相对应的那些矢量就组成一个集合.接着,利用Fisher线性判别函数,寻找一组最优化的权重因子;在此基础上利用Fisher线性变换将上述各集合中每一个矢量进行线性变换.使得经Fisher线性变换后17个COGs类对基因组进化的重要程度得到更准确的反映.最后,用进行变换后的矢量组成的集合间的距离代替基因组之间的距离.使用这种方法,分别用38个和43个基因组做的进化树都支持了Woese的三界理论.该方法克服了其他基于全基因组信息构建系统发育树方法难以对大小相差很大的基因组进行比较的问题,并能减少基因横向迁移对基因组间距离的扭曲.

    • >经验交流
    • 神经介素U(neuromedin U)研究概况

      2002, 29(5):765-765.

      摘要 (2412) HTML (20) PDF 0.00 Byte (2457) 评论 (0) 收藏

      摘要:

    • >研究报告
    • 泛肽相关蛋白基因UBAP1单核苷酸多态及与鼻咽癌的相关研究

      2002, 29(5):766-770.

      摘要 (2986) HTML (35) PDF 0.00 Byte (3538) 评论 (0) 收藏

      摘要:UBAP1基因是在鼻咽癌9p最小共同缺失区内新克隆的鼻咽癌候选抑瘤基因,通过采用病例-对照研究方法,对105例鼻咽癌患者和183例正常人UBAP1基因的5个单核苷酸多态(SNPs)用测序法进行了分型,在实验过程中,偶然发现了一个新的SNP位点,并已登录至dbSNP(登录号:rs3135929).经相关分析发现,位于UBAP1基因第6外显子中的SNP rs1049557与鼻咽癌发病存在显著相关性,基因型GG和GC的相对危险度分别为1.64和1.31.实验结果进一步支持了UBAP1基因与鼻咽癌的发生发展可能存在密切关系,SNP rs1049557由于处在UBAP1基因下游3′非翻译区,其多态类型可能在某种程度上影响UBAP1基因的表达调控,从而与鼻咽癌发病相关.

    • 胶质细胞源性神经营养因子受体α1基因的克隆表达及其活性研究

      2002, 29(5):771-775.

      摘要 (2543) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3402) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了获得重组胶质细胞源性神经营养因子受体α1(glial cell line-derived neurotrophic factor receptor alpha1, GFRα1)并研究其生物学活性,从新生4天的SD大鼠海马组织中提取总RNA,通过 RT-PCR方法,扩增出GFRα1 cDNA.将GFRα1 cDNA克隆至含T7启动子的质粒pET-28a(+)中,构建表达质粒pET-GFRα1,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达菌株BLGFRα1.表达菌株经1 mmol/L IPTG诱导3~5 h后,GFRα1蛋白表达,并形成包涵体.凝胶自动扫描分析表明,GFRα1表达量占全菌总蛋白的21.5%,用Ni2+-NTA树脂纯化和复性后,纯度达90%以上,复性的重组GFRα1蛋白可显著介导GDNF促PC12细胞的存活和分化作用.

    • 网织红细胞膜剪切弹性模量和表面粘度的研究

      2002, 29(5):776-780.

      摘要 (3315) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3228) 评论 (0) 收藏

      摘要:用苯肼使动物造成急性溶血性贫血的方法,诱发动物体内同步生长的新生网织红细胞,用一种测量红细胞膜剪切弹性模量及表面粘度的新方法——新型激光衍射法,连续72 h监测经过不同发育阶段的网织红细胞的小变形指数(DId和变形恢复过程(即松弛过程)中变形恢复到最大值(DImax一半的时间t0.5(即变形恢复半时间),将测得的结果分别代入红细胞膜的剪切弹性模量(E)公式和表面粘度(μm)公式.计算出不同发育阶段的网织红细胞的膜剪切弹性模量和表面粘度,发现网织红细胞在转变为成熟红细胞的过程中,其膜剪切弹性模量和表面粘度有明显改变.这对研究由于贫血等原因造成的网织红细胞增多情况下,全血的微观流变学特性有重要的临床意义,同时对新生网织红细胞在转化过程中膜的剪切弹性模量和表面粘度的变化规律加以系统研究,填补了网织红细胞研究方面的空白,具有重要的基础理论研究价值.

    • >其他
    • 利钠肽的结构、受体与生理作用

      2002, 29(5):780-780.

      摘要 (2804) HTML (42) PDF 0.00 Byte (2651) 评论 (0) 收藏

      摘要:

    • >研究报告
    • 蛋白激酶Cα对人正常肝和肝癌细胞中Ha-ras基因表达的影响

      2002, 29(5):781-785.

      摘要 (2488) HTML (3) PDF 0.00 Byte (3104) 评论 (0) 收藏

      摘要:运用基因转染技术,将蛋白激酶C(PKCα)cDNA正向插入的真核表达重组质粒pXJ41-PKCα,导入人正常肝细胞(L-02),经蛋白质免疫印迹等检验,表明成功构建了稳定过表达PKCα的人正常肝细胞模型(LT3),用LT3和表达反义PKCα的人肝癌细胞HT6为细胞模型,通过RT-PCR,蛋白质印迹(Western blot)等分析和进一步运用自行构建的真核表达质粒prasGL3,进行荧光素酶活性检测表明:过表达PKCα可以促进L-02细胞的增殖速率,并引起Ha-ras基因转录水平上升和Ha-ras启动子活性升高;反之,表达反义PKCα的BEL-7402细胞增殖被抑制,Ha-ras基因转录水平下降,Ha-ras启动子活性降低.通过实验我们首次观察到,PKCα亚类对Ha-ras癌基因表达的影响与其对Ha-ras启动子活性的作用有关,PKCα可能参与了对Ha-ras基因表达的调控.

    • 一氧化氮在寡糖素诱导的小麦对条锈菌系统获得抗性中的时序性

      2002, 29(5):786-789.

      摘要 (2236) HTML (6) PDF 0.00 Byte (2679) 评论 (0) 收藏

      摘要:研究了寡糖素在诱导感病小麦品种辉县红系统抗条锈性中的作用,同时利用ESR测定了系统获得抗性(SAR)中一氧化氮(NO)的时间进程,结果表明寡糖素可以诱导辉县红对条锈菌毒性小种CY29-1的系统抗性,此系统抗性与内源NO信号启动的时间及强度有关.

    • pNEgr-mIL-12真核表达载体的体外和体内生物学活性检测

      2002, 29(5):790-795.

      摘要 (2613) HTML (4) PDF 0.00 Byte (3231) 评论 (0) 收藏

      摘要:肿瘤的基因-放射治疗是近年来发展起来的新技术.分别于体外和体内检测含辐射敏感启动子和mIL-12基因的真核表达载体(pNEgr-mIL-12)的生物学活性.体外经酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法检测转染pNEgr-mIL-12重组质粒的COS-7和B16细胞可经辐射诱导mIL-12 p70表达,于1.5~2.0 Gy照射后表达增高最明显,COS-7细胞于照后4 h 达峰值,B16细胞的表达水平随照射后时间延长而逐渐增高;pNEgr-mIL-12重组质粒联合电离辐射治疗小鼠移植肿瘤,单次或多次注射pNEgr-mIL-12重组质粒,联合局部照射能够抑制小鼠移植肿瘤生长,与单纯照射组比较肿瘤生长速度减慢,瘤重降低,尤以多次给予质粒治疗组效果明显.为进一步探讨最佳治疗方案及临床肿瘤病人的基因放射治疗提供了初步依据.

    • >技术与方法
    • 表面等离激元共振生物传感器研究整合素蛋白αⅡbβ3与RGD多肽的特异结合

      2002, 29(5):796-800.

      摘要 (2590) HTML (5) PDF 0.00 Byte (3021) 评论 (0) 收藏

      摘要:整合素蛋白αⅡbβ3是血小板上的一种钙依赖性膜受体,其胞外结构域可与含有RGD序列的肽链特异结合.通过将含有NTA-DOGS的磷脂单分子层膜转移到50 nm厚的金膜上,制备了一种含有NTA头部的表面等离激元共振(SPR)传感器敏感膜.设计并合成了含有6个组氨酸和RGD基团的His-tagged短肽P1,并利用SPR生物传感器,对整合素蛋白与含有RGD配基的支撑平面膜的特异相互作用以及Ca2+、Mn2+对该相互作用的影响进行了研究.结果表明,NTA敏感膜能很好地将P1锚定在支撑平面膜表面,并能够保证P1维持一个有效的定向.将Ca2+从低结合位点去除或加入Mn2+都能够增加整合素蛋白的配基结合活性.二价阳离子对整合素蛋白配基结合能力的调节作用,可能在整合素发挥其生理功能的过程中具有重要的意义.

    • 35S标记重组植物钙调素的制备方法

      2002, 29(5):801-805.

      摘要 (2595) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3016) 评论 (0) 收藏

      摘要:利用35S标记的氨基酸混合物喂养工程菌,成功地制备了35S标记的拟南芥钙调素亚型2(35S-ACaM2),对其纯度、放射活度、电泳行为及其灵敏性等进行了检测.结果表明从工程菌中制备的35S-ACaM2纯度高、放射活度高、Ca2+与EGTA存在时的电泳行为与未标记的ACaM2相同,可作为一种高灵敏性的探针用于检测钙调素结合蛋白.

    • 利用动态等位基因特异性杂交技术进行单核苷酸多态高通量分型

      2002, 29(5):806-810.

      摘要 (3355) HTML (34) PDF 0.00 Byte (3707) 评论 (0) 收藏

      摘要:动态等位基因特异性杂交(dynamic allele-specific hybridization, DASH)是新发展起来的一种单核苷酸多态(single nucleotide polymorphisms, SNP)等位基因分型技术,具有快速、经济、准确、高通量、重复性好等优点.利用DASH技术,对96份正常人外周血DNA样品成功地进行了两个SNP位点的基因分型,并摸索实验条件,对该技术进行了优化.

    • >研究简报
    • 镉中毒大鼠睾丸与肝脏金属硫蛋白表达的时相研究

      2002, 29(5):811-815.

      摘要 (2563) HTML (35) PDF 0.00 Byte (3059) 评论 (0) 收藏

      摘要:啮齿目动物睾丸对镉毒性较肝脏更敏感.为阐明睾丸的镉毒性分子机制,比较了肝脏与睾丸金属硫蛋白(MT)表达的时相变化.mRNA采用RT-PCR技术分析并用光密度扫描定量;蛋白质定量用ELISA方法.结果显示,睾丸中存在MT,镉中毒后MT1与MT2 mRNA明显升高,但MT没有相应增加;肝脏镉中毒后MTmRNA与MT均明显升高.结果提示:镉虽然能诱导睾丸MTmRNA的转录,但没有促进其MT的合成,这可能是睾丸对镉毒性与致癌作用较肝脏更敏感的重要原因.

    • 一个血清抑制基因的克隆

      2002, 29(5):816-819.

      摘要 (2775) HTML (5) PDF 0.00 Byte (3358) 评论 (0) 收藏

      摘要:比较血清培养细胞和血清饥饿细胞的基因表达差异,获得了一段血清饥饿细胞中特异表达的cDNA序列,以此序列出发,通过搜索表达序列标签(EST),拼接出完整的基因序列,通过PCR分段克隆获得全长cDNA序列.该基因全长5 429 bp,编码框预测有791个氨基酸残基.GenBank搜索,该基因与已有的细胞周期调控基因没有同源性.所以,该基因是一个新的与细胞周期有关的基因(GenBank接受号:AY050169).由于该基因最初发现在无血清培养条件下表达,故叫血清抑制基因(serum inhibit gene,Si-1基因).

    • 基于质粒DNA匹配问题的分子算法

      2002, 29(5):820-823.

      摘要 (2688) HTML (5) PDF 0.00 Byte (3603) 评论 (0) 收藏

      摘要:给定无向图,图的最小极大匹配问题是寻找每条边都不相邻的最大集中的最小者,这个问题是著名的NP-完全问题.1994年Adleman博士首次提出用DNA计算解决NP-完全问题,以编码的DNA序列为运算对象,通过分子生物学的运算操作解决复杂的数学难题,使得NP-完全问题的求解可能得到解决.提出了基于质粒DNA的无向图的最大匹配问题的DNA分子生物算法,通过限制性内切酶的酶切和凝胶电泳完成解的产生和最终接的分离,依据分子生物学的实验手段,算法是有效并且可行的.

    • >经验交流
    • 一种简单、快速筛选水稻种胚脂氧合酶-3缺失体的新方法

      2002, 29(5):824-826.

      摘要 (2822) HTML (0) PDF 0.00 Byte (3024) 评论 (0) 收藏

      摘要:根据水稻种胚脂氧合酶-3(LOX-3)催化产物的氧化特性,结合脂氧合酶的专一性抑制剂——去甲二氢愈创木酸,建立了筛选水稻种胚脂氧合酶-3缺失体的I2-KI比色法,并探讨其最佳实验条件.与常用的单克隆抗体筛选技术相比,该方法具有准确、简单且成本低的特点,可以进一步用于耐储藏水稻的育种研究.

    • >其他
    • 嗜盐菌的培养及紫膜分离纯化方法的改进

      2002, 29(5):827-827.

      摘要 (2488) HTML (1) PDF 0.00 Byte (2365) 评论 (0) 收藏

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