摘要:Insulin is one of the most important hormonal regulators of metabolism. Since the diabetes patients increase dramatically, the chemical properties, biological and physiological effects of insulin had been extensively studied. In last decade the development of NMR technique allowed us to determine the solution structures of insulin and its variety mutants in various conditions, so that the knowledge of folding, binding and stability of insulin in solution have been largely increased. The solution structure of insulin monomers is essentially identical to those of insulin monomers within the dimer and hexamer as determined by X-ray diffraction. The studies of insulin mutants at the putative residues for receptor binding explored the possible conformational change and fitting between insulin and its receptor. The systematical studies of disulfide paring coupled insulin folding intermediates revealed that in spite of the conformational variety of the intermediates, one structural feature is always remained: a “native-like B chain super-secondary structure”, which consists of B9-B19 helix with adjoining B23-B26 segment folded back against the central segment of B chain, an internal cystine A20-B19 disulfide bridge and a short α-helix at C-terminal of A chain linked. The “super-secondary structure” might be the “folding nucleus” in insulin folding mechanism. Cystine A20-B19 is the most important one among three disulfides to stabilize the nascent polypeptide in early stage of the folding. The NMR structure of C.elegans insulin-like peptide resembles that of human insulin and the peptide interacts with human insulin receptor. Other members of insulin super-family adopt the “insulin fold” mostly. The structural study of insulin-insulin receptor complex, that of C.elegans and other invertebrate insulin-like peptide, insulin fibril study and protein disulfide isomerase (PDI) assistant proinsulin folding study will be new topics in future to get insight into folding, binding, stability, evolution and fibrillation of insulin in detail.

摘要:合成了双链寡聚核苷酸——decoy核酸，其与靶转录因子AP-1有高亲和性，可进入细胞作为decoy顺式元件，通过抑制特异的转录因子和调控区域的结合，调控基因转录而改变基因的表达.在体内外抗肿瘤试验中, decoy核酸有显著抑制肿瘤细胞增殖的作用，可以成为潜在性的肿瘤基因治疗药物.

摘要:STAT3(signal transducers and activators of transcription) 是胞浆中的潜在转录因子,在细胞因子、生长因子等外界信号分子的刺激下发生磷酸化和二聚化进入细胞核，结合在基因特定的启动子上调控转录.目前对STAT3的磷酸化和二聚化都相当清楚，但对其怎样进入细胞核还知之甚少.入核分子一般都有一段碱性氨基酸的核定位序列（NLS），但通过比较STAT家族没有发现经典的核定位序列(NLS).以IL-6为外界信号分子，293T为细胞模型，绿色荧光蛋白GFP为标签分子，研究发现STAT3分子在IL-6刺激前呈胞浆分布，刺激后聚集胞核中是由于构象的改变暴露了核定位序列.通过同源比较和缺失突变发现,位于STAT3 DNA结合域403～426位氨基酸之间的一段富含赖氨酸和精氨酸的碱性氨基酸对STAT3入核起重要作用，具有核定位序列(NLS)的功能.

摘要:为了建立黑色素皮质素受体（MC4R）激动剂的高通量筛选方法，将人的MC4R基因质粒（hMC4R/pCDNA3.1）与报告基因质粒（3×CRE/3×MRE/SRE-LUC）按1∶5的比例共转染到HEK293细胞，通过G418筛选，建立了稳定的MC4R激动剂筛选细胞株.利用MC4R内源激动剂α-MSH探索和优化了每孔接种细胞数目、激动剂孵育时间、溶剂DMSO终浓度、荧光素酶底物浓度等筛选条件，建立了可靠的筛选方法.实验表明：当细胞数目为4×10⁴个/孔,激动剂孵育时间为8 h,每孔DMSO终浓度小于1％和α-MSH终浓度为1 μmol/L时，系统Z'-因子接近0.7，能够用于MC4R激动剂的高通量筛选.

摘要:聚合酶链式反应（PCR）微芯片是基于微机电系统（MEMS）制作，在微芯片上进行PCR反应，实现生物样品扩增的一项新技术.介绍了硅-玻璃PCR微芯片的设计和制作、微反应腔的清洗和表面处理、借助外置温度控制系统进行PCR扩增反应以及扩增产物在琼脂糖凝胶电泳下的检测分析，实现了对β-葡糖苷酸酶（GUS）基因的有效扩增，扩增时间由原来的90 min缩短到现在的37 min.

摘要:利用Affymetrix寡核苷酸基因表达谱芯片对2型糖尿病肾病模型动物——db/db小鼠的肾脏基因表达谱进行了研究.在此基础上，利用末端快速扩增法和RT-PCR方法,对筛选出来的一个糖尿病肾病相关表达序列标签(EST)进行了cDNA克隆和表达分析.得到了一长为1.4 kb的cDNA，并暂时命名为mdnr411(mouse diabetic nephropathy related mRNA No.411).序列分析和网上数据库比对说明，这是一个新的cDNA序列.利用DNA序列分析软件对此cDNA阅读框进行的预测性分析表明，此cDNA包含了一个完整的阅读框序列.其编码的蛋白质由90个氨基酸残基组成.以氨基酸序列进行的同源性搜索表明，此多肽只与Archaeoglobus fulgidus 的Na⁺/H⁺ antiporter (napA-2)具有局部的同源性.以上结果表明，mdnr411是一个功能完全未知的小鼠糖尿病肾病相关新基因.mdnr411 cDNA的成功克隆，为进一步研究其生物学功能及其在糖尿病肾病发生、发展过程中的作用创造了条件.

摘要:哺乳动物卵母细胞是发育生物学和细胞生物学的重要研究对象.激光共聚焦显微术是检测卵母细胞中纺锤体相关蛋白的有用技术，但是针对哺乳动物卵母细胞的特点需要做许多调整以得到理想结果.其中，卵母细胞的准备、固定、透膜、脂类抽提、抗体孵育步骤十分关键.另外，不同物种的卵母细胞也有差异，在进行激光共聚焦研究时需要做出相应的调整.

摘要:采用PCR方法，将人胰岛素分子B链B10位His突变为Glu，在B25和B26位之间插入Glu，构建了［B10 Glu，B25-Glu-B26］胰岛素原融合蛋白基因.利用通用型质粒pBV220构建表达载体，在大肠杆菌DH5α中表达，表达蛋白为包含体形式，约占菌体总蛋白的20%～30%.经过复性、凝胶过滤等步骤得到胰岛素原融合蛋白.用胰蛋白酶和羧肽酶B酶切，经过DEAE离子交换和RP-HPLC纯化得到胰岛素突变体类似物，并经过质谱测定鉴定.凝胶过滤法测定了蛋白质分子自身的缔合性质，圆二色谱（CD）测定了构象的变化.并分别测定了放免活性、受体结合活性及小白鼠低血糖惊厥实验.结果表明，突变体分子缔合性明显下降.放免活性和受体结合活性分别约为标准胰岛素的63.5%和114.4%， 整体活力略高于天然胰岛素.

摘要:探讨表达幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）粘附素保守区（AB）的减毒鼠伤寒沙门菌X4072（pYA248-AB）的免疫治疗效果，以及可能的免疫治疗机制，以确定X4072（pYA248-AB）在Hp疫苗研制中的应用价值.建立Hp感染小鼠模型，在该模型中评价X4072（pYA248-AB）治疗Hp感染的效果，运用细菌培养法观察Hp根除率及定植量的改变，流式细胞术分析免疫后小鼠脾细胞亚型，IL-2和IL-4细胞依赖株的细胞测活法检测细胞因子，ELISA法检测小鼠血清及肠液中抗AB抗体产生情况.结果表明，免疫治疗后疫苗治疗组根除率为53.3%，显著高于X4072（pYA248）和PBS对照组（P＜0.01）.未根除Hp的小鼠，疫苗治疗组Hp的定植密度明显低于其他两组（P＜0.01）.应用流式细胞仪分析免疫小鼠脾CD4⁺/CD8⁺ T淋巴细胞的比值时，发现疫苗治疗组和鼠伤寒菌对照组的比值均显著高于PBS对照组（P＜0.05），而疫苗治疗组的比值又显著高于鼠伤寒菌对照组（P＜0.05）.进一步对细胞因子进行分析发现，与PBS对照组相比免疫治疗组和鼠伤寒菌对照组IL-2和IL-4明显升高(P＜0.05).同时，免疫治疗组与鼠伤寒菌对照组相比,IL-4增高明显(P＜0.05).针对AB的抗体测定结果发现，仅在免疫治疗组的小鼠肠液中检测到了IgA抗体.免疫治疗组IgG抗体滴度较其他两组明显升高，第二次加强免疫后2周即上升至1∶10 000.动物实验表明,X4072（pYA248-AB）能根除或显著降低Hp在小鼠胃内的定植，其可能的免疫治疗机制包括提高CD4⁺/CD8⁺比值，诱导Th1和Th2反应以及产生针对AB的特异性抗体.

摘要:富含脯氨酸小蛋白(Sprrs)参与构建复层扁平上皮的角化细胞壳（CE），它们在子宫单层上皮中的作用还不清楚.采用RNA印迹和半定量RT-PCR方法，研究了Sprr2在小鼠动情周期和妊娠子宫中的表达及其激素调控.实验结果发现:Sprr2在动情前期和动情期表达上调，而动情后期和间情期表达下调.在妊娠初期表达迅速下调，直至临产期表达重新受到诱导并在产后达到高峰.鉴于其在不同生殖阶段子宫中独特的表达模式和在复层上皮中保护性的功能，推测Sprr2与子宫对交配和分娩所产生的应激反应有关.

摘要:根据基因剪切位点处的碱基保守性特征,和附近位点的碱基组成和关联特征，应用多样性指标和二次判别分析，对几类模式生物的基因结构进行统一的分析和预测，能够较好地识别外显子和内含子及其边界.计算结果表明，对于4类物种，线虫(C.elegans),拟南芥(A.thaliana), 果蝇(D.melanogaster)和人类(human)，核苷酸水平的识别精度为92.5%～97.1%，外显子水平的识别敏感性为83.7%～94.5%，特异性为87.8%～97.1%.预测能力优于GeneSplicer等剪切位点检测软件.

摘要:光学二次谐波成像技术由于具有三维高分辨率、不需要荧光标记、对生物样品的杀伤效应小等特点，在生物医学研究上具有广阔的应用前景.在双光子荧光成像基础上，实现了适合对厚组织样品观测的背向光学二次谐波成像，探讨了背向二次谐波成像的特点和影响因素.通过对多种生物组织样品进行大量实验，发现胶原纤维和肌肉纤维均可以产生很强的背向二次谐波，并成功地将背向二次谐波成像技术应用于糖尿病患者皮肤的观测.背向二次谐波成像技术可望推广到病理检查等临床应用中.

摘要:神经芯片是一种用硅微加工技术制造的微机电器件.活体的哺乳动物神经元细胞在神经芯片上培养存活，通过外加电路的控制，人们可以方便地对活体神经元进行检测，研究其在外加激励模式下的响应，整个研究过程是选择性的、实时的、连续的.简要评述了神经芯片技术的研究进展，并对其前景作了展望.

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