摘要:

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摘要:引入新概念可能推动学科的发展.近年来冗余性概念已逐步渗入生命科学，细胞因子和转录因子的功能冗余性已引起研究者的关注.但是，对细胞冗余性的研究报道尚少.最近，对成体干细胞可塑性和专职吞噬细胞、兼职吞噬细胞的研究进展引发人们对细胞功能冗余性的思索.综述对细胞冗余性和抗冗余性的有关资料，试从生物医学角度探讨细胞冗余性的作用和意义，建议积极开展对细胞冗余性的研究.

摘要:环氧化酶(cyclooxygenase, COX)家系被显示与恶性肿瘤的增殖和凋亡耐受有关，COX-2可作为恶性肿瘤治疗和预防的重要分子靶标.应用COX-2特异抑制剂——celecoxib，观察了药物对人慢性粒细胞白血病急变细胞株——K562细胞的增殖抑制和凋亡诱导效应.结果证明，celecoxib能够有效地抑制K562细胞增殖(台盼蓝染色，MTT试验及集落形成抑制试验证实)，并呈一定的剂量依赖性.Celecoxib抑制K562细胞增殖的IC₅₀为46 μmol/L.通过DNA ladder胶电泳和流式细胞仪检测，凋亡细胞的AO/EB染色等方法证明celecoxib能够诱导K562细胞凋亡，这一效应与Caspase-3蛋白表达上调和裂解激活有关,当阻断Caspase-3的活性，celecoxib诱导的K562细胞凋亡明显受抑.利用RT-PCR分析技术及蛋白质印迹，证明K562细胞存在COX-2 mRNA和COX-2蛋白表达；而且，K562细胞COX-2蛋白表达可被IL-1β诱导性刺激，从而确认K562细胞为COX-2表达阳性细胞；celecoxib在较高浓度(80～160μmol/L)既可抑制K562细胞COX-2 mRNA表达，也可下调COX-2蛋白质表达，提示celecoxib抗K562白血病细胞活性与COX-2的抑制相关，其抗白血病的分子机制部分涉及到COX-2依赖性途径.

摘要:为了加快基因功能的研究，利用已有的来源于不同组织的cDNA克隆，并通过交换和购买补充了低丰度和染色体覆盖不完全的部分cDNA，研制开发出具有相当代表性、覆盖较完全的高密度cDNA表达型基因芯片，每张芯片上含有384个质控DNA和12 630个cDNA探针，其中包括12 508个Unigene和122个表达序列标签(EST).利用这些芯片，对肥胖患者及正常人内脏脂肪组织基因表达谱进行了初步研究，并发现在肥胖患者内脏脂肪组织差异表达的基因，其中上调的有与凋亡相关的基因、与免疫有关的基因以及与能量代谢有关的基因等，而下调的主要是与脂肪酸及胆固醇合成有关的基因，对这些基因进一步的功能研究将为阐明肥胖发生机制奠定基础.

摘要:RNA干涉是由与特定基因同源互补的双链RNA，在体内以序列特异的方式引发靶基因的mRNA降解，从而导致转录后基因沉默的过程.为研究内源性的siRNA对靶基因的抑制效果，用pPUR/U6载体构建用于细胞内转录靶向hTERT基因的短发夹状siRNA表达质粒，并评价其对hTERT基因的抑制效果.将hTERT cDNA 3 565～3 583一段19 bp的DNA序列及其反向重复序列，用9 bp的连接序列连接后再接上5个T碱基，将此段DNA序列克隆至pPUR/U6载体U6启动子的下游，形成能在体内合成hTERT特异性短发夹状RNA的重组质粒载体pPUR/U6/hTERT.将pPUR/U6/hTERT与对照质粒pPUR/U6分别转染HepG2细胞.采用嘌呤霉素筛选和富集转染具有抗性的细胞.收集存活的细胞接种12孔板、提取RNA和蛋白质.以细胞计数法测定细胞的生长速度,RT-PCR和蛋白质印迹分析hTERT基因的表达,端粒重复放大测定法检测端粒酶活性,蛋白质印迹检测p53蛋白水平.与转染对照质粒pPUR/U6的细胞相比，转染pPUR/U6/hTERT的细胞其hTERT基因表达水平显著下降,端粒酶活性降低,细胞生长速度变慢,p53蛋白表达明显升高.以上结果表明,以DNA质粒为载体产生的内源性短发夹状siRNA能高效抑制hTERT基因的表达，有望成为基因功能研究的有力工具.

摘要:肺癌是常见的恶性肿瘤之一，其死亡率和发病率在世界范围的肿瘤性疾病中均居高不下.p16基因启动子区异常甲基化被认为是肺癌发生中的一起早期事件.为了提高检测异常甲基化方法的灵敏度及特异性，利用微流控芯片检测p16基因的异常甲基化，通过对肺癌患者血浆标本的检测，使病人血浆中的p16基因甲基化的异常改变可能成为辅助肺癌早期诊断和高危人群筛选的分子标记物，以期建立一种崭新而可靠的早期肺癌临床诊断方法.

摘要:突变热点区域是基因突变相对集中的区域，在生物的遗传和变异中有特殊的地位.针对特殊条件下发生突变形成的突变热点区域进行了相关研究.而人类基因组序列的测定和人类基因框架图的绘制，为在全基因组范围内进行突变热点研究提供了条件.分析了人类基因组中2 831个基因突变热点区域上简并度的性质，对突变热点区集中在高简并度区或者低简并度区的基因生物学功能进行了分析和分类.研究的焦点集中在某类功能的基因简并度特性一致的情况上.对搜集到的基因简并度特性利用聚类计算进行分析，找到了一些特殊的功能类，属于其中某类功能的基因能够通过聚类分析聚合到一起，从而说明简并度特性也是相近的，这为从基因的简并度特性预测表达物的功能提供了线索.

摘要:为探讨E1A激活基因阻遏子蛋白(CREG)对血管平滑肌细胞表型转换的调控机制，应用pRC/CMV-hCREG真核表达载体转染体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)，观察了转染前后细胞的表型改变.结果发现，pRC/CMV-hCREG质粒转染后，大鼠平滑肌细胞增殖受抑，细胞分化标志蛋白SM α-actin表达显著增加.免疫共沉淀分析发现，CREG与血清反应因子(SRF)发生相互作用形成复合体，在CREG基因过表达时，与CREG结合的SRF蛋白增加.凝胶迁移阻滞分析(GSMA)和抗体凝胶迁移阻滞分析(supershift)显示，过表达的CREG蛋白与SRF蛋白共同结合到 SM α-actin基因启动子区CArG位点上，可能参与 SM α-actin表达的调控. 构建SM α-actin promoter- pCAT^® 3报告基因载体并与pRC/CMV-hCREG质粒共转染VSMCs也证实，CREG蛋白过表达可增强SM α-actin基因表达.上述研究提示,CREG蛋白可能是调控VSMCs表型转换的重要分子.

摘要:探讨大鼠胰腺不同发育时期相关蛋白的差异表达,应用显微技术分离了大鼠孕15.5天，孕18.5天胚胎胰腺和新生鼠及成年鼠的胰腺，提取其蛋白质后，用固相pH梯度双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和质谱分析等蛋白质组学方法，得到了4个不同发育时期的蛋白质表达谱.对其中的6个在孕18.5天胚胎胰腺中有高丰度表达，而在成年鼠胰腺中缺失的蛋白质点，4个在成年胰腺中特异表达的蛋白质点, 8个在成年胰腺中表达明显下调的蛋白质点和1个在成年中表达上调的点，进行了肽质量指纹分析和蛋白质鉴定，共获得18个点的肽质量指纹图.经BIOWORK等软件搜索大鼠非冗余蛋白质数据库来鉴定其身份，发现其中7个点为大鼠甲胎蛋白（AFP）、5个点为胰脂酶相关蛋白1前体、1个点为微管蛋白β、2个点为蛋白二硫异构酶、1个为FLN29基因产物的类似物、1个为胰蛋白酶V-A前体、1个为过氧化物氧化还原酶4.其中AFP为特异表达于大鼠胚胎期及新生期胰腺的蛋白质，在孕18.5天的胰腺中表达量最高，在成年胰腺中极低表达.对它们的功能和与胚胎胰腺代谢调节功能完善过程的可能关系进行了初步探讨.

摘要:AtNHX2基因是拟南芥NHX基因家族的一员，编码了一种液泡膜中的Na⁺/H⁺反向运输体并对拟南芥的耐盐能力起着重要的作用.采用PCR扩增的方法克隆了拟南芥AtNHX2基因启始密码子上游约2.8 kb的DNA片段，并将其克隆到植物表达载体pCAMBIA1301-1中，通过基因枪轰击洋葱表皮瞬时表达的方法,初步检测启动子的活性.将重组质粒pCAMBIA1301-1/AtNHX2 promoter转化拟南芥并筛选纯合子.AtNHX2 promoter-GUS分析显示AtNHX2在所有的组织中均有表达,包括根尖.在保卫细胞中检测到了强烈的GUS表达，这一结果表明，AtNHX2对特殊细胞的pH调控和K⁺自身稳定方面起着重要的作用.AtNHX2启动子的活性可被NaCl抑制,并且抑制的强度和NaCl的浓度成正相关. 300 mmol/L KCl处理可增强启动子的活性，说明NaCl和KCl是在转录水平上调控AtNHX2的表达.在老叶中GUS活性比在新叶中GUS活性强，这说明了AtNHX2优先将有毒的离子积累在老叶中，从而有利于植物的正常发育.在根毛细胞中也观测到了强烈的GUS活性，这就暗示了AtNHX2在扩大的液泡中储存Na⁺.

摘要:突触相关蛋白家族成员的功能与神经突触膜上的谷氨酸酯受体和钾离子通道的定位和功能有关，参与神经递质的释放、神经的生长、发育及修复.为分析一个新的人突触相关蛋白基因（FRG4）的抗原表位和该蛋白质在血管细胞的表达，从人胎肝文库PCR扩增获得FRG4基因全长cDNA序列.通过生物信息学分析，预测FRG4编码氨基酸序列的二级结构、抗原决定簇和功能结构域；选取抗原13肽PKLVKEEVFWRNY，采用固相多肽合成法合成了FRG4抗原多肽，免疫新西兰白兔获得兔抗人FRG4多抗；免疫组化检测该蛋白质在人血管细胞中的表达.高效液相色谱检测显示制备的兔抗人FRG4多克隆抗体纯度达82.79%，抗体滴度为1∶16 000，蛋白质印迹证实该抗体具有较好的反应性和特异性,免疫组化证实，其主要在平滑肌细胞和内皮细胞的胞浆中表达.结果表明，成功制备了兔抗人FRG4抗体，FRG4蛋白主要在细胞胞浆中表达，与生物信息学分析结果一致.

摘要:根据LAP（leech antihemostatic protein）理论，在分析山蛭素和decorsin结构特征的基础上，利用重组PCR方法，删除了山蛭素氨基酸序列的33位至35位，同时分别插入了RGDS和来源于decorsin的一段PRGDADP序列构建成为2种含RGD序列的山蛭素突变体，分别命名为HRGD1和HRGD2.这2种突变体在毕赤酵母菌株GS115中得到成功表达.经过超滤、阳离子交换层析和凝胶过滤层析等纯化步骤之后，得到纯度高于95%的目的蛋白.通过以chromozym TH为底物的凝血酶酰胺水解实验和血小板聚集抑制实验证实了其体外生物学活性，HRGD1和HRGD2抑制凝血酶的动力学常数达到10^-13 mol/L水平，抑制血小板的IC₅₀在10^-6 mol/L水平上.