摘要:禽流感一直是严重危害世界各国养禽业发展的头号大敌，近期又成为继严重急性呼吸道综合症(SARS)后又一严重威胁人类生命安全的重要疾病，由于禽流感病毒抗原及其致病力的易变性，这就要求未来的防制策略要采取快速检测，并用先进的分子生物学技术进行病毒鉴定、检疫及免疫保护等措施，建立全国性甚至全球性禽流感检测防制网络，并且搞清禽流感与人类流感的关系，从而保证人和动物的安全.

摘要:Notch是一个进化上十分保守的跨膜受体蛋白家族，它可以通过与表达配体的相邻细胞间的相互作用转导信号，从而决定动物系统发育过程中多种细胞的“命运”.Notch信号转导过程包括Notch受体与配体的结合、Notch受体的酶切活化、可溶性NICD转移至细胞核并与CSL DNA结合蛋白相互作用，从而调控靶基因的表达.Notch活性水平、时间和空间分布受到包括配体、蛋白质转运、泛素化降解等多水平内源性和外源性诱导因素的调节.系统介绍了Notch信号转导通路的分子组成、Notch信号激活的生化机制、Notch信号的多水平调节以及与部分相关疾病的关系.

摘要:基因表达受不同层次的调控.RNA干扰通过产生双链小RNA诱导同源mRNA序列降解，从而在转录后抑制特定基因的表达.最新的研究成果显示：RNA干扰产生的双链小RNA可通过与染色质中的重复序列DNA及组蛋白甲基化酶相互作用，引起组蛋白H3 Lys9的甲基化，进一步与异染色质形成相关蛋白结合，导致染色质沉默.综述了RNA干扰，小RNA，组蛋白修饰，染色质沉默及基因表达调控之间存在着精密的网络调控机制.

摘要:脂肪酸和前列腺素等脂代谢的产物不仅通过膜受体起作用，也可以通过与核受体结合来调节基因表达.前列腺素I₂(PGI₂)既可以与G蛋白偶联的细胞表面IP受体起作用，也可以通过核受体过氧化物酶体增殖因子活化受体（PPARs）发挥生物学功能.前列腺素E₂(PGE₂)的受体（EPs）不仅仅在质膜上有，最近在核膜上也发现了EPs受体.前列腺素核受体介导的信号转导途径与膜受体介导的信号途径不同,对于基因转录的调控机制也不同.

摘要:丙型肝炎病毒核心（HCV-C）蛋白是维持丙型肝炎病毒结构的重要蛋白质，由于参与调节细胞的生长与凋亡，被认为与HCV感染所致的肝硬化及肝细胞癌的发生有关.为了进一步探索HCV-C蛋白与肝细胞癌发生的关系，首先构建了表达HCV-C蛋白的真核表达载体，脂质体介导转染Chang-liver人肝细胞株，建立表达HCV-C蛋白的人肝细胞模型，RT-PCR方法检测HCV-C基因在人肝细胞内的表达，蛋白质印迹和免疫细胞化学方法鉴定Chang-liver肝细胞内HCV-C蛋白及其在细胞内的分布情况.表达HCV-C蛋白的Chang-liver人肝细胞培养20代以后，与对照组细胞相比，细胞的形态出现长梭形样改变，生长速度显著加快，细胞内DNA含量的均一性变差.接种表达HCV-C蛋白的Chang-liver人肝细胞的6只裸鼠在第20天时全部有肿瘤长出，且肿瘤组织结构符合肝细胞癌病理形态特点，对照组裸鼠未见肿瘤生长.上述结果表明HCV-C基因表达可导致Chang-liver人肝细胞发生恶性转化，提示HCV-C蛋白与HCV感染所致肝细胞癌的发生有直接关系.

摘要:In human cells, the heterogeneous nuclear ribonucleoproteins (hnRNP) are represented by a group of polypeptides, with various molecular properties, comprizing the most abundant constituents of the cell nucleus. Autoantibodies to hnRNPs have been reported in patients suffering from different rheumatic dieseases since 1980s. Experimental evidence indicates that hnRNP complexes undergo substantial structural changes during mRNA formation and export. However, how this contributes to disease development still has to be elucidated. Here some preliminary physicochemical features of RNA-protein folding and stability patterns of newly characterized hnRNP A3 with further functional implications in development of systemic human autoimmune states are reported.

摘要:人MOB基因被认为是在脑组织中高表达的5次跨膜而功能未知的膜蛋白.从胎儿和成人肾脏消减杂交cDNA文库中获得了一条新的表达序列标签（expressed sequence tag，EST）序列，该序列对应于功能未知的MOB基因.利用生物信息学分析工具和分子生物学技术，从胎儿肝脏中成功地克隆了人MOB基因cDNA序列，同时也获得了含有完整开放读码框的大鼠和鸡MOB的电子全长序列.人MOB基因定位于10q11.1～11.2之间，含有一个1 242 bp的开放阅读框，第415位开始的ATG可能是翻译起始位点.核酸序列相似性搜索发现，其他种属中存在与之高度相似的EST序列，如爪蟾（79%）、羊（87%）、猪（94%）、牛（93%）.蛋白质序列相似性搜索发现，人MOB与大鼠、小鼠和鸡MOB有97%、97%、91％的相似性，与其他一些不同种属来源的假想蛋白有45%～73%的相似性.不同物种之间MOB基因核酸和蛋白质序列的高度相似说明，MOB是进化上高度保守的蛋白质.保守结构域分析发现,人、小鼠、大鼠和鸡MOB结构域组成完全一致，N端均与不育α基序（sterile alpha motif，SAM）结构域显著匹配，随后出现匹配显著性稍差的几个结构域.核酸和蛋白质序列的保守性提示，除N端约70个氨基酸组成SAM结构域外，其余的保守氨基酸可能形成一个新的保守的MOB结构域.表达谱分析表明，人MOB基因在所有被检组织和细胞中都表达.亚细胞定位研究显示，人MOB广泛表达于细胞内，主要在细胞核.DNA含量测定结果表明，人MOB基因过表达并不影响HeLa细胞的细胞周期和凋亡.总之，人MOB蛋白是一个在多种组织和细胞中广泛表达、细胞内广泛分布、进化上十分保守的蛋白质，可能通过特定蛋白质之间的相互作用，参与多种发育过程的调节.其过表达不影响HeLa细胞的周期和凋亡.

摘要:采用生物信息学方法和5′cDNA末端快速扩增法(RACE)技术相结合，克隆了一个大鼠心肌缺血-再灌诱导表达上调的新基因Mip1，并经RT-PCR测序及多组织膜RNA印迹证实.生物信息学分析显示，MIP-1定位于大鼠染色体1q12区，含5个外显子和4个内含子，开放阅读框(ORF)为1 827 bp，编码608个氨基酸，其编码蛋白N端含KRAB结构域，C端含14个连续的C2H2型锌指蛋白结构域，氨基酸第277位至293位为双向的核定位信号，多组织膜RNA印迹显示该基因在脑组织表达最高，其次是心脏，在其他组织表达较低或无表达.进一步深入研究该基因的功能具有重要生物学意义.

摘要:为了解H9N2和H5N1亚型流行性感冒病毒株的NS1基因特性，采用RT-PCR方法测定了12株2000～2003年间在华南地区分离的禽流感病毒株的NS1基因核苷酸序列. 测序显示6株H9N2亚型流感病毒NS1基因开放阅读框(ORF)长654 bp，编码217个氨基酸. 6株H5N1亚型毒株NS1基因ORF长678 bp，编码225个氨基酸. 核苷酸和氨基酸同源性分析表明，同一亚型分离株之间有很高的同源性，而不同亚型的H9N2和H5N1毒株之间存在较大差异. BLAST分析表明，H5N1和H9N2亚型流感病毒分离株的NS1基因分别与近两年从香港特区和华南地区的鸭中分离的毒株A/Duck/Hong Kong/646.3/01 (H5N1)、A/Duck/Shantou/2143/01 (H9N2)有很高的亲缘关系. 该研究结果为进一步进行NS1功能研究奠定了基础.

摘要:从粘粒文库中筛选出人α-乳清蛋白基因，构建9.5 kb的转基因表达载体.利用显微注射的方法获得68只F₀代小鼠，经PCR检测和DNA印迹分析证实有8只小鼠（4♂，4♀）为整合人α-乳清蛋白基因的转基因阳性小鼠，整合率为11.7%，整合拷贝数在1至8之间.利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测和蛋白质印迹分析,4只雌性F₀代转基因阳性小鼠全部表达了人α-乳清蛋白.放射免疫测定法测定,含量分别为0.62 g/L、0.48 g/L、0.56 g/L、3.21 g/L；同时测定F₀代50号转基因公鼠的后代阳性母鼠（50-2号）乳样中人α-乳清蛋白含量也达到1.03 g/L，证明由原代转基因公鼠遗传给后代的人α-乳清蛋白基因亦获得了稳定的表达.所构建的人α-乳清蛋白转基因载体具有结构较小，表达量高，可以稳定遗传等优点.为利用人α-乳清蛋白基因改善牛乳成分和品质奠定了基础.

摘要:为建立一种快速、准确、特异的SARS病毒RNA定量检测方法，根据复合探针荧光定量分析原理，对SARS病毒核酸进行实时荧光定量RT-PCR检测.借助计算机辅助，对SARS病毒基因靶序列以及检测引物和探针进行了优化筛选；利用体外转录SARS病毒RNA靶序列，对RT-PCR反应的镁离子浓度参数进行了优化；比较Trizol法、磁珠法、Qiagen法、煮沸法等4种方法提取RNA的检测效果，建立了样本处理方法；通过对构建的体外转录靶序列模型的检测，对本方法的灵敏度、特异性、定量线性关系、精确度等进行了评价，并通过对42例临床标本的检测对本方法的检测效果进行了评估. 通过克隆SARS病毒核酸靶序列并进行体外转录，获得了长度约1.2 kb的体外转录RNA靶序列；经优化，荧光RT-PCR反应液中的Mg²⁺浓度以4.0 mmol/L为最好；RNA提取方法采用磁珠法效果较好；本方法的检测灵敏度最低可达5个拷贝的体外转录RNA分子，特异性100%，C_t值的CV值小于5%.对临床确诊的42份SARS病人血清和漱口水标本的检测结果表明，该方法的检出率为79%，与荧光抗体检测法的符合率为70%.上述结果表明，该方法建立的荧光定量RT-PCR技术能够快速准确、特异、敏感地对SARS病毒核酸进行定量分析，为临床SARS冠状病毒RNA的检测提供了新的，更为有效的检测方法.

摘要:采用基因分段克隆、表达结合蛋白质印迹, 筛选到了口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC上高结合力、保守的感染相关线性表位，分别位于3ABC蛋白上第106～155和156～190位氨基酸.这两个表位可与感染不同血清型口蹄疫病毒动物康复血清反应，但不与来自健康免疫动物和未接触病毒动物的血清发生反应.实验表明，用基因工程表达的多肽筛选抗原表位的方法是可行的.

摘要:为了寻找影响PC-1分子进入细胞核的序列，将该分子不同区段分别与EGFP融合表达，通过观察绿色荧光蛋白在细胞内的分布，发现PC-1分子的第112～190区段是一独立的功能区，缺失这一区段后，分子的其余部分能够进入细胞核并在其中积累，这一区段使PC-1分子被排斥于细胞核之外，并在细胞质中浓缩成许多点状结构.运用以SOS恢复系统为基础的酵母双杂交方法，发现PC-1分子能够定位于细胞膜上，通过缺失突变发现该分子的第112～190区段是一独立的细胞膜定位信号序列，这一序列将其定位于细胞的胞膜上.

摘要:钙网蛋白是高等动物细胞中普遍存在的一种钙结合蛋白，近年发现它及其N端1～180位氨基酸能抑制内皮细胞生长和血管生成.为了寻找高效和小分子质量的血管生成抑制因子，用PCR技术扩增出钙网蛋白N端122～180位氨基酸的DNA序列，克隆进原核表达载体pET-3c，转化大肠杆菌BL21(DE3), 经IPTG诱导后，该片段以包涵体形式表达，表达量约占菌体总蛋白的35.4%.包涵体经变性溶解、复性和初步纯化后，纯化产物可以抑制人脐静脉内皮细胞的生长，鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成和小鼠原位黑色素瘤的生长.

摘要:从单细胞蓝藻钝顶螺旋藻中纯化C-藻蓝蛋白，从海洋红藻多管藻纯化R-藻红蛋白.分别用高碘酸钠氧化法和戊二醛法将二者共价连接为R-藻红蛋白-C-藻蓝蛋白交联物，再用Sephadex G-200柱层析纯化.光谱分析表明，用两种方法构建的共价交联物都可以将激发能从R-藻红蛋白传递到C-藻蓝蛋白.二者相比，高碘酸钠氧化法构建的共价交联物的能量传递效率更高.

摘要:为研究四环素调控的胰岛素表达载体肌肉直接注射后对实验性糖尿病小鼠的降糖作用,构建了质粒prTA-tet4-rhINS.以链脲佐菌素(STZ)诱导Balb/C小鼠成糖尿病模型，300 μg质粒注射至小鼠的股部肌肉,并同时在饮水中加入不同浓度强力霉素（Dox），监测小鼠末梢血糖、体重，测定血清人胰岛素、C肽水平.用RT-PCR检测小鼠肌肉注射部位组织中人胰岛素原mRNA水平的表达情况.结果表明：质粒prTA-tet4-rhINS注射后，给予Dox可显著降低糖尿病小鼠的血糖，血清人胰岛素、C肽水平相应升高，体重增加.效果持续大约二周.小鼠肌肉组织中有人胰岛素原mRNA表达.降糖效果和基因表达程度随Dox浓度增加而增强.质粒prTA-tet4-rhINS对STZ诱导的糖尿病小鼠高血糖起到明显的降低作用.在糖尿病小鼠肌肉组织能很好地表达，并受Dox调控.

摘要:通过硫酸铵分级沉淀、阴离子交换柱层析及凝胶过滤柱层析，从灰树花子实体中分离到了一种具有抑制烟草花叶病毒（TMV）侵染活性的热稳定蛋白——GFAP.经常规凝胶电泳和等电聚焦电泳显示为单一条带，而SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果证明该蛋白质含有两个亚基，其分子质量分别为34 ku、40 ku.等电聚焦测定蛋白质pI为3.76，含糖量约为2%.GFAP的40 ku条带N端氨基酸序列为ACCVPSVTEFENAINSDPVM，将其与GenBank中的氨基酸序列检索比较后没有发现同源序列，预示可能为一新的氨基酸序列.GFAP与TMV混合接种心叶烟，当GFAP浓度为32 mg/L时即可完全抑制浓度为10 mg/L的TMV的侵染，而4 mg/L的GFAP对浓度为40 mg/L的TMV的抑制率仍可达60%以上.