摘要:在庞大的基因组序列中数量占绝对优势的序列因为不编码蛋白质或RNA产物，一直被人们称为junk DNA.事事讲究经济效率的生物在长期的进化中,应该不会让大量无功能的“垃圾”堆积在充满活力的生命细胞中.近年来的研究已揭示junk DNA具有重要的功能，随着研究的深入，一定会发现越来越多的junk DNA决非垃圾，而是基因组的宝贵财富.

摘要:囊膜病毒可能采用相似的病毒-宿主细胞膜融合机制，即病毒表面糖蛋白结合到宿主细胞受体后，启动了病毒融合蛋白的一系列构象变化，根据囊膜蛋白构象变化特征，囊膜病毒可采用两种以上的方式发生膜融合，并据此分为两类：Ⅰ型病毒膜融合和Ⅱ型病毒膜融合.Ⅱ型病毒膜融合以黄病毒为代表，其分子机制与Ⅰ型病毒膜融合不同，但不很清楚.而Ⅰ型病毒膜融合中，如艾滋病毒，流感病毒等，在囊膜蛋白变构形成稳定折叠的发夹三聚体结构时，拉近了两膜之间的距离，此过程释放出来的能量进一步促使两膜融合.膜融合使病毒蛋白及病毒RNA基因组释放到宿主细胞内而感染宿主.以上述研究为基础设计的C肽/N肽小分子抑制子, 可以在病毒糖蛋白中间体构象形成的短时间内,高效、特异地竞争结合其配体，从而阻止糖蛋白的进一步折叠，达到抑制病毒入侵的目的，为病毒疾病的防治提供了新思路和策略.针对艾滋病毒设计的C肽，即T20或Enfuvirtide在临床应用效果很好.以艾滋病毒和流感病毒为例，主要对Ⅰ型病毒膜融合的研究进展进行了讨论.

摘要:RNA干扰(RNA interference，RNAi)是指在生物体细胞内，外源性或内源性的双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)引起与其同源mRNA特异性的降解，因而抑制其相应的基因表达过程.由于它能够高度特异性、高效性地抑制基因的表达，因此在研究基因功能及表达调控、信号传导通路、药物靶点的鉴定和基因药物开发等方面具有良好的应用前景.主要介绍RNAi可能的分子机制、分子生物学特性、产生方法及其在肿瘤研究中的应用.

摘要:黑素皮质素受体1 (melanocortin 1-receptor, MC1R)基因是控制动物黑色素合成的重要基因.采用多聚酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)以及DNA测序的方法，在由丝羽乌骨鸡与明星肉鸡为亲本建立的中国农业大学资源家系群体鸡MC1R基因的编码区检测到3个单核苷酸多态位点，并对该单核苷酸多态性进行了分析.结果显示，鸡MC1R基因编码区引物3扩增片段多态性是由G→A（867位）点突变引起的，引物5扩增片段的多态性是由C→T（1 292位）与C→G（1 377位）两个点突变引起的，最后对单核苷酸多态性与肤色、肉色、胫色与内脏膜色等黑色素性状进行了卡方独立性分析，结果显示，MC1R基因编码区867处突变与鸡的肤色性状显著相关（P＜0.05），1 292处突变与鸡的活体胫色性状显著相关（P＜0.05），1 377处突变与鸡的肉色性状显著相关（P＜0.05）.研究表明，MC1R基因可能是鸡黑色素性状的主效基因或者与鸡控制黑色素性状的主效基因连锁.

摘要:为了确定hhlim是否参与胚胎期的心肌分化和发育过程，用可表达hhlim蛋白和hhlim反义RNA的真核表达质粒转染P19胚胎干细胞，经G418筛选得到稳定表达hhlim和hhlim反义RNA的P19细胞克隆后，观察hhlim对P19细胞向心肌分化和发育的影响.结果显示，Nkx2.5和GATA-4在未被外源性hhlim基因转染的P19细胞中不表达.DMSO刺激细胞2天后，GATA-4开始表达，3天后Nkx2.5的表达活性显著升高.hhlim的过表达不但有利于P19细胞的存活和生长，而且还可以使Nkx2.5和GATA-4的表达比对照细胞提前1天.反义hhlim细胞株被DMSO诱导5天后，细胞仍呈集落化生长.同时，Nkx2.5和GATA-4开始表达的时间明显延滞.结果表明，hhlim能促进P19细胞向心肌细胞分化，其作用是通过促进转录因子GATA-4和Nkx2.5的表达而实现的.

摘要:CEP65蛋白(cancer and embryo expression protein 65)为肿瘤单克隆抗体3H11所识别的抗原分子, RT-PCR及RNA印迹检测表明, CEP65蛋白表达于肿瘤及胚胎组织.为了研究CEP65在肿瘤发生中的作用机制,以CEP65为诱饵蛋白,通过酵母双杂交体系筛选人胚胎组织cDNA表达文库. 从5.2×10⁶个克隆中筛选得到14个阳性克隆，并在酵母体系中通过不同方法得到验证.在此基础上，选取在双杂交中作用明显的51号克隆,与CEP65作GST pull-down实验, 结果证明, CEP65与51号阳性克隆蛋白确能相互作用. 生物信息学分析发现, CEP65与51号阳性克隆蛋白相互作用, 可能通过WW结构域或者蛋白激酶C对细胞的增殖与分化起到调节作用.

摘要:探讨了肝细胞在胚胎干细胞（ES cell）体外诱导分化系统中成熟分化的条件、机制及其鉴定方法.利用TGF, bFGF、HGF等细胞生长因子进行BALB/c小鼠ES细胞向肝细胞方向的定向诱导.利用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫细胞化学（ICC）和放射免疫法（RIA）动态检测肝细胞特异性基因和蛋白AFP，ALB，G6P，TAT，CK8, CK18等在培养体系中的表达，并测定肝细胞的尿素合成功能，最后测定肝细胞分化率.结果，肝细胞特异基因AFP， ALB，G6P和TAT最早分别于第3、9、11、13天表达，肝细胞特异蛋白AFP，CK8，CK18和ALB最早分别于第7、9、9和11天开始表达.第12天开始检测到尿素出现，浓度为8.3 μmol/L,并随培养时间延长而浓度逐渐增加.最后，测得生长因子诱导组肝细胞的分化率为32％，对照组肝细胞分化率为8%.说明肝细胞可以在ES细胞体外诱导分化系统中出现并成熟分化，bFGF、HGF、OSM等可以明显提高细胞分化率和成熟度，有望成为解决肝功能替代疗法中细胞来源问题的新希望.

摘要:人核糖核酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor, RI)是一种细胞质中分子质量为50 ku的酸性糖蛋白.RI能抑制核糖核酸酶A（RNase A）的活性, RNase A与血管生成因子（angiogenin，Ang）的氨基酸有着高度保守的同源序列.Ang是RNase A超家族的一员，RI通过与RNase A和Ang的紧密结合而抑制其活性.血管生成及新血管的形成, 是肿瘤发生和转移的必要条件.所以抗血管生成将是一种很有希望的对抑制肿瘤生长和转移的有效方法.实验显示RI能有效地抑制肿瘤诱导血管的生成.RI由含有许多亮氨酸重复序列的多肽组成.含有这样重复序列的100多种蛋白质显示了广泛的功能，包括细胞周期调节，DNA修复，对细胞外基质相互作用以及抑制酶活性等.RI被认为是胚胎发育，创伤愈合及肿瘤发生中新血管形成的一种调节因子.RI定位于染色体的11p15.5，与ras基因邻近，在肿瘤病人中经常存在染色体11p15.5部位的变异和异常.RI可能与细胞的生长和分化有关, 因此，RI 可能还具有尚未知的生物学作用.为了进一步了解RI的潜在功能以及探讨RI与肿瘤浸润、转移的关系, 将人的核糖核酸酶抑制因子基因的cDNA通过逆转录包装细胞PA317,并转染到B16小鼠黑色瘤细胞中, 用转染空载体和未转染的B16细胞作为对照.通过PCR, RT-PCR, 蛋白质免疫印迹, 免疫荧光分析鉴定，获得稳定表达人核糖核酸酶抑制因子的细胞株.结果显示, 转染的RI基因在体外能显著地抑制细胞增殖和细胞迁移，增加了细胞的粘附以及改善细胞的恶性形态，B16，B16 pLNCX，B16 pLNCX-RI 3种细胞的倍增时间分别为(24.98±0.16) h, (25.62±0.28) h, (32.64±1.11) h.与对照组相比，转RI的细胞粘附率增加17.8%和19.5%而迁移降低了61.4%和60%.转RI的细胞比对照组细胞较平展，核仁和分裂相较少，胞质嗜碱性减弱，提示细胞增殖活性降低和恶性表型的改善. 将3种B16细胞静脉注射到C57BL/6小鼠中, 结果表明, 转染RI基因的实验组显著地抑制了肿瘤的转移, 与两个对照组相比,荷瘤小鼠有更长的存活时间, 少得多的转移节结, 更低的肿瘤血管密度和肺重量.结果显示,RI的表达可能与黑色瘤的转移有关, 提示RI能显著地抑制肿瘤的转移,可能由于其与抑制血管作用,增加细胞粘附,降低细胞迁移及增殖有关.

摘要:神经原纤维缠结是阿尔茨海默病（Alzheimer disease, AD）的特征性病理改变.蛋白激酶和蛋白磷酸酯酶失衡可导致骨架蛋白的异常过度磷酸化，而异常过度磷酸化的tau 和神经丝 (neurofilament, NF) 是神经原纤维缠结的组成部分.在众多激酶中，糖原合酶激酶-3（glycogen synthase kinase-3，GSK-3）可能是AD神经退行性变起重要作用.为深入探讨GSK-3在AD样神经退行性变中的作用，以磷酯酰肌醇三磷酸激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）的特异性抑制剂渥曼青霉素（wortmannin，WT）处理野生型鼠成神经瘤细胞株（wild type mouse neuroblastoma cell lines, N2a wt），系统观察WT处理N2a wt不同时间点（1 h、3 h、6 h）细胞代谢率、细胞形态、细胞骨架蛋白tau和NF的磷酸化状态改变以及细胞的命运，并分析了GSK-3活性与上述参数改变之间的相关性.结果发现：1 μmol/L WT处理细胞1 h，GSK-3活性与未经WT处理的对照组相比明显增高，并伴有Ser9磷酸化的GSK-3水平的降低； NF磷酸化程度增强，tau在Ser198/Ser199/Ser202位点的磷酸化增强. 1 μmol/L WT处理细胞3 h，GSK-3活性与对照组和处理1 h 组相比明显下降，NF磷酸化程度较1 h降低，但仍高于正常水平.1 μmol/L WT处理细胞6 h，细胞形态、GSK-3活性、Ser9磷酸化形式的GSK-3β的表达、NF磷酸化程度与对照组相比均无明显改变.WT呈剂量依赖性降低细胞代谢率.1 μmol/L WT处理细胞1 h和3 h导致细胞变圆，突起变短甚至消失.1 μmol/L WT处理细胞1 h，用TUNEL法和电子显微镜技术未观察到细胞凋亡.研究结果提示：在N2a细胞中过度激活GSK-3可导致神经细丝和tau蛋白的AD样过度磷酸化，从而引起神经细胞的AD样退行性变.

摘要:为研究PDX-1基因在骨髓间充质干细胞中的表达情况及生物学功能的发挥，构建了含PDX-1基因的重组腺病毒载体. 酶切PDX-1基因并连入穿梭质粒pAdTrack-CMV.用电穿孔法使穿梭质粒pAdTrack-CMV-PDX-1与病毒骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组.利用脂质体介导重组腺病毒载体转染293细胞，包装出完整的腺病毒.分离、培养、扩增骨髓间充质干细胞.用重组腺病毒感染间充质干细胞.用荧光显微镜、RT-PCR、免疫荧光染色等方法检测PDX-1、胰岛素基因及蛋白质的表达，用放射免疫分析法检测转基因细胞分泌胰岛素情况.结果表明:通过测序、PCR、酶切等鉴定PDX-1基因已正确插入穿梭质粒中，并与病毒骨架质粒重组.重组腺病毒滴度为6.3×10⁷ PFU/ml.通过荧光显微镜观察证实重组腺病毒可高效感染骨髓间充质干细胞，经RT-PCR、免疫荧光染色证实转染pAd-PDX-1后培养7天的细胞中有PDX-1及胰岛素基因的表达.这些转基因的细胞向胞外分泌的胰岛素量为(15.21±3.50) mIU/L.

摘要:用贵州小香猪建立2型糖尿病动物模型，探讨糖尿病小型猪三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的变化.采用高脂高蔗糖饲料喂养贵州小香猪，建立2型糖尿病动物模型.血浆总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇和葡萄糖的浓度均用氧化酶法测定,血浆游离脂肪酸(FFA)用比色法测定, 采用逆转录-聚合酶链反应、蛋白质印迹和免疫组织化学分别检测ABCA1mRNA和蛋白质的表达.喂养6个月后，实验组与正常对照组比较,空腹血糖值明显升高;空腹胰岛素水平在头3个月轻度升高，在第6个月末其水平降低; 血清总胆固醇、甘油三酯和游离脂肪酸水平升高;肝组织、冠状动脉、肾组织ABCA1表达上调，同时观测到糖尿病小型猪肝组织LXRα表达上调.结果提示高脂高蔗糖饲料可引起小型猪脂质和糖代谢紊乱, 并导致肝组织、冠状动脉和肾组织ABCA1表达上调以及肝组织LXRα表达上调.

摘要:虎纹捕鸟蛛毒素Ⅴ是从虎纹捕鸟蛛毒液中分离得到的一种昆虫毒素.它含有35个氨基酸残基，其中6个半胱氨酸形成三对二硫键.首先采用多酶将天然的肽链裂解后，通过MALDI-TOF质谱分析酶解肽段，推断出1对二硫键位于Cys9-Cys21，然后利用改进的部分还原分步测序法,确定虎纹捕鸟蛛毒素Ⅴ的另外2对二硫键的配对方式为Cys2-Cys16和Cys15-Cys28.因此，虎纹捕鸟蛛毒素Ⅴ的3对二硫键分别以Cys2-Cys16，Cys9-Cys21，Cys15-Cys28（即1-4、2-5和3-6）的方式配对.

摘要:为了解析分支酸变位酶和预苯酸脱氢酶在大肠杆菌T蛋白的定位,根据T蛋白限制性水解结果，分段克隆分支酸变位酶和预苯酸脱氢酶.T蛋白限制性水解结果显示,第93位氨基酸是大片段的N端，分段克隆的1～93 片段测定得到分支酸变位酶活性，96～373片段得到了预苯酸脱氢酶活性.研究表明,大肠杆菌T蛋白由两个独立结构域组成，N端93个氨基酸组成了分支酸变位酶，C端277个氨基酸组成了预苯酸脱氢酶.

摘要:已知凋亡过程的基本变化之一是细胞骨架的异常，后者在某种程度上决定凋亡细胞的形态学特征.为揭示凋亡相关蛋白酶——颗粒酶B和胱天蛋白酶-3对胞浆型肌动蛋白的水解作用，采用成年猕猴脑组织粗提物作为无细胞体系，以外源性颗粒酶B触发凋亡途径的终末反应. 经一系列免疫印迹分析发现: 孵育12 h方见β-肌动蛋白被剪切，产生41 ku和15 ku水解片段，并证明该水解反应为颗粒酶B依赖；颗粒酶B活化的内源性胱天蛋白酶-3和重组胱天蛋白酶-3均不能水解脑提取物中的β-肌动蛋白，尽管胱天蛋白酶-3可作用于纯化的肌动蛋白，产生15 ku片段. 以上结果提示，内源性β-肌动蛋白对凋亡相关蛋白酶，尤其胱天蛋白酶-3不敏感，这可能与该蛋白质的空间结构特征或脑组织中存在的某种蛋白酶抑制因子有关.

摘要:以肺炎克雷伯菌荚膜糖蛋白为免疫原，获得了兔抗肺炎克雷伯菌荚膜糖蛋白抗血清，通过硫酸铵分级沉淀与吸附法相结合的方法对抗血清进行纯化，并在此基础上建立了肺炎克雷伯菌荚膜糖蛋白间接ELISA检测方法.该检测方法的检测灵敏度为0.031 mg/L，线性检测范围为2.5～30.0 mg/L，批内误差为1.04％～3.22％，批间误差为2.61％～8.35％.

摘要:在基因组DNA水平，应用基因突变分析的方法对肾上腺脑白质营养不良进行分子诊断十分重要.由于人体内存在多个肾上腺脑白质营养不良假基因的拷贝，应用PCR-RFLP和PCR产物直接测序等常规方法难以检测一部分的基因突变.为了排除基因组DNA中假基因的干扰，利用扩增阻滞突变系统，成功地分析了一个肾上腺脑白质营养不良（R617G突变）家系成员的基因型.结果表明，扩增阻滞突变系统是排除假基因干扰的有效方法之一.