摘要:早在 1674 年， van Leeuwenhoeck 就首次在牛奶里发现了脂肪滴 . 从那以后， 300 多年过去了，有关脂肪滴的许多根本问题仍然没有得到解决 . 迄今，除有为数不多的几个脂肪滴表面蛋白被发现外，人类对脂肪滴的认识仍停留在其作为中性脂贮存器上 . 为了更好地认识脂肪滴，我们以及其他几个研究小组分别从不同细胞中纯化了脂肪滴，然后使用质谱蛋白分析对这些脂肪滴的蛋白质进行了蛋白质组学研究，从中发现了两组非常有意义的功能蛋白 . 一组是与脂肪合成及代谢有关的酶，另一组则是与膜转运有关的蛋白质 . 尽管这些实验使用了不同的细胞，而且是由不同实验室分别完成的，但结果却非常相似 . 这些发现表明，脂肪滴有可能是一种具有生理代谢活性的非常复杂的细胞器 . 同时，它有可能参与细胞内的脂肪合成、代谢及转运 . 这篇综述将重点介绍近年来的脂肪滴蛋白质组学研究进展，以及由此推测的脂肪滴的生理功能 . 如果读者希望了解脂肪滴的其他方面内容，请阅读 Denis Murphy 发表于 2001 年的一篇非常完整的综述 .

摘要:胰岛素对治疗 2 型糖尿病有一定效果，但长期使用会引起低血糖反应；双胍类药物降糖疗效显著，但会引起消化道不良反应 . 因此，寻找一种安全有效的药物是 2 型糖尿病治疗的当务之急 . 胰升血糖素样肽-1 作为一种胰岛素分泌促进剂和胰岛素增敏剂越来越受人们的关注，将它用于治疗糖尿病不会产生低血糖，对 1 型和 2 型糖尿病都有疗效 . 讨论胰升血糖素样肽-1及其受体的最新研究状况 .

摘要:高迁移率族蛋白 (high mobility group protein ， HMG) 是一系列的染色质相关蛋白，广泛存在于真核生物细胞中，含量丰富，因其在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的高迁移率而得名 . HMG 蛋白家族可分为 HMGB 、 HMGA 和 HMGN 三类亚家族，各亚家族有其特征的结构域，这些结构域介导了 HMG 和 DNA 或染色质相关区域的相互作用 . 现已发现这些蛋白质具有多种重要生物学功能，其中几乎所有 HMG 都可以通过修饰、弯曲或改变染色质 /DNA 的结构，促进各种蛋白质因子形成大分子复合物来调节基因转录 .

摘要:Cx31 突变可以导致常染色体显性听力下降、常染色体隐性听力下降、周围神经疾病伴听力丧失，以及变性红皮肤病角化病，其导致不同疾病的机理一直是研究的重点 . 利用定点突变技术 (site-directed mutagenesis, SDM) 构建 connexin31 显性听力下降相关突变体 Cx31R180X ， Cx31E183K 并插入到真核表达载体 pEGFP-N1 ，转染 HeLa 细胞，转染 Cx31R180X-pEGFP-N1 和 Cx31E183K-pEGFP-N1 Cx31 突变体质粒的 HeLa 细胞质膜上没有出现斑块状染色和聚集现象，分别用内质网染料 conA 和高尔基体染料 WGA 进行免疫荧光染色，结果显示 Cx31 显性听力下降相关突变体蛋白主要分布在细胞质内，且大部分定位在内质网和高尔基体上 . 同时分别用抗 Cx31 和抗 GFP 抗体进行蛋白质印迹检测，证实 Cx31R180X ， Cx31E183K 在转染的 HeLa 细胞中都有表达 . 研究发现 Connexin31 显性耳聋相关突变体 Cx31R180X ， Cx31E183K 不能正常地形成间隙连接通道，这与 connexin31 EKV ( 变性红皮肤病角化病 ) 相关突变体能够运输到细胞膜上形成间隙连接通道的报道不相同，提示 connexin31 不同部位突变导致不同疾病的致病机理可能不一样 , 从而为解释“ one connexin two diseases ”提供分子水平的依据 .

摘要:大电导的电压和 Ca²⁺ 激活的 K⁺ 通道 (BK 通道 ) 在哺乳动物的组织中广泛表达，起着多种多样的作用 . 目前只有少数组织中 BK 通道的性质被深入地研究，而且鲜见有失活的 BK 通道 (BK_i) 的报道，尤其是在神经元中 . 发现在大鼠小直径的背根神经节 (DRG) 神经元中，普遍存在失活的 BK 通道 . 失活的 BK 电流成分是 Ca²⁺敏感的，可以被大电导的 BK 通道特异阻断剂 ChTX 所阻断，而且木瓜蛋白酶可以从胞外改变通道失活的特性 .

摘要:采用半定量 RT-PCR、蛋白质印迹和免疫组化等方法，对大鼠妊娠过程中子宫和胎盘转化生长因子β1(TGF-β1) 的动态表达和表达定位，及体内注射超生理剂量的γ干扰素 (interferen-gamma， IFNγ) 后 TGF-β1 的表达进行检测，探讨了妊娠子宫和胎盘中 TGF-β1 的表达规律、定位及与 IFNγ的关系 . 正常妊娠各个时期大鼠子宫和胎盘中均能检测到 TGF-β1 mRNA 和蛋白质的表达 . 半定量 RT-PCR 结果表明：妊娠早期 (D1~D9) 子宫 TGF-β1 mRNA 的表达呈递增趋势，胚泡植入前 (D4) ，子宫 TGF-β1 mRNA 的表达较低，胚泡植入早期 (D6) TGF-β1 mRNA 的表达显著升高，植入后期 (D9) TGF-β1 mRNA 的表达达高峰，妊娠中期 (D15) 和妊娠晚期 (D19) TGF-β1 mRNA 的表达逐渐降低；妊娠早 (D9) 、中 (D15) 、晚期 (D19) 胎盘中 TGF-β1 mRNA 的表达呈时效递增， D15 胎盘中 TGF-β1 mRNA 的表达高于 D9 (P<0.01) ， D19 胎盘中 TGF-β1 mRNA 的表达高于 D15 (P<0.01). 免疫组化结果显示，妊娠早期 TGF-β1 主要在子宫蜕膜中表达，中晚期主要在滋养层表达 . 生殖道肌肉注射超生理剂量的 IFNγ能下调 TGF-β1 的表达，且呈一定的剂量依赖关系 . 提示：在妊娠不同时期子宫和胎盘中 TGF-β1 的表达呈显著的时空动态变化， IFNγ酌对 TGF-β1 mRNA 的表达有调节作用 .

摘要:人乳腺癌细胞系 MCF-7 及其转移亚克隆 LM-MCF-7 为肿瘤转移分子机制的研究提供了细胞模型 . 应用基因芯片技术比较两种具有不同转移能力细胞系基因表达谱的差异，寻找乳腺癌转移相关基因 . 提取两种细胞总 RNA ，分别用 Cy5-dCTP 、 Cy3-dCTP 标记 LM-MCF-7 和 MCF-7 的 cDNA ，并与含有 21 329 个基因的芯片进行杂交并扫描，利用 GenePix Pro 4.0 图像分析软件处理数据判断基因是否在两个细胞中存在表达差异 . 经互换荧光标记物重复两次实验，共筛选出差异表达基因 67 个，其中 41 个在 LM-MCF-7 细胞中表达上调， 26 个在 LM-MCF-7 细胞中表达下调 . 应用实时定量 RT-PCR 对 7 个表达差异明显的基因进行了验证 . 生物信息学分析结果提示，上述发现的差异基因编码产物与细胞内信号转导、转录调节、应激反应、新陈代谢、发育、细胞运动、细胞凋亡和细胞粘连等功能有关 . 据文献报道，这些差异表达的基因中有 35 个与肿瘤有关，其中 9 个与乳腺癌转移有关， 6 个可能参与肿瘤浸润和转移过程 . 根据基因芯片检测的结果，从功能上对 LM-MCF-7 细胞和 MCF-7 细胞与细胞凋亡的关系进行了研究，发现具有高转移倾向的 LM-MCF-7 细胞与 MCF-7 细胞相比，抗凋亡能力较强 . 上述与肿瘤转移相关基因在肿瘤转移中的作用及其分子机理有待深入研究 .

摘要:细胞外脂肪酸结合蛋白 (extracellular fatty acid-binding protein, Ex-FABP) 基因是脂肪酸结合蛋白 (fatty acid-binding protein, FABP) 家族的另一成员，参与鸡的脂肪酸、肌纤维、骨骼等调控过程 . 利用 PCR-SSCP (single strand conformation polymorphism) 和 DNA 测序的方法，对不同品种的杂交鸡进行了 Ex-FABP 基因 5′调控区部分序列的多态性分析，发现了 3 个单核苷酸多态性 (single nucleotide polymorphisms, SNPs) 位点 . 其中，此片段中的碱基 C (－1000) 的插入和碱基 T → C (－1011) 的突变，导致此处比野生型基因少了 1 个 cap ，多了 1 个 Nkx-2 、 1 个 AhR/Ar 和 2 个 CF1 等转录因子结合位点的产生 . 利用 SAS 软件对 Ex-FABP 基因 5′调控区的 SNPs 与屠体性状的最小二乘分析，发现基因型 BB (突变型) 与腹脂重存在极显著相关 (P<0.01). 研究结果表明，细胞外脂肪酸结合蛋白 (Ex-FABP) 基因是影响脂肪沉积、控制腹脂性状的主要候选基因 .

摘要:微卫星是近年大力开发的一种遗传标记，为推进按蚊遗传学相关研究，对按蚊全基因组中由 1~6 个碱基重复单元组成的简单序列重复 ( 微卫星 ) 进行了分析 . 进而对其微卫星的丰度和分布进行了比较分析，也比较了染色体各个区域 ( 外显子、内含子和基因间隔区 ) 之间的分布差异 . 微卫星在按蚊基因组中的比例约占 2.14% ，其中 X 染色体拥有微卫星的密度最大 . 对按蚊基因组中微卫星丰度而言， A 碱基和 C 碱基重复在基因组中丰度相似， AC 单元的丰度是 AG 单元的两倍多，然而 AT 和 CG 单元非常稀少；对于三四碱基而言， AGC， AAAC 和 AAAT 单元最为丰富， ACG， ACT， AGG， CCG， ATGC， CCCG， ACTG， AACT， ACGT， AGAT， CCGG， ACCT 和 AGCT 单元等均很稀少，而一些五碱基重复，在某条甚至某几条染色体中均未分布 . 除两碱基重复单元在 2L 的外显子区域丰度较高外，其他重复单元均在内含子和基因间隔区丰富 . 进一步分析显示，微卫星在每条染色体两臂的丰度和分布存在着很多的相似性 .

摘要:通过比较研究不同转移潜能肝癌细胞系中核心岩藻糖基化蛋白质表达谱的差别，筛查与转移相关的重要糖蛋白 . 用 SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 、双向电泳 (2-DE) 和凝集素印迹技术联合基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱 (MALDI-TOF-MS/MS) 分析，建立 3 种不同转移潜能人肝癌细胞系 Hep3B 、 MHCC97L 和 MHCC97H 的核心岩藻糖基化蛋白质表达图谱 . 比较研究发现，不同转移潜能肝癌细胞呈现不同的 SDS-PAGE/LCA 凝集素印迹图谱， MHCC-97H 和 MHCC-97L 在 35~45 ku 和 45~60 ku 间出现了 Hep3B 未见的条带 . 在核心岩藻糖基化蛋白质表达图谱中， Hep3B、 MHCC97L 和 MHCC97H 分别平均检测到 (55±7) 个蛋白质点 (n=3)， (60±6) 个蛋白质点 (n=3)， (61±4) 个蛋白质点 (n=3)；以各自双向电泳图谱为参考胶，Hep3B、 MHCC97L 和 MHCC97H 分别与其匹配的平均匹配点数为 (25±3) 个 (n=3)， (30±4) 个 (n=3)， (28±3) 个 (n=3). 该图谱中，与 Hep3B 相比， MHCC97L 有 13 个点未匹配，其中 9 个点为 Hep3B( － )/MHCC97L(+)； MHCC97H 有 9 个点未匹配，其中 6 个点为 Hep3B( － )/MHCC97H(+)， MALDI-TOF-MS/MS 可鉴定出 Annexin1、 Keratin 8 等 12 种差异蛋白质 . 这些结果证实了不同转移潜能的肝癌细胞有明显的核心岩藻基化糖蛋白差异性表达 . 提示肝癌转移可能与这些差异糖蛋白及其核心岩藻糖基化有关 .

摘要:细胞中的生理活动主要是通过蛋白质 - 蛋白质之间的相互作用来调控完成 . 详尽细致的蛋白质 - 蛋白质相互作用网络的解析对于理解细胞中复杂的调控、代谢和信号通路有重要的意义 . 近年来，关于新的蛋白质 - 蛋白质相互作用预测领域进展快速，这里，利用贝叶斯算法结合关联的 GO (Gene Ontology) ，来预测蛋白质的相互作用 . 利用非冗余的蛋白质相互作用数据来观察 GO 对的特性，得到 GO 关联的概率 . 通过阳性的和阴性的标准对照数据证实这个新方法可以很好地区别这两类不同的数据，显示出较好的灵敏度和非常低的假阳性预测率 . 通过与已知的高通量的实验数据比较，这个方法具有灵敏度高、速度快的优点 . 而且，运用这个新方法可以提供一些新的关于细胞内蛋白质之间相互作用的信息，为进一步的实验提供理论依据 .

摘要:为探讨核定位信号在热休克蛋白 70 (HSP70) 抑制 H²O² 所致核仁损伤中的作用，采用分子克隆技术分别构建了 4 个真核表达载体， pcDNA3.1(-)-HSP70^WT (HSP70 野生型)， pcDNA3.1(-)-HSP70^ΔNLS (核定位信号缺失突变体 )， pEGFP-N1-HSP70^WT， pEGFP-N1- HSP70^ΔNLS. 向传代培养的 C²C¹²肌源细胞培养液中加入终浓度为 1.0 mmol/L 的 H²O² 模拟体外氧化应激 . 甲苯胺蓝染色细胞核仁发现，正常细胞仅有一个位于中央的、浓染致密的核仁颗粒 . 过氧化氢处理后 3 h ，可见明显的核仁分离 . 热休克反应处理的细胞及转 pcDNA3.1( － )-HSP70WT 细胞则能明显抑制氧化应激所致的核仁分离 . 荧光蛋白示踪及核仁蛋白质免疫印迹分析显示， H²O²处理后 1 h ， HSP70WT 由正常时的细胞浆定位转为细胞核及核仁定位，而 HSP70ΔNLS 在 H²O²处理后仍定位于细胞浆，同时丧失了抑制核仁分离的作用 . 上述结果提示，野生型 HSP70 能显著抑制氧化应激所致细胞核仁分离，核定位信号通过介导 HSP70 向细胞核及核仁移位而决定 HSP70 对核仁损伤的保护作用 .

摘要:从微小体积鼻咽癌活检标本中获取纯净癌细胞一直是鼻咽癌分子生物学研究中的难题 . 为了寻找一种能从鼻咽癌活检组织中获得高纯度、高质量 RNA 来完成 cDNA 微阵列 (cDNA Microarray) 实验的简便实用方法，采用 RNAlater 技术保存鼻咽癌活检组织，显微切割技术来获得高纯度鼻咽癌细胞，利用 RNA 线性扩增技术得到 cDNA 微阵列实验所需 RNA. 结果表明：利用 RNAlater 技术可以很好地保持组织 RNA 的稳定，通过优化显微切割和 RNA 线性扩增的条件获得了 cDNA 微阵列实验所需的高纯度、高质量 RNA.

摘要:随着基因组测序工程的实施与完成，如何对包含完整基因信息的特定细菌人工染色体 (BAC) 进行有目的修饰，已成为功能基因组学研究的一个重要环节 . 应用新近优化的 Red/ET 同源重组技术对目标 BAC 进行修饰，以 pSC101-BAD-gbaA 为依托质粒，采用 rpsL-neo 为正 / 反向筛选系统，可以快速、高效地对 BAC 进行剪切、插入、替换等操作，其中能够进行抗性筛选的一步 BAC 修饰只需一周时间，以插入非抗性标记基因 Cre 为代表的两步 BAC 修饰在两周内即可完成 . 通过阿拉伯多糖诱导调控和简单地变化培养温度，能使 pSC101-BAD-gbaA 依托质粒在发挥完 Red/ET 同源重组作用后自然消失，最终获得完整而纯净的修饰后 BAC ，为加快功能基因组学研究提供了一个可靠的实验平台 .

摘要:发明一种组织微阵列供体取样与受体蜡块制作的新器具和新方法 . 利用这种新器具和新方法成功地制作了分别含 448 和 390 个供体组织点阵的组织微阵列受体蜡块和切片 . 这种新方法制作的组织微阵列切片经 H&E 染色，显微镜下观察证实，所有切片均无供体点阵组织脱落，切片厚度适中，组织结构无挤压变形，细胞形态均匀一致 . 免疫组化检测 P53 和 P16 蛋白在组织微阵列切片与其相应的常规组织切片中的表达结果完全一致 . 这种组织微阵列供体取样与受体蜡块制作新器具和新方法成本低廉，操作简便，具有在实验室推广应用的价值 .