摘要:对人脑结构和功能的深入研究，已经要求脑成像技术不能仅仅局限于研究简单的脑功能定位问题，即寻找和定位与特定认知任务相关的某一块或者一组大脑皮层功能区，而必须研究分析各功能区间的动态功能连通和整合问题，即描述特定脑功能区域间的交互作用以及这些交互作用如何受认知任务的影响. 已有几种非常规的脑成像技术和数据分析方法，包括时间相关性分析、心理生理交互作用 (PPI)、结构方程模型 (SEM)、动态因果模型 (DCM)、弥散张量成像 (DTI)等等，被成功用于人脑功能连通性和有效连通性的研究. 脑功能连通性研究的发展，有利于深入理解人脑在系统水平上的动态运作方式，是今后认知神经科学发展的一个重要方向.

摘要:酸感受离子通道(ASICs)为H⁺-门控的阳离子通道，是一类新的配体门控性离子通道，属于钠通道超家族的新成员. 作为近来研究的热点，ASICs具有许多重要的生物学功能，并很有可能成为抗癫痫、镇痛、提高学习记忆能力和保护神经元缺血损伤作用药理学新靶点. 近来，ASICs各个亚基已被克隆，它们在生物体内分布、表达、功能和相关调节因素的研究正受到广泛重视.

摘要:作为老年性痴呆的主要类型，阿尔茨海默症 (AD) 的病理特征包括大脑局部，尤其是海马和皮层神经元退行性变化，细胞内神经原纤维缠结和细胞外老年斑沉淀，其中老年斑的主要毒性成分为β-淀粉样肽 (Aβ). 随着对AD研究的深入，关于疾病发生的Aβ假说得到了深入的发展，越来越多的证据显示Aβ可能是AD发生的原发性病理因子. Aβ假说认为，AD是一种由于基因缺陷直接或间接改变淀粉样前蛋白(APP)表达或蛋白酶解过程，从而影响Aβ聚集稳定性的病理综合征，Aβ产生和清除之间的平衡逐渐改变，聚集态的Aβ累积引发连串的复杂反应，包括突触/突起的变化，Tau蛋白磷酸化，递质丢失，神经胶质增生和炎症反应等，最终出现神经元功能失调，死亡，斑块形成，神经原纤维缠积等病理现象. 但Aβ究竟是通过什么样的分子途径引发AD的，Aβ作用的部位在哪里，Aβ毒性与其聚集状态的关系等等问题都还未能完全揭示. 结合近年来实验室的研究结果和体会，综述了Aβ最新的研究进展.

摘要:通过基因转染技术培育caveolin-1过表达乳癌HS578T耐药细胞株Hs578T/Dox+cav-1和空载体细胞株Hs578T/Dox+vector，探讨caveolin-1蛋白对耐药肿瘤细胞体内和体外侵袭转移能力的影响. 由于caveolin-1表达的增加，Hs578T/Dox+cav-1细胞形态变为长梭形，伪足更长而伸展，其粘附能力高于空载体Hs578T/Dox+vector细胞株((0.897 ± 0.163) vs (0.633 ±0.053)，P＜0.01). 侵袭小室试验发现，Hs578T/Dox+cav-1侵袭转移能力增强，培养6 h迁徙进入微孔膜的细胞数比Hs578T/Dox+vector细胞株明显增多 ((107.8 ± 10.9) vs (80.8 ± 8.07)，P＜0.01)，侵袭破坏matrigel基质蛋白胶进入膜内的细胞数也明显增多 ((68.8 ± 9.88) vs (25.6 ± 5.41)，P＜0.01). 悬浮培养的Hs578T/Dox+cav-1细胞比Hs578T/Dox+vector细胞更容易聚集，形成相对较致密的细胞团块，24 h检测流式细胞凋亡指数下降 ((8.79 ± 1.54)% vs (16.42 ± 1.42)%，P＜0.01). 这表明其具有更强的抗失巢凋亡和继续生存的能力，为循环转移的肿瘤细胞定植前取了更多时间. Hs578T/Dox+vector细胞在裸鼠皮下种植成瘤试验中不能成瘤，而Hs578T/Dox+cav-1细胞接种15只裸鼠，全部形成肿瘤，平均直径 (0.8 ± 0.45) cm. 发现一只成瘤裸鼠双肺可见瘤样肿块转移. HE病理组织染色见肿瘤细胞弥漫性分布，细胞核异型性明显. 上述结果表明，caveolin-1对Hs578T耐药肿瘤细胞侵袭、转移和成瘤性具有明显的促进作用.

摘要:MicroRNA (miRNA) 是一组内源性的非编码RNA，主要功能是采用降解靶mRNA和抑制靶mRNA的翻译两种作用方式调控基因的表达. 研究表明miRNA与动植物的发育、细胞生长分化和凋亡、脂肪代谢以及人类重大疾病密切相关. 检测特定状态下的组织或细胞的miRNA表达谱对深入研究miRNA的生物学功能具有重要的意义. 研制出了一种检测miRNA表达的微阵列芯片，实验结果显示该芯片具有良好的重复性、灵敏度和特异性. 利用这个芯片检测了人脑、肝脏和心脏等组织以及HeLa、HepG2和HL60等细胞株的miRNA表达谱，聚类分析结果显示，miRNA表达模式具有组织特异性，不同个体的同一组织的miRNA表达谱可以聚类在一起. 最后，用RT-PCR (reverse transcription-PCR) 技术检测了不同组织和细胞株中miR-122a、miR-9和miR-124a的表达，结果显示它们分别在肝脏或脑组织中特异高表达，和芯片结果一致.

摘要:为探讨热休克蛋白70 (heat shock protein 70, HSP70)在肺腺癌中的表达及其作用，首先采用免疫印迹检测经临床支纤镜确诊并行手术切除的肺腺癌组织标本中HSP70的表达，结果显示在癌旁正常组织中HSP70的表达量显著低于其在癌组织中的表达量. 其次，采用HSP70反义寡核苷酸阻断A549细胞中HSP70表达后，经MTT和Hoechst33258检测发现，HSP70下调能显著促进放线菌素D(actinomycin D，Act D)所致的A549细胞增殖抑制及凋亡，反义寡核苷酸处理组与正义或随机寡核苷酸处理组比较P值均小于0.05. 进一步构建HSP70真核重组质粒并瞬时转染A549细胞后，能显著增加A549细胞中HSP70表达，同时采用MTT和流式细胞术及基因组DNA琼脂糖凝胶电泳检测发现，HSP70过表达能显著抵消Act D所致细胞增殖抑制及凋亡，转染HSP70重组质粒组与转染空载体组相比P值小于0.05. 上述结果提示，HSP70在肺腺癌组织中高表达，高表达的HSP70在降低肺腺癌细胞对Act D的敏感性及促进癌细胞增殖与抑制凋亡等方面发挥了重要作用.

摘要:ZAP是一种抗病毒因子，能够特异性结合病毒RNA并招募细胞中的RNA酶降解所结合的靶RNA，从而抑制某些病毒的复制，如鼠白血病病毒 (MLV)、辛德比斯病毒 (SIN). ZAP对HIV病毒抑制作用并不明显. Tat和Rev是HIV编码的两种可以特异性结合HIV RNA的蛋白质，将它们与ZAP构建成融合蛋白，使得融合蛋白通过Tat或Rev结合HIV RNA并通过ZAP降解HIV RNA，从而抑制HIV假病毒载体携带基因的表达. 这一结果为抑制HIV病毒提供了一个新思路，也支持了ZAP招募mRNA降解机器降解靶RNA的模型.

摘要:体外培养人胸膜间皮细胞 (HPMC)，检测人胸膜间皮细胞水通道蛋白1～10 mRNA的表达，探讨其在胸腔内液体平衡中的意义. 从胸腔积液中分离人胸膜间皮细胞，进行培养，用形态学和免疫组化染色进行细胞鉴定. 用RT-PCR检测水通道蛋白1～10 (AQP_1～10) mRNA在人胸膜间皮细胞上的表达. 成功建立人胸膜间皮细胞体外培养模型，鉴定证实为间皮细胞，人胸膜间皮细胞上AQP_1～10 mRNA均有表达，AQP₁、AQP₉、AQP₁₀表达丰富. 人胸膜间皮细胞存在AQP_1～10 mRNA的表达，结合已知水通道蛋白的功能，证实人胸膜间皮细胞参于胸腔内液体转运.

摘要:衰老的大肠上皮不仅多种生理功能下降，而且对大肠癌在内的多种衰老相关的肠道疾病易感性显著增加，但结肠上皮衰老及衰老的结肠上皮对癌症易感的分子机制仍然不清楚. 为此，应用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离青年人及老年人的正常结肠上皮的总蛋白质，图像分析识别差异表达的蛋白质点，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对差异表达的蛋白质点进行鉴定， 免疫组化和实时定量(real-time quantitative) PCR检测部分差异蛋白，在青年人和老年人结肠上皮中的表达水平. 得到了分辨率较高、重复性较好的青年人和老年人结肠上皮的2-DE图谱，质谱分析鉴定了17个结肠上皮衰老相关的蛋白质，免疫组化和 real-time quantitative RT-PCR证实了部分差异蛋白质的表达水平. 研究结果提示，线粒体功能受伤、抗氧化能力下降是结肠上皮衰老的重要原因，4个差异蛋白质即guanine nucleotide-binding protein beta subunit-like protein(Rack1)、stress-70 protein、40S ribosomal protein SA 和 chloride intracellular channel protein1可能与衰老的结肠上皮对癌症易感有关.

摘要:应用噬菌体展示技术制备抗Met (HGF受体，一个与肿瘤发生、侵袭和转移相关原癌基因产物)特异性、高亲和力的全人Fab片段. Fab基因分三步合成，以从错配PCR突变库中筛选出的Fab基因可变区为模板，扩增VH和VL基因，分别与CH1、CL基因融合，合成Fd和L基因，再拼接合成Fab基因，克隆于pComb3XSS中，构建Fab次级抗体库. 经细胞筛选和固相筛选，获得高亲和力阳性克隆. 工程菌经IPTG诱导表达，SDS-PAGE和蛋白质印迹分析，在25 ku和27 ku出现预期大小蛋白质条带. Fab分子经流式细胞术、免疫沉淀、细胞免疫荧光检测，结果表明，Fab能够与S114和MKN45细胞膜上的Met胞外区特异性结合，而与阴性细胞NIH3T3不结合. 抗体内化分析显示，Fab能够与标记肥皂草毒素(ZAP)的抗人IgG结合，并进入细胞内，抑制Met阳性细胞的生长，揭示该抗体能够与Met特异性结合，并且被细胞内化. 该抗体有望成为肿瘤临床诊断或治疗的候选分子.

摘要:8型AAV重组病毒载体是新型的基因转移载体，能高效转染肌肉细胞和肝细胞. AAV转染细胞的效果与注射病毒的途径有很大关系. 与门脉注射和肌肉注射相比，经腹腔注射的rAAV8病毒能经血液循环转运到全身其他组织器官，形成更加广泛和持久的基因转导. 通过腹腔途径把5×10¹⁰ gc的8型重组病毒载体注射到小鼠体内，2周后，小鼠血浆中有明显的基因表达，1个月至2个月期间多数小鼠表达量达到高峰，然后表达水平下降，直到4个月后血浆中尚维持明显的表达量. 凝血实验显示，表达的人凝血因子Ⅸ具有生物活性. 免疫组化实验显示，病毒载体已进入体内多组织器官中表达. 说明8型AAV病毒载体经腹腔注射后已经血液循环运送到其他组织，并在肌肉、肝脏、肾脏和心脏等器官明显表达，表达产物具有凝血活性.

摘要:根据二醇脱水酶与甘油脱水酶的激活因子基因序列同源性分析，设计简并引物从L. diolivorans基因组DNA中扩增出了假定的二醇脱水酶激活因子基因 (gldG、gldH) 全序列，补全了GenBank 中该基因序列的未知部分，构建了表达质粒pSE-gldGH，以E. coli BL21为宿主，进行诱导表达. 表达产物的变性与非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明：gldGH表达产生 68 ku、13 ku两个蛋白质，它们经金属螯合亲和层析与凝胶过滤得到共纯化，纯化产物即假定的激活因子为分子质量约325 ku的蛋白质聚合体，由这两个蛋白质以等摩尔量组成，因此假定的激活因子可能为α₄β₄亚基结构. 以L. diolivorans二醇脱水酶为对象，进行激活实验，结果证实gldGH表达产物具备二醇脱水酶激活因子的功能.

摘要:哺乳动物细胞表达的人类新细胞因子———趋化素样因子超家族成员-2 (CKLFSF2)存在分泌形式，位于CKLFSF2分子的羧基端，具有细胞趋化作用. 为进一步研究CKLFSF2羧基端蛋白的结构和生物学功能及抗体制备，构建了GST-CKLFSF2 C51原核表达质粒，经原核表达、亲和层析、凝胶过滤，获得GST-CKLFSF2 C51融合蛋白和CKLFSF2羧基端蛋白(CKLFSF2 C51)，纯度可达到95%以上. GST-CKLFSF2 C51融合蛋白用于制备多克隆抗体，ELISA方法检测抗体效价阳性，蛋白质印迹检测CKLFSF2哺乳动物细胞超表达细胞裂解液，获得特异性条带与预期大小一致. CKLFSF2 C51经N端测序，质谱鉴定与预期结果一致，该蛋白质具有对PC-3细胞趋化的活性，并且该活性可被制备的多克隆抗体中和. 上述结果表明，原核CKLFSF2羧基端蛋白具有与CKLFSF2真核表达蛋白类似的细胞趋化活性，原核CKLFSF2羧基端蛋白制备的多克隆抗体可用于免疫组织化学、蛋白质印迹检测，并能中和CKLFSF2蛋白的趋化活性作用.

摘要:为筛选表皮生长因子受体 (epidermal growth factor receptor，EGFR) 调控的鼻咽癌 (nasopharyngeal carcinoma，NPC) 细胞的分泌蛋白质，揭示EGFR在NPC发病中的作用机制，采用无血清培养法培养NPC细胞系CNE2，并用转化生长因子 (transforming growth factor-α，TGF-α) 刺激CNE2细胞24 h作为实验组，对照组CNE2细胞不用TGF-α刺激. 超滤法脱盐并浓缩两组细胞的培养上清制备分泌蛋白，采用双向凝胶电泳技术 (two-dimensional electrophoresis，2-DE) 分离两组细胞的分泌蛋白，PDquest图像分析软件识别差异表达的蛋白质点，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS) 鉴定差异表达蛋白. 建立了实验组和对照组CNE2细胞分泌蛋白的2-DE图谱，图像分析识别了22个差异蛋白质点，质谱鉴定了8个非冗余蛋白质，其功能涉及肿瘤细胞侵袭转移、细胞凋亡和增殖，为进一步揭示EGFR在NPC发病中的作用及其机制奠定了基础.