摘要:ERK3是ERK家族中结构较为独特的成员，尤其在分子生物学特征上与ERK家族其他成员明显不同，如基因结构中外显子之间的大内含子、蛋白质结构中活化环的丝氨酸单磷酸化位点以及激酶C端的延伸序列等. ERK3具有独特的丝氨酸单磷酸化位点，导致所有以苏氨酸/酪氨酸双磷酸化位点为磷酸化靶点的MEK分子均不能活化ERK3. ERK3的C端延伸序列能与细胞周期蛋白D3结合并调控ERK3的亚细胞定位，从而影响ERK3对细胞周期的调节. 据目前文献推测，ERK3调控细胞周期的信号通路可能为：Ras→B-Raf→ERK3激酶→ERK3→G1期CDK复合物减少→S期抑制因子增多→细胞增殖阻滞于S期→细胞停止增殖，进入分化. 此外，ERK3信号通路的活化与细胞分化、胚胎发育、胰岛素分泌以及肿瘤的发生密切相关.

摘要:钙调素是普遍存在于真核生物细胞中、发挥多种生物学调控作用的信号组分. 钙调素不仅在有Ca²⁺情况下通过与钙依赖性钙调素结合蛋白作用而传递信号，也能在相对无Ca²⁺条件下直接结合钙不依赖性钙调素结合蛋白而传递信号. 综述了无钙离子结合钙调素及钙不依赖性钙调素结合蛋白的结构特性、钙不依赖性钙调素结合蛋白的种类及其可能的生物学作用，这将有助于我们深入认识钙调素介导信号途径的特异性、复杂性和多样性.

摘要:川楝素是我国学者从驱蛔中药中分离、鉴定的一个三萜化合物，已证明具选择地影响神经递质释放，有效地对抗肉毒中毒，促进细胞分化、凋亡，抑制肿瘤增殖，抑制昆虫发育和取食，影响K⁺、Ca²⁺通道活动等多种生物效应. 综述了证明川楝素抑制多种K⁺通道，选择地易化L型Ca²⁺通道和进而升高胞内Ca⁺浓度的研究资料，并对川楝素产生这些生物效应的机制进行了讨论.

摘要:鼻咽上皮细胞无时无刻不暴露和接触到共生微生物与病原微生物，机体依靠天然防御系统和抗原识别的适应性免疫反应系统来进行自我保护. 慢性感染的重要毒力因素被认为是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分脂多糖(LPS)，对LPS的识别与信号传导是宿主细胞抵御革兰氏阴性细菌的关键. 通过流式细胞术、RT-PCR等研究发现，5-8F细胞可与LPS相结合并产生反应，且其受LPS调节的机制是由于5-8F细胞中存在LPS受体分子如CD14、TLR4与MD2等的表达. 同时应用免疫荧光、蛋白质印迹、荧光素酶报告系统等研究发现，5-8F细胞可受到LPS的诱导而活化TLR4的下游信号传导通路. 5-8F细胞在LPS的诱导下，磷酸化NFκB p65的表达增加，并且使NFκB p65活化迁移至核内. 研究还发现，LPS增加 TNF-α全长启动子活性，同时LPS可使5-8F细胞中TNF-α的分泌增加，从而介导炎性因子的释放. 因此，5-8F细胞可通过与LPS受体分子：CD14、TLR4及MD2与LPS相结合并反应，从而激活TLR4介导的NFκB信号通路，使炎性因子的释放增加，导致鼻咽部的炎症反应诱发鼻咽癌.

摘要:将人肝癌细胞 (HepG2) 接种于生物可降解支架聚羟基乙酸 (polyglycolic acid ，PGA) 上，采用模拟微重力方法，在具有低剪应力和适宜气体扩散的旋转细胞培养系统 (RCCS) 中培养，构建体外三维培养模型. 通过扫描电镜、透射电镜、RT-PCR、流式细胞术等方法观察分析. 结果表明，细胞在此模型中生长良好，细胞呈多面体，含有丰富的微绒毛、线粒体以及胞间有紧密连接形成. 该系统有利于细胞形成三维结构，更接近于体内细胞实际生长状况. 另外，通过黏附分子表达分析，表明该模型重现了肝癌细胞某些体内侵袭转移特征. 一些在肿瘤细胞侵袭和转移过程中具有重要作用的细胞黏附分子 (cell adhesion molecules，CAMs) 表达有了显著的变化，其中E-钙粘素 (E-cadherin) 表达降低，CD44、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1，CD54) 以及整合素β1 (integrin β1，CD29) 表达增高. 在体外实验中，对实验模型的适当选择是得到理想客观实验结果的必要前提，采用模拟微重力的方法构建的体外细胞三维培养模型，将为肿瘤生物学研究、药物敏感性试验等提供更为理想的研究模型.

摘要:MicroRNAs (miRNAs) 是动植物中较短的参与调控基因表达的功能性非编码RNA序列. 第一个miRNA是通过实验手段发现的，然而通过实验手段识别miRNA在技术上仍然具有很大的挑战性和不完整性. 因此，miRNA基因识别需要寻求计算方法来弥补实验方法的不足. 提出了一个全新的miRNA前体的识别方法. 在构造识别模型中，把初级序列和序列二级结构相结合，采用k-gram方法把序列信息映射到高维特征空间中，然后通过特征选取方法提取特征，并用这些特征为miRNA前体的识别构造了基于SVM的识别模型. 同时，采用隐马尔可夫模型(HMM)的学习方法进行了比较. 实验结果表明，该方法是有效的，可以达到较高的敏感性和特异性.

摘要:有关T细胞共刺激分子信号转导方面的研究远落后于其功能研究，为探讨T细胞活化后诱导表达的共刺激分子ICOS(inducible costimulate)维持T细胞存活、抑制活化后T细胞凋亡的作用是否与survivin相关，利用survivin重组腺病毒感染活化但不提供共刺激信号的T淋巴细胞，或者在活化后提供ICOS信号的条件下人工给予优势抑制survivin突变基因，CCK-8及TUNEL法分别检测活化晚期上述T细胞存活及凋亡情况. 结果显示，T细胞活化后2～6天，ICOS抗体刺激可以明显增强survivin表达，survivin可维持无ICOS信号的T细胞存活减少其凋亡，突变型survivin在ICOS信号存在下抑制T细胞存活使其凋亡增加. 结果提示，活化后表达的共刺激分子ICOS通过survivin维持T细胞分裂和存活.

摘要:对于培养的神经元网络而言，学习是外界刺激与网络响应之间联系建立和调控的过程. 为构建合适的神经元网络学习模型，采用闭环低频(1 Hz)成对电极的电刺激模拟认知任务，在多通道微电极阵列系统中对培养的海马神经元网络进行训练，使其发生网络层次上的学习行为. 经过训练后，神经元网络在刺激后20～80 ms内的早期突触后响应明显增加，响应/刺激比(在闭环训练中，电极上任一阶段连续10次刺激的早期突触后响应的个数/10)增大，响应时延减小，并且响应具有选择性，即表明，神经元网络与外界刺激之间已建立可调控的联系，该可调控联系是通过网络的响应来表现的，建立神经元网络与外界刺激之间的可调控联系即网络层次的学习.

摘要:变形链球菌smu.776基因编码一段含有385个氨基酸的蛋白质，其功能可能为依赖于腺苷甲硫氨酸的甲基转移酶. smu.776 的DNA片段被克隆到表达载体pET28a后，在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中过量表达得到很好的产量. 产物Smu.776蛋白通过Ni²⁺亲和柱和分子筛柱层析两步得到纯化. 采用悬滴气象扩散法得到了Smu.776蛋白的晶体. X射线衍射分辨率达到2.0 Å，晶体属单斜空间群C2，晶格参数为a=168.47 Å，b= 50.66 Å，c=53.96 Å，β=104.22°. 每个最小不对称单元内含有一个蛋白质分子，溶剂含量为51.3%.

摘要:表皮葡萄球菌 (Staphylococcus epidermids) 是一种条件致病菌，SarA(Staphylococcal accessory regulator A)是该菌中一个全局性调控因子，它控制着细胞中许多与毒性相关的基因表达. 报道了SarA在转录水平直接调控atlE、lipA和zinC基因的表达. RT-PCR和lacZ报告基因的分析结果显示，在表皮葡萄球菌ATCC35984中，SarA对atlE (自溶酶基因) 表达起负调控作用，而对lipA (脂肪酶基因) 和zinC (膜相关锌金属蛋白酶基因) 的表达则有正调控作用. 生物信息学分析表明，SarA控制atlE，lipA和zinC 3种基因表达可能是通过与被调控基因上游的特定DNA序列的结合来实现的，该DNA结合区保守并富含AT碱基. 根据已报道的金黄色葡萄球菌中SarA的结合位点序列，利用Omiga软件分析并推测了SarA结合atlE，lipA和zinC的可能区域. 基于SarA是一种多功能的毒素相关调控因子，结果提示，SarA能调控众多因子，可以作为防治表皮葡萄球菌感染的一个药物筛选靶点.

摘要:蛋白激酶CK2在寻找抗肿瘤及抗病毒药物方面是一个具有吸引力的分子靶点，其特异性抑制剂具有潜在的临床应用价值. 通过测定药物作用后转移到CK2底物上[γ-³²P]ATP的放射性活度，探讨黄色黄素对重组人CK2全酶以及细胞内CK2活性的影响；采用多重RT-PCR检测CK2α、α' 和 β亚基的mRNA表达水平；Lineweaver-Burk作图法分析CK2的酶动力学机制. 发现黄色黄素能显著抑制重组人CK2全酶(IC₅₀=0.86 μmol/L)以及HL-60细胞内的CK2活性，其作用效果均强于阳性对照TBB. 另外，黄色黄素作用2h可使CK2α和α'亚基的mRNA表达下降，对β亚基则无明显的影响. 酶动力学分析表明，黄色黄素与ATP呈竞争性抑制CK2的活性，与酪蛋白则呈混合性抑制CK2的活性.研究说明，黄色黄素是一种有效的细胞内蛋白激酶CK2抑制剂.

摘要:糖组学方法筛查人肝癌细胞转移过程中发挥重要作用的核心岩藻糖基化蛋白质分子，解析比较筛出的差异蛋白——细胞角蛋白8(CK8)翻译及糖基化修饰改变与人肝癌细胞转移潜能的关系. 应用双向电泳(2-DE)、凝集素亲和印迹、凝集素亲和沉淀联合质谱分析技术，筛查并验证与肝癌转移相关的核心岩藻糖基化蛋白；应用细胞免疫荧光和蛋白质免疫印迹检测CK8的蛋白质表达情况；应用免疫沉淀结合多种凝集素亲和印迹，推测其与肝癌转移相关的寡糖链结构改变. 研究发现，3种不同转移潜能人肝癌细胞Hep3B、MHCC97-L和MHCC97-H的扁豆凝集素(LCA)亲和印迹表达谱中，分子质量55～60 ku、等电点4～6区域处有核心岩藻糖基化蛋白呈差异表达，质谱鉴定为CK8. LCA亲和沉淀及蛋白质印迹进一步验证CK8异常核心岩藻糖基化与肝癌转移相关；研究发现，CK8分布于细胞浆内，在MHCC97-L和MHCC97-H细胞中蛋白质表达水平较Hep3B高，在MHCC97-H中与LCA和蓖麻凝集素(RCA-1)的亲和力较Hep3B强. 以上结果提示，2-DE和凝集素印迹技术联合MALDI-TOF-MS/MS分析可用于筛查疾病过程相关的异常糖基化蛋白质分子，CK8蛋白水平、核心岩藻糖基化及β-1,4末端半乳糖基化的增加均与肝癌细胞转移潜能相关.

摘要:变性链球菌 (Streptococcus mutans) 是最主要的龋齿致病菌. 其中Smu_195c为一个约10 ku (86个氨基酸) 的蛋白质，序列比对结果显示，它没有包含保守的结构域，功能也是未知的. 为揭示其功能，在大肠杆菌BL21 (DE3) 中表达了N端结合了6个His的编码Smu_195c 的DNA片段. 通过悬滴法得到了两种不同晶系的晶体. 第一种属于空间群P6₁22 或 P6₅22，晶格参数为a = b = 62.93 Å, c = 90.63 Å, γ = 120°；第二种属于空间群P4₁2₁2 或 P4₃2₁2，晶格参数为 a = b = 57.97 Å, c = 103.51 Å. N端带有His的蛋白质长出的晶体属于第一种，而切掉N端的6个His后的蛋白质长出的晶体两种都有.

摘要:通过重组慢病毒系统感染人胎儿肝脏基质细胞(fetal liver stromal cell，FLSC)，建立了能够稳定、高效表达碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)的细胞株bFGF/FLSC. 从流产胎儿肝脏组织分离富集基质细胞，对其进行了生长特性和表面标志的鉴定，其在体外维持传代35代，依然保持正常的染色体核型. 从胎儿骨髓间充质干细胞中克隆得到bFGF基因，构建重组慢病毒载体，感染FLSC，根据荧光表达强弱进行流式分选，获得能够继续稳定传代的低表达和高表达bFGF的两株细胞，RT-PCR和蛋白质印迹证实，细胞株中bFGF基因的稳定表达. RT-PCR结果显示，弱荧光和强荧光表达细胞的bFGF，在mRNA水平的表达分别是转染空载体细胞的2.33倍和6.19倍；蛋白质印迹结果显示，在蛋白质水平表达分别是1.76倍和5.05倍. 用建立的bFGF/FLSC作饲养层细胞体外培养人胚胎干细胞(human embryonic stem cells，hES)，结果证明，其能在无或少量添加外源bFGF的条件下，维持人ES细胞增殖及其干性达20代. bFGF/FLSC细胞株的建立，将为构建低成本、安全高效的人胚胎干细胞的培养体系及研究造血细胞的发育分化提供适宜的微环境.

摘要:IκB激酶-α (IKKα)的功能与淋巴形成和乳腺发育相关，在乳腺肿瘤中观察到IKKα蛋白的过量表达. 应用小鼠受精卵卵周隙注射慢病毒载体的方式，建立IKKα基因RNAi转基因小鼠模型，为在体内研究IKKα基因的生物学功能及其与肿瘤发生的关系创造条件. 实验构建了针对IKKα基因RNAi (剔降) 的慢病毒载体，并将载体导入小鼠受精卵卵周隙，获得携带该载体的转基因小鼠模型，经PCR鉴定首建鼠阳性率为15%. 转基因小鼠外周血细胞IKKα mRNA表达量明显降低. 初步表型观察分析，IKKα基因RNAi小鼠发育正常，进一步的分析工作正在进行中.

摘要:非洲爪蟾Paraxial Protocadherin (PAPC) 是一个在爪蟾Spemann组织者特异表达的膜蛋白. 它在爪蟾原肠运动阶段的汇聚延伸运动和体节发生阶段的体节边界形成，以及早期听泡的形态发生和细胞特化过程中都有重要的作用. 为了研究PAPC基因在早期胚胎发育过程中的表达及其生物学功能，需要制备PAPC抗体. 应用谷胱甘肽S-转移酶 (glutathione S transferase， GST) 表达系统表达GST-PAPC融合蛋白，亲和纯化后用以免疫新西兰大白兔，获得PAPC多克隆抗体. 免疫印迹分析发现， 以1∶3000稀释的该多克隆抗体为一抗时，能够在转染了全长PAPC质粒的HEK 293T细胞的蛋白质抽提物中，特异地识别出150 ku的印迹条带. 同时，GST-PAPC融合蛋白可以竞争性抑制该抗体对全长PAPC质粒转染细胞的蛋白质抽提物的特异性条带. 用1∶500稀释的该抗体为一抗进行免疫荧光分析时，发现，PAPC多克隆抗体能够识别在HEK 293T细胞中过表达以及爪蟾动物极细胞中过表达的PAPC蛋白，荧光信号定位在细胞膜上. 免疫印迹分析证明，PAPC抗体能够识别爪蟾胚胎中内源表达的PAPC蛋白.