摘要:人程序性细胞死亡因子10 (programmed cell death 10，PDCD10) 最初被称为TFAR15 (TF-1 cell apoptosis related gene 15)，是在1999年运用cDNA-RDA技术首先克隆得到的一个新基因，早期研究提示与凋亡抑制功能相关. 近期国外多项研究证明，PDCD10基因的缺失和突变与颅内海绵状血管瘤(cerebral cavernous malformations, CCM) 的发生密切相关，CCM的第三个致病基因CCM3 即为PDCD10. 此外，其他研究表明，PDCD10受到严格的表达调控，在多种肿瘤组织中表达明显上调，提示可能在肿瘤的信号转导通路中起重要作用. 最近通过对PDCD10相互作用蛋白的分析和研究，首次证实了PDCD10可以和Ste20激酶家族成员MST4相互作用，增强其激酶活性，并进而通过对ERK-MAPK通路的调控，促进细胞增殖和转化. 以上研究证明了PDCD10的多种生物学效应，并提示其在血管生成和肿瘤中发挥重要作用.

摘要:当前，基于生物质谱进行蛋白质鉴定的技术已经成为蛋白质组学研究的支撑技术之一. 产生的数据主要使用数据库搜索的方法进行处理，这种方法的一大缺陷是不能鉴定数据库中未包含的蛋白质，因此如何充分利用质谱数据对蛋白质组研究的意义很大，而新蛋白质鉴定更是其中一个重要的内容. 新蛋白质鉴定是蛋白质鉴定的一个方面，新蛋白质的定义按照序列和功能的已知程度分为3个层次；以蛋白质鉴定的方法为基础，目前新蛋白质鉴定的方法可分为de novo测序和相似序列搜索结合的方法以及搜索EST、基因组等核酸数据库的方法2大类；两者各有利弊.存在各自的问题和相应处理的策略. 不同的研究者可以根据具体目的应用和发展不同的鉴定方法，同时新蛋白质的鉴定也将随着蛋白质组学研究的发展而更加完善.

摘要:泛素C末端水解酶L1 (ubiquitin carboxy-terminal hydrolases L1) 属于泛素C末端水解酶家族成员，但是泛素C末端水解酶L1酶活性非常特异，不仅具有泛素C末端水解酶活性，而且具有泛素C末端聚合酶的活性. 因此，泛素C末端水解酶L1，不仅在泛素化蛋白降解途径中起到关键的作用，也在其他的泛素信号途径，如在K63-多聚泛素信号途径中起重要的作用. 由于泛素C末端水解酶L1特异的蛋白酶活性，也赋予了泛素C末端水解酶L1多种生物学功能，在神经发育发生、精子发生、卵子发生和受精等方面有着重要的作用. 泛素C末端水解酶L1突变也与帕金森症等神经元退化疾病紧密相关. 泛素C末端水解酶L1在甲状腺、肺等多种组织的超表达，也与该组织的癌症发生有着密切的联系.

摘要:RNA干扰是双链RNA介导的特异性转录后基因表达沉默现象. 由于双链小干扰RNA介导的RNA干扰技术设计简便、作用迅速、效果明显，目前已被广泛应用于基因功能和重大疾病治疗的研究，尤其为肿瘤治疗提供了一条新途径. 利用RNA干扰技术通过调节肿瘤发生发展相关基因的表达可制定出一系列有效的抗癌策略. 然而在现行大多数策略中往往采用不可调控的RNA聚合酶Ⅲ启动子(H1，U6)表达经典的发夹结构RNA，经由Dicer酶切割成功能性siRNA，因此缺乏组织细胞靶向性和抗癌效率. 最新研究表明，采用RNA聚合酶Ⅱ启动子可弥补由RNA聚合酶Ⅲ启动子调控RNA干扰缺陷和不足. 此外，运用病毒载体特别是具有靶向和溶瘤效应的肿瘤特异性复制腺病毒，介导RNA聚合酶Ⅱ启动子调控表达siRNA有望成为更有效的治疗手段.

摘要:为了阐明大鼠脑组织Nav1.5钠通道α亚单位的编码基因、分子特性及其在不同发育阶段各脑叶的分布差异，应用逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR) 方法，对大鼠脑组织Nav1.5 钠通道α亚单位进行了克隆(命名为rN1)，并比较其在不同发育阶段各脑叶的分布情况. rN1基因编码2 016个氨基酸残基，序列分析显示，其与rH1氨基酸相似性为96.53%，与hNbR1相似性为96.13%. 在DI-S3～S4发现与rH1不同的一个新的外显子(第7外显子)，同时发现DⅡ～Ⅲ选择性剪切了第20外显子 (53个氨基酸残基) 的异构体 (命名为rN1-2). 分布结果显示，大鼠脑组织Nav1.5 钠通道α亚单位在不同发育阶段各脑叶分布有明显的差异，研究证实，Nav1.5 钠通道在大鼠脑组织显著表达，存在脑叶的分布差异，而且随着脑组织的发育，其表达逐渐趋于稳定，实验证实Nav1.5 钠通道基因编码了一个新的外显子而且其表达范围更加广泛.

摘要:采用RT-PCR获得黄瓜花叶病毒CMV-CB7株系全长基因组cDNA，经克隆测序发现该CMV的RNA1、2和3分别为3 356 nt、3 045 nt和2 218 nt (序列登录号为：EF216866、DQ785470 和EF216867). CMV-CB7基因组cDNA克隆体外转录RNA接种心叶烟引起坏死症状，而CMV-Fny则产生典型花叶. 由CMV-CB7和CMV-Fny基因组RNA相互交换而构建6个假重组型病毒 (C1C2F3、C1F2C3、F1C2C3、F1F2C3、F1C2F3 和C1F2C3) 活性分析表明：CMV-CB7基因组RNA2决定其在寄主上的症状反应. 嵌合型RNA2 (RNA2^F5C3和RNA2^C3F5) 的寄主侵染活性测定表明：2b基因或RNA2 3′端非编码序列决定CMV-CB7在心叶烟坏死症状. RNA印迹分析结果显示：CMV-CB7和CMV-Fny^F5C3引起寄主坏死与基因组RNA积累没有直接关系.

摘要:基因治疗是未来临床医学最具潜力的治疗方式，目前阻碍临床基因治疗发展的主要因素是缺乏安全和高效的基因载体，因此研究理想的非病毒转基因载体具有重要的意义. 构建了由质粒DNA(D)-抗DNA抗体(A)-阳离子脂质体(C)组成的三元复合纳米基因载体(DAC)，研究表明，三组分在磷酸缓冲液中可通过分子组装形成复合纳米胶束，DAC在细胞培养中表现出显著高效的基因表达，DAC在血管平滑肌细胞中的基因转染效率比不含抗DNA抗体的二元组合(DC)高4倍，比不含阳离子脂质体的二元组合(DA)约高11倍. 激光共聚焦荧光显微观察证明，DAC细胞摄取量和DNA进入细胞核的量均明显高于对照组，而DC二元组合(不含抗DNA抗体)的DNA很少进入细胞核，细胞在DAC存在下生长正常. 未发现细胞毒性. 研究结果提示，DAC的作用机理主要是三元复合胶束中DNA的装载量比二元载体大得多，抗DNA抗体与阳离子脂质体的协同作用明显有利于DNA被细胞摄取和胞吞，从而提高了基因的转染和表达.

摘要:为了建立新型、高产量的慢病毒载体制备体系，将构建好的主框架质粒pVECRNA、包装质粒pGAGPOL及包膜质粒pVSVG通过脂质体共转染至BHK21细胞. 再用含有T7RNA聚合酶基因的重组痘苗病毒vTF-3感染细胞，培养4天后，收集培养上清. 提取培养上清的RNA，进行RT-PCR反应，将培养上清进行免疫印迹鉴定，将培养上清感染正常的293T细胞、HepG2细胞、Vero细胞，荧光显微镜下观察细胞GFP的表达情况，采取3×3×3析因分析方法，优化系统产量，Real-time PCR方法测定细胞培养上清中病毒载体的拷贝数，利用流式细胞术检测病毒载体滴度. RT-PCR及p24免疫印迹结果均提示在细胞上清中存在慢病毒载体；通过荧光显微镜观察到感染组293T细胞、HepG2细胞、Vero细胞均表达绿色荧光蛋白GFP，说明此系统制备出的慢病毒载体具有感染性；系统经优化后，培养上清中慢病毒载体拷贝数达到1.1×10¹²/ml，培养上清原始滴度达到1.3×10⁸ tu/ml，高出目前常用制备体系产量1个数量级. 上述结果表明，新型慢病毒载体制备体系已初步建立，为今后该系统的大规模应用提供客观的科学依据.

摘要:FabB 和FabF是大肠杆菌(Escherichia. coli)脂肪酸合成的关键酶. 生物信息学分析显示，粪肠球菌基因组中有2个与大肠杆菌fabF同源的基因：fabF1和fabF2，缺少与fabB同源的基因. 用粪肠球菌(Enterococcus faecalis)V583总DNA为模板，PCR扩增 fabF1和 fabF2基因， 以pBAD24为载体，构建了重组质粒pHW13(fabF1)和pHW14(fabF2). 体内体外研究显示： fabF1基因能互补大肠杆菌fabB突变， FabF1具有β酮脂酰ACP合成酶Ⅰ(FabB)活性；fabF2能互补大肠杆菌fabF突变，FabF2 具有β酮脂酰ACP合成酶Ⅱ(FabF)活性. 同时发现粪肠球菌FabF2不同于大肠杆菌FabF，它还拥有微弱β酮脂酰ACP合成酶Ⅰ(FabB)活性，可使大肠杆菌fabB突变株产生少量的不饱和脂肪酸. 上述结果表明，FabF类酶 (FabF like enzyme) 同样可以具有β酮脂酰ACP合成酶Ⅰ(FabB) 活性.

摘要:采用化学比色法测定正常皮肤(8例)、增生性瘢痕(10例)及瘢痕疙瘩(10例)组织中黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase，XO)、铜锌超氧化物歧化酶(copper，zinc-superoxide dismutase，CuZn-SOD)、过氧化氢酶(catalase，CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶 (glutathione peroxidase，GPX) 活性以及丙二醛(malonaldehyde，MDA)含量. 结果表明：与正常皮肤比较，病理性瘢痕中XO和CuZn-SOD活性增加、CAT活性降低(P < 0.05)而GPX活性不变，CAT/CuZn-SOD和GPX/CuZn-SOD活性比率下降(P < 0.05)，同时MDA含量升高(P < 0.05). 增生性瘢痕、瘢痕疙瘩之间比较均无差异. 上述结果表明，在病理性瘢痕中，氧化酶XO，抗氧化酶CuZn-SOD、CAT以及GPX的活性改变可能是引起活性氧水平升高的原因之一，在抗氧化剂选择上，CAT可能较为合理.

摘要:淋巴道转移是上皮来源恶性肿瘤转移的早期阶段，其发生机制不清，一直是肿瘤学研究面临的难题，为寻找淋巴道转移相关蛋白，以一对来源于同一亲本细胞，且淋巴道转移潜能显著不同的小鼠肝癌腹水型细胞株为研究对象，其中Hca-F为高淋巴道转移力细胞株，Hca-P为低淋巴道转移力细胞株，采用定量蛋白质组学技术——荧光差异双向凝胶电泳，建立了高低淋巴道转移力小鼠肝癌细胞荧光差异蛋白表达图谱，高通量筛选与肿瘤淋巴道转移相关的蛋白质. 经DeCyde软件分析，共得到163个有统计学差异的蛋白质点，选择2倍以上的差异性蛋白质点23个，经质谱鉴定得到17个蛋白质，在Hca-F中高表达的蛋白质有7个：转羟乙醛酶、波形蛋白、肌酸激酶(脑)、膜联蛋白7 、膜联蛋白5、烯酰辅酶A水合酶1 (过氧化物酶体)、核内异质核糖核蛋白 A2/B1 异构体1. 而在Hca-F中低表达的蛋白质有10个：真核翻译延长因子2、Ero1样蛋白、乙醛脱氢酶2 (线粒体)、苹果酸盐脱氢酶 2(NAD)、β-内酰胺酶2、谷胱甘肽S转移酶ω1、泛素C末端水解酶同工酶L3、内质网蛋白29(前体)、溶血磷脂酶1、微管不稳定蛋白. 这些差异性蛋白质的功能涉及到代谢、蛋白质分泌、蛋白质结合、核苷酸结合，钙离子结合、凋亡和调节生长等过程. 对这些蛋白质功能的进一步验证，将有助于解析肿瘤淋巴道转移的分子机制.

摘要:用含有针对小鼠FSP27基因的siRNA慢病毒，感染小鼠前脂肪细胞系3T3-L1，建立小鼠FSP27基因沉默的前脂肪细胞系，为进一步研究该基因在脂肪细胞分化和脂肪代谢过程中的作用提供实验材料. 根据小鼠FSP27基因设计双链siRNA，克隆至pSilencer2.1-U6质粒，形成含U6-siRNA box的重组质粒. 在293T细胞中检测siRNA沉默FSP27基因的效率，结果显示，siRNA可以高效地抑制外源小鼠FSP27的表达. 将U6-siRNA box 重组到慢病毒载体FG12上，并将慢病毒载体与其他辅助载体用磷酸钙法转入293T细胞，包装成慢病毒. 收集、浓缩、纯化病毒上清并用来感染靶细胞3T3-L1，检测感染效率和内源蛋白表达量的变化. 结果显示，该siRNA可以高效地抑制内源小鼠FSP27的表达，并且siRNA插入基因组中，形成稳定表达. 至此，小鼠FSP27基因沉默的前脂肪细胞系成功建立，为研究FSP27基因的功能提供了研究基础.

摘要:基因之间除了线性关联作用关系外，还存在着非线性的逻辑关系. 用这种逻辑关系构建的生物系统网络模型对研究细胞内的各种生物通路和细胞分子网络非常重要. 首先，根据图着色原理确定了基因的低阶和高阶逻辑关系，然后应用结肠癌基因表达谱数据分析了51个癌基因和抑癌基因的逻辑关系，在此基础上构建了结肠癌基因表达的逻辑网络. 通过这个网络模型发现了与KEGG数据库中结肠癌通路一致的转化生长因子信号通路，并分析了各生物通路成员之间错综复杂的关系. 实验结果表明，基因逻辑网络模型在一定程度上揭示了结肠癌基因和抑癌基因之间并行、分叉等复杂的相互作用关系，反映了结肠癌发病的复杂分子机制，为分子生物医学家提供了一个参考模型.

摘要:BRD7是采用cDNA 代表性差异分析法克隆的一个新的Bromodomain基因，过表达BRD7可抑制鼻咽癌细胞的生长和细胞周期进程，同时发现BRD7基因可以调控Rb/E2F通路的活性. 该研究旨在进一步探讨BRD7调控Rb/E2F通路的分子机制. 通过蛋白质印迹和RT-PCR实验方法发现，BRD7能够降低Rb的磷酸化水平，抑制cyclinD1、cyclinE的蛋白质表达，上调CDK4抑制子P19的mRNA表达，但对CDK4和CDK2的蛋白质表达没有明显影响; 通过荧光素酶实验从转录调控水平进一步证实了BRD7能够明显抑制cyclinD1启动子活性；采用反义核酸技术抑制COS7细胞内源性BRD7的表达后，发现cyclinD1、cyclinE、磷酸化Rb的蛋白质表达水平上调，并且可以促进细胞生长. 这些结果表明：BRD7参与调控Rb/E2F信号通路中重要靶分子的表达，抑制Rb/E2F通路的活性，从而阻止细胞周期G1-S期进程，抑制鼻咽癌细胞生长.

摘要:黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus，CMV)2b蛋白作为重要致病因子的角色在茄科模式植物上已为广泛描述，但其致病机理尚未廓清. 从寄主叶绿体结构和光合特征的角度探索了病毒侵染过程中2b蛋白对心叶烟(Nicotiana glutinosa)的影响. 首先利用PCR方法导入突变位点，构建了2b蛋白不表达的人工突变体Fny-CMVΔ2bpro，然后通过平行接种野生型Fny-CMV和Fny-CMVΔ2bpro，分析二者侵染后心叶烟的症状表现、叶绿素含量、光合速率以及叶绿体超微结构变化. 结果显示：接种30天，Fny-CMV侵染的心叶烟表现重花叶、畸形和矮化症状，植株的光合速率和叶绿素含量显著降低，叶绿体形态和结构发生明显病变. 但是，Fny-CMVΔ2bpro侵染的心叶烟植株仅表现轻微花叶或不表现明显症状，与健康对照相比，其光合速率和叶绿素含量没有显著差异，叶绿体形态和结构亦未出现明显病变. 由此可见，野生型病毒侵染导致的相对低的光合速率和叶绿素含量，与2b蛋白引起的叶绿体形态和结构的破坏有一定的相关性. RNA杂交分析结果显示：2b蛋白的致病性与CMV子代RNA在寄主体内的积累量有关，不表达2b蛋白使得CMV基因组 RNA1和RNA2含量显著下降，其亚基因组RNA4 (编码CP蛋白)含量降低尤为显著.