• 2008年第35卷第12期文章目次
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    • >综述与专论
    • 表观遗传与microRNA相互调控机制以及在抗肿瘤领域内的应用

      2008, 35(12):1343-1350.

      摘要 (4404) HTML (53) PDF 0.00 Byte (9307) 评论 (0) 收藏

      摘要:DNA甲基化和组蛋白修饰等表观遗传机制是恶性肿瘤发生发展的重要原因之一.然而近年来研究发现,microRNA表达水平改变也参与恶性肿瘤的形成.最新研究资料揭示,表观遗传可调控microRNA表达,而一些种类的microRNA也可调节表观遗传,并且二者之间相互作用可调控组织细胞内基因表达以及诱导体内恶性肿瘤产生.研究资料还显示,表观遗传主要通过DNA甲基化、组蛋白修饰等方式调控microRNA表达,而microRNA则通过调节DNA甲基化转移酶、维持细胞中DNA甲基化水平或改变组蛋白修饰等途径调控表观遗传.对microRNA与表观遗传之间的调控关系以及在抗肿瘤领域内的应用进行全面而系统的论述.

    • 脂肪因子visfatin的调节与功能多样性

      2008, 35(12):1351-1357.

      摘要 (3815) HTML (4) PDF 0.00 Byte (5761) 评论 (0) 收藏

      摘要:内脏脂肪素(visfatin)是一种由内脏脂肪细胞分泌的分子质量为52 ku的蛋白质细胞因子.基因序列分析显示其cDNA编码序列与前B细胞集落增强因子(PBEF)同源且在进化中高度保守.Visfatin被发现具有多种迥然不同的生物活性:通过与胰岛素受体相互作用,在不同的情况下visfatin可表现出类胰岛素或抗胰岛素样作用;在细胞质中,visfatin具有烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)活性,能够催化烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的生物合成;作为分泌型的细胞因子,visfatin还可以诱导多种炎性因子的表达,如TNFα、IL-1β和IL-6.Visfatin与一些代谢疾病和急、慢性炎性疾病的关系日益受到重视,如糖尿病、肥胖、急性肺损伤、类风湿性关节炎、败血症、心肌梗塞和炎性肠病等.最近,对visfatin的启动子区及其单核苷酸多态性(SNP)的研究,进一步深化了人们对其在疾病发病机制中作用的认识.重点讨论visfatin的结构、功能多态性以及它与多种疾病的关系.

    • Calpain裂解Atg5决定中性粒细胞发生自噬还是凋亡,以及C5a在其中的可能作用

      2008, 35(12):1358-1363.

      摘要 (3868) HTML (64) PDF 0.00 Byte (6928) 评论 (0) 收藏

      摘要:通过阐明C5a、calpain和Atg5相互作用,为开展新的研究寻找方向.中性粒细胞凋亡控制炎症反应及其强度,多种疾病和中性粒细胞凋亡失调有关,但其发生机制尚未阐明.C5a为补体片段,有多种功能,如诱导中性粒细胞趋化、呼吸爆发、增强吞噬、颗粒酶释放和延迟凋亡.已知calpain涉及中性粒细胞功能及凋亡调节并对该凋亡发生具有特异性.不同刺激因素可通过不同路径调节不同calpain亚型的活性. 已有报道C5a可以通过调节calpain亚型活性而调节中性粒细胞的趋化反应.另外,自噬是真核细胞中广泛存在的生物过程,具有细胞保护作用,Atg5对于自噬体形成必不可少.Calpain可裂解Atg5为24 ku tAtg5,使其失去形成自噬体的功能并介导凋亡.Atg5参与了自噬和凋亡的转换.

    • >研究报告
    • HeLa、HEK293、SH-SY5Y细胞中的Tau蛋白

      2008, 35(12):1364-1370.

      摘要 (3862) HTML (7) PDF 0.00 Byte (6329) 评论 (0) 收藏

      摘要:通过间接免疫荧光测定了HeLa、HEK-293、SH-SY5Y细胞内Tau蛋白的分布,观察到在细胞间期单克隆抗体Tau-1的荧光信号分布于细胞质和胞核中.特别是HeLa细胞,其胞核内具有相对较高的Tau蛋白免疫荧光信号.通过分离SH-SY5Y的细胞核,更为清楚地显示了Tau蛋白在细胞核中的分布,并且免疫荧光信号与DNA的Hoechst33258染色信号相重合.Western blotting的测定结果进一步证明了SH-SY5Y细胞的胞质和胞核中均含有Tau蛋白的不同异构体.以上结果提示,Tau蛋白不仅存在于神经、肌肉等细胞内,也存在于肿瘤细胞系,并且分布于间期的胞核中.

    • 牛αS1-酪蛋白5′调控序列驱动人α-LA基因与LacZ基因在牛乳腺上皮细胞中的表达

      2008, 35(12):1371-1377.

      摘要 (4229) HTML (70) PDF 0.00 Byte (4838) 评论 (0) 收藏

      摘要:将牛αS1-酪蛋白5′调控序列约1.2 kb的片段,连接到含SV40启动子调控下β-半乳糖苷酶基因(LacZ)的PSV载体上,做为启动子,在其后连接0.76 kb的人α-乳白蛋白基因(α-LA),构建真核表达载体 αS1-LA-psv.采用组织块接种法,培养奶牛乳腺上皮细胞,经传代纯化后,对细胞接种存活率、群体倍增时间、生长曲线、形态学等生物学性状进行检测,用免疫荧光细胞染色法对培养的奶牛乳腺上皮细胞进行角蛋白18鉴定,结果表明,成功建立奶牛乳腺上皮细胞系,细胞传至20代以上时仍保持旺盛的增殖活力.将构建的真核表达载体 αS1-LA-psv 转染奶牛乳腺上皮细胞,培养24~120 h均检测到了β-半乳糖苷酶的表达;培养72 h检测到细胞中人α-乳白蛋白的表达,表达量约为0.64 g/L.实验结果表明,建立的奶牛乳腺上皮细胞系具有外源基因表达活性,得到的牛αS1-酪蛋白5′调控序列能作为启动子指导外源基因的表达,构建的真核表达载体能在体外培养的牛乳腺上皮细胞中同时表达人α-乳白蛋白和β-半乳糖苷酶.

    • 稳定表达“毒性”瞬时受体势A1通道细胞系的建立

      2008, 35(12):1378-1386.

      摘要 (4492) HTML (0) PDF 0.00 Byte (5876) 评论 (0) 收藏

      摘要:瞬时受体势A1 (TRPA1) 是一种对低温敏感的离子通道,除响应温度外,也可被各种刺激性化合物激活,是许多感觉模型的转导通道.建立TRPA1异源表达系统将为药理分析及功能研究提供很大的便利,但是TRPA1的表达会引发细胞毒性,因此构建TRPA1稳定细胞系一直面临着挑战.在人胚肾细胞(HEK-293)中非调控的表达TRPA1稳定细胞系被成功建立.实验证实,培养至25代以上,该细胞系仍持续表达TRPA1,且细胞的功能检测也进一步验证了该重组TRPA1细胞系的稳定性及特异性.TRPA1-HEK细胞系不但是TRPA1功能性分析的便利工具,而且可应用于高通量药物筛选系统,鉴定TRPA1特异性调节剂.

    • 人呼吸道禽流感病毒受体的分布趋势

      2008, 35(12):1387-1393.

      摘要 (4314) HTML (5) PDF 0.00 Byte (5150) 评论 (0) 收藏

      摘要:禽类流感病毒和人类流感病毒具有很强的受体识别特异性,分别与唾液酸α-2,3Gal和α-2,6Gal受体分子结合而感染各自的宿主细胞.这种受体结合特异性是流感病毒在禽类和人类之间跨种属传递的主要障碍.应用凝集素组织化学染色技术,探讨人呼吸道各解剖学部位流感病毒唾液酸受体的分布特征.结果显示,唾液酸α-2,3Gal受体, 即禽类流感受体,主要分布在下呼吸道的呼吸部即呼吸细支气管和肺泡, 而在主气管、支气管和细支气管仅少量分布.相反,人类流感病毒受体,唾液酸α-2,6Gal受体在气管、支气管呈高密度分布,随着支气管分级逐渐降低分布减少,至肺泡分布最少.但比较人呼吸道发育成熟过程中,唾液酸α-2,3Gal和α-2,6Gal受体的表达,未发现明显差别.禽流感H5N1病毒体外感染人呼吸道组织试验结果表明,肺泡上皮较支气管和气管上皮易感染,与唾液酸α-2,3Gal受体分布特点相符合.结果提示,人呼吸道可被禽流感病毒感染,目前H5N1病毒极少发生人传人的特点,可能与个体间上呼吸道唾液酸α-2,3Gal受体表达差异有关.

    • Argonaute亚族蛋白对人类肿瘤细胞周期的影响

      2008, 35(12):1394-1402.

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      摘要:Argonaute(Ago)家族蛋白与小的非编码RNAs(siRNAs, miRNAs, piRNAs)生物发生和细胞功能密切相关.它可以结合小RNAs,调控蛋白质的合成或影响mRNA的稳定性,即RNA干扰(RNAi),并且参与Piwi相关RNAs(piRNAs)的生成.人类Argonaute蛋白家族包括8个成员,对其中的4个(Ago1~Ago4)mRNAs进行了实时定量PCR(qRT-PCR)检测,其在许多细胞中共表达,与细胞生长紧密相关.针对人乳腺癌MCF7和子宫颈癌HeLa细胞系,通过下调Ago亚族蛋白表达量,研究其在细胞周期中的调控作用.MTT实验证明,Ago蛋白表达缺失导致细胞增殖活性显著下降(P < 0.01),生长受阻.进一步研究揭示,细胞周期在G0/G1期发生停滞,其中Ago1(P < 0.01)和Ago4(P < 0.05)的作用尤为明显,但并不引发凋亡.虽然具体调控机制尚不清晰,但在人类肿瘤细胞中Argonaute蛋白可直接或间接地参与细胞周期进程的调控.

    • 乌拉坦对大鼠海马CA1区锥体神经元自发放电的抑制作用

      2008, 35(12):1403-1409.

      摘要 (4470) HTML (102) PDF 0.00 Byte (5362) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了深入研究麻醉药乌拉坦对大鼠海马CA1锥体神经元自发放电的作用及其机制,分析了10 mmol/L乌拉坦对自发放电、电压门控钠通道、电压门控钾通道的作用.从自发放电信号中计算了放电频率、提取了峰峰间隔序列(ISI)并利用样品熵和去趋势波动法对ISI进行了非线性分析.结果表明,乌拉坦不仅抑制了自发放电的频率,而且降低了自发放电ISI序列的复杂度并弱化了其长时程相关性.离子通道研究结果表明,乌拉坦显著地抑制了钠通道电流(INa),对延迟整流钾通道电流(IK)和瞬时外向钾通道电流(IA)虽然也有抑制作用但无统计学意义.由于乌拉坦不影响突触传递,因此它可能通过抑制INa使自发放电的阈值升高而降低放电频率,同时,由于参与的通道数量或活性降低而使得ISI的复杂度下降,长时程相关性弱化.

    • 抗小鼠PLRP1多克隆抗体的制备以及特异性鉴定和应用

      2008, 35(12):1410-1416.

      摘要 (4118) HTML (0) PDF 0.00 Byte (4908) 评论 (0) 收藏

      摘要:小鼠胰泡细胞表达和分泌一种被称为胰甘油三脂酶(PTL)的脂肪酶,主要参与食物来源的甘油三脂的消化吸收,胰泡细胞同时也表达胰脂肪酶相关蛋白1(PLRP1),它同PTL具有很高的同源性.为了研究PLRP1的生物学功能,需要制备其抗体.应用谷胱甘肽S-转移酶(GST)表达系统表达了GST融合蛋白,亲和纯化后用以免疫新西兰大白兔,获得了抗PLRP1的多克隆抗体.免疫印迹分析表明,该多克隆抗血清能检测出0.6 ng的融合蛋白抗原以及在3 μg的小鼠胰液提取物中检测出PLRP1蛋白.在证明抗体的特异性方面,尝试了一种新的方法:用PLRP1基因剔除的小鼠作为阴性对照,通过免疫印迹和免疫组化实验证明了该多克隆抗血清具有很高的特异性.进一步的研究发现,进食能促进胰腺中PLRP1的外分泌,这表明PLRP1可能在食物的消化过程中具有一定的生物学功能.

    • 从人胚胎干细胞畸胎瘤中有效获取间充质干细胞和神经前体细胞

      2008, 35(12):1417-1424.

      摘要 (3767) HTML (84) PDF 0.00 Byte (5560) 评论 (0) 收藏

      摘要:通过人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESC)体外分化方法和畸胎瘤形成可以分化获得多种成体细胞.但目前尚不清楚是否可以从hESCs畸胎瘤中分离某些特异性细胞.通过体外筛选方法,有效地从hESCs畸胎瘤中分离出神经前体细胞(neural progenitor cells,NPCs)和间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs).这种hESCs畸胎瘤来源的NPCs和MSCs与体内神经前体细胞和间充质干细胞有着相似的分子标记和特性,并具有进一步的分化潜能——分别可以诱导成为神经元、神经胶质细胞、脂肪细胞和骨骼细胞等.根据人胚胎干细胞畸胎瘤中含有不同分化阶段的外胚层、中胚层和内胚层的组织或细胞,认为人胚胎干细胞畸胎瘤可以作为另一个细胞来源以获取多种(包括人胚胎干细胞体外分化难以得到的)各种前体/干细胞和终末分化细胞.

    • P-糖蛋白在多药耐药的K562细胞转运苯妥英纳与卡马西平中的作用

      2008, 35(12):1425-1429.

      摘要 (3383) HTML (0) PDF 0.00 Byte (2604) 评论 (0) 收藏

      摘要:研究证实,多药转运体与难治性癫痫耐药机制密切相关,P-糖蛋白在其中起重要作用.主要研究P-糖蛋白拮抗剂维拉帕米对P-糖蛋白过表达的K562细胞耐药性及细胞内苯妥英纳与卡马西平浓度的影响.首先建立了P-糖蛋白高表达的K562/Dox(阿霉素诱导)耐药细胞株,比较耐药细胞株和P-糖蛋白表达阴性的K562细胞株对苯妥英纳和卡马西平的耐药性,并观察给予维拉帕米后,耐药细胞内抗癫痫药物的浓度变化.结果发现,苯妥英纳和卡马西平对K562/Dox细胞株的半数抑制浓度(IC50)明显高于K562细胞株,加入维拉帕米后,苯妥英纳和卡马西平对K562/Dox 细胞的IC50明显下降,逆转倍数分别为2.5和1.5.进一步研究发现,K562/Dox细胞内苯妥英纳和卡马西平的浓度均显著少于其药敏K562细胞,仅分别为正常K562细胞的23.6%和32.2%.当加入维拉帕米后,K562/Dox细胞内抗癫痫药物浓度明显升高(P < 0.05).由此证明,高表达的P-糖蛋白参与了细胞的药物转运,在难治性癫痫的耐药机制中扮演重要角色.

    • Hsp22对SCA3/MJD转基因果蝇的神经保护作用研究

      2008, 35(12):1430-1436.

      摘要 (4233) HTML (0) PDF 0.00 Byte (6369) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了探讨Hsp22在SCA3/MJD发病机制中的作用.选用GMR-GAL4和elav-GAL4驱动子,利用经典的GAL4-UAS系统,将含有78个CAG重复扩增的ataxin-3蛋白片段(MJDtr-Q78)分别在果蝇眼睛和神经系统选择性表达,构建GMR-GAL4/UAS和elav-GAL4/UAS系统SCA3/MJD转基因果蝇模型, 然后利用遗传学方法和热休克反应使Hsp22在SCA3/ MJD转基因果蝇眼睛和神经系统以不同水平过表达.结果表明,Hsp22过表达显著抑制了MJDtr-Q78蛋白的神经毒性,果蝇眼睛视网膜光感受神经元变性明显缓解,果蝇存活能力也显著提高.Hsp22对SCA3/MJD具有保护作用,增强Hsp22表达对SCA3/MJD可能是一种潜在的治疗方法.

    • 甜菜(Beta vulgaris L.)叶绿体转化体系建立及抗虫和抗除草剂植株的获得

      2008, 35(12):1437-1443.

      摘要 (4100) HTML (2) PDF 0.00 Byte (2506) 评论 (0) 收藏

      摘要:为建立外源基因甜菜叶绿体转化体系,利用分子生物学方法构建了包含有编码苏云金芽孢杆菌晶体蛋白基因Bt cry1Ac和编码膦丝菌素乙酰转移酶基因bar的甜菜叶绿体转化载体pSKARBt/bar,以甜菜叶绿体基因组中atpB/rbcL做同源片段,以甜菜叶绿体16S启动子和终止子为调控基因,以bar基因为筛选标记基因.基因枪法转化甜菜叶柄,经筛选获得抗性转基因植株.对转基因植株进行外源基因Bt cry1Acbar的PCR检测、DNA印迹分析,结果表明:外源基因Bt cry1Acbar确已导入到甜菜叶绿体基因组中.转基因植株除草剂抗性鉴定及其离体叶片虫试鉴定结果表明:转基因植株具有较强的杀虫活性和抗除草剂特性,表达了相应的蛋白质.研究结果还表明:bar基因在植物叶绿体转化中,既可以用作抗性基因,又可用作转化体筛选的标记基因.建立了甜菜叶绿体转化体系.

    • >技术与方法
    • 采用亲和层析结合制备凝胶电泳获得高纯度的重组抗原蛋白用于制备蛋白质芯片

      2008, 35(12):1444-1450.

      摘要 (4305) HTML (35) PDF 0.00 Byte (5265) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了得到制备抗原芯片所需的高纯度重组抗原蛋白,需要建立一套适合于多种重组抗原表达和纯化的技术路线.采用了亲和层析结合制备胶电泳的方法,对16种用于构建蛋白质芯片的食管癌相关抗原基因进行了克隆重组并在大肠杆菌中进行了表达.对高表达的重组蛋白首先制备包涵体,然后采用Ni-Sepharose亲和层析得到初步纯化的蛋白质,最后使用SDS-PAGE制备胶电泳作进一步纯化.经过透析复性后,用于制备蛋白质芯片.采用亲和层析纯化重组蛋白,得率为71% ,纯度约为70%;在SDS-PAGE制备胶进一步纯化后,得率为32%,纯度为95%,经过透析和复性后,最终得率为21%,纯度为95%.得到的重组蛋白RPS4在ELISA检测中可以和血清中识别RPS4 的自身抗体起反应,并且,采用精纯抗原制备的蛋白质芯片,在检测抗原与抗体这一对反应中也具有较高的敏感性和特异性,适合大规模血清抗体的检测.研究表明,采用亲和层析结合制备凝胶电泳纯化抗原蛋白,是一条简便快捷,适合需要量不大,但对纯度要求比较高的蛋白质芯片制备的技术路线.

    • 凋亡相关基因的整合分析及基因表达芯片的制备

      2008, 35(12):1451-1460.

      摘要 (4000) HTML (55) PDF 0.00 Byte (7360) 评论 (0) 收藏

      摘要:利用IPI和GenBank,收集了与凋亡相关的5 333条基因序列,用一定的标准,整合筛选得到1 384个凋亡相关的基因.通过亚细胞定位、组织表达差异显著性分析、自然正义/反义RNA对预测、基因簇在pathway上的定位、蛋白质/蛋白质相互作用等方面的分析发现,一些基因只在一个组织里显著差异表达,一些基因存在自然正义/反义RNA对现象,一些基因簇同时位于多条pathway等重要信息.同时,制作了一张凋亡相关基因的寡核苷酸芯片,并且对于一对NAIF1表达质粒转染前后的HeLa样品,通过该芯片的筛选,得到24个差异表达的基因.发现NAIF1过表达诱导的细胞凋亡,伴随了PAX2、PDCD8、PDCD10、DFFA、CASP7等基因表达的显著变化,同时还发现,U58668,该mRNA没有任何基因或蛋白质的注释信息,当camptothecin诱导U937细胞系凋亡时上调,在这里的NAIF1过表达诱导的HeLa细胞系中也上调(上述数据结果见http://gpcrome.cbi.pku.edu.cn:2005/chip).

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