摘要:Th17细胞作为一个不同于Th1、Th2的细胞亚群，已经被证实在自身免疫病、感染等疾病中发挥重要的作用．为了进一步认识Th17细胞的效应机制，近来对于Th17细胞的分化及调节进行了深入的研究，证实TGF-β与IL-6或者IL-21的协同作用是诱导Th17细胞分化的关键因素，而IL-23在促进IL-17分泌，增强Th17细胞效应功能方面发挥重要作用．与Th1、Th2、Treg 细胞特异性的转录调节因子T-bet、GATA3、Foxp3相对应，现证实ROR-γt（retinoid-related orphan receptors -γt)是促进Th17细胞分化、调节其功能的特异性转录调节因子．Th17细胞通过分泌IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22、IL-6、TNF-α等细胞因子发挥效应功能。其中IL-21作为Th17细胞的一个自分泌调节因子，在诱导Th17分化、抑制Th1、Treg功能方面发挥关键作用．而另一方面，近来发现，重要的T细胞生长因子IL-2在维持、促进Th1、Th2、Treg及CD8⁺T细胞功能活性的同时，却发挥着抑制Th17细胞分化的作用．Th1、Treg、Th17细胞的分化之间存在微妙的调节关系，TGF-β的水平、作用的时间决定着上述三群T细胞的分化结局．Th17细胞与Th1细胞均是自身免疫病及感染性疾病的重要效应细胞，二者的作用是否有时间、空间、功能方面的特异性？TGF-β如何调节两群效应细胞的分化方向及功能？以及Th17细胞在体内免疫平衡中的作用，是否可以通过Th17细胞诱导免疫耐受等，是人们急于回答的非常有意义的课题．

摘要:NK细胞识别受体(NKR)和Toll样受体(TLR)是天然免疫系统最重要的2个天然免疫识别受体家族，位于机体抵抗外来侵袭的第一道防线．二者各自具有独特的识别外来或内源性的危险信号、区分自我和非我的识别机制，同时又相互协同、相互调节，成为启动免疫应答的关键分子以及连接固有免疫和适应性免疫的桥梁．以NK细胞为载体将TLRs/NKG2连接起来，阐明这2类重要的天然免疫受体间的识别和调节关系，可以较好地反映机体内外环境变化或刺激时固有免疫对适应性免疫的调节作用，并为有效控制感染、炎症、肿瘤及自身免疫性疾病提供崭新的治疗策略．

摘要:炎症反应是机体针对损伤因子所产生的防御反应并伴随着红、热、肿、痛的局部临床特征 ．炎症反应是由多种细胞和细胞因子共同参与的复杂过程， 天然免疫细胞(包括吞噬细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞等)是起始和推进炎症反应的重要效应细胞，而获得性免疫细胞如T细胞不仅参与后期炎症反应的发生同时还具有调节早期炎症反应的重要功能．炎症反应本身有利于清除消灭致病因子，液体的渗出可稀释毒素，吞噬搬运坏死组织以利于再生和修复，使致病因子局限在炎症部位而不致蔓延全身．另一方面，过激和长期的炎症反应又会对机体造成损伤．因此，深入研究炎症反应的机制可为治疗炎症所引起的疾病提供新的思路．

摘要:淋巴细胞是哺乳动物唯一能发生体细胞基因组变化的一类细胞，淋巴细胞在发育过程中通过V(D) J重组获得成熟的特异的抗原受体基因，实现了免疫细胞抗原识别惊人的多样性．关于V(D) J重组的调控机制一直是免疫学研究的重要问题，然而直到将表观遗传学研究引入这一领域，综合遗传学和表观遗传学的研究才真正揭示V(D) J重组精细的调控机制．综述了新近发现的V(D) J重组过程中重要的表观遗传学调控机制，如CpG甲基化，组蛋白修饰，核小体重塑及核拓扑学变化．

摘要:NOK能激活包含JAK-STAT信号通路在内的多种促细胞有丝分裂信号通路．研究发现，在人胚肾细胞(HEK293T)中，NOK与STAT3具有直接的相互作用．进一步的实验表明，NOK能同STAT3蛋白除螺旋结构域及C端结构域外的其他4个结构域发生相互作用，而NOK的胞内区则介导了NOK同STAT3的相互作用．同时，免疫共沉淀实验显示，NOK能与JAK2发生相互作用．重要的是，共同表达NOK与JAK2蛋白对STAT3信号通路能产生一种非常显著的协同激活作用，但当共同表达NOK和JAK2的激酶活性缺失突变体时，并不产生这种协同激活效应．综上，实验结果显示，NOK可能同STAT3和JAK2形成一个复合物，通过JAK2依赖性方式激活STAT3信号通路．

摘要:为研究神经元限制性沉默因子(NRSF)负调控神经元及胰岛细胞中神经特异性基因的表达，拟通过RNAi的方法降低NRSF表达以进一步观察其调控的下游基因的表达情况．构建含人胰岛素启动子-荧光素酶(HIP-LUC)的pcDNA3.1报告载体．通过RNAi序列设计软件进行NRSF干涉片段及脱靶对照片段的设计，然后构建慢病毒干涉载体．包装产生慢病毒干涉毒液，用其感染HeLa细胞获得稳定干涉NRSF的细胞株，利用RT-PCR、实时定量PCR、蛋白质免疫印迹、免疫荧光染色等方法检测NRSF的干涉效果及其下游基因的表达情况，观察干涉NRSF后胰岛素启动子报告载体荧光素酶活性的变化．构建具有NRSF干涉效果的慢病毒干涉载体成功，并获得了稳定干涉NRSF及脱靶对照的HeLa细胞株，RT-PCR及实时定量PCR检测结果表明，NRSF干涉片段的干涉效率为56% (n = 6, P < 0.01)，蛋白质免疫印迹、免疫荧光染色方法检测证实干涉后NRSF蛋白表达水平明显降低．RT-PCR实验表明干涉NRSF后下游基因开始表达，荧光素酶活性分析表明，干涉NRSF后胰岛素启动子活性增强了2.4倍 (n = 3，P < 0.01)．上述结果表明，成功构建NRSF的慢病毒干涉载体并获得稳定干涉NRSF的HeLa细胞株，干涉NRSF后，其下游基因特别是胰岛素基因开始表达．这一研究工作有助于我们进一步了解NRSF在胰岛细胞发育分化中的调控作用．

摘要:为研究siRNA干扰瘢痕疙瘩成纤维细胞cyclin D1基因表达，对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖、细胞周期和G1期调控的影响，构建了靶向cyclin D1的siRNA表达质粒．利用Lipofectamine^TM 2000转染体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞，应用荧光定量PCR、RT-PCR检测cyclin D1 mRNA的干扰效果, 应用MTT法、流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期的变化,应用免疫组织化学染色检测成纤维细胞中cyclin D1、CDK4、P16、pRb蛋白表达的影响．主要结果如下：a．靶向cyclin D1的特异性siRNA序列可以高效地抑制成纤维细胞cyclin D1基因表达，对照组与实验组在mRNA水平其表达抑制率分别为63.68%和92.83% (P < 0.01)；b．可以显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖，改变细胞周期分布，G0/G1期细胞比例显著高于各对照组 (P < 0.05)，细胞分裂被阻滞；c．免疫组化染色发现，转染72 h后，过表达的cyclin D1、CDK4和pRb蛋白，在瘢痕疙瘩成纤维细胞中均出现了不同程度的表达下调，而低表达的P16则呈上调表现．由上述结果可见，构建的靶向cyclin D1的RNAi表达质粒，可有效地抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞cyclin D1基因表达，通过改变G1期相关周期蛋白的水平，影响G1/S期的进程，显著地抑制成纤维细胞的增殖．

摘要:在组织水平上已经描述了许多植物通气组织的形成过程，但对其发育过程的调控仍然知道得很少．利用CSEM-EDX微量分析技术，定点测量慈姑叶柄通气组织不同发育时期的细胞壁矿质元素的组成．这些元素除了C，O以外，还包括Mg，Ca，Cu，Zn，P 等必需的矿质元素．结果发现，在叶柄发育的早期，通气组织细胞壁的K和Cl含量很高，分别高达36%和4.3%细胞壁干重．Mg的含量在第二阶段最高，达到细胞壁干重的0.86%．只有在第三和第四阶段监测到Cu和Zn元素，最高含量分别为2.5%和1.5%细胞干重．仅在第四和第五阶段才能检测到Ca，其最高含量为1.3%细胞壁干重．通气组织横膈膜细胞和圆柱体腔壁细胞的元素构成变化有相似的趋势，说明这种变化与组织的发育阶段关系密切．细胞壁的一些元素间呈现较高的相关性，其中K和Cl及Cu和Zn之间成较高的正相关．在不同发育阶段，细胞壁的元素含量呈现动态变化，说明细胞壁(质外体物质)的元素构成有很大的变动范围．早期的通气组织细胞壁大量积累K和Cl，暗示早期的气体空间充满液体(组织液)；Mg可能参与细胞伸展的调控；伸展中细胞的细胞壁积累高浓度的Cu和Zn，并不影响细胞的正常功能；而Ca的出现使细胞比硬度增加，将终止细胞伸展．Cu和Zn在细胞壁中的积累呈高度的直线关系，回归分析显示，二者呈现定量关系，推测它们可能有共同的或者类似的转运和吸收机制．

摘要:Mink相关蛋白1 (MiRP1)是由KCNE基因家族成员KCNE2编码的具有一个跨膜结构的小分子蛋白质，发生在KCNE2上的相关突变能够引起遗传性长QT间期综合症 (long QT syndrome，LQT6)，但其机制不明．以往的工作表明，MiRP1调节瞬间外向钾电流(transient outward current，I_to)的功能，对维持心电稳定性具有重要的调节作用．在哺乳细胞系COS-7表达系统利用膜片钳全细胞记录方式，研究了两种LQT6相关的突变体I57T和V65M对Kv4.3通道功能的影响，从MiRP1对I_to功能调控的改变探讨LQT6引起心律失常的电生理机制．结果表明，KCNE2与Kv4.3共表达后对通道功能具有明显的调控作用，使通道的激活和失活明显减慢，电压依赖性失活发生正向移位，同时加快Kv4.3通道从失活中的恢复．I57T与Kv4.3共表达的通道，门控动力学以及通道的恢复特性更接近Kv4.3单独表达的通道，表现为丧失KCNE2的功能 ——“loss of function”，而V65M的作用则与之刚好相反，对Kv4.3门控动力学和恢复特性的调节较KCNE2更强，同时，使通道电流密度明显降低，表现为增强KCNE2的功能——“gain of function”．由此推论，KCNE2对I_to功能有重要的调节作用，发生在KCNE2基因上的突变，无论是增强(V65M)还是减弱(I57T)KCNE2的功能都可能通过改变I_to在心脏电稳定性中的贡献，从而使心脏在某些条件下发生心律失常．

摘要:促肝细胞再生磷酸酶-3 (PRL-3)是重要的肿瘤转移相关基因，其转录调控机制一直未被阐明． 应用TRED在线分析系统共获得3种可能的人PRL-3基因启动子区域．通过与人基因组序列进行比对，发现其中3号启动子序列距离人PRL-3基因距离最近，位于该基因上游约1 kb的DNA区域，与5′端非翻译区域邻接．在线Consite分析系统发现，－500 bp至－451 bp之间存在Snail结合的核心寡核苷酸序列CACCTG． 运用分子克隆的方法获得PRL-3基因启动子2段区域 －699 bp至299 bp及 －642 bp至 －383 bp区域，后者具有Snail结合位点核心寡核苷酸序列CACCTG． 构建具有荧光素酶报告基因的pGL3载体并检测其启动子活性．－699～299 bp区域与－642～－383 bp区域的DNA片段在SW480、SW620、CNE2、293A细胞中均具有启动子活性，其中含有Snail结合位点核心寡核苷酸序列CACCTG的短片段活性强于较完整的序列． 染色质免疫沉淀结合PCR扩增技术及凝胶迁移阻滞实验确定PRL-3基因启动子区域具有Snail结合位点．研究确定，PRL-3基因的启动子位于转录起始位点上游700 bp与下游300 bp的DNA区域，PRL-3基因启动子存在转录因子Snail结合元件．

摘要:过氧亚硝酸阴离子(ONOO^－)是一种性质活泼的自由基，可引起强的氧化性损伤，介导了一氧化氮(NO)的大部分毒性作用．应用全细胞膜片钳技术，探讨ONOO^－对脑片海马神经元电压门控钠通道电流(I_Na)和神经元兴奋性的影响．结果表明，ONOO^－供体SIN-1(10，500，2000 μmol/L)可浓度依赖性抑制I_Na电流峰值．SIN-1与ONOO^－清除剂尿酸共处理，并不影响I_Na．500 μmol/L的SIN-1可使I_Na的I-V曲线上移，并可抑制其失活后恢复过程，但对I_Na的激活和失活过程无影响．SIN-1还可抑制动作电位发放频率和幅值．脑片预处理腺苷酸环化酶(adenylate cyclase, AC)抑制剂MDL-12, 330A (25 μmol/L)和NEM (50 μmol/L)对SIN-1的作用无影响．然而，预处理鸟苷酸环化酶(CG)抑制剂ODQ可抑制SIN-1对I_Na的作用．以上结果提示，ONOO^－通过cGMP-I_Na-AP信号级联系统作用于海马神经元，与PKA和蛋白巯基亚硝化途径无关，这可能是ONOO^－神经毒性的机制之一．

摘要:去整合素基质金属蛋白酶19(ADAM-19)是新近发现的ADAMs家族成员，在胎盘组织中有较高水平的表达，但其在胎盘发生过程和滋养层细胞侵润中的功能还是未知的．我们以人正常胎盘来源的细胞滋养层细胞(NPC)为体外模型，利用基因转染、RT-PCR、蛋白质印迹、免疫组织化学及细胞侵润分析等手段，证实ADAM-19在人胎盘组织中有特异表达，存在于多种滋养层细胞中；转化生长因子β1(TGF-β1)可以显著上调NPC细胞中ADAM-19的表达，呈现剂量依赖性；过表达hADAM-19可使NPC细胞中MMP-9 的mRNA和蛋白质表达下调，并降低细胞的侵润能力．研究结果表明，人滋养层细胞中存在ADAM-19表达的旁分泌调节机制，而ADAM-19在调节滋养层细胞侵润中发挥一定作用．这一结果为阐明ADAM-19在胎盘发生中的功能提供了新的科学资料．

摘要:拟南芥谷胱甘肽S-转移酶Zeta类(AtGSTZ)是一种与细胞代谢和环境净化密切相关的多功能酶．应用易错PCR和多轮DN A洗牌技术构建了AtGSTZ随机突变文库，再利用pH指示剂颜色改变法对突变文库进行筛选，获得了9个二氯乙酸脱氯活性提高的突变子．其中，NN23含25个氨基酸突变，比活力提高120%，NN20含24个氨基酸突变，比活力提高102%，EC1含2个氨基酸突变，比活力提高47%，其他6个为单点突变，比活力分别提高9%～60%．酶学分析显示，所有进化酶对底物二氯乙酸的催化效率和对谷胱甘肽的亲和力以及个别进化酶的复性能力都得到不同程度的提高，但热稳定性均没有明显改善．同时，对一系列与AtGSTZ空间折叠及催化活性相关位点进行了讨论．

摘要:利用RT-PCR技术检测apoE基因缺失(apoE^-/-)小鼠在1、2和3月龄3个年龄段主动脉以及14天、1、2和3月龄4个年龄段肝脏中动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)重要相关基因的时序表达特点，并通过血清生化检测结合主动脉根部病理形态学特征的分析，探讨AS重要相关基因时序表达特点与AS早期病变的关系．在主动脉检测的9条AS相关基因中，apoE-/-与野生型(WT)小鼠相比，1、2和3月龄时IL-1β的mRNA表达水平均显著上调．1月龄时VCAM-1、IκB和TGF-β，2月龄时PDGF-α和CD36，3月龄时TNF-α和MMP2的mRNA表达水平均显著上调，其他年龄段无显著变化．在肝脏检测的2条AS相关基因中，C反应蛋白(CRP)的mRNA表达水平在14天到2月龄时无显著变化，3月龄时显著上调．NF-κB在各年龄段apoE^-/-小鼠主动脉和肝脏中的基因表达量与同龄WT小鼠相比均无显著差异．不同年龄段的apoE^-/-小鼠血清TC、TG和LDL-C水平均明显高于同龄WT小鼠．2月龄apoE^-/-小鼠主动脉内膜出现散在的脂质沉积，并随年龄增长逐渐加重．上述结果显示，时序表达上调的AS重要相关基因构成了以NF-κB为核心的复杂调控网络，它们之间相互作用，共同参与慢性炎症过程，在apoE^-/-小鼠AS的早期发生发展中发挥重要作用．

摘要:腺相关病毒(AAV)是一种复制缺陷性DNA病毒，其基因组两端的两个倒转末端重复序列( ITR)是rAAV包装复制所必需的自身结构．ITR容易缺失并影响病毒颗粒的包装和感染力．比较两个ITR完整的和一端ITR缺失的AAV病毒发现，一端ITR缺失的AAV载体质粒包装病毒的效率明显比ITR完整的质粒低．用这两种AAV病毒感染293细胞、HeLa细胞和小细胞肺癌细胞NCI H446细胞，显示两个ITR完整的AAV病毒感染细胞的能力明显比一个ITR缺失的病毒强．说明ITR缺失对AAV病毒的包装和感染力都有明显的影响．因此，筛选两个ITR完整的AAV载体质粒，并稳定其基因组的结构，对提高病毒生产的产量和增强病毒的感染力都有显著的价值．

摘要:HBsAg抗原145位突变，可能导致临床上广泛使用的HBsAg诊断试剂出现漏检．通过杂交瘤技术制备出了一种抗该突变体的单克隆抗体，属IgG1亚类 (κ型，效价为1∶9×10⁴) 与其他类型肝炎病毒抗原无交叉反应．采用该单抗与多克隆抗体所建立的AC-ELISA法，对临床上乙型肝炎病毒(HBV)的突变样品进行检测的特异性和敏感性较高．