摘要:筛选特异神经元表达的Gal4转基因品系对于果蝇神经系统及其功能的研究极其重要。GAL4蛋白是酵母中的一类转录因子，它能够与特定的上游激活序列（Upstream Active Sequences, UAS）结合，并驱动UAS下游基因的表达。果蝇的转座子P因子（P-element）可以在其自身产生的转座酶的作用下，在果蝇的基因组内移动。通过剔除P因子内转座酶基因，使其成为转基因的载体。在外源转座酶的帮助下将带有一个弱启动子的Gal4基因随机插入到果蝇的基因组中，如果插入的位置正好在某个增强子的作用范围内，就会驱动Gal4基因的表达，获得具有特定表达模式的Gal4转基因品系，这就是“增强子陷阱”（enhancer-trap）技术。通过转基因载体同样可以将UAS及其下游目的基因（如绿色荧光蛋白GFP）一起转入果蝇的基因组中，从而获得UAS-GFP转基因品系。当Gal4转基因品系与UAS-GFP转基因品系的果蝇杂交后，在其子代中产生的GAL4蛋白与UAS特异性结合，驱动UAS下游的GFP表达，从而标记出Gal4转基因品系的表达模式。经过大规模的筛选就可以得到大量具有特定表达模式的Gal4转基因品系。由于已有的Gal4品系本身不能产生转座酶，保证了已有Gal4品系的稳定遗传。如果人为地为已有的Gal4品系提供一次转座酶，就可以引起P因子的再次转座，从而可能产生具有特定表达模式的新Gal4品系。本期发表的《用“增强子陷阱” 技术构造并筛选果蝇UAS/Gal4系统中Gal4新品系及脑基因表达图谱数据库的开发》（见xx-xx页），报道了清华大学钟毅实验室经过开展大规模的遗传筛选，找到了一批目前国外Gal4基因库中还没有发现的具有特异神经元表达的Gal4品系，将极大地拓展果蝇脑结构与功能的研究。根据Gal4品系的表达模式，他们开发了在果蝇脑中特异表达的图谱数据库，将会方便快速查找实验所需的特定表达的Gal4转基因品系。这项工作不仅扩大了国际上果蝇Gal4品系资源，也为建立我国特有果蝇信息与资源平台打下了良好的基础。 果蝇作为一种经典的模式生物，其Gal4/UAS系统被比喻为瑞士军刀（Swiss Army Knife），是探索生命科学问题的强有力的工具。凭借Gal4/UAS系统，果蝇已经被应用于生命领域的各个学科中。如神经科学的研究中，需要研究各种基因、突触、神经元以及神经元网络在各种神经活动中的功能。有了大量特异神经元表达的Gal4转基因品系，就使得上述研究得心应手。如将UAS转基因品系中的目的基因换成要研究的基因，与特定表达模式的Gal4品系杂交，可以研究该基因在相关部位的功能。如果将UAS转基因品系中的目的基因换成各种功能阻断分子等，与各种特定表达的Gal4品系杂交，就可以准确研究果蝇脑中从单个神经元、神经元群到神经回路的功能，从而最终实现果蝇脑功能的精确定位。 目前国际上已经建立了多个果蝇的信息与资源平台，如美国印第安纳大学的布卢明顿果蝇种系中心（Bloomington Drosophila Stocks Center），日本京都工业技术大学的果蝇遗传资源中心（Drosophila Genetics Resource Center，DGRC）以及奥地利维也纳果蝇RNAi中心（Vienna Drosophila Resource Center, VDRC）等等。这些果蝇的信息与资源平台为各国科研人员进行信息交流、获得果蝇品系、促进科研发展起到了非常重要的作用。由于建立果蝇信息与资源库的成本较高，既需要大量工作人员进行长期的筛选工作，又需要稳定的资助来维持果蝇资源与数据库的运转。钟毅实验室克服了各种困难，建立了具有自己特色的Gal4转基因品系库和相关的数据库，并且还在不断的扩大和完善已有的资源与信息，极大地推动了国内果蝇信息与资源平台的建设。另一方面，随着国内果蝇实验室的不断发展与壮大，科研水平的日益提高，新的基因突变体和转基因品系不断增多，如何有效的利用国内的果蝇资源，如何推动国内果蝇信息与资源的共享，还需要国内果蝇实验室的不断努力。另外，建立和维持果蝇品系库需要大量人员和财力的支撑，我们也希望国内的果蝇实验室在国家相关部门的大力支持下，通过多种形式建立和完善各种果蝇的信息与资源平台，推动国内科研持续稳定地发展。

摘要:大量研究表明，神经元的突触可塑性包括功能可塑性和结构可塑性，与学习和记忆密切相关．最近，在经过训练的动物海马区，记录到了学习诱导的长时程增强(long term potentiation, LTP)，如果用激酶抑制剂阻断晚期LTP，就会使大鼠丧失训练形成的记忆．这些结果指出，LTP可能是形成记忆的分子基础．因此，进一步研究哺乳动物脑内突触可塑性的分子机制，对揭示学习和记忆的神经基础有重要意义．此外，在精神迟滞性疾病和神经退行性疾病患者脑内记录到异常的LTP，并发现神经元的树突棘数量减少，形态上产生畸变或萎缩，同时发现，产生突变的基因大多编码调节突触可塑性的信号通路蛋白，故突触可塑性研究也将促进精神和神经疾病的预防和治疗．综述了突触可塑性研究的最新进展，并展望了其发展前景．

摘要:磷酸化蛋白50(ERM-binding phosphoprotein-50，EBP50)是由358个氨基酸组成的多功能连接蛋白．EBP50通过其PDZ-Ⅰ、PDZ-Ⅱ和ERM结合结构域与多种蛋白质结合，对PI3K/Akt、PLCβ等生长信号途径及对细胞迁移进行调控．目前有很多证据提示，ebp50是一种新的抑癌基因．在乳腺癌病人临床标本和细胞系中可检测到ebp50基因的杂合性丢失(LOH)和突变，其抑癌作用可能是通过它与多种抑癌蛋白(如抑癌蛋白PTEN、MERLIN和SYK)的相互作用并增强它们的稳定性，并与致癌蛋白结合从而抑制其致癌功能来达到的．通过对其分子结构、调控的信号途径及其与乳腺癌发生、发展的关系进行综述，为乳腺癌的防治提供新线索．

摘要:植物同源结构域(plant homeodomain, PHD结构域)，是真核生物中一种进化保守的锌指结构域．多种调控基因转录、细胞周期、凋亡的蛋白质含有PHD结构域．研究表明，PHD结构域涉及多种功能，包括蛋白质相互作用，特别是同核小体组蛋白的作用．目前认为，各种组蛋白修饰(包括甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化等)的模式和组合，调节染色质状态和基因转录活性，并提出了组蛋白密码理论．PHD指结构域能特异性识别组蛋白的甲基化(修饰)密码，可能是组蛋白密码的一种重要解读器．

摘要:据世界卫生组织(WHO)报道，全世界约有20亿人曾感染过乙型肝炎病毒(HBV)，其中3.5亿人为慢性HBV感染者．我国现有1.3亿乙肝病毒携带者和3 000多万乙肝患者，其中约有20%～40%的患者经过多年慢性炎症的反复发作可发展为肝硬化和肝癌．然而，至今人们仍没有找到一种能够彻底治愈慢性乙肝的特效药物．自从RNA干扰(RNA interference，RNAi)技术建立以来，人们致力于将其应用于抗病毒药物的研究与开发．研究结果表明，RNAi可有效地抑制乙肝病毒的复制，但靶向目的基因的不同RNA干扰片段所沉默的效率不同．关于将RNAi抗病毒药物应用于人体治疗的安全性和有效性还有待进一步研究，RNAi发生“脱靶”的现象是临床应用的难点之一．

摘要:p27^kip1是细胞周期重要的负性调控因子，在乳腺癌等多种肿瘤发生发展过程中发挥重要作用．乳腺癌细胞中p27^kip1蛋白通常是低丰度表达和错位分布，导致这种分布和表达改变的确切机制并不明确．已有研究表明，p27^kip1磷酸化是重要的调节途径之一，细胞内外信号分子通过多种途径调节p27^kip1的分布和表达．为了进一步阐明肿瘤细胞内调节p27^kip1功能的分子机制，必须首先明确p27^kip1在肿瘤细胞与正常细胞中相互作用蛋白质谱的差异．包括细胞周期素、周期素依赖性激酶、CRM1、jab1、Skp2等在内的多种分子可以与p27^kip1发生相互作用．在乳腺癌细胞中还有几种特异的作用分子．在不同细胞周期和不同细胞内分布状态下，p27^kip1蛋白有不同的相互作用蛋白质谱．因此，我们推断在乳腺癌细胞内p27^kip1分子相互作用蛋白质谱的差异可能是导致其低表达和错位分布的主要机制．

摘要:第九届全国酶学学术讨论会暨邹承鲁诞辰85周年纪念会于2008年5月15日～17日在北京举行，此次会议由中国生物化学与分子生物学会酶学专业委员会、中国科学院生物物理研究所共同主办． 全国酶学学术讨论会吸引了该领域的著名专家、学者共120余人欢聚一堂，相互交流酶学领域的最新研究成果及研究方法与技术，共同探讨我国酶学研究领域的发展方向与应用前景．周筠梅主持了15日下午的开幕式，赫荣乔致开幕词，王志珍主持了大会特邀报告和大会报告．王志新、赫荣乔、王恩多、周海梦分别主持了16日的大会报告和工作展讲．本届讨论会安排了两个精彩的大会特邀报告，分别是：北京大学生命科学院饶毅的“社会行为的分子机理”；以及中国科学院生物物理研究所陈润生的 “非编码序列、非编码基因和非编码RNA”．中国科学院生物化学与细胞生物学研究所的王恩多，中国科学与技术大学的施蕴渝等18位与会代表就酶的结构与功能关系及其作用机制、酶的去折叠与再折叠、酶的催化动力学、酶与信号传导及细胞凋亡、酶在药物设计及工农业中的应用等五个方面的研究进展作了大会报告，另有31位代表做了5分钟的工作展讲，这些报告加深了与会代表的相互了解，为会后的进一步交流奠定了良好的基础． 这次研讨会，内容丰富，大会特邀报告、大会报告、工作展讲等学术交流形式多样，发言、提问踊跃，讨论热烈，学术气氛活跃，基本上反映了酶学研究的国际、国内研究现状和最新的研究进展．无论是多次还是初次参加酶学讨论会的代表，都认为此次研讨会开得非常成功，是一次高水平的学术研讨会．此次研讨会对进一步明确在我国酶学研究的方向，瞄准重点，结合我国国情，努力缩短与国际前沿的差距将起到积极的推动和促进作用． 2008年5月17日是邹承鲁先生诞辰85周年纪念日，200余名邹先生的亲属，生前朋友、同事和学生，以及酶学会的代表们出席了5月17日上午举行的纪念会，共同怀念这位国际著名的、对我国科学事业作出了杰出贡献的生物化学家．纪念会由中国生物化学与分子生物学会理事长王志新院士和中国科学院生物物理研究所徐涛所长共同主持．出席纪念会的有全国人大副委员长韩启德院士，全国政协副主席王志珍院士，中国科学院院士张树政、梁栋材、何祚庥、王恩多、王大成、常文瑞，和李佩、李林、李伯良、饶毅、方舟子、刘望夷、张今、王渝生、高勘、王芷、孙伟林、王贵海、杨星科、赫荣乔、朱美玉等所内外来宾． 邹承鲁院士是中国科学家的典范，他把自己的一生无私地贡献给了国家、人民和中国科学的发展．2006年11月23日5时22分，一代宗师，科学泰斗——邹承鲁院士走完了他的生命历程．邹先生的丰功伟绩与高风亮节将永远铭刻在我们后人的心中，并将永远鼓舞和激励一代代科技工作者开拓进取、勇于创新、努力攀登科学高峰！纪念会上大家回忆了自己与邹先生交往的经历，都对邹先生卓越的科学成就，和敢于直言的爱国情怀给予了高度评价和赞扬．会上还向来宾赠送了“邹承鲁传记”、“邹承鲁先生画册”、“邹承鲁先生邮册”和“邹承鲁杂文集”． 酶学会议期间还召开了中国生物化学与分子生物学会第三届酶学专业委员会委员会议 (5月15日晚上)，正式成立了第三届酶学专业委员会 (附后)，并讨论了召开第十届全国酶学学术讨论会的有关事宜．委员们一致表示要继承邹承鲁先生的遗志，努力在酶学领域取得更大的研究成果，为我国科学事业培养出更多合格的接 班人． 在紧张的会议之余，部分参会代表于5月16日晚上参观了奥运主场馆鸟巢、水立方和国家大剧院的外景，游览了后海酒吧街．

摘要:“增强子陷阱”技术是建立果蝇脑全基因组表达图谱及其数据库的重要方法．筛选获得新特异表达的GAL4品系，可为进一步研究果蝇脑神经在学习记忆功能提供强有力的基因工具．通过“增强子陷阱”技术来获得果蝇突变体，并与报告转基因果蝇(UAS-EGFP)杂交，用荧光显微镜观察成年果蝇脑内荧光分布，从而获得该突变体的脑基因表达图谱，在此基础上利用JavaScript来建立果蝇脑全基因组表达数据库．目前获得基因突变体果蝇2 677种，大部分在果蝇脑中有表达，其中在果蝇嗅觉学习记忆相关脑区蘑菇体表达的基因有368个，且有部分基因特异地表达在某些传导通路上．这些果蝇基因突变体库及其表达图谱为进一步研究各基因的功能及作为遗传工具来研究各脑区结构和功能提供极大方便．

摘要:Cre/lox系统可以介导DNA的定点插入和定点删除，可利用其实现转基因动物中“友好位点”的重复利用及标记基因的有效删除．为直观地评估该系统介导的以上两种重组反应的效果，通过标记基因并利用大鼠乳腺癌细胞系SHZ-88进行了模型研究．首先构建了两个载体：a．整合载体pTE-lox2272-DsRed-loxP-GFP-loxP，含有红色荧光标记基因DsRed和绿色荧光标记基因GFP；b．置换载体pT-lox2272-neo-loxP，含有筛选标记基因neo，用以置换DsRed基因．然后，用整合载体转染SHZ-88细胞，并随机挑取了3个同时表达DsRed和GFP的稳定整合细胞克隆．随后用置换载体和Cre表达载体PBS185对以上每个克隆分别进行了3次共转染，通过G418筛选并扩增培养后，总共获得1 070个克隆．通过分析标记基因DsRed和GFP在这些克隆中的表达情况：Cre介导的删除效率为91.1%，定点置换效率为29.3%．最后对部分克隆进行了PCR和DNA印迹鉴定，分子鉴定结果与发光的表型状况一致．这一方法为Cre/lox系统在转基因家畜生产中的进一步应用提供了实验依据．

摘要:以往研究发现，食管癌细胞的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL)基因的过表达具有明显的12-O-十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯(12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate，TPA)诱导性，在启动子-152～-60区段存在着一种新型的TPA反应元件(TPA response element，TRE)，但是该元件的结合蛋白尚未被鉴定出来．采用寡核苷酸DNA亲和层析法(oligonucleotide trapping)从食管癌细胞中分离纯化了NGAL基因TRE结合蛋白；经SDS-PAGE进一步分离，银染显示目标蛋白带．人工切取各目标蛋白带进行MALDI-TOF-MS分析，通过Mascot软件搜索NCBI数据库，根据蛋白质的功能、细胞定位和分子质量大小等指标确定8个核蛋白因子：C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β、FAM54A、KLF15、KLF10和YY-1．最后，利用RT-PCR验证了这些核蛋白因子表达的TPA反应性，结果表明C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β和KLF15等编码基因的转录表现出了明显的TPA反应性，提示可能是食管癌细胞中应答TPA刺激，参与NGAL基因过表达的转录激活因子．

摘要:为了研究珍珠质自然涂层钛种植体表面的体外生物相容性，将珍珠质自然涂层的钛片与MC3T3E1成骨样细胞复合培养以观察细胞的生长、增殖和分化．分别以羟基磷灰石涂层钛片和没有涂层的纯钛片作为对照组，以MC3T3E1细胞单纯培养作为空白组，分别培养3天，5天和7天，通过倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞生长情况，流式细胞技术检测细胞增殖活性，金氏比色法检测碱性磷酸酶(ALP)活性以及蛋白质印迹(Western blotting)法测定转化生长因子-β1(TGF-β1)表达水平．结果发现，细胞在珍珠质周围能形成良好附着，在其表面生长丰满．细胞培养第3天，第5天和第7天时，珍珠质表面的细胞增殖指数分别为(35.9±2.5)%、(69.7±3.3)%和(58.2±2.6)%，ALP活性分别为(6.123±2.917) U/g、(17.486±1.986)U/g 和(23.987±1.372) U/g．第5天和7天时，实验组的细胞增殖指数、ALP活性和TGF-β1表达水平显著高于对照组和空白组(P < 0.05)．珍珠质自然涂层钛表面有利于MC3T3E1细胞的生长、增殖和分化，表明了珍珠质涂层能提高种植体表面的生物相容性，有可能会促进种植后的骨整合.

摘要:直接用可溶性Jagged-1/Fc嵌合蛋白(Jagged-1/Fc)在体外诱导小鼠淋巴结细胞向CD4⁺CD25⁺ T细胞分化．通过荧光标记单克隆抗体染色结合流式细胞术，观察不同剂量Jagged-1/Fc在不同时间对淋巴结细胞向CD4⁺CD25⁺T细胞分化的影响，观察Jagged-1/Fc诱导T细胞内细胞因子的变化； 藉ELISA法检测Jagged-1/Fc诱导分化的T细胞分泌TGF-β1、IL-4和IL-10的水平．结果显示，超过500.0 μg/L剂量的Jagged-1/Fc使CD4⁺CD25⁺ T细胞百分比明显增高，诱导时间需要4～6天，抗Jagged-1单抗能抵消Jagged-1/Fc的诱导作用，用DAPT阻断Notch信号通路的活化也能抑制Jagged-1/Fc的诱导作用，Jagged-1/Fc诱导分化的T细胞培养上清中IL-4和IL-10的水平明显增高，TGF-β1无明显变化，胞内IL-4，IL-10，IL-2和TNF-α的水平也呈增高趋势．上述结果表明，可溶性Jagged-1/Fc嵌合蛋白在体外可诱导小鼠淋巴结细胞向CD4⁺CD25⁺ 调节性T细胞分化．

摘要:Laryngeal carcinoma related gene 1(LCRG1)是一个喉癌候选抑瘤基因，为进一步深入研究其转录调控机制，应用5′RACE技术确定了该基因的转录起始位点，然后在对人LCRG1基因进行生物信息学分析的基础上，通过PCR定向克隆和酶切亚克隆策略，构建了11种含不同长度LCRG1启动子荧光素酶报告基因重组体．启动子活性分析表明，－169～＋127 区域的启动子活性最高．研究提示，LCRG1 基因转录所必需的基因启动子序列在－169～＋127范围内．

摘要:应用双向电泳及质谱技术对血清2型鸭疫里默氏杆菌强毒株及其体外传代200代(RA200)的弱毒菌株的外膜蛋白进行比较蛋白质组学研究，借此分析鸭疫里默氏杆菌的外膜蛋白表达特点，研究差异表达蛋白与细菌毒力的关系．在实验中检测到血清2型鸭疫里默氏杆菌原代及其体外传代获得的弱毒菌株的外膜蛋白约表达60 个蛋白质点( n = 3)，其中相差5倍以上3个．胶内酶解和肽质量指纹图谱分析后鉴定， W1为热休克蛋白Hsp20家族成员，W2、 W3为转座酶，推测它们可能与里默氏杆菌的毒力密切相关．

摘要:已有的研究结果表明，肝素可以作为β₂-整合素(Mac-1)的配体抑制炎症过程中Mac-1介导的嗜中性粒细胞与血管内皮细胞的黏附．通过选择性化学修饰方法制备了具有低抗凝血活性的高碘酸氧化-硼氢化钠还原肝素(RO-肝素)，系统地研究了它对Mac-1介导的嗜中性粒细胞黏附的抑制作用．结果表明，显著失去抗凝血活性的RO-肝素仍能有效地抑制Mac-1介导的嗜中性粒细胞与ICAM-1重组蛋白、转染ICAM-1 cDNA的COS-7细胞和人脐静脉内皮细胞黏附．为深入阐明拮抗Mac-1介导的白细胞黏附的分子机制和筛选抗炎症药物提供了有价值的实验证据．

摘要:钙调素结合蛋白的研究有助于探明钙调素介导的信号转导途径．以拟南芥钙调素亚型2(ACaM2)为钓饵，重组共转化法构建并筛选了酵母双杂交文库．复筛后得到一个阳性克隆．序列测定及分析表明，分离的阳性克隆中包含一个编码钙调素结合蛋白AtIQD26的cDNA片段．凝胶覆盖实验进一步表明，AtIQD26在1 mmol/L Ca²⁺ 或1 mmol/L EGTA条件下都能与钙调素结合，说明其存在不依赖于Ca²⁺的CaM结合特性．GUS染色分析表明，AtIQD26具有普遍的组织表达特性，尤其是在新生的组织中表达量较大；融合荧光蛋白定位显示，AtIQD26在细胞核与质膜附近有分布．AtIQD26与钙调素空间分布的相似性，预示着它们在植物生长发育过程中可能共同发挥作用．

摘要:缺血导致的心肌细胞缺氧是缺血性心脏病的主要病理因素，糖尿病是缺血性心脏病最常见的合并症之一．冠心病合并糖尿病患者心肌损伤明显加重，预后差，可能与缺氧诱导因子1(hypoxia-inducible factor 1，HIF-1)表达减少有关．但糖尿病时HIF-1信号转导系统改变的机制目前尚不清楚．近年来的研究表明, 提高 HIF-1α在缺血心肌中的表达及活性能明显促进新生血管形成，促进心肌细胞存活, 减少缺血再灌注损伤，降低心肌梗塞面积，提高心肌功能，因此，调节HIF-1α的表达及活性成为治疗缺血性心脏病的新方法．通过制作GK糖尿病大鼠心肌梗塞模型，应用免疫组织化学染色、RT-PCR等方法研究发现，GK糖尿病大鼠合并心肌梗塞时，HIF-1α表达减少，心梗面积增大，而给予糖尿病大鼠慢性氯化钴处理后，其血糖水平降低，HIF-1α表达增加，心梗面积减小，这为如何调节HIF-1信号转导系统治疗冠心病合并糖尿病提供一个可能的新的治疗视点和策略．

摘要:Rab GTPase 家族成员基因及其调节囊泡膜运输途径功能已有许多报道，但Rab26蛋白分子的结构和功能仍不清晰．通过生物信息学分析，并在人脑cDNA文库中克隆了一个新的Rab26基因全长cDNA序列，长1 656 bp，与已发表的基因序列相比，在48～50位插入了GCC，在956位T被C取代，而在1 197位G被A取代．该序列包含一个771 bp完整的开放阅读框(ORF)，编码256个氨基酸残基的Rab26蛋白，分子质量为27.9 ku(GenBank 登录号No.AY646153)，而非如以往报告的190个氨基酸残基．GFP荧光标记全长Rb26在哺乳动物细胞中表达显示，Rab26主要呈现在细胞膜状结构相联系的分布，发现该基因高表达能显著增强PE标记的红色异源蛋白质的吞噬．还应用逆转录-聚合酶链反应对多种人肿瘤细胞Rb26表达进行了研究，结果显示，Rab26 在Acc2、SPC-A1，K562 以及 HeLa等肿瘤细胞株呈高表达，而在SMMOL/LC-7721、HepG2、Caco2等肝和肠上皮细胞株中则不表达，值得进一步深入研究．