摘要:胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES细胞)是指由胚胎内细胞团(inner cell mass，ICM)细胞经体外抑制培养而筛选得到的细胞，具有无限增殖潜能，在体外可以向造血细胞分化，有可能为造血干细胞移植和血细胞输注开辟新的来源．此外，ES细胞向造血干/祖细胞的定向诱导分化也为阐明哺乳动物造血发育的细胞和分子机制提供了良好的体外模型．对ES细胞向造血干/祖细胞定向分化的研究进展进行了综述．

摘要:棘皮动物属原始后口动物、无脊椎动物的最高等类群，它处于由无脊椎动物向脊椎动物开始分支进化的阶段．研究棘皮动物的免疫功能和作用机理，对从比较免疫学角度探讨动物免疫系统进化过程有承前启后的重要意义．因此，有必要对棘皮动物的免疫学研究进展作一个较全面的综述，并理清未来的研究热点和方向．棘皮动物与其他无脊椎动物一样具有先天性免疫系统，但未发现脊椎动物所具有的获得性免疫．其免疫应答是由参与免疫反应的效应细胞——体腔细胞和多种体液免疫因子共同介导的．比较免疫学分析表明，棘皮动物存在脊椎动物补体系统的替代途径和凝集素途径，但未发现经典途径和明确的终端途径．棘皮动物先天性免疫系统存在数量庞大的基因家族．今后应加强对未知免疫相关基因、蛋白质、信号传导途径及效应分子的研究，回答免疫系统的起源、功能和进化等问题．

摘要:Cdc7在人类细胞里的同源蛋白huCdc7几乎在人体所有组织中均有表达，在细胞周期中huCdc7可以通过磷酸化作用行使调控DNA复制起始的功能，同时也可通过参与ATR/Chk1途径调控细胞周期中DNA损伤的S期检验点．而近来研究发现，huCdc7表达水平的改变也参与恶性肿瘤的发生发展，在肿瘤细胞里huCdc7能加快肿瘤细胞的异常增殖同时对抗化疗药物也起到关键性的作用．目前，huCdc7已成为治疗肿瘤的一个重要靶标，最新发现的huCdc7有效抑制剂——PHA-767491在癌症治疗中显示出了独特的抑制肿瘤的作用，并且对正常细胞无毒副作用．因此，对huCdc7激酶及其抑制剂的进一步深入研究有望为临床治疗肿瘤开辟新的途径．

摘要:蛋白质生物合成过程的终止是由于第一类肽链释放因子识别终止密码子，并导致肽酰-tRNA酯键水解，释放出新合成的多肽链．近期，通过冷冻电镜、结晶学、核磁共振、分子动力学和生物化学等方面的研究，使第一类肽链释放因子的结构与功能逐渐清晰．对近期的研究进行了分析和整理．

摘要:根据条件基因敲除技术和基因沉默的理论，构建了可被CRE操控的条件基因沉默系统，并应用其研究分子伴侣相互作用蛋白CHIP(C-terminus of Hsc70-interacting protein)对TGF-β信号通路的调控．RT-PCR和免疫印迹结果显示，pLoxP/CHIPi与CRE相互作用后，可以有效地降低内源CHIP的mRNA水平，减少外源和内源CHIP的蛋白质量．荧光素酶报告系统分析表明，条件基因沉默能解除CHIP对TGF-β信号通路的抑制性调控，增强TGF-β信号通路的转录活性．结果表明，CRE依赖的条件基因沉默系统具有高效性、特异性，并通过它反向验证了CHIP对TGF-β信号通路的抑制性调控，为进一步研究与CHIP相关的TGF-β信号通路所致疾病的发生机理提供了有效工具．

摘要:为研究胎肝中造血和肝上皮发育的关系，建立了小鼠胎肝高增殖潜能集落形成细胞（HPP-CFC）培养体系，并进行了单克隆培养以及诱导分化实验.在造血和肝诱导因子的共同作用下，对单克隆来源的HPP集落细胞向造血和肝上皮细胞进行诱导分化，采用透射电镜(TEM)、巢式RT-PCR、细胞免疫荧光检测，从细胞形态、超微结构、上皮细胞分化标志等方面对分化后的细胞进行检测.检测结果显示诱导后的部分细胞具有肝细胞特异性的超微结构并不同程度的表达白蛋白（ALB）、甲胎蛋白（AFP）、细胞角蛋白（CK8，CK18）等肝上皮分化标志，同时还表达间质标志α-SMA和血管内皮细胞标志Flk-1.免疫磁珠分选表明：胎肝来源的HPP-CFC主要来自于CD45⁺细胞，CD45^-细胞不具有形成造血克隆的能力.在肝上皮细胞分化潜能上，流式分选获得的CD49f⁺/Sca-1⁺细胞与未分选细胞无明显差异.该模型的克隆源性通过细胞混合实验进行证明.研究结果表明，改进的胎肝来源的HPP-CFC可能代表了一个新的造血向肝上皮细胞分化的单克隆模型，为研究胎肝中造血和非造血细胞的发育关系提供了一个新的切入点.

摘要:为进一步研究血清抑制相关基因(Si1)的生物学功能，用绿色荧光蛋白EGFP融合的EGFP/Si1重组蛋白在HeLa细胞中成功表达．结果显示该蛋白定位在细胞核中，这一结果与生物信息学预测结果相符合．通过构建不同长度的EGFP/Si1基因突变体观察其核定位信号所在区段，发现核定位信号区在465～531氨基酸残基之间．Si1基因编码框中肿瘤相关1 639位点的改变，虽然并不在入核信号相关结构区，但影响Si1基因表达蛋白的细胞核迁移，进而影响基因功能．

摘要:为寻找放射敏感性基因，采用基因芯片技术筛选出辐射可诱导表达mRNA上调的基因，其中就有IER5．为探索IER5基因的生物学功能及其在宫颈癌放疗中的作用，采用RNA干扰技术构建IER5基因表达抑制的质粒载体并构建IER5-siRNA-HeLa细胞系．对该细胞系与HeLa细胞进行辐射，旨在了解IER5-siRNA-HeLa的细胞生长曲线、细胞周期等实验参数的变化，揭示了IER5基因在辐射诱导中的生物学功能．实验发现，IER5基因表达抑制可提高细胞分裂进入S期与G2-M期的比例，促进细胞分裂，促进细胞生长，提高细胞对辐射的拮抗性，同时发现IER5-siRNA-HeLa细胞在尺寸上大于HeLa细胞．研究表明，IER5基因表达抑制可促使细胞受辐射后发生S期与G2-M期的阻滞，IER5参与辐射细胞周期的调控，对临床宫颈癌放疗有一定的潜在应用价值．

摘要:角质细胞生长因子2(KGF-2)是成纤维细胞生长因子超家族的一员，由间质细胞合成并分泌，能特异促进上皮细胞增殖、分化与迁移，对脊椎动物多种组织和器官的发育起重要调控作用．通过PCR从人的肾组织cDNA文库中克隆分离获得了KGF-2的cDNA，表明该因子在成人肾中有表达．采用大肠杆菌表达并纯化重组蛋白用于生物学功能研究的结果显示：KGF-2在体外不仅能够促进角质细胞的生长和增殖，而且对其凋亡具有抑制作用，还对细胞的移行具有影响．在动物实验中，KGF-2能促进皮肤切除产生的伤口愈合，提示该蛋白质可以作为创伤治疗或辅助用药的候选分子．

摘要:分析启动子区域内调控元件是阐明基因转录起始机制的重要前提．利用从PlanPromDB数据库下载的植物Pol-ⅡTATA和TATA-less启动子数据，深入分析了两类启动子GC偏好、位点结构保守性、序列碱基组分、保守模体分布、TATA box位点分布及关联位点保守性等特点，统计出两类植物启动子许多特有的序列组分和结构规律，这些规律对进一步揭示植物Pol-Ⅱ启动子的转录调控机制有一定的帮助．通过构建能够同时考虑位点保守性和关联性的位点关联性权重矩阵扫描模型(PCWM)， 利用相应打分函数(Score)对两类启动子进行区分，得到了较好结果， 说明PCWM的预测性能要优于单碱基的位点权重矩阵(PWM)．

摘要:次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶( hypoxanthine guanine phosphoribosyltransferase，HGPRT )的功能缺失与痛风、肾结石和雷纳综合症(Lesch-Nyhan Syndrome)等疾病相关．制作HGPRT基因表达降低的模式动物，将有利于人们对这种疾病的发病机理和治疗做进一步的研究．构建了针对HGPRT基因表达的shRNA干扰载体，并将质粒转染兔成纤维细胞，获得携带该干扰片段的转基因细胞系，经PCR鉴定转基因成纤维细胞克隆阳性率为83.3%．RT-PCR及Western blot检测结果表明转基因干扰成纤维细胞系HGPRT mRNA和蛋白质表达量明显降低．最后，以转基因成纤维细胞进行核移植，囊胚率为27.8%，与正常来源的成纤维细胞囊胚率相比较差异不显著．说明，通过RNAi可稳定干扰兔成纤维细胞HGPRT基因的表达，为进一步通过核移植技术建立HGPRT RNAi转基因兔模型创造条件．

摘要:为筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)发病相关的蛋白质，采用双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis，2-DE)和质谱(mass spectrometry，MS)技术比较NPC组织与癌旁正常鼻咽上皮组织(adjacent normal nasopharyngeal epithelial tissue，ANNET)蛋白质表达的差异，鉴定了21个差异蛋白，其中Raf 激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein，RKIP)等9个蛋白质在NPC组织中的表达水平低于ANNET．为探讨RKIP在NPC转移中的作用和机制，采用Western blot检测RKIP在不同转移潜能的5-8F和6-10B NPC细胞中的表达水平，采用免疫组化方法检查RKIP在石蜡包埋NPC组织、正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngeal epithelial tissue，NNET))及颈淋巴结转移NPC组织(lymphnode metastatic NPC，LMNPC)中的表达水平，采用脂质体转染方法将正义、反义RKIP表达质粒及其相应空白载体分别转染5-8F和6-10B细胞，建立相应的稳定转染细胞系，分析RKIP表达水平改变对NPC细胞体外侵袭能力和NF-κB信号通路活性的影响．结果显示：RKIP在高转移5-8F细胞中的表达水平低于非转移6-10B细胞、在NPC组织中的表达水平低于NNET、在转移癌中表达缺失．上调RKIP表达能抑制5-8F细胞的侵袭能力，而下调RKIP表达能增强6-10B细胞的侵袭能力；上调RKIP表达能降低5-8F细胞的p-IκB-α水平和NF-κB的转录活性，而下调RKIP表达能增加6-10B细胞的p-IκB-α水平和NF-κB的转录活性．研究结果提示，RKIP 可能是NPC的一个转移抑制蛋白，RKIP表达下调可能通过活化NF-κB信号通路促进NPC细胞侵袭和转移．

摘要:动植物系统研究表明，钙调素不仅在结合钙离子时调节多种靶酶或靶蛋白的活性，而且没有钙离子结合时，还可以通过结合钙不依赖的钙调素结合蛋白，发挥多种生物学作用．然而，目前却没有体内分析钙调素与钙不依赖钙调素结合蛋白相互作用的方法．首先，采用定点突变的方式，得到了拟南芥钙调素亚型2的多个突变基因mCaM2，随后，大肠杆菌重组表达突变蛋白的电泳迁移率及⁴⁵Ca²⁺覆盖分析表明，得到了编码失去钙结合能力的钙调素的突变基因mCaM2₁₂₃₄, mCaM2₁₂₃₄突变钙调素中所有4个钙结合EF-hand结构域中的关键氨基酸谷氨酸均突变为谷氨酰胺．在酵母双杂交体系中，作为诱饵蛋白的突变钙调素mCaM2₁₂₃₄与我们前期体外方法报道的钙不依赖性钙调素结合蛋白AtIQD26存在相互作用．这将为钙不依赖性钙调素结合蛋白提供有用的体内研究工具，有利于我们全面认识钙-钙调素-钙调素结合蛋白信号途径．

摘要:研究新近发现的猪Ghrelin (porcine ghrelin，pGhrelin)对猪前体脂肪细胞Caspase-3活性及其基因表达的影响．采用细胞培养技术，以仔猪背部皮下前体脂肪细胞为靶细胞，经0、1、10和100 nmol/L pGhrelin处理细胞48 h后，于倒置生物显微镜下进行脂肪细胞形态学观察．利用MTT法测定pGhrelin对细胞增殖的影响．采用分光光度法检测Caspase-3活性．以实时荧光定量RT-PCR方法测定Caspase-3的基因表达．结果显示，10 nmol/L pGhrelin可以显著降低脂肪细胞Caspase-3的活性与mRNA的表达水平(P < 0.05)，100 nmol/L pGhrelin对猪脂肪前体细胞增殖有极显著促进作用(P < 0.01)．上述结果表明，pGhrelin可以下调Caspase-3的活性与基因表达，促进脂肪细胞增殖，抑制脂肪细胞凋亡，其机制可能与Caspase-3依赖性凋亡调节信号通路有关．

摘要:LRRC4是一个新发现的胶质瘤抑瘤基因，它在多种胶质瘤细胞系和胶质瘤组织表达缺失或下调，前期研究结果表明胶质瘤细胞和组织中LRRC4的编码区未发生突变、缺失或重排．为了获得LRRC4作为胶质瘤抑瘤基因的进一步证据，采用去甲基化制剂5-Aza-CdR处理LRRC4表达缺失的SF126和SF767胶质瘤细胞，MSP和RT-PCR检测表明，LRRC4的启动子在表达缺失的SF126和SF767细胞存在完全的甲基化，而5-Aza-CdR能逆转LRRC4启动子的甲基化状态，恢复LRRC4的表达．MTT法测定显示，5-Aza-CdR使SF126和SF767胶质瘤细胞增殖受到明显抑制，并呈时间和剂量的依赖性．同时流式细胞仪检测显示，5-Aza-CdR使SF126和SF767胶质瘤细胞周期阻滞于G0/G1期．因此，5-Aza-CdR能抑制胶质瘤细胞SF126和SF767增殖并干扰其细胞周期，LRRC4启动子异常甲基化是其在胶质瘤细胞中表达缺失的重要机制，5-Aza-CdR能逆转LRRC4基因的甲基化，恢复LRRC4的表达，为LRRC4作为胶质瘤去甲基化治疗的靶标提供了科学依据．

摘要:非分泌型巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的表达在肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用，为探讨胞质M-CSF对细胞增殖的影响，采用基因重组技术构建胞内稳定表达M-CSF的HeLa细胞系，以空载体(pCMV/myc/cyto)转染HeLa细胞和未转染HeLa细胞作为对照，MTT法及反义寡核苷酸抑制实验分析M-CSF对细胞增殖的影响，并计算细胞倍增时间，RT-PCR观察胞内M-CSF对G1期细胞周期相关蛋白的影响．结果显示，与对照组比较，转染M-CSF的HeLa细胞倍增时间明显缩短、增殖能力显著增强，M-CSF的特异性反义寡核苷酸能抑制转染M-CSF的HeLa细胞的增殖，且抑制率随着反义寡核苷酸浓度的增高而增强，转染M-CSF 的HeLa细胞的cyclinD1/D3和CDK2/6 mRNA表达显著升高(P < 0.05)．提示：M-CSF可上调cyclinD1/D3和CDK2/6的mRNA表达，促进HeLa细胞的增殖．

摘要:含具有哺乳动物细胞活性的启动子的重组杆状病毒(BacMam病毒)可有效转导多种哺乳动物细胞，并被广泛用于开发新型非复制型载体疫苗．将水泡性口炎病毒G蛋白(VSV-G)基因插入多角体启动子下游，得到经修饰的杆状病毒转移载体，将对虾白斑综合症病毒(WSSV)ie1启动子控制下的猪瘟病毒E2基因表达盒插入此载体中，构建了BacMam病毒BacMam/G-ie1-E2，以其感染Sf9细胞和转导HeLa细胞，通过间接免疫荧光试验和Western blot分析检测E蛋白的表达，同时用BacMam病毒直接免疫小鼠，用检测猪瘟病毒抗体的间接ELISA方法检测免疫小鼠血清抗体，用基于CFSE和WST-8的淋巴细胞增殖试验评价其细胞免疫应答．结果显示，BacMam/G-ie1-E2能同时在昆虫细胞和哺乳动物细胞中高效表达E2蛋白，免疫小鼠能诱导产生针对猪瘟病毒的特异性抗体，免疫小鼠脾细胞经猪瘟病毒刺激后能诱导特异性的淋巴细胞增殖．这表明，由BacMam病毒介导的基因转移有望用于开发针对猪瘟病毒的非复制型载体疫苗．

摘要:现代大规模焦测序技术的产生是DNA测序技术的一次革命，其关键技术之一是得到高活性的、固定于磁性微球表面的ATP硫酸化酶．生物素化的ATP硫酸化酶可以通过生物素与亲和素之间的特异结合特性固定在包被亲和素的磁性微球表面，但是利用化学修饰法将ATP硫酸化酶进行生物素化修饰很可能会影响酶的活性．利用融合表达策略，将大肠杆菌生物素酰基载体蛋白C端87个氨基酸肽段(BCCP87)与ATP硫酸化酶在大肠杆菌内融合表达，经SDS-PAGE和Western blot分析，表达的融合蛋白分子质量约为64 ku，并且能够在大肠杆菌内被生物素化．生物素化的ATP硫酸化酶能够与亲和素包被的磁珠结合，固定后的ATP硫酸化酶具有活性，并且能够用于定量检测焦磷酸盐(PPi)和焦测序，为今后建立高通量大规模焦测序系统提供了一个有效的工具酶．

摘要:在NIH3T3细胞中构建了一种链霉菌噬菌体ФC31整合酶报告系统．该报告载体同时编码红色荧光蛋白和绿色荧光蛋白，与编码ФC31整合酶的载体共转染可以反映ФC31整合酶的活性．细胞中从红色荧光到绿色荧光的变化和百分比的变化可经流式细胞仪检出．随着转染中ФC31整合酶表达载体的比例升高，表达绿色荧光的细胞比例上升．ФC31整合酶表达载体和报告系统载体比例在10∶1时，可达最高约90%的红绿荧光转变率．这表明该ФC31整合酶报告系统提供了一种在细胞中快捷可靠的评价ФC31整合酶功能的方法．

摘要:将Cre-LoxP系统应用于Bacillus anthracis中并成功敲除eag基因．以B.anthracis基因组为模板扩增得到上下游同源臂，联合两端带有LoxP位点的壮观霉素抗性基因片段构建好同源重组载体，转化B．anthracis AP422，通过一系列筛选得到带有抗性标记的重组菌．然后，通过转入Cre重组酶表达质粒，去除抗性标记，得到eag基因缺失的重组菌，并在DNA水平、RNA水平和蛋白质水平进行了系统的鉴定．最终建立了Cre-LoxP系统在B．anthracis中的应用方法，并成功敲除eag基因.