摘要:程序性细胞死亡因子4 (programmed cell death 4，Pdcd4) 基因是近年新发现的一种抑癌基因，它的表达产物通过抑制相关基因的转录和翻译抑制肿瘤生成．Pdcd4在多种人肿瘤组织细胞中表达缺失或低表达．有研究发现，5’CpG岛的甲基化可能是脑胶质瘤中Pdcd4基因沉默的主要原因之一．另外，在多种肿瘤细胞中发现microRNA-21的表达水平与Pdcd4蛋白的表达呈负相关性，microRNA-21在转录后水平调控Pdcd4，其作用位点位于Pdcd4 mRNA的3′-UTR区．肿瘤细胞中Pdcd4的表达水平与细胞对抗肿瘤药物的敏感性有关，上调Pdcd4表达会增加细胞对某些抗肿瘤药物的敏感性，反之，下调Pdcd4表达则会引起某些药物细胞毒活性的减弱．有些药物本身也可以影响细胞中Pdcd4的表达水平．Pdcd4可以抑制p53的乙酰基化．Pdcd4蛋白能被蛋白激酶Akt/PKB磷酸化，引起Pdcd4的核易位，并减弱Pdcd4对转录激活因子AP-1的抑制作用．Pdcd4可以被蛋白激酶S6K1磷酸化并在泛素连接酶SCF^βTRCP介导下经泛素化途径降解．

摘要:单克隆抗体具有特异性强、表达较稳定等优势，而鸡IgY抗体因其种属距离等特点而具备一系列特殊优势，诸如交叉反应小、产生IgY的鸡免疫系统对哺乳动物保守的生物分子反应明显等，如能将这两种抗体的优势结合起来，开发单克隆卵黄抗体则有望大大拓展抗体的研究模式和应用领域．针对这一新兴领域，从单克隆卵黄抗体的理论背景、研发与技术现状和可能的应用前景三个角度综述了国外的研究现状．

摘要:原发性高血压(简称高血压病)是遗传和环境因素相互作用所导致的一种复杂性疾病．近年来的研究发现，高血压病的发生和发展与DNA甲基化密切相关．11β-HSD-2、ECE-1和AT1b等基因发生甲基化和去甲基化会影响代谢酶和受体的表达，从而通过肾素-血管紧张素-醛固酮系统激活以及肾性水钠潴留等途径引起高血压的发生，这可能是高血压发病的一个重要分子机制．基因组低甲基化(如：高同型半胱氨酸所引起的)会诱发 AT1b、ECE-1等受体和代谢酶基因发生去甲基化，从而参与高血压病的发生．深入了解DNA甲基化调控在原发性高血压发病过程中的分子机制及药物代谢酶和受体基因甲基化状态的改变对高血压患者降压疗效的影响，将为临床制定合理化的用药方案提供依据．

摘要:阿尔茨海默病 (Alzheimer′s disease，AD) 是一种神经系统退行性疾病，近年来许多研究发现 AD 与细胞凋亡关系密切，有研究证明肿瘤坏死因子 (tumor necrosis factor-α，TNF-α) 的合成过量会造成神经细胞的凋亡从而导致 AD 等神经退行性疾病的发生，然而人们对 TNF-α 造成神经细胞凋亡的分子机制并不了解．采用激光共聚焦扫描成像技术和荧光共振能量转移 (fluorescence resonance energy transfer，FRET) 技术在活细胞中实时对 TNF-α 诱导分化PC12 细胞凋亡的信号通路进行了细致的研究．实验结果证明，TNF-α 诱导的分化 PC12 细胞凋亡会经过线粒体和非线粒体途径，并通过激活核转录因子(NF-κB)上调 Bcl-xL 的表达来抑制经过线粒体的凋亡途径．进一步的研究证明，BimL 会在线粒体上替换原来被 Bcl-xL 抑制的 Bax，从而让 Bax 寡聚化，进而引发细胞凋亡，而c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂 SP600125可以抑制Bax 寡聚化．此外，在未分化PC12细胞中共表达 GFP-Bim_L 和 YFP-Bax 质粒，发现 Bim_L 可以促进 Bax 发生聚集，并且它们二者之间不是直接发生相互作用．上述结果证明，Bim_L在 TNF-α 诱导神经细胞凋亡过程中起到了重要作用， Bim_L 在 TNF-α 诱导分化 PC12 细胞凋亡的过程中间接激活了 Bax．

摘要:通过重组慢病毒系统感染人胎肝基质细胞(fetal liver stromal cells，FLSCs)，建立了能够稳定高效表达促红细胞生成素(erythropoietin，EPO)的细胞株EPO/FLSCs．从胎儿肝脏克隆EPO基因，构建重组慢病毒EPO的表达载体，感染FLSCs，根据荧光表达强弱进行流式分选，获得能够继续稳定传代的高表达EPO基因的FLSCs，RT-PCR和ELISA结果证实，细胞株中的EPO基因稳定表达．RT-PCR结果显示， FLSCs的EPO在mRNA水平的表达分别是未转染FLSCs和转染空载体FLSCs的5.63倍和5.71倍．ELISA法检测了转染重组慢病毒EPO表达载体的FLSCs EPO蛋白表达水平，结果显示EPO蛋白的表达水平也明显升高．收集EPO/FLSCs的条件培养基，体外诱导脐血CD34+细胞向造血细胞分化，结果显示向红系定向分化的细胞比例明显居多，有可能为临床细胞治疗提供稳定、高质量的细胞来源．

摘要:神经系统信息处理的理论研究和计算结果表明，视皮层可以通过稀疏编码 (sparse coding) 模式来处理自然刺激信息．神经元群体中，单个神经元在大多数时间里没有强的脉冲发放 (时间维稀疏性，lifetime sparseness)，而针对某一刺激，只有少数神经元在特定的时间内发放 (空间维稀疏性，population sparseness)．从神经元放电的时间和空间模式两个方面考察了视网膜神经节细胞群体对自然刺激(电影)的编码方式，并同实验室常用的伪随机棋盘格刺激下视网膜的反应模式进行比较，分析了视网膜神经节细胞反应的稀疏性指标，并深入探讨了其内在的时间和空间特点．结果提示，视觉系统在其最初阶段——视网膜——即开始采用一种高效节能的稀疏编码方式来处理自然视觉信息，单个神经元的时间维稀疏性节省了代谢能量消耗，而群体神经元中邻近神经元的动态成组协同发放，提高了信息向突触后神经元传递的有效性．

摘要:葡萄糖通过血脑屏障从血液中进入脑组织必须依赖葡萄糖转运蛋白(glucose transporter，GLUT)的帮助．GLUT1是血脑屏障上最主要的GLUT，也是脑毛细血管壁内皮细胞的分子标记．动物研究显示在急性脑缺血后脑内的GLUT1表达增加．检测了7例慢性微血管缺血性脑血管病变(ischemic cerebrovascular diseases，ICVD)的尸检脑组织中的GLUT1水平，并与11例同龄对照组比较．结果发现GLUT1水平在ICVD组中降低．其降低可能是由于低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)的下调所致．但是，在ICVD脑组织中的GLUT1水平降低不伴随有蛋白质O-GlcNAc糖基化水平的下降．上述结果为探讨脑缺血病变的机理提供了新线索．

摘要:由高通量微阵列技术产生的数据集可以用于解释生物系统基因调控的未知机制．生物过程是动态的，所以很有必要关注某些条件下特异的基因调控子网络．细胞周期是一个基本的细胞过程，识别酵母的细胞周期特异调控子网是理解细胞周期过程的基础，并且有助于揭示其他细胞条件的基因调控机理．使用一个基因表达微分方程模型(GEDEM)，从静态网络中识别了动态的细胞周期相关调控关系．与已经报道的细胞周期相关调控相互作用相比，该方法识别了更多的真实存在的条件特异调控关系，取得了比当前的方法更好的性能．在大数据集上，GEDEM识别了具有高敏感性和特异性的调控子网．组合调控的深入分析显示，条件特异调控子网的转录因子之间的相关性呈现出比静态网络中转录因子相关性更强，这说明条件特异网络比静态网络更加接近真实情况．另外，GEDEM方法还识别更多潜在的共调控转录因子．

摘要:为了探讨端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子调控重组血管基膜衍生多功能肽(rVBMDMP)基因表达抑制肺癌细胞生长的作用机制，采用PCR方法，克隆hTERT启动子核心区片段，并检测其功能活性．然后，构建pLNSX/hTERT/rVBMDMP逆病毒载体，获取逆病毒，感染肺癌A549细胞，检测hTERT启动子调控rVBMDMP基因表达对细胞形态、细胞生长、细胞凋亡以及Caspase-3表达的影响．另外，观察hTERT启动子调控rVBMDMP基因表达对裸鼠成瘤的抑制作用、瘤组织细胞的凋亡及Caspase-3表达情况．结果发现：a．hTERT启动子核心区能调控rVBMDMP基因的表达(n=3，P < 0.05)；b．hTERT启动子调控rVBMDMP基因的表达具有抑制肺癌A549细胞的生长和裸鼠成瘤作用(n=6，P < 0.05)；c．rVBMDMP基因表达能促进肺癌A549细胞凋亡和Caspase-3蛋白表达．以上结果说明，hTERT启动子调控rVBMDMP基因表达后，通过提高Caspase-3的表达水平，促进细胞凋亡而抑制肺癌A549细胞的生长．

摘要:T7核酸酶Ⅰ (T7EⅠ)是一种能特异识别并拆分重组中间体Holliday Junction (HJ)的多功能核酸酶，该酶不仅能特异识别和拆分HJ，而且能随机切刻双链DNA，特异识别并切割双链DNA中的切刻和单碱基错配位点．构建了两种原核表达载体用于表达MBP和His-tag融合的两种T7EⅠ突变体，MBP-T7EⅠ(E20K)和His6-T7EⅠ(E65K)．每一种融合蛋白形成的同源二聚体不具有核酸酶活性，通过共表达或两种蛋白质共变性复性、双标签亲和纯化，最终获得具有单个活性结构域的 T7EⅠ异源二聚体(T7EⅠ-SAD)．以pUC(AT)和pUC19为底物测试T7EⅠ-SAD的HJ拆分活性、随机切刻活性和切刻位点切割活性，结果显示，T7EⅠ-SAD可特异识别并切刻HJ结构，但丧失了同时引入两个切刻位点的能力，其对pUC(AT)的特异切刻活力和对pUC19的随机切刻活力与野生酶相当．逐级变性梯度洗脱实验显示，T7EⅠ-SAD的稳定性与野生型酶接近，二聚体解离需要5.0～6.0 mol/L尿素或1.75～2.0 mol/L盐酸胍；凝胶阻滞实验表明T7EⅠ-SAD具备与HJ结构特异结合的能力．为具有细胞毒性蛋白的表达提供了一种新策略，同时提供了一种简便直观的蛋白质二聚体稳定性测试方法．

摘要:通过化学共沉淀法合成纳米粒子Fe₃O₄磁核，以壳聚糖为包裹材料包被自制的磁核，采用乳化交联法制备了具有核-壳结构的磁性高分子微球-壳聚糖磁性微球，并偶联肝素配基得到了一种新型亲和磁性微球，应用SEM、FT-IR、XRD等对微球的粒径、形貌、结构和磁响应性进行了表征．考察了该亲和磁性微球对凝血酶的分离纯化性能，并与传统的DEAE离子交换色谱法进行了比较．结果表明，所得亲和磁性微球具有较窄的粒径分布、形状规整，粒径在50 nm左右．对凝血酶一步吸附纯化获得了比活为1879.71 U/mg的酶，得率85%，纯化倍数11.057，而传统柱层析法得率为72%，纯化倍数仅为5.33．制备了壳聚糖亲和磁性微球，并将磁分离技术应用于凝血酶的分离纯化，得到了较好的效果，这将对于凝血酶的纯化及生产具有一定参考价值．

摘要:热休克反应(heat shock response，HSR)是细胞在缺氧、病毒感染等应激因素刺激下，为适应微环境的改变而发生的一种自身保护性反应，以暂时性下调细胞正常代谢和选择性上调热休克蛋白(heat shock protein，HSP)的表达为特点．HSR 是通过热休克转录因子(heat shock transcription factor，HSF)与相应的启动子结合，启动转录过程，进而促使HSP 的表达来实现，其中HSF1 是最有代表性、研究最多的一种HSF．HSF1 在无活性的单体及有活性的三聚体之间的转变和平衡是转录调控的关键．热休克因子结合蛋白(heat shock factor binding protein，HSBP1)是一个含有两个伸展的疏水重复区，与HSF1 的三聚体区域相互作用，以其伴侣形式实现对HSF1 的DNA 结合活性有负调节作用，通过抑制HSF1 与DNA 结合活性，从而抑制HSF1 的转录活性．为了深入研究HSBP1行使功能的结构基础，对HSBP1蛋白成功地进行了克隆表达和结晶，该晶体属于 R3空间群，其晶胞参数为 a = b =35.2Å, c= 233.3Å.

摘要:为了研究睾丸特异性乳酸脱氢酶，即乳酸脱氢酶C₄(LDH-C₄)基因突变在男性不育发病中的作用，利用LDH-C₄特异性底物对100名不明原因男性不育症患者的精子LDH-C₄进行活性显色，用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对LDH-C₄活性低下的患者进行LDHC基因PCR产物的突变筛查，对DHPLC峰形异常的PCR产物进行序列测定．筛选到一组精子LDH-C₄活性明显下降的患者，其中1名患者的LDHC基因PCR产物在DHPLC中呈异常洗脱峰．对这一PCR产物进行序列测定，发现患者LDHC基因第5外显子的115位碱基发生了T→A的杂合改变(GenBank登录号GU479375)，该突变使LDHC基因的178位密码子由原来的TTG(编码亮氨酸)变为TAG(终止密码子)，形成截短的C亚基．T克隆-测序进一步证实了该无义突变的杂合状态．这是在人类LDHC基因上发现的第一个突变，提示LDHC基因突变可能是男性不育发病的原因之一．

摘要:肌肉生长抑制素 (myostatin，MSTN) 属于转化生长因子-β (transforming growth factor-β，TGF-β) 超家族，主要功能为负向调节骨骼肌的生长．肌肉生长抑制素基因敲除小鼠肌肉出现显著增加，而将干涉该基因的短发夹RNA注射并电击转化入大鼠胫前肌则引起肌肉重量、肌纤维以及MHCⅡ表达的增加．通过与小鼠肌肉生长抑制素基因表达载体共转染HEK293细胞，筛选到两条能够高效抑制小鼠肌肉生长抑制素基因表达的小干涉RNA． 构建了这两条小RNA的表达载体Mst-shRNA1和Mst-shRNA2， 用其分别转染小鼠C2C12成肌细胞，并通过G418药物筛选和流式细胞仪富集整合了短发夹RNA表达载体的阳性细胞．通过采用Real-time PCR和Western blot分析，检测到在分别整合了Mst-shRNA1和Mst-shRNA2的C2C12细胞中，内源性肌肉生长抑制素基因的mRNA水平分别下降了10.2%和35.5%，蛋白质表达则分别下降了29.3%和64.7%．同时，在这两组中MyoD的表达上升了24.4%和40.4%，证明通过RNA干涉实现的肌肉生长抑制素基因的抑制导致了下游MyoD基因表达的上调．这些结果表明内源性产生的肌肉生长抑制素基因小干涉RNA能够有效抑制该基因的表达．这种以RNA干涉技术为基础促进肌肉生长的方法为遗传育种提供了一种新技术，能够在对家畜经济性状的改良中发挥重要作用．