摘要:脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)是人体内含量最多的神经营养因子，在神经系统的发育和功能维持中起至关重要的作用．研究表明，抗抑郁剂通过提高BDNF表达来促进神经细胞的生存，增加突触可塑性及神经发生．

摘要:真核泛素-蛋白酶体系统是细胞内蛋白质降解的重要机制，参与细胞生理功能调控，因此泛素-蛋白酶体通路的机制和功能研究备受关注．20世纪80年代，人们就发现放线菌中存在原核蛋白酶体，但是对于原核蛋白酶体的功能和作用机理长期以来了解甚少．2008年，Pearce等在结核分枝杆菌中发现了原核类泛素蛋白(prokaryotic ubiquitin-like protein，Pup)．在Dop、PafA、Mpa等辅助因子的作用下，Pup可以共价标记多种功能蛋白，并介导被标记蛋白质通过蛋白酶体降解，Pup-蛋白酶体系统的发现揭示了原核生物中一个崭新的蛋白质降解机制．Pup-蛋白酶体系统的靶蛋白涉及物质中间代谢、信号通路、毒性和抗毒性因子、细胞壁和细胞膜组分等多个方面，并且与结核分枝杆菌的致病性相关，被认为是新的结核病治疗药物靶点．本文就原核Pup-蛋白酶体系统的作用机理及其功能的研究进展作一综述．

摘要:机体天然免疫系统拥有一系列可以探测和抵制微生物侵袭的机制．目前，关于病原RNA的细胞内识别机制有了较为深入的研究和相关报道，但细胞内病原DNA的识别和相应的天然免疫应答机制仍未完全被揭示．阐明上述机制有助于了解和治疗一系列微生物感染相关的疾病，包括病毒和细菌感染类疾病、病毒相关的肿瘤、自身免疫性疾病等．近年来，细胞内多个充当“DNA传感器”的分子和干扰素调节分子被认为在细胞质DNA诱导宿主天然免疫反应过程中起着关键性调节作用．综述了对细胞内病原DNA的主要识别分子、信号通路以及相关的天然免疫调控机制．

摘要:本实验室报道了microRNA(miRNA)在水稻重金属镉胁迫应答中的作用(Ding et al., 2011)．利用miRNA微阵列芯片和实时定量PCR方法，筛选分离得到一批镉胁迫应答相关的水稻miRNA．这些miRNA的下游靶基因多为转录因子、蛋白激酶等调节性基因，参与多种代谢过程和信号通路；miRNA基因上游的顺式作用元件分析显示，重金属响应元件更多的存在于芯片分离得到的镉胁迫相关的miRNA基因上游．这些结果初步探明了miRNA在镉胁迫应答网络中的地位，突出了围绕miRNA的重金属应答调控网络．

摘要:异常磷酸化Tau蛋白是神经纤维缠结的主要成分，也是老年痴呆的典型病理特征之一．本实验室前期报道了Tau蛋白具有保护DNA的作用，但磷酸化对Tau与DNA相互作用的影响需要进行探索，这对于揭示Tau蛋白异常磷酸化与神经细胞死亡之间的关系具有一定的参考价值．本文采用甲醛孵育N2a细胞，引起了细胞内Tau蛋白的过度磷酸化．实验结果进一步显示，甲醛孵育组的细胞核内磷酸化Tau蛋白与DNA非共定位存在，而对照组细胞核内Tau蛋白与DNA存在一定程度的共定位现象．电泳迁移率实验检测GSK-3?茁催化的磷酸化Tau蛋白与DNA的结合情况，可以观察到磷酸化减弱了Tau蛋白与DNA的相互结合．这些结果表明，异常磷酸化可以使Tau蛋白丧失对DNA的保护作用，这可能是Tau蛋白异常磷酸化引起DNA损伤甚至细胞死亡的原因之一．

摘要:窖蛋白-1(caveolin-1)是胞膜窖(caveolae)中重要的结构和功能蛋白．Caveolin-1参与细胞的多种生命活动并与恶性肿瘤的发生相关．为探讨caveolin-1对胰腺癌细胞PANC1的体外增殖、迁移、侵袭以及裸鼠体内成瘤能力的影响，通过基因转染技术培育caveolin-1过表达细胞株PANC1/cav-1作为实验组，转染空载体细胞株PANC1/vector作为对照组，采用RT-PCR及Western blot方法检测caveolin-1的表达量, 流式细胞术分析细胞周期，软琼脂细胞克隆实验检测细胞增殖能力, 侵袭小室实验检测癌细胞迁移和侵袭的能力，建立裸鼠皮下种植瘤模型并检测肿瘤组织的增殖与凋亡．PANC1/cav-1中的caveolin-1表达稳定，表达量明显高于对照组细胞株和亲本细胞株(P < 0.01)，细胞周期检测显示大量PANC1/cav-1细胞被抑制于G0/G1期，caveolin-1抑制PANC1的增殖，迁移和侵袭能力．在裸鼠的体内实验中，caveolin-1显著抑制PANC1细胞在裸鼠体内的生长，Ki-67染色和TUNEL染色表明在PANC1细胞中过表达caveolin-1，可以抑制肿瘤增殖并诱导肿瘤凋亡．上述结果表明，caveolin-1可能通过对胰腺癌细胞周期的影响(抑制于G0/G1期)，抑制胰腺癌PANC1细胞在体内外的增殖、迁移和侵袭，并导致肿瘤凋亡．

摘要:本课题组以前的研究表明，adipophilin通过ERK1/2-PPARγ信号转导通路促进细胞内的脂质蓄积．为了研究高表达和敲减adipophilin是否影响RAW264.7细胞内ERK1/2的活性、PPARγ的表达以及细胞内的脂质蓄积，从而进一步证实这一通路，阐明adipophilin促进泡沫细胞形成的机制．重组pQCXIP-HA-Adipophilin和pSuper-retro-adipophilin siRNA逆转录病毒载体经酶切检测证实，并用Sofast^TM介导转染到包装细胞PA317中，经培养后释放逆转录病毒．将收集的逆转录病毒感染RAW264.7细胞，经嘌呤霉素筛选后获得稳定高表达和敲减adipophilin的细胞系．用50 mg/L的氧化低密度脂蛋白处理细胞24 h后，用油红O染色法和高效液相色谱法测定细胞内的脂质蓄积情况，用半定量RT-PCR和蛋白质印迹分别检测adipophilin和PPARγ的mRNA和蛋白质的表达，用蛋白质印迹对与动脉粥样硬化发病有关的ERK1/2及其磷酸化进行检测．酶切结果表明，pQCXIP-HA-Adipophilin和pSuper-retro-adipophilin siRNA重组逆转录病毒载体构建成功．在荷脂情况下，pQCXIP-HA-Adipophilin转染的细胞能明显增加细胞内的脂质蓄积，但使PPARγ的表达和ERK1/2的磷酸化下调，这些作用可被adipophilin siRNA逆转．结果表明，adipophilin与泡沫细胞的形成有关，adipophilin可能是通过ERK1/2-PPARγ途径促进细胞内的脂质蓄积．

摘要:脓毒症早期内毒素(脂多糖，LPS)可激活丝裂原活化蛋白激酶通路，诱导肿瘤坏死因子α(TNF-α)等多种炎性细胞因子大量生成．TNF-α作为一种重要的早期炎症介质，间接激活Janus激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)通路．STATs活化后直接进入核内参与LPS诱导的基因表达．本研究拟探讨STAT3在TNF-α启动子上的作用位点，为深入认识JAK/STAT信号通路在脓毒症发生中的分子基础及其干预途径提供理论依据．a．将Flag-STAT3与全长TNF-α启动子报告基因共同转染COS-7细胞，观察STAT3作用的剂量-效应．结果证实，STAT3对TNF-α基因的表达不受LPS调节，无论是否有LPS刺激，随着STAT3剂量的增加，TNF-α基因的表达亦随之增加．在将200 ?滋g/L浓度的Flag-STAT3质粒分别与不同长度的TNF-α启动子报告基因质粒共同转染COS-7细胞并用LPS刺激，观察不同片段的TNF-α启动子活性．结果发现，95 bp片段的TNF-α缺失突变体作用最为明显，增加了6.9倍．b．分别构建了70 bp、75 bp、80 bp和85 bp片段的TNF-α缺失突变体——pTNF-α(70 bp)、pTNF-α(75 bp)、pTNF-α(80 bp)和pTNF-α(85 bp)，将它们与Flag-STAT3共同转染COS-7细胞并用LPS刺激，观察到85 bp片段的活性与95 bp片段相似，当片段到达80 bp时，活性降低到对照水平．为了进一步了解其精确结合位点，将85 bp片段突变体的81和82位碱基突变，检测其对TNF-α活性影响，发现启动子活性下降．c．为了证明STAT3的潜在结合位点在80 bp到85 bp之间，且81和82位这2个位点的突变确实改变了STAT3对TNF-α启动子活性，进行凝胶迁移阻滞实验，观察到TNF-α启动子62～85 bp的野生型γ-³²P标记的探针可以与核蛋白STAT3结合，而突变的62～85 bp标记的探针不能与核蛋白STAT3结合．上述结果表明，STAT3对TNF-α基因表达的调节不依赖LPS的刺激，STAT3在TNF-α启动子的潜在结合位点是在80到85碱基片段之间．

摘要:本室以前已经报道了G蛋白偶联受体APJ的内源性配体多肽，apelin-13，通过激活ERK1/2促进大鼠血管平滑肌细胞增殖．本文研究14-3-3信号蛋白是否参与apelin-13促进大鼠血管平滑肌细胞增殖ERK1/2信号途径，探讨apelin/APJ系统的细胞信号转导机制．组织贴块法培养大鼠胸主动脉VSMCs；Western blotting方法检测14-3-3、pRaf-1、Raf-1、pERK1/2、ERK1/2、cyclinD1、cyclinE的表达； MTT方法观察14-3-3抑制剂Difopein对VSMCs的增殖作用；免疫共沉淀方法检测14-3-3和Raf-1蛋白复合物的形成．Western blotting方法结果显示，apelin-13 (0、0.5、1、2、4 μmol/L)浓度依赖性刺激大鼠VSMCs 14-3-3表达、Raf-1和ERK1/2磷酸化，以2 μmol/L最为明显；2 μmol/L apelin-13时间依赖性刺激大鼠VSMCs 14-3-3表达、Raf-1和ERK1/2磷酸化，在4 h增加最为显著； 14-3-3蛋白抑制剂Difopein明显抑制apelin-13诱导的Raf-1磷酸化、ERK1/2磷酸化、cyclinD1及cyclinE表达； 免疫共沉淀方法发现apelin-13诱导14-3-3与Raf-1结合增加，而Difopein明显抑制两者结合；MTT法显示Difopein明显抑制apelin-13诱导的血管平滑肌细胞增殖．上述结果表明，Apelin-13通过14-3-3/Raf-1复合物-ERK1/2信号转导通路促进大鼠血管平滑肌细胞增殖．

摘要:本室以前已经报道G蛋白偶联受体APJ的内源性配体多肽apelin-13促进单核细胞-血管内皮细胞黏附，本文研究PI3K信号途径是否参与apelin-13促进单核细胞-血管内皮细胞黏附，探讨apelin/APJ系统的细胞信号转导机制．MPO方法检测细胞黏附；Western blot方法检测PI3K、VCAM-1的表达．Western blot方法结果显示，apelin-13 (0、 0.5、 1、 2、 4 μmol/L)浓度依赖性刺激血管内皮细胞PI3K磷酸化，以1 μmol/L最为明显；1 μmol/L apelin-13时间依赖性促进血管内皮细胞PI3K磷酸化，在30 min增加最为显著； PI3K抑制剂LY294002明显抑制apelin-13诱导的VCAM-1表达和单核细胞-血管内皮细胞黏附．上述结果表明，PI3K信号途径介导apelin-13促进单核细胞-血管内皮细胞黏附．

摘要:内源甲醛代谢失衡所造成的脑慢性损伤被认为是衰老过程中记忆丢失的危险因素之一，因此，有必要准确测定脑内不同区域甲醛的含量为相关研究提供参考．作者通过2, 4-二硝基苯肼(2, 4-DNPH)偶联高效液相色谱(UV-HPLC)，测定了家猪脑额叶、顶叶、颞叶、枕叶、海马、小脑、脑干内源甲醛含量(75.5～83.4 μmol/kg)．采用10%三氯乙酸处理脑组织匀浆(pH=1.0)，不但可以避免蛋白质及其他分子的干扰，还可以省略现有方法中的萃取步骤，且提高了测试的灵敏度(P < 0.05)．该方法的回收率约95.96%～102.04%，相对标准偏差(n=5)小于10%．结果表明，改良2, 4-DNPH法用于脑内源甲醛的测定，其操作简便、可信度高．