摘要:Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/CRISPR-associated (Cas)9系统成功被改造为第三代人工核酸内切酶，与锌指核酸内切酶(zinc finger endonuclease，ZFN)和类转录激活因子效应物核酸酶(transcription activator-like effector nuclease，TALEN)一样可用于各种复杂基因组的编辑．目前该技术成功应用于人类细胞、斑马鱼和小鼠以及细菌的基因组精确修饰，修饰类型包括基因定点InDel突变、基因定点敲入、两位点同时突变和小片段的缺失．由于其突变效率高、制作简单及成本低的特点，被认为是一种具有广阔应用前景的基因组定点改造分子工具．本文从CRISPR/Cas的研究历史、分类、作用机理以及基因定点修饰应用等方面进行简单介绍，希望能够为在这一领域的科研工作者提供参考．

摘要:面对解决血液来源匮乏的问题，开发新的血源已经成为当前医疗中的迫切需要，其中一种重要的手段就是体外产生功能性的红细胞，而脱核是关键的一步．虽然目前的研究表明已经可以在体外条件下产生成熟的脱核红细胞，但是诱导分化的效率相对比较低．不仅如此，我们对红细胞脱核机制研究的并不是很清楚．本文对于目前研究比较成熟的三种脱核理论，包括细胞凋亡学说、不对称分裂学说、膜泡运输理论，以及脱核过程中重要的蛋白质、microRNA进行了阐述，并对体外制备血细胞的前景进行了展望．

摘要:转座子约占了人类基因组的45%，对基因组的结构与功能造成了重大的影响. 一部分转座子现在仍然具有活性，它们的转座能引发疾病. LINE-1（long interspersed element-1）是现今在人类基因组中发现的唯一具有活性并能自主转座的转座子，并能介导非自主转座的元件进行转座. 近年来LINE-1的研究有新的突破，本文简述了LINE-1的结构、转座机制及对基因组的影响，重点总结和分析宿主对LINE-1的限制机制. 由于LINE-1的生活周期与逆转录病毒有相似之处，也希望能够为宿主抗病毒的研究提供线索.

摘要:外泌体(exosomes)是细胞分泌的纳米级别膜性小泡，在20世纪80年代初就已经被发现，但其在细胞间所起到的信息交流作用，直至最近才开始为人们所认知．应用大规模分析技术使得exosomes中的复杂成分不断被确定，因为其中的脂质、蛋白质和RNA成分在脂质膜的保护下具有充分的生物学活性，可有效发挥对受体细胞的调节作用，引起科学界的极大兴趣，逐渐成为研究热点之一．我们综述了近几年关于exosomes的研究成果，总结了其参与细胞间信息交流的三种主要方式，包括膜表面信号分子的直接作用、膜融合时内容物的胞内调节以及生物活性成分的释放调节．Exosomes的发现使得细胞间的信息交流更加精细和全面，尤其重要的是，它的发现揭示了存在于机体自身的RNA胞间转移途径．我们还进一步综述了exosomes的三种作用方式在神经系统及肿瘤发生发展中的作用，探讨了exosomes在疾病监测、自身免疫性疾病与缺血性疾病治疗中的临床应用价值．在基因治疗领域，由于具有安全有效的靶向运输能力，exosomes将有望成为理想的基因治疗载体．

摘要:无

摘要:炎症因子的表达调控是炎症反应的关键步骤，与自身免疫疾病以及癌症等密切相关．一氧化氮(nitric oxide，NO)在炎症因子表达调控中具有重要作用，但已有的研究多关注于NO合成对炎症因子的调控作用，而对NO代谢的作用知之甚少．亚硝基化谷胱甘肽还原酶(S-nitrosoglutathione reductase，GSNOR)是体内NO信号通路代谢调控的关键蛋白．本研究发现脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)在RAW264.7细胞中上调诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)的同时下调GSNOR的转录和蛋白质表达，该下调作用依赖MEK1/2、p38和PI3K信号通路．抑制GSNOR可促进LPS诱导的炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达，而过表达GSNOR作用相反．抗炎症药物曲古抑菌素A (trichostatin A，TSA)能够挽回LPS对GSNOR的下调作用，并且GSNOR抑制剂削弱了TSA对炎症因子IL-6和TNF-α转录的抑制效应．这些结果表明：GSNOR是一个新的重要炎症调控分子，它可能成为调控NO介导的炎症相关信号通路的新的潜在靶点，上调GSNOR可能是抑制炎症的新思路．本研究揭示了巨噬细胞通过上调iNOS和下调GSNOR共同增强免疫炎症反应的新机制，拓展了对NO代谢在炎症反应中作用机制的认识．

摘要:真核生物的基因组以染色质的形式存在，染色质在真核生物的基因表达调控及胚胎发育过程中起重要作用，为表观遗传提供一个重要的信息整合平台．染色质的高级结构，特别是 30 nm染色质的动态变化在基因转录沉默和激活过程中起着重要的调控功能．但是目前对30 nm 染色质纤维的组装及其精细结构的认识还十分有限．本文通过体外表达系统，表达未经修饰的组蛋白，并利用克隆构建的601DNA均一重复序列，通过逐步降低盐离子浓度并加入组蛋白H1或镁离子的方法，体外重组均一的30 nm染色质纤维．并利用镀金属、负染色制样和冷冻电镜制样等手段通过透射式电子显微镜(TEM)对30 nm纤维结构的形成原因、组蛋白H1的作用和核小体重复单位(nucleosome repeat lengths，NRLs)长度对30 nm染色质纤维的影响进行研究．研究结果显示在组蛋白H1或二价镁离子存在的情况下，均可形成30 nm染色质纤维．其形成的染色质拓扑结构有所不同．统计分析表明，不同长度核小体重复单位(NRLs)形成的染色质纤维直径有所不同(P < 0.05)．同时，我们得到了较为均一的冷冻电镜样品，为进一步研究30 nm染色质纤维的高级结构及理解体内染色质存在的形式及动态过程打下了较好的基础．

摘要:YSY-01A是一种新型蛋白酶体抑制剂，前期研究已经证实其对肿瘤细胞的增殖有抑制作用．但是它对肿瘤血管生成是否有影响尚不明确．本研究旨在探明YSY-01A阻碍肿瘤细胞促进血管生成的作用及机制．我们首先将磺酰罗丹明B(sulforhodamine B，SRB)法与细胞共培养(Transwell)模型相结合，探讨YSY-01A抑制人结肠癌细胞(HT-29 cells)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)的增殖促进作用；运用高内涵筛选(high content screening，HCS)法研究YSY-01A对HT-29细胞中NF-κB核转位的影响；利用Western blot法检测YSY-01A对HT-29细胞中缺氧诱导因子-1α(hypoxia- inducible factor-1α，HIF-1α)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)的表达调控．为了观察YSY-01A对HUVEC增殖和运动有无直接抑制作用，我们采用SRB法观察YSY-01A对HUVEC的增殖抑制作用；运用HCS法分别考察YSY-01A对HUVEC的运动抑制和细胞毒作用．结果证实，YSY-01A可以阻碍HT-29细胞对HUVEC的增殖促进作用并具有浓度依赖性．YSY-01A还可抑制HT-29细胞中NF-κB的核转位，下调HIF-1α及VEGF的表达．进一步研究证实，YSY-01A能够浓度依赖地抑制HUVECs的增殖和运动，而不伴有明显的细胞毒作用．上述结果表明，YSY-01A可以通过抑制蛋白酶体活性下调肿瘤细胞中促血管生成因子的表达，进而在血管内皮细胞中发挥抗血管生成作用．

摘要:改善血流、促进血管新生是缺血性外周血管疾病的重要治疗措施．由于载脂蛋白A(ApoA)与纤溶酶原(plasminogen，Plg)具有75%～98%的结构同源性，因此，ApoA也可能通过类似Plg的方式抑制内皮祖细胞(endothelial progenitor cells，EPCs)增殖、黏附及迁移而影响血管发生的能力．本文研究ApoA对EPCs 血管发生的影响及机制．为了编码人ApoA全长cDNA序列的pSG-5表达载体，转染COS-7细胞株后进行培养，收集培养液，免疫亲和层析法分离纯化ApoA蛋白；从转ApoA基因小鼠、野生型对照鼠及正常对照鼠骨髓分离培养EPCs，经ApoA处理后移植下肢缺血实验小鼠，于移植后第3、7、14天后观察ApoA对EPCs黏附、迁移及血管发生能力的影响．研究发现，ApoA能显著降低 EPCs的黏附、迁移能力，Matrigel胶上，EPCs血管腔样结构严重破坏，体内实验揭示，EPCs归巢至ApoA转基因小鼠缺血组织血管周围的数量及毛细血管数量显著减少．结果表明，ApoA能损伤EPCs的黏附、迁移及归巢，最终损伤EPCs的血管发生能力．

摘要:肌质网(sarcoplasmic reticulum，SR)中的钙释放通道利阿诺定受体(ryanodine receptor，RyR)是调控胞浆钙离子浓度的重要蛋白，其活性受多种调控剂影响．调控剂的不同电子传递性质可能作用于RyR的功能性巯基，进而影响其门控状态．了解具有不同电子传递性质的调控剂影响钙通道的作用机制具有重要意义．本研究采用光子相关光谱法(PCS)、CPM(7-二乙 基-3-(4′-马来酰亚胺苯基)4-甲基香豆素)荧光标记法及[³H]-ryanodine结合等实验，分别检测多种调控剂对RyR1的蛋白及复合体粒度分布、自由巯基量及对通道状态的影响，利用光漂白法检测各调控剂的电子传递性质．结果显示，激活剂和巯基氧化剂具有类似电子受体的性质并产生相似作用，即自由蛋白粒度增加，自由巯基量减少，具有激活通道作用；抑制剂和巯基还原剂则具有类似电子供体的性质，作用效果相反．

摘要:在急性、慢性神经退行性疾病和炎症引发的神经系统疾病的发病机制中，兴奋性毒性可能是造成后期神经元死亡的共同途径．小脑颗粒神经元谷氨酸兴奋性毒性模型是研究上述过程的重要实验手段，该模型的稳定性和可重复性是开展相关研究的重要基础．然而，文献报道的建模方法条件各异，说法不一，很难适从．本工作针对小脑颗粒神经元谷氨酸兴奋性毒性模型建立的关键环节，包括小脑颗粒神经元的培养、兴奋性毒性刺激条件的确定，毒性标志性指标的表征，分别进行了比较和优化, 从培养皿的包被、神经元消化、兴奋性刺激的溶液介质选择、神经元刺激的最佳时间及谷氨酸的最佳刺激浓度等方面分别给出了优化条件．通过特征性钙离子曲线、NMDA受体特异性抑制剂MK-801的干预作用以及c-fos基因转录水平的动力学变化等指标，确认了毒性模型的成功建立．本工作不仅对建立小脑颗粒神经元谷氨酸兴奋性毒性模型的实验室具有重要参考意义，而且，其针对不同条件分析比较的结果及优化原则，对其他神经毒性模型的建立也具有普遍参考意义．